银杏叶提取物制剂_阿司匹林及氯吡格雷抗血小板聚集作用比较及对血小板活化因子含量的
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银杏叶提取物( EGB) 制剂是由银杏叶提取得 到的, 是一种用途广泛、无不良反应的天然物质。 EGB 的活性成分主要有黄酮类、萜内酯类、酚酸 类化合物和微量元素等, 其中银杏内酯占 2. 8% ~ 12. 0% , 银杏内酯 B 的含量超过 1. 2% , 具有抗 炎和保护神经作用。血小板活化因子拮抗剂一直 是国内外新药研发的热点, 但是到目前还没有化 学合成的拮抗剂问世, 但是在天然药物领域中银 杏叶当中的银杏内酯 B 是目前世界上唯一公认 的专属性拮抗剂。阿司匹林和氯吡格雷是传统的 抗凝药物, 本实验将比较银杏叶制剂、阿司匹林、 氯吡格雷这 3 种药物抗血小板聚集的途径及靶点 特异性。
2 结果
2. 1 对家兔血小板聚集率的影响 和生理盐水 组相比, EGB 制剂能 显著抑 制 AA、ADP、PAF 诱导的家兔血小板聚集( P < 0. 05, P < 0. 01) , 并 且对 PAF 诱 导 的 血 小 板 聚 集 抑 制 作 用 最 强 ( 38. 93% ) 。和生理盐水组相比, 阿司匹林对 AA 诱导的血小板聚集有显著抑 制作用( P < 0. 01) ; 氯吡格雷对 ADP 诱导的血小板聚集有显著抑制 作用( P< 0. 01, 表 1~ 3) 。 2. 2 对家兔血清 PAF 含量的影响 与给药前相 比, EGB 制剂能降低家兔血清中的 PAF 含量( P < 0. 05) ; 而阿司匹林和氯吡 格雷给药前后 PAF 含量无统计学差异( P> 0. 05, 表 4) 。
998
基础研究
中国临床药理学与治疗学 中国药理学会主办
C N 34-1206/ R, ISSN 1009-2501 htt p: / / w w w . cjcpt. com
2011 Sep; 16( 9) : 998- 1001
银杏叶提取物制剂、阿司匹林及 氯吡格雷抗血小板聚集作用比较及
对血小板活化因子含量的影响
王如伟1, 吕 燊1, 黄 黎1 , 徐 露2, 董 志2
1 浙江中药与天然药物研究院, 浙江省中药利药技术重点实验室, 杭州 310052, 浙江; 2 重庆医科大学药学院重庆市生化与分子药理重点实验室, 重庆 400016
摘要 目的: 观察银杏叶提取物( EGB) 制剂、阿司 匹林及氯吡格雷对家兔血小板聚集率及血小板活 化因子( PAF ) 含量的影 响。方法: 采用体 内实 验, 观察 EGB 制剂、阿司匹林及氯吡格雷对由花 生四烯酸( AA) 、二磷酸腺苷( ADP ) 和 PA F 诱导
表 2 对 ADP 诱导的血小板聚集的影响( x s, n= 7)
组别
生理盐水组 EGB 制剂 阿司匹林 氯吡格雷
给药剂量 ( mg / kg) 等容积
20. 53 5. 13 3. 85
给药次数 ( 次/ d) 3 3 1 1
1 min 33 6 31 6 34 6 31 6
与生理盐水组比较b P< 0. 05, c P< 0. 01
的家兔血小板聚集作用的影响, 以及对给药前后 家兔 P AF 含量的影响。结果: 与生理盐水组比 较, EGB 制剂抑制 AA、ADP、PAF 诱导的家兔血 小板聚集有统计学差异( P < 0. 05, P < 0. 01) , 并 能够降低血清中 PAF 的含量( P < 0. 05) , 阿司匹 林对 AA 诱导的血小板聚集有统计学差异( P < 0. 01) , 氯吡格雷对 ADP 诱导的血小板聚集有统 计学差异( P < 0. 01) , 而阿司匹林和氯吡格雷对 PAF 的含量没有显著影响。结论: EGB 制剂具有 抗血小板聚集作用, 抗 PAF 诱导的血小板聚集作
1 min 30 5 30 6 31 5 30 5
与生理盐水组比较b P< 0. 05, c P< 0. 01
给药后聚集率( % ) 5 m in 54 8 41 7c 34 6c 50 9
M ax 56 10 43 7b 36 6c 54 9
血小板聚集 抑制率( % )
23. 15 35. 45 3. 75
血小板聚集率( % ) = ( 生理盐水组血小板聚 集率- 给药组血小板聚集率) / 生理盐水组血小板 聚集率 100 1. 4 统计学处理 血小板聚集率检测用生理盐 水组与给药组比较, 采用成组 t 检验; PAF 含量 检测采用给药前后自身对照, 用配对 t 检验。P< 0. 05 表示差异有统计学意义。
M ax 57 10 35 6c 47 8 47 8
1 材料与方法
1. 1 动物、试剂、仪器 日本大耳白兔, 体重( 2. 0 0. 2) kg, 雌雄各半, 由重庆医科大学实验动物
中心提供, 动物合 格证号: SCXK ( 渝) 20090006。 EGB 制剂( 银杏叶 片, 批号: 20090601, 浙江康恩 贝制药股份有限公司生产) 、阿司匹林( 拜耳医药 保健公司, 批号: BT A7294) 、氯吡格雷( 赛诺菲- 安 万特, 批号: 2633) ; 花生四烯酸( AA, Sigm a) 使用 时 将 其 溶 解 在 1% 碳 酸 钠 溶 液 中, 配 成 0. 35 mm ol/ L 的浓度; 二磷酸腺苷( ADP , Sigm a) 溶于磷酸盐缓冲液, 最终浓度为 300 mol/ L; 血 小板活化因子( P AF, Cayman) 溶解在 pH 为 7. 6 的含 0. 25% 小牛血清蛋白的 T ris- N aCl 溶液中, 终浓度为 3. 6 nm ol/ L ; 枸橼酸钠( 北京中杉金桥 生物 技 术 公 司 ) 蒸 馏 水 配 成 3. 8% 的 浓 度。 T YXN- 96 多功能智能血液凝聚仪( 上海通用技术 研究所研制) ; 兔血小板活化因子 ELISA 试剂盒 ( Uscnlife) ; 酶标仪 ( spect ra maxm 2 多功 能酶标
给药后聚集率( % ) 5 m in 52 9 36 6c 50 10 36 6c
M ax 56 10 43 7b 53 10 37 7c
血小板聚集 抑制率( % )
23. 43 6. 07 33. 23
表 3 对 PAF 诱导的血小板聚集的影响( x s, n= 7)
组别
生理盐水组 EGB 制剂 阿司匹林 氯吡格雷
1000
Chin J Clin Phar maco l T her 2011 Sep; 16( 9)
表 1 对 AA 诱导的血小板聚集的影响( x s, n= 7)
组别
生理盐水组 EGB 制剂 阿司匹林 氯吡格雷
给药剂量 ( mg / kg) 等容积
20. 53 5. 13 3. 85
给药次数 ( 次/ d) 3 3 1 1
仪) 。 1. 2 分组及给药 日本大耳白兔 28 只, 随机分 为 4 组, 每组 7 只: 生理盐水组、EGB 制剂组、阿 司匹林组、氯吡格雷组。以上各组剂量均根据文 献[ 1] 由人体剂量换算为家兔等效剂量( 具体见文 中表格) , i. g. 给药, 生理盐水组、EGB 制剂组每 日 3 次, 阿司匹林和氯吡格雷组每日给药一次, 连 续 7 d。 1. 3 血小板聚集率及 PAF 含量的检测 每只动 物首次 给药 前, 耳 缘静脉 抽血 1 m L, 室温 放置 2 h 取血清, 检测给药前 PAF 含量。在第 7 天给 药后 1 h, 心脏取血 7 mL , 分出 1 mL 用于检测 给药后 PAF 的含量, 剩余 6 mL 用 3. 8% 枸橼酸 钠 1 9 抗凝, 800 r/ m in 离心 10 min, 取上清得 富血小板血浆( PRP) , 剩余部分 3000 r/ m in 速度 离心 15 min, 取贫血小板血浆( PPP ) 。用 P PP 调 节 PR P, 使 P RP 血小板数目在 3. 6 1011/ L。测 定并 记 录 在 不 同 诱 导 剂 下 ( AA、ADP 、P AF ) 1 m in、5 m in 及最大血小板聚集率。
pared w it h the model g roup, the macr oscopic and micr oscopic damage scores and t he act ivity of MP O w ere sig nif icant ly decreased in GSPE dosage g roup. M oreover, t he ex pression lev els of c- Jun and c- F os in t he colon t issues w ere significant ly decr eased. CONCLUSION: GSPE can inhibit the expressio n of c- Jun and c- F os in the co lon t issues of t he recurrent colit is rats. KEY WORDS P roant hocyanidins fro m g rape seeds; 2, 4, 6- t rinit robenzenesulfonic acid; Col-i tis; Re- cur rent ; c- Jun; c- Fo s
2011-07- 07 收稿 2011-08-25 修回 浙江省重点实验室和中试基地计划项目( 2009E10009) ; 浙江省 重 大科技专项重点社会发展项目( 2009C13027) 王如伟, 男, 博士生导师, 研究方向: 中药药理。 Tel: 13588431182 E-mail: lus @ conbagroup. com
给药剂量 ( mg / kg) 等容积
20. 53 5. 13 3. 85
给药次数 ( 次/ d) 3 3 1 1
1 min 30 5 23 5b 24 6b 24 5b
与生理盐水组比较b P< 0. 05, c P< 0. 01
给药后聚集率( % ) 5 m in 49 8 34 5c 42 7 41 7
rats w er e randomized divided int o six gr oups: no rmal cont ro l group, model cont rol gr oup, Su-l f asalazine ( SASP) gro up, and t he 3 GSPE t reatm ent gr oups. Rat s w er e intr ag ast rically administ ered dif ferent doses of GSPE ( 100, 200, and 400 mg / kg ) per day f or 7 days af t er r ecur rent colit is w as tw ice- induced by T NBS- 50% et hanol. Rat s w er e killed aft er GSPE treat ment 7 days. T he colonic injury and inf lam mat io n w ere assessed by macro scopic and microscopic damage scores and m yelopero xidase ( M PO ) act iv it y. T he ex pression levels o f c- Jun and c- F os in the colo n tissues w ere m easur ed by enzyme- l inked immuno sor bent assay m et hods. RESULTS: Com-
本文编辑: 储冀汝
中国临床药理学与治疗学 2011 Sep; 16( 9)
99 9
Байду номын сангаас
用最强, 并能显著降低 PAF 含量。 关键词 银杏叶提取物制剂; 抗血小板聚集; 血小 板活化因子
中图分类号: R965. 2 文献标识码: A 文 章 编 号: 1009- 2501( 2011) 09- 0998- 04
2 结果
2. 1 对家兔血小板聚集率的影响 和生理盐水 组相比, EGB 制剂能 显著抑 制 AA、ADP、PAF 诱导的家兔血小板聚集( P < 0. 05, P < 0. 01) , 并 且对 PAF 诱 导 的 血 小 板 聚 集 抑 制 作 用 最 强 ( 38. 93% ) 。和生理盐水组相比, 阿司匹林对 AA 诱导的血小板聚集有显著抑 制作用( P < 0. 01) ; 氯吡格雷对 ADP 诱导的血小板聚集有显著抑制 作用( P< 0. 01, 表 1~ 3) 。 2. 2 对家兔血清 PAF 含量的影响 与给药前相 比, EGB 制剂能降低家兔血清中的 PAF 含量( P < 0. 05) ; 而阿司匹林和氯吡 格雷给药前后 PAF 含量无统计学差异( P> 0. 05, 表 4) 。
998
基础研究
中国临床药理学与治疗学 中国药理学会主办
C N 34-1206/ R, ISSN 1009-2501 htt p: / / w w w . cjcpt. com
2011 Sep; 16( 9) : 998- 1001
银杏叶提取物制剂、阿司匹林及 氯吡格雷抗血小板聚集作用比较及
对血小板活化因子含量的影响
王如伟1, 吕 燊1, 黄 黎1 , 徐 露2, 董 志2
1 浙江中药与天然药物研究院, 浙江省中药利药技术重点实验室, 杭州 310052, 浙江; 2 重庆医科大学药学院重庆市生化与分子药理重点实验室, 重庆 400016
摘要 目的: 观察银杏叶提取物( EGB) 制剂、阿司 匹林及氯吡格雷对家兔血小板聚集率及血小板活 化因子( PAF ) 含量的影 响。方法: 采用体 内实 验, 观察 EGB 制剂、阿司匹林及氯吡格雷对由花 生四烯酸( AA) 、二磷酸腺苷( ADP ) 和 PA F 诱导
表 2 对 ADP 诱导的血小板聚集的影响( x s, n= 7)
组别
生理盐水组 EGB 制剂 阿司匹林 氯吡格雷
给药剂量 ( mg / kg) 等容积
20. 53 5. 13 3. 85
给药次数 ( 次/ d) 3 3 1 1
1 min 33 6 31 6 34 6 31 6
与生理盐水组比较b P< 0. 05, c P< 0. 01
的家兔血小板聚集作用的影响, 以及对给药前后 家兔 P AF 含量的影响。结果: 与生理盐水组比 较, EGB 制剂抑制 AA、ADP、PAF 诱导的家兔血 小板聚集有统计学差异( P < 0. 05, P < 0. 01) , 并 能够降低血清中 PAF 的含量( P < 0. 05) , 阿司匹 林对 AA 诱导的血小板聚集有统计学差异( P < 0. 01) , 氯吡格雷对 ADP 诱导的血小板聚集有统 计学差异( P < 0. 01) , 而阿司匹林和氯吡格雷对 PAF 的含量没有显著影响。结论: EGB 制剂具有 抗血小板聚集作用, 抗 PAF 诱导的血小板聚集作
1 min 30 5 30 6 31 5 30 5
与生理盐水组比较b P< 0. 05, c P< 0. 01
给药后聚集率( % ) 5 m in 54 8 41 7c 34 6c 50 9
M ax 56 10 43 7b 36 6c 54 9
血小板聚集 抑制率( % )
23. 15 35. 45 3. 75
血小板聚集率( % ) = ( 生理盐水组血小板聚 集率- 给药组血小板聚集率) / 生理盐水组血小板 聚集率 100 1. 4 统计学处理 血小板聚集率检测用生理盐 水组与给药组比较, 采用成组 t 检验; PAF 含量 检测采用给药前后自身对照, 用配对 t 检验。P< 0. 05 表示差异有统计学意义。
M ax 57 10 35 6c 47 8 47 8
1 材料与方法
1. 1 动物、试剂、仪器 日本大耳白兔, 体重( 2. 0 0. 2) kg, 雌雄各半, 由重庆医科大学实验动物
中心提供, 动物合 格证号: SCXK ( 渝) 20090006。 EGB 制剂( 银杏叶 片, 批号: 20090601, 浙江康恩 贝制药股份有限公司生产) 、阿司匹林( 拜耳医药 保健公司, 批号: BT A7294) 、氯吡格雷( 赛诺菲- 安 万特, 批号: 2633) ; 花生四烯酸( AA, Sigm a) 使用 时 将 其 溶 解 在 1% 碳 酸 钠 溶 液 中, 配 成 0. 35 mm ol/ L 的浓度; 二磷酸腺苷( ADP , Sigm a) 溶于磷酸盐缓冲液, 最终浓度为 300 mol/ L; 血 小板活化因子( P AF, Cayman) 溶解在 pH 为 7. 6 的含 0. 25% 小牛血清蛋白的 T ris- N aCl 溶液中, 终浓度为 3. 6 nm ol/ L ; 枸橼酸钠( 北京中杉金桥 生物 技 术 公 司 ) 蒸 馏 水 配 成 3. 8% 的 浓 度。 T YXN- 96 多功能智能血液凝聚仪( 上海通用技术 研究所研制) ; 兔血小板活化因子 ELISA 试剂盒 ( Uscnlife) ; 酶标仪 ( spect ra maxm 2 多功 能酶标
给药后聚集率( % ) 5 m in 52 9 36 6c 50 10 36 6c
M ax 56 10 43 7b 53 10 37 7c
血小板聚集 抑制率( % )
23. 43 6. 07 33. 23
表 3 对 PAF 诱导的血小板聚集的影响( x s, n= 7)
组别
生理盐水组 EGB 制剂 阿司匹林 氯吡格雷
1000
Chin J Clin Phar maco l T her 2011 Sep; 16( 9)
表 1 对 AA 诱导的血小板聚集的影响( x s, n= 7)
组别
生理盐水组 EGB 制剂 阿司匹林 氯吡格雷
给药剂量 ( mg / kg) 等容积
20. 53 5. 13 3. 85
给药次数 ( 次/ d) 3 3 1 1
仪) 。 1. 2 分组及给药 日本大耳白兔 28 只, 随机分 为 4 组, 每组 7 只: 生理盐水组、EGB 制剂组、阿 司匹林组、氯吡格雷组。以上各组剂量均根据文 献[ 1] 由人体剂量换算为家兔等效剂量( 具体见文 中表格) , i. g. 给药, 生理盐水组、EGB 制剂组每 日 3 次, 阿司匹林和氯吡格雷组每日给药一次, 连 续 7 d。 1. 3 血小板聚集率及 PAF 含量的检测 每只动 物首次 给药 前, 耳 缘静脉 抽血 1 m L, 室温 放置 2 h 取血清, 检测给药前 PAF 含量。在第 7 天给 药后 1 h, 心脏取血 7 mL , 分出 1 mL 用于检测 给药后 PAF 的含量, 剩余 6 mL 用 3. 8% 枸橼酸 钠 1 9 抗凝, 800 r/ m in 离心 10 min, 取上清得 富血小板血浆( PRP) , 剩余部分 3000 r/ m in 速度 离心 15 min, 取贫血小板血浆( PPP ) 。用 P PP 调 节 PR P, 使 P RP 血小板数目在 3. 6 1011/ L。测 定并 记 录 在 不 同 诱 导 剂 下 ( AA、ADP 、P AF ) 1 m in、5 m in 及最大血小板聚集率。
pared w it h the model g roup, the macr oscopic and micr oscopic damage scores and t he act ivity of MP O w ere sig nif icant ly decreased in GSPE dosage g roup. M oreover, t he ex pression lev els of c- Jun and c- F os in t he colon t issues w ere significant ly decr eased. CONCLUSION: GSPE can inhibit the expressio n of c- Jun and c- F os in the co lon t issues of t he recurrent colit is rats. KEY WORDS P roant hocyanidins fro m g rape seeds; 2, 4, 6- t rinit robenzenesulfonic acid; Col-i tis; Re- cur rent ; c- Jun; c- Fo s
2011-07- 07 收稿 2011-08-25 修回 浙江省重点实验室和中试基地计划项目( 2009E10009) ; 浙江省 重 大科技专项重点社会发展项目( 2009C13027) 王如伟, 男, 博士生导师, 研究方向: 中药药理。 Tel: 13588431182 E-mail: lus @ conbagroup. com
给药剂量 ( mg / kg) 等容积
20. 53 5. 13 3. 85
给药次数 ( 次/ d) 3 3 1 1
1 min 30 5 23 5b 24 6b 24 5b
与生理盐水组比较b P< 0. 05, c P< 0. 01
给药后聚集率( % ) 5 m in 49 8 34 5c 42 7 41 7
rats w er e randomized divided int o six gr oups: no rmal cont ro l group, model cont rol gr oup, Su-l f asalazine ( SASP) gro up, and t he 3 GSPE t reatm ent gr oups. Rat s w er e intr ag ast rically administ ered dif ferent doses of GSPE ( 100, 200, and 400 mg / kg ) per day f or 7 days af t er r ecur rent colit is w as tw ice- induced by T NBS- 50% et hanol. Rat s w er e killed aft er GSPE treat ment 7 days. T he colonic injury and inf lam mat io n w ere assessed by macro scopic and microscopic damage scores and m yelopero xidase ( M PO ) act iv it y. T he ex pression levels o f c- Jun and c- F os in the colo n tissues w ere m easur ed by enzyme- l inked immuno sor bent assay m et hods. RESULTS: Com-
本文编辑: 储冀汝
中国临床药理学与治疗学 2011 Sep; 16( 9)
99 9
Байду номын сангаас
用最强, 并能显著降低 PAF 含量。 关键词 银杏叶提取物制剂; 抗血小板聚集; 血小 板活化因子
中图分类号: R965. 2 文献标识码: A 文 章 编 号: 1009- 2501( 2011) 09- 0998- 04