分析方法验证-实例部分
《化学分析方法验证、确认指南汇编及实例分析》记录
《化学分析方法验证、确认指南汇编及实例分析》读书随笔目录一、内容描述 (2)二、化学分析方法验证的基本概念与重要性 (3)三、验证前的准备工作 (4)1. 明确验证目的和范围 (5)2. 选择合适的验证方法和技术 (6)3. 建立验证团队和制定工作计划 (7)四、化学分析方法验证的实施 (8)1. 验证试验设计的制定 (10)2. 双重检查的制定与实施 (11)3. 结果评价与偏差分析 (12)4. 纵向和横向的比较 (14)五、化学分析方法确认的具体步骤 (15)1. 确认试验方案的确定 (16)2. 选择性、准确性和精密度的测试 (18)3. 仪器校准与方法的重现性评估 (19)4. 系统适用性测试 (20)六、案例分析 (22)1. 氯化钠中痕量钾的测定 (23)2. 水中硫酸根离子的测定 (24)七、总结与展望 (26)一、内容描述本书首先介绍了化学分析方法验证和确认的基本概念、目的和意义。
阐述了在化学分析过程中，为何需要进行方法的验证和确认，以及它们对于保证分析结果的准确性和可靠性的重要性。
详细阐述了化学分析方法验证和确认的基本流程，包括方法的选择、实验设计、实验操作、数据收集与分析等方面。
这些内容为后续的实践操作和实例分析提供了理论支持和方法指导。
本书汇编了多种化学分析方法的验证和确认指南，这些指南涵盖了从传统的化学分析到现代仪器分析的各种方法，如滴定法、分光光度法、色谱法、质谱法等。
每一种方法的验证和确认指南都详细介绍了具体的操作步骤、注意事项以及可能遇到的问题和解决方案。
这些内容为读者提供了实用的操作指南，使读者能够根据实际需求选择和应用不同的化学分析方法。
本书还通过实例分析的方式，展示了化学分析方法验证和确认的实际应用。
这些实例涉及了不同的领域，如环境监测、食品安全、药品检测等。
通过对这些实例的分析，读者可以更加深入地了解化学分析方法验证和确认的实际操作过程，以及如何解决实际应用中可能遇到的问题。
分析方法验证的内容
分析方法验证的内容
在进行数据分析时，验证分析方法的准确性和有效性是至关重要的。
只有通过验证，我们才能确保我们所采用的分析方法能够正确地解释数据，并且能够得出可靠的结论。
本文将介绍分析方法验证的相关内容，包括验证的重要性、常用的验证方法以及验证过程中需要注意的问题。
首先，让我们来看看验证分析方法的重要性。
验证分析方法的目的是确保所使用的方法能够准确地反映数据的特征和规律。
如果我们在分析数据时采用了错误的方法，那么得出的结论就会是错误的，这将对决策和预测产生严重的影响。
因此，验证分析方法是确保我们能够做出准确决策的重要步骤。
接下来，我们将介绍一些常用的验证方法。
首先是交叉验证方法，这是一种常用的验证方法，它将数据集划分为训练集和测试集，然后使用训练集来训练模型，再使用测试集来验证模型的准确性。
此外，还有留出法验证、自举法验证等方法，它们都是常用的验证方法，可以帮助我们验证分析方法的准确性和有效性。
在进行验证过程中，我们需要注意一些问题。
首先是样本的选择，样本的选择应该具有代表性，能够充分反映整体的特征。
其次是验证指标的选择，验证指标应该能够准确地评估分析方法的准确性和有效性。
最后是验证结果的解释，验证结果应该能够清晰地反映分析方法的优劣，帮助我们做出正确的决策。
综上所述，验证分析方法的重要性不言而喻，只有通过验证，我们才能确保我们所采用的分析方法是准确的、有效的。
在验证过程中，我们需要选择合适的验证方法，注意样本的选择和验证指标的选择，确保验证结果能够准确地反映分析方法的准确性和有效性。
希望本文能够帮助大家更好地理解分析方法验证的相关内容。
真实案例解析分析方法的验证、转移和确认
真实案例解析分析⽅法的验证、转移和确认摘要: 分析⽅法验证、转移和确认的⽬的是证明分析⽅法的适⽤性，对保证检测结果的⼀致性、可靠性和准确性具有重要作⽤。
⽅法验证、转移和确认的概念不同，适⽤范围不同，在实际⼯作中存在⼀些模糊概念，⽽分析⽅法验证、转移和确认的⽬的是证明所采⽤的分析⽅法适合于相应检测要求和⽬的，被测样品质量可控，保证得到⼀致、可靠和准确的测定结果，同时也证明检验⼈员有能⼒操作分析⽅法。
⽅法学验证1、⽅法验证、转移和确认相关指导原则法规⽬前国内外和分析⽅法学有关的指导原则和技术⽂件中，⼤部分都是阐述分析⽅法验证的内容，很少有专门阐述分析⽅法转移和确认的⽂件。
美国、欧盟、⽇本、澳⼤利亚、中国等国家和地区的药品监管机构以及化组织( InternationalOrganization forStandardization， ISO) 等国际组织都有专门的关于⽅法学验证的指导原则。
其中美国⾷品药品监督管理局( U.S.Food and DrugAdministration，FDA) 在2000 年和2001布了“⽣物分析⽅法验证指南( guideline onbioanalytical method validation) ”，2012年2 ⽉1 ⽇⽣效，⽤于药代动⼒学和毒代动⼒学研究中⽣物样品定量测定的分析⽅法验证。
ICH 在1995 年和1996 年分别发布了Q2A“分析步骤验证－定义和术语”和Q2B“分析步骤验证－⽅法学”; ISO 17025 于2005 年发布的“检测和校准实验室通⽤要求”第“5.4. 5”章节中对分析⽅法验证提出了⾮常具体的规定和关于⽅法学确认， ISO 17025: 2005 通篇只在“5.4.2”中有⼀⼩段描述: “……在进⾏检测或校准之前，实验室应确认能够正确操作这些标准⽅法。
如果标准⽅法发⽣了变化，应重新进⾏确认”。
最早发布相应技术⽂件专门企业⽽制定的，规定制药企业在制定药品分析⽅法时需要验证哪些参数，⽤于向药品监管机构证明该⽅法可⾏，产品质量可控。
药物分析方法的设计和验证
第三节 药物分析中的有效数字 一、有效数字 （一）定义：分析中，实际能测量到的数字。
根据测定方法和使用仪器的准确程度来确定，只有最
后一位欠准，欠准度为±1。
例: 电子分析天平读数0.3526 滴定管体积读数22.25
2、有效位数确定 （1）0在数据中位置不同，作用不同。
例：1.002---4位，0.0980---3位，2.0×103---2位
第三章 药物分析方法的设计和验证 第一节 药物分析方法的分类和设计 一、分类
常量分析（0.1~1g或10~100mL）
按取样量分
半微量 (10~100mg或1~10mL)
微量分析 微量 (0.1~10mg或10uL~1mL)
超微量(<0.1mg或10uL)
按测定原理与操作方法 分
重量分析法
化学分析法 滴定或容量分析法
一、误差及其分类 （一）绝对误差和相对误差
（二）系统误差和随机误差
1、系统误 差
（1）方法误差
解决方法
（2）仪器和试剂误差 （3）操作误差
对照或空白试验 校正仪器
2、随机误差-----多次平行测定
3、测量结果检验-----方差分析 （t检验、G检验、F检验）
一、准确度和精密度 （一）准确度（Accuracy)
50.11.45 0.281 50.11.4 0.3 51.8
（二）乘除法 以有效数字最少的那个测量值为准（相对误差最大）。
例：0.231× 20.24÷3.2=14.9618 ≈15
三、药物含量测定结果的表达法
测量结果的有效数字的保留取决于仪器的精确度和要求。一 般滴定和重量分析取4位有效数字；仪器分析取3 位有效数字。
实例分析
苯溴马隆
推荐 ICH-Q2分析方法验证课件 精品
范围：
分析方法的范围是指样品中分析物的上限和下限 浓度的区间，该区间内分析方法被证明具有合适 的精密度、准确性和线性。
耐用性：
分析方法的耐用性是指化验参数适当的发生微小 改变时，测量保持不受影响的能力，可用于说明 正常使用时的可靠性。
不同类型检测的推荐验证项目
检验项目 ＼ 验证 内容 ＼ 准确度 杂质测定 鉴别 － 定量 + 限度 含量分析及溶出 度 （仅用于检测） + 含量/效 价 特殊分析 +4
三、Q2 分析方法验证
Q2是讨论药物在欧盟、日本和美国注册 申请时，作为注册申请的一部分递交的分析 方法验证所需要考虑的项目。分析方法验证 的目的是为了证明方法能够满足其预期目的。 分析方法验证常见以下四种类型： 1、鉴别试验 2、杂质含量的定量试验 3、杂质控制的限度检查 4、原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定 组分的定量检验。
二、Q1 回顾 Q1包括五部分
Q1A(R2)------新原料药和制剂的稳定性； Q1B------------稳定性试验：新原料药和制剂的 光稳定性试验； Q1C-----------新剂型的稳定性试验； Q3D-----------原料药和制剂的稳定性时间的交 叉和矩阵设计； Q1E-----------稳定性数据的评价； Q1F-----------第III和第IV气候带注册申请的稳 定性数据。
精密度－重复性
精密度－中间精密 度 专属性 检测限 定量限 线性 范围
－
－ +2 -
+
+ + -3 + + +
+ + -
+
+1 +5 + +
实例分析方法
实例分析方法在研究和学术领域中，实例分析方法是一种常用的研究方法，它通过对具体的案例进行观察、分析和解释，以揭示普遍的规律和原则。
实例分析方法在理解和解决实际问题、推动学术研究和学科发展方面具有重要作用。
本文将介绍实例分析方法的基本概念、步骤和优势，并通过具体案例展示其应用。
一、实例分析方法的基本概念实例分析方法，又称为案例研究方法，是一种基于实例的研究方法，通过深入观察和分析个别案例，以获取对整体情况的深入认识。
实例可以是个人、组织、事件或社会现象等，研究者通过对实例的详细观察和细致分析，揭示其中的因果关系、发展趋势和规律性特征。
实例分析方法主要包括以下几个重要要素：1. 个案选择：研究者需要选择具有代表性、典型性和信息丰富度的个案，以确保研究的可信度和适用性。
2. 数据收集：研究者通过多种方法收集个案相关的信息和数据，如观察、访谈、问卷调查等，以获取全面且准确的数据基础。
3. 数据分析：研究者将收集到的数据进行整理、分类和分析，运用适当的分析方法和工具，揭示个案的内在联系和内涵含义。
4. 结论推断：在数据分析的基础上，研究者进行合理推断和解释，从而得出对于普遍性规律和原则的认识。
二、实例分析方法的步骤实例分析方法通常包含以下几个步骤：1. 确定研究目的：研究者需要明确研究目的和科学问题，以指导后续的研究设计和数据分析。
2. 选择个案：在确定研究目的后，研究者需要选择适当的个案，以确保个案的代表性和典型性。
3. 数据收集：研究者通过多种方法和渠道，收集个案相关的信息和数据，如观察、访谈、问卷调查等。
4. 数据分析：研究者将收集到的数据进行整理、分类和分析，运用适当的分析方法和工具，揭示个案的内在联系和内涵含义。
5. 结论推断：在数据分析的基础上，研究者进行合理推断和解释，从而得出对于普遍性规律和原则的认识。
三、实例分析方法的优势实例分析方法具有以下几个优势：1. 研究深入：实例分析方法可以对个案进行深入观察和分析，获得详细和全面的信息，从而对研究对象有更深入的了解。
药物的含量测定方法与验证-样品的前处理方法
R-NH2
H2SO4 K2SO4
(NH4)2SO4 NaOH (NH4)HSO4
NH3↑
NH3↑+H3BO3→NH4BO2 →H2SO4滴定
13
前处理方法-湿法破坏
பைடு நூலகம்
凯氏定氮法(kjeldahl nitrogen determination)
间接法 水-NaOH溶液 硫 浓H2O2溶液与水 磷水 硒 硝酸溶液（1→30）
22
前处理方法-干法破坏
氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method ） 3.样品制备
固体样品（研细） 无灰滤纸 液体样品 纸袋
样品研细后放中间,按 虚线折叠 固定于铂丝下端螺旋 处.
23
前处理方法-干法破坏
氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method ）
4.实例-碘苯酯的含量测定（P163）
I
CH3
CH (CH2)8 COOCH2CH3
24
例1. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
25
例2．选择氧瓶燃烧法所必备的实验 物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
一方法测定
回收率%= 测定对照品量平均结值果比×较100%
加入对照品的量
33
分析方法验证的效能指标
—— 1.准确度 (accuracy)
（一）含量测定方法的准确度
2.制剂准确度
用本法测定 结果与已知
《化学分析方法验证》课件
按照验证方案进行实验，记录实验数据和异常情况。
数据整理
对实验数据进行整理、分类和归档，确保数据准确性 和完整性。
验证结果评估
数据分析
对实验数据进行统计分析，评估方法的准确 度、精密度和可靠性。
评估结论
根据数据分析结果，得出验证结论，判断方 法是否符合预期要求。
异常处理
对实验中的异常情况进行分析，找出原因并 提出改进措施。
对比验证
将新开发的化学分析方法与已通过验证的成熟方 法进行对比，以评估新方法的性能和可靠性。
02
验证流程
验证计划
确定验证目的
明确验证范围、验证标准和预期结果。
制定验证方案
包括验证方法、实验步骤、所需设备和试剂等 。
分配任务和责任
确保参与验证的人员明确各自职责，分工合作。
验证实验
实验准备
确保实验设备和试剂符合要求，实验环境符合标准。
验证的目的
验证的目的是确保化学分析方法在应 用过程中具有足够的精密度、准确度 和检测限，能够提供可靠、准确的分 析结果。
验证的重要性
保证分析结果准确可靠
通过验证，可以确保化学分析方法在使用过 程中产生的分析结果准确可靠，避免误差和 偏差对分析结果的影响。
提高分析效率
经过验证的化学分析方法可以更快地获得准 确结果，提高分析效率，缩短分析周期。
THANKS
降低成本
通过验证，可以避免因使用不合适的分析方 法而导致重复实验和样品浪费，从而降低分 析成本。
验证的分类
1 2 3
方法验证
对全新的化学分析方法进行全面的验证，包括准 确度、精密度、检测限等指标的评估。
常规验证
对已经通过验证的化学分析方法进行常规的验证 ，以确保该方法在长时间内仍然具有可靠性和准 确性。
分析方法验证、确认和转移
• USP <1224>:是将非法定方法从一个实验室转移至另 一个实验室，即为分析方法转移。
• 通常不适用于法定方法，但可以参考。 • ChP没有相应有通则或定义、表述和规定。
转移豁免） • 2.分析方法转移方案与讨论 • 四. 分析方法确认 • 五. 分析方法验证、转移/确认的之间关系 • 六. 总结
一 相关概念、定义
• 方法验证（method validation） • 方法转移（method transfer） • 方法确认（method verification） • 检验项目分类（USP） • 类别Ⅰ-用于原料药中主要成分或药物制剂中活性成
分析方法转移（ method transfer ） （Transfer of Analytical Procedures）
• 记录一个实验室（接收方）能够使用由另 一个实验室（转移方，也称作转出方）所 开发检验方法的过程，并确保接收的实验 室知道检验的程序并有能力按规定进行检 验。
方法确认（ method verification）
• USP <1225>: USP-NF所收载方法，使用者不需要验证 这些方法的准确性和可靠性，但需要确认这些方法 在实际使用条件下的适应性 。
• USP <1225>:简而言之：是相关数据而不是重复验证 过程。
• USP <1226>:确认包括所涉及方法的性能参数，如那 些在本通则中描述的性能参数。
• ICH Q2（R1）：是阐明分析方法适用于它所期望的 应用目的。
检验方法验证、检验方法确认实例
检验方法确认报告验证工作组目录1. 概述2. 确认目的和范围3. 组织及职责4. 确认起止日期5. 方法确认所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 方法确认所需要的对照品、原辅料、检验样品的确认7.确认项目和确认方法、确认结果【鉴别（1）】人工牛黄薄层色谱鉴别方法确认【鉴别（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别方法确认【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别方法确认甲硝唑含量测定方法专属性确认甲硝唑含量测定方法线性关系与线性范围确认甲硝唑含量测定方法准确度确认甲硝唑含量测定方法精密度确认甲硝唑含量测定方法耐用性确认胆红素含量测定方法系统适用性确认胆红素含量测定方法专属性确认胆红素含量测定方法线性关系与线性范围确认胆红素含量测定方法准确度确认胆红素含量测定方法精密度确认胆红素含量测定方法耐用性确认8.三批产品按本检验方法检验的结果确认9.偏差与漏项控制10.确认报告会审1. 概述我公司生产的品种人工牛黄甲硝唑胶囊，执行国家药监局颁布的法定药品标准，标准号为：WS-10001-(HD-0204)-2002。
本公司前身（原广东华卫药业有限公司）按该标准生产、检验人工牛黄甲硝唑胶囊已有多年的历史。
根据GMP（2010版）第二百二十三条规定，对收入药典和其它法定标准的分析方法，应通过检验方法确认来证明该方法在本实验室条件下的适用性。
故本公司依照法定标准WS-10001-(HD-0204)-2002以及《中国药典》2015版四部附录9101：药品质量标准分析方法验证指导原则的规定，制定本检验方法确认方案，由质量部按制定的方法进行试验，根据试验结果判断检验方法在本公司是否适用。
本产品的微生物限度检查方法验证，另行制定验证方案进行验证，不包括在本次确认。
2. 确认目的和范围确认该产品的检验方法在本公司检验室的适用性，保证检验结果的可靠性。
本确认方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊，进行检验方法的确认。
确认项目包括【鉴别】、【甲硝唑含量测定】、【胆红素含量测定】等。
分析方法的验证和确认与转移
1.新产品的成分与已有的品种 如果有资格转移豁免，接收方应 的成分类似或浓度类似，并且 以适当的理由将其记录下来 对于使用的分析方法，接收方 有经验； 2.检验方法与已使用的方法相 同或非常接近； 3.负责方法开发、验证或产品 日常检验的人员由转出方调到 接收方。 4.待转移的方法出自药典，并 且没有改变，这种情况下只需 做方法确认。
双方
1转移方和接收方间应预先开个转移会议，这样便于双方就方法转移过程争议的地方可 以讲清楚，并解答转让过程中的任何问题。如有全验证或部分验证的数据，接收方应获 得这些数据，包括检验过程中应注意的技术细节。在一些情况下，参与研发或验证的人 员在方法转移的过程中应在场，这样会很有帮助。 1.方案应包括目的、范围、转出方和接收方的职责、使用的仪器和试剂，转移中应包括 分析方法、实验设计和对所有测试和可接受标准。2.根据验证数据和检验方法，在转移 方案中规定需对哪些分析项目进行确认以及评估方法转移可接受结果。3.对使用的物料、 对照品、样品、仪器和仪器参数应说明。4.转移方案的文件部分应包括报告的格式，以 确保可以持续地记录检验结果并提高不同实验室间的一致性。该部份还应包含结果及其 他附带信息，例如：样品的色谱图和光谱图；5方案中还应说明如果与可接收的标准发 生偏差的话应采取哪些措施。当出现不符合标准规定的情况，对转移方案发生的任何变 更，必须在获得其他额外的数据前获得批准。
确认要求应建立在对方法和方法应用的产品的复杂性评估基础上。尽管不需要对 一个药典方法进行全面再验证来确认方法在实际使用条件下适用，但是<1225>章 节表2列出的一些分析性能参数可以用于确认目的。 仅需要评价那些被认为是适合于方法确认的性能参数。 确认过程的程度和范围可能取决于使用者的培训情况和经验水平、方法的类型和 相关设备或仪器、具体的操作步骤以及被检测的产品。
分析方法转移比对性检验
方法转移比对性测试实例药物分析杂志Chin J Pharm Anal 2015发表一篇文章“分析方法验证、转移和确认概念解析” (许明哲，黄宝斌，杨青云，田学波，白东亭，王佑春 , 中国食品药品检定研究院)2003年日本藤泽公司申请注册进口他克莫司软膏剂（2种规格：30g∶0.03%·支－1 和30g∶0.1%·支－1 ），用于治疗过敏性皮炎。
笔者所在实验室承担了进口注册质量标准复核工作。
按照要求，藤泽公司报送2个规格各3批样品、空白软膏基质、含量测定和有关物质测定所需标准物质，并提交了质量标准、方法学验证资料及3批样品的出厂检验结果。
鉴于该品种处方和含量测定方法的复杂性，复核实验室决定起草的进口注册质量标准中含量测定方法按照企业方法制定，不做改动。
复核实验室根据企业提供的含量测定方法，对企业提供的2个规格6批样品进行了检验，并将检验结果与企业提供的出厂检验结果进行了比对，见表4。
这个过程就是一个完整的方法转移过程，方法建立实验室是日本藤泽公司研发实验室，方法接收实验室是复核实验室，检验结果的比对结果表明， 2个规格共6批样品，复核实验室的检验结果与企业出厂检验结果之间的误差均在 1.5%之内，满足了预先设定的该品种含量测定方法差异的限度(误差不得过2%），说明复核实验室有能力正确操作方法建立实验室建立的含量测定方法，方法转移成功。
在此基础上，复核实验室根据企业质量标准起草了他克莫司软膏剂含量测定进口复核质量标准，并上报国家食品药品监督管理局批准。
案例分析作者(中国食品药品检定研究院) 说明方法接收实验室需要证明其能够成功地在本实验室操作该方法，最常用的方式就是比对性测试，如果接收实验室采用该方法对样品测定的结果与方法建立实验室测定的结果两者之间比对的结果符合转移之前确定的相关接受标准，就说明方法接收实验室能够和方法建立实验室一样有能力成功地操作此方法，方法转移成功。
验收标准: 复核实验室的检验结果与企业出厂检验结果之间的误差均在 1.5%之内，满足了预先设定的该品种含量测定方法差异的限度 (误差不得过2%）。
实验四 LR(1)分析法
实验四LR(1)分析法实验学时：2实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的构造LR(1)分析程序，利用它进行语法分析，判断给出的符号串是否为该文法识别的句子，了解LR（K）分析方法是严格的从左向右扫描，和自底向上的语法分析方法。
二、实验内容对下列文法，用LR（1）分析法对任意输入的符号串进行分析：（1）E- E+T（2）E- E—T（3）T- T*F（4）T- T/F（5）F- (E)（6）F- i三、LR（1）分析法实验设计思想及算法(1)总控程序，也可以称为驱动程序。
对所有的LR分析器总控程序都是相同的。
(2)分析表或分析函数，不同的文法分析表将不同，同一个文法采用的LR分析器不同时，分析表将不同，分析表又可以分为动作表（ACTION）和状态转换（GOTO）表两个部分，它们都可用二维数组表示。
(3)分析栈，包括文法符号栈和相应的状态栈，它们均是先进后出栈。
分析器的动作就是由栈顶状态和当前输入符号所决定。
LR分析器由三个部分组成：◆其中:SP为栈指针，S[i]为状态栈，X[i]为文法符号栈。
状态转换表用GOTO[i，X]=j表示，规定当栈顶状态为i，遇到当前文法符号为X时应转向状态j，X为终结符或非终结符。
◆ACTION[i，a]规定了栈顶状态为i时遇到输入符号a应执行。
动作有四种可能：(1)移进：action[i，a]= Sj：状态j移入到状态栈，把a移入到文法符号栈，其中i,j表示状态号。
(2)归约：action[i，a]=rk：当在栈顶形成句柄时，则归约为相应的非终结符A，即文法中有A- B的产生式，若B的长度为R(即|B|=R)，则从状态栈和文法符号栈中自顶向下去掉R个符号，即栈指针SP减去R，并把A移入文法符号栈内，j=GOTO[i,A]移进状态栈，其中i为修改指针后的栈顶状态。
(3)接受acc:当归约到文法符号栈中只剩文法的开始符号S时，并且输入符号串已结束即当前输入符是'#'，则为分析成功。
常用统计分析方法介绍与实例解析
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常用推断性统计分析方法介绍 及其实例解析
1
目录
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基本概念——变量类型 常用推断性统计分析 1. 两组之间比较—定性资料 2. 两组之间比较—等级资料 3. 两组之间比较—定量资料
血压正常
20
465
8
. 9
. 10
.
II 配对设计：对一组样品同时用两种检测方法对其进行检 测，每种检测方法检测结果都分为阳性和阴性，数出两种检 测方法同时判定为阳性、阴性的样品数以及它们检测结果不 一致的样品数，将结果表示成配对四格表的资料格式。所用 统计方法为配对四格表χ2 检验。
实例 1：两种探针同时检测的结果
18
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（1）成组设计的t检验，设计类型为成组设计，且因素变量为二分类 变量，分析前需要先对资料的正态性和方差齐性进行检验（这是很多 参数检验的前提条件）。
例：两组雌鼠，分别饲以高蛋白和低蛋白饲料，8周后记录各鼠体重 增加量（克），问两组动物的增重是否有差别？（此处正态性和方差齐 性检验略）。
利用SPSS进行分析，数据文件及格式见“成组设计t检验.sav”， SPSS菜单操作为：分析→比较均值→独立样本T检验
结果见下页
22
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Paired Samples Test
Paired Differences
Mean Std. Deviation t
Pair 1 治疗前 - 治疗9后.700
12.347 2.484
Sig .
df (2-tailed)
药物定量分析与分析方法验证
方法验证的内容与步骤
准确度
通过对比已知浓度的样品测量值 与真实值，评估方法的准确度。
精密度
通过多次测量同一样品，评估方 法的重复性和再现性。
专属性
验证方法是否能够区分目标成分 与其他物质的干扰。
耐用性
验证方法在不同条件下的稳定性 及变化程度。
范围
验证方法适用的浓度范围。
线性
验证方法在一定浓度范围内的响 应是否呈线性关系。
响应值应无明显交叉干扰，能够准确区分目标物质与杂质。
专属性验证结果
根据响应值判断分析方法的专属性是否符合要求。
检测限与定量限验证
检测限与定量限验证方法
逐渐降低样品浓度，观察信号响应值的变化。
检测限与定量限验证要求
检测限和定量限应满足预设的灵敏度要求。
检测限与定量限验证结果
根据信号响应值判断分析方法的检测限与定 量限是否符合要求。
分析方法验证的意义
分析方法验证是确保药物定量分析结果准确可靠的重要手段。通过验证，可以证明所选用 的分析方法适用于该药物的分析，并确保其在各种条件下的稳定性和可靠性。
当前发展状况
随着科学技术的发展，药物定量分析的方法和技术也在不断进步。目前，高效液相色谱法 、气相色谱法和质谱法等先进技术已被广泛应用于药物定量分析中，大大提高了准物质进行多次测定，计算相对标准偏 差（RSD）。
精密度验证要求
RSD应符合预设的接受范围，通常不超过±5%。
精密度验证结果
根据RSD大小判断分析方法的精密度是否符 合要求。
专属性验证
专属性验证方法
采用具有相似结构或相同成分的物质进行测定，比较其响应值。
专属性验证要求
中药有效成分的定量分析
中药是我国传统医学的重要组成部分， 中药有效成分的定量分析对于确保中 药质量和临床疗效具有重要意义。
理化分析方法的检测限、定量限和耐用性验证及案例
理化分析方法的检测限、定量限和耐用性验证及案例检测限和定量限检测限定义为样品中被分析物能够检出但无需准确定量的最低量。
检测限常常与方法的灵敏度相混淆，灵敏度是以响应值对被分析物的浓度或质量作图所得校正曲线的斜率。
定量限（LOQ）定义为能够以适当的精密度和准确度对样品中的被分析物进行定量测定的最低量。
定量限和检测限测定方式包括：a) 视觉判断通过测定待测成分浓度已知的样品，并确定该成分能被可靠检出的最低水平来计算检测限。
如重金属测定法。
b) 信噪比法通过比较测得的已知低浓度的样品信号和空白样品的信号，建立能够监测的被测物的最低浓度所得到的方法。
如色谱法。
c) 基于空白的响应值标准偏差通过分析适当数量的空白样品并计算所得响应值的标准偏差来测量分析背景响应值的大小。
如光谱法。
检测限数据须用含量相近的样品进行验证。
应附测定图谱，说明试验过程和检测限结果；定量限数据还应包括准确度和精密度验证数据。
图1 通过信噪比评价检测限和定量检测限和定量限测定方法（信噪比法）示例：在最灵敏的仪器状态下,测定至少四个空白样品,洗脱时间需覆盖整个样品中所有组分的流出，计算平均噪声水平；然后按信噪比大于2而小于6 配制所有组分的样品溶液，每个样品进样三次,计算该组分的最小检测限；然后按信噪比等于10.0±0.5 配制样品溶液，连续进样三次计算组分的最小定量限。
耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于日常检验提供依据。
确定方法的耐用性时，使一系列的方法参数在一定的范围内变动，测定这些变动对结果的量化影响。
常见的耐用性考察因素示例如下表。
如果参数的影响在预先设定的允许范围内，则证实方法在该参数范围内耐用。
表1 常见耐用性考察因素耐用性试验可以确定分析方法的关键参数及其允许的容量范围，并可以帮助评估一种或某种参数变化后方法是否需要重新验证。
在方法开发阶段应考虑通过风险评估的方式确定耐用性试验因素设计，这也是“质量源于设计”（QbD）在方法开发中的体现。
体内药物分析方法的验证与实例
体内药物分析方法的验证与实例
c1、下列关于验证的效能指标与基本要求叙述错误的是（）
A、标准曲线与线性范围应覆盖所有浓度范围
B、强调特异性是为避免干扰
C、准确度是为了确保结果的可重现
D、稳定性是为了确保所有样品准确测定
E、提取回收率是为了确保准确度
a2、分析方法在用于实际生物样品分析之前必需（）
A、验证分析方法的可行性与可靠性
B、考虑所有可变因素
C、评价效能指标
D、进行用药后的实际生物样品测试
b3、生物基质中待测药物稳定性的验证包括（）
A、室温放置
B、高温
C、冷冻
D、冷藏
E、冻-融循环
c4、分析方法的验证需要验证（）
A、特异性与线性范围
B、精密度与准确度
C、包封率与载药量
D、定量限与检测限
E、回收率与溶液稳定性
a5、盐酸环丙沙星的化学结构中具有苯环、羰基等结构，可初步选择的分析方法是（）
A、HPLC
B、GC
C、TCL
D、AA
E、EIA。
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8.7－溶液加热降解 • • 方法: 样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中, 加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。稀释到刻度。 取4ml溶液并转移到坩埚内。与105C加热2小时。冷 却到室温。过滤。 标准品:4ml的工作标准液转移到坩埚内。与105C加 热2小时。冷却到室温。过滤。
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6.1－线性 • 方法 • • • 计算 • • 线性回归分析 相关系数,斜率,Y轴截距 按照分析方法要求,均匀选择6个点,配制标示量 的0.02%到1.0%含量标准溶液 分别进样
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6.2－准确性 • 方法 • • • 计算 • • 按峰面积用回归线性方程来计算测量浓度 平均值,相对标准偏差 配制杂质浓度的标准溶液 进样6次
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6.5－检测限度 • 用系统重复性实验中的标准偏和线性回归方程中的斜 率差计算
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7.0－m-盐酸氟西汀验证 • 项目: • • • • • 线性 检测限度 定量限度 准确性 精密度 • • 方法重复性 中间精密度
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2.0－精密度 • 项目: • • • 系统重复性 方法重复性 中间精密度
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2.1－系统重复性 • 方法 • • • 计算 • 峰面积平均值与相对标准偏差 按照分析方法要求,配制盐酸氟西汀标准溶液 重复进样5次
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6.3－系统重复性 • 方法 • • • 计算 • 峰面积的平均值与相对标准偏差 配制工作浓度的0.02%和0.05%标准溶液 分别进样6次
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6.4－定量限度 • 用系统重复性实验中的标准偏和线性回归方程中的斜 率差计算
•
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8.5－氧化降解 • • 方法: 样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中, 加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加1ml的30%过 氧化氢。放置5小时。稀释到刻度。过滤。 标准品:称量大约22mg的标准品,转移到50ml容量瓶中, 加入20ml稀释剂,2ml的30%过氧化氢。放置5小时。 稀释到刻度。
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5.1－标准品准确性 • 方法 • • • 计算 • 准确性 • 测定浓度值用峰面积按照回归方程进行 计算 按照分析方法要求,配制盐酸氟西汀标准溶液 重复进样5次
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5.2－样品准确性 • 方法 • • • 计算 • 回收率 • 测定浓度值用峰面积按照回归方程进行 计算
•
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8.4－碱降解 • • 方法: 样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中, 加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加1ml的5N氢 氧化钠。放置18小时。用5N盐酸中和到pH5.5。稀释 到刻度。过滤。 标准品:称量大约22mg的标准品,转移到50ml容量瓶中, 加入20ml稀释剂,加2ml的5N氢氧化钠。放置18小时。 用5N盐酸中和到pH5.5。稀释到刻度。
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7.5－准确性 • 方法 • 在已知m-盐酸氟西汀含量的样品中分别在 0.4%,0.5%和0.6%3个水平加入m-盐酸氟西汀 标准品 每组3个样品中 回收率 实际检测值用峰面积按照回归线性方程计算
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• • 计算 • •
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4.0－范围 • 方法 • • • • 计算 • •
正常20mg样品含量分析浓度50%到200%范围 内 均匀选5个点 配制盐酸氟西汀样品溶液 分别进样 线性回归分析 相关系数,斜率,Y轴截距
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5.0－准确性 • 项目: • • 标准品准确性 样品准确性
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10.2－析因设计因素
项目 柱 流动相 溶液A 溶液B 流量 温度 进样量 检测器 稀释剂 规格 Shandon, Hypersil BDS C-8, 5, 1504.6mm 溶液A:溶液B(55:45) 三乙胺缓冲液:乙腈:四氢呋喃(75:15:10) 三乙胺缓冲液:乙腈:四氢呋喃(65:20:15) 1.4 － 1.6mL/min 30C (2 C) 10L UV detector = 227nm, Flow Cell = 10mm. 溶液B
•
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8.8－粉末加热降解 • • 方法: 样品:称量大约等量20mg的样品,转移到合适的试管中。 于100C加热4小时。冷却到室温。转移到50ml容量 瓶,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。稀释到刻度。 过滤。 标准品:称量大约等量45mg的标准品,转移到合适的试 管中。于100C加热4小时。冷却到室温。转移到 100ml容量瓶。稀释到刻度。过滤。
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3.0－线性 • 方法 • • • • 计算 • •
正常含量分析用标准溶液浓度的50%到200% 范围内 均匀选择5个点 并配制相应浓度的盐酸氟西汀含量标准溶液 分别进样 线性回归分析 相关系数,斜率,Y轴截距
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9.0－标准与样品溶液的稳定性 • 项目: • • 标准溶液 样品溶液
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9.1－标准溶液稳定性 • 方法: • • 配制标准溶液,冷藏于4C－8C放置30天以上 与两个新配制的标准溶液一道测试
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8.9－系统适应性 • • • • 系统适应性按照规定方法进行。 氟西汀与m-氟西汀间分离度应不小于2.0。 氟西汀峰拖尾因子应不大于2.0。 氟西汀的典型保留时间大约在9.5到10.0分之间。
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8.10－空白 • • 分析两个批号的空白与氟西汀,并分析混合样品 没发现干扰峰
7.6－重复性 • 项目: • • 方法重复性 中间精密度
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7.61－方法重复性 • 方法 • • • 计算 • • • 平均值 标准偏差 相对标准偏差
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按照要求配制溶液 反复进样6次
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7.62－中间精密度 • 方法 • • • • 计算 • 含量及相对标准偏差 另外一个分析员,在不同日期,另外的仪器上按 照方法重复性方法 配制溶液6次 分别进样
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8.0－选择性
1.降解
1) 原样 2) 酸降解 3) 碱降解 4) 氧化降解 5) 日光降解 6) 溶液加热降解 7) 粉末加热降解
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2.系统适应性 3.空白
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8.1－简介 • 降解产物的选择性试验是分析方法稳定性指示性验证 的一个重要部分 主要目的是通过试验证明各种降解的产物与所要分析 的物质可以完全分开 本试验中的主要设备是二极管矩阵检测器。并通过计 算:纯度角,匹配角,纯度阈值,匹配阈值,含量来证明峰 的纯度
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9.2－样品溶液稳定性 • 方法 • • 配制样品溶液,冷藏放置48小时 重新分析
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10.0－耐用性 • 项目: • • 提取效率 析因设计
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10.1－提取效率 • 方法 • • 取三个样品,按照要求配置溶液,但超声分为 5,10和15分钟 每个样品测定3次
•
•
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8.2－原样品 • 方法: • • 20mg胶囊按照规定的方法进样分析 标准品按照规定的方法进样分析
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8.3－酸降解 • • 方法: 样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中, 加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加1ml的浓盐酸。 放置18小时。用10N氢氧化钠中和到pH5.5。稀释到 刻度。过滤。 标准品:称量大约22mg的标准品,转移到50ml容量瓶中, 加入20ml稀释剂,加2ml的盐酸。放置18小时。用10N 氢氧化钠中和到pH5.5。稀释到刻度。
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7.1－m-盐酸氟西汀简介 • • • m-盐酸氟西汀是产品中的一个杂质 m-盐酸氟西汀在0.05%－1.0%区间呈线性 相对响应因子(对盐酸氟西汀) • F=132.73952/74859534=1.8
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