脱落细胞学检查技术及基本知识ppt课件

特点:固定和染色合并在一起,手续简便,染色时间短,对 白细胞特异性颗粒着色较好,但对核的着色差.
1.瑞氏染料:由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有 复合染料。
亚甲蓝(M+)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型 两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝,其有色部分为阳离子， 无色部分为阴离子 。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇 等次级染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。
（二）涂片制备方法
推片法 涂抹法 压拉涂片法 吸管推片法 喷射法 印片法
（三）涂片的固定
目的：保持细胞形态结构，防止其自溶。
固定液：首选95％酒精，乙醇乙醚，氯仿 乙醇
注意事项：巴氏染色，涂片勿在空气中干 燥后染色；固定时间不短于15分钟（48h 内进行巴氏染色）；固定液要达到90％以 上；液体标本离心后涂片，待潮干后再固 定，宫颈的刮片、痰涂片、拉网涂片、内 窥镜的刷片、针吸涂片应立即固定。
巴氏
液基薄层制片
10～20％标本移至玻片 100％标本收集至保存液中
干固定
湿固定
制片技术不稳定，不能重 复
易受血黏液炎性渗出物覆 盖
细胞分布不均匀，易重叠
技术稳定，可重复 去除血黏液和大量炎性遮盖物 细胞分布均匀集中，不易重叠
镜下观察费力，易漏诊 镜下观察省力，不易漏诊
成本较低
成本较高
染色
一、瑞特染色法(Wright ' s)
3min ×2 • 封片：中性树胶封固
结果判定：胞核呈紫蓝色，核仁红色，底 层细胞、中层细胞和表层角化前细胞为淡 蓝色，不全角化细胞（角化前细胞）呈粉 红色，角化细胞呈桔黄色。
适用于上皮细胞染色和阴道涂片观察女性 激素的影响
优点：细胞具有多色性
缺点：染色程序较复杂
注意事项：
染液要充分溶解 苏木素要染前月余配制，用时每天过滤1次，加
脱落细胞学
第一章 脱落细胞检查技术和临床应用评价
脱落细胞学：是对人体各部位特别是管腔 器官表面的脱落细胞，或对病变组织通过 细针吸取的方法获得的细胞染色并在显微 镜下观察作出诊断，又称诊断细胞学。
标本来源：自然排出物 体腔抽出液 细针穿刺吸取液
第一节 标本采集和涂片制作
一、标本采集
原则：尽量减少受检者的痛苦，取得合 作；方法简便、实用、经济；尽量取得 足够供诊断的细胞成分；及时快速送检 立刻制片；绝对避免污染；标本号标记 清楚。
固定方法：带湿固定 干燥固定
固定时间：15～30min （四）涂片的染色
目的：使细胞结构清晰显示；应用各种染色使细 胞浆与核恰当显示不同颜色；使细胞透明度高， 结构清晰。 方法：常规染色为巴氏染色，配合HE、Giemsa、 特染等。
1 巴氏染色法
• 水化：固定好的涂片→80％、70％、50％乙醇→蒸馏水
各1min • 染核：苏木素染3～5min • 分色：1％盐酸中数秒，水洗 • 蓝化：置饱和碳酸锂溶液中1min，水洗 • 脱水：50％、70％、80％、95％乙醇各1min • 染浆：置于橘黄G液中染2～4min→95％乙醇洗2次→置于
EA36染液中4～5min • 脱水：95％、无水乙醇各1～2min→二甲苯透明2～
对检查影响较大的是过多成熟的红细胞和 标本的严重凝固，需处理，淋巴细胞分离 液或低渗方法可去除红细胞，凝固的积液 将凝块吸出，剩余液体离心涂片。
二、涂片制作
（一）要求： 1 标本要新鲜 2 操作要轻柔：细胞分布均匀；薄厚适 当 勿挤压摩擦，以免细胞损伤变形； 3 玻片要清洁 4 涂片要牢固 5 涂片数量 6 标号准确
途径： 细针穿刺；脱落细胞学检查
常用方法：
直视采集法：直接用刮片刮取、吸管吸取、 刷洗
自然分泌液采取法：痰涂片、尿液涂片、 前列腺液涂片、乳头溢液涂片
灌洗法：空腔器官、盆腔或腹腔 摩擦法：鼻咽、食管、胃 针穿抽吸法：浆膜腔关节腔积液，淋巴结、
软组织、甲状腺、肝
浆膜腔积液的处理：
抽出应立即送检（4℃保存，24h内处理完 标本）
新液。室温低时不易着色，可<50℃加热 盐酸分化前镜下观察以确定分化时间 涂片在橘黄液中不宜过长EA36染液配制和使用前
应用滤纸调试
2 HE染色：透明度好、核浆对比鲜明、染 色效果稳定，核紫蓝色、浆淡玫瑰红色。 步骤简单，适用于痰涂片。
3 瑞氏－吉姆萨染色：多用于血液、骨髓细 胞学检查
常规巴氏制片与液基薄层制片比较
浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要
是化学作用，是离子彼此结合的反应。
（ 2 ）固定,升温:甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在 一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作
用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速 染色反应。
3.染色原理:
细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学 的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同， 对各种染料的亲和力也不一样。
⑴.血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与 酸性染料伊红结合，染红色，称为嗜酸性物 质；
⑵细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性蛋白质， 与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色，称为 嗜碱性物质；
⑶中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结 合，染淡紫红色，称为中性物质。
4.影响因素: ⑴PH对细胞染色影响:细胞各种成分均为不同蛋白质，
用：
ห้องสมุดไป่ตู้
甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作
（ 1 ）溶解:甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ） 在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而 着色。
ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天
青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞
由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而 定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合， 染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝 或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓 度十分敏感，染色用片必须清洁，无酸碱污染。配 制瑞特液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液， 冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应 异常，以致识别困难，甚至造成错误。 ⑵空气氧化作用:新鲜配制的染料偏碱，须在室温或 是37℃下贮存一定时间，待染料成熟，主要是美蓝 逐渐转变为天青B后才能使用，贮存时愈久，染色 效果愈好。 ⑶挥发:瑞特染液贮存过程中，必须塞严，以防止甲 醇挥发和被氧化成甲酸。有人主张在配方中加入甘 油30ml，防止甲醇挥发，并可使细胞染色清晰。 甲醇必须纯净(AR级)，如甲醇中丙酮含量过多， 染色偏酸，使白细胞着色不良。
伊红(E-)通常为钠盐,既伊红化钠有色部分为阴离子， 无色部分为阳离子，其有色部分为酸性 。
伊红和亚甲蓝混合后，产生一种憎液性胶体伊红化美 蓝中性沉淀(ME)，即瑞特染料(其溶于甲醇即瑞特染液)。 ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
2.甲醇的作用:用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。