清除自由基研究方法汇总

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2024DPPH清除自由基方法

2024DPPH清除自由基方法2024年，一种新的清除自由基的方法被引入，该方法使用DPPH试剂。

DPPH（1,1-二苯基-2-三甲基-苦基-2-脒基），是一种广泛应用于生物医学研究中的人工氧化剂。

DPPH试剂呈紫色，并且可与捕获自由基反应后转变成无色。

因此，通过测量DPPH试剂的颜色变化，可以评估抗氧化物质对自由基的清除能力。

DPPH清除自由基方法是一种简单、快速且经济的方法。

它适用于各种类型的样品，包括天然产物、食品、药物和化妆品。

使用DPPH试剂测定抗氧化能力的方法主要有两种：溶液试剂法和固相试剂法。

溶液试剂法是最常用的DPPH清除自由基方法之一、在这种方法中，首先将DPPH试剂以适当浓度溶解在溶剂中，通常使用甲醇或乙醇。

然后，将样品与DPPH溶液混合，反应一定时间。

在反应过程中，DPPH试剂将与样品中的抗氧化物质反应，使DPPH试剂转变为无色。

通过测量反应溶液的吸收光谱或测定其吸光度的变化，可以计算出样品的清除自由基能力。

固相试剂法是一种近年来发展起来的新方法。

在这种方法中，固定DPPH试剂在固相载体上，通常使用硅胶或其他吸附剂。

样品溶液被滴加到载体上，自由基会与固相DPPH试剂发生反应，并转变成无色。

然后，通过测量吸附剂的颜色变化或对比吸附剂的吸光度，可以确定样品的清除自由基能力。

DPPH清除自由基方法的优点之一是它不需要复杂的仪器设备，因此可以应用于各种实验室条件。

此外，DPPH试剂的制备相对简单，价格也相对较低。

这使得DPPH清除自由基方法成为研究抗氧化剂的吸引人选择。

然而，DPPH清除自由基方法也存在一些限制。

首先，DPPH试剂只能评估清除自由基的能力，而不能提供有关抗氧化物质的详细信息。

此外，该方法不能区分不同类型的自由基，因此不能用于研究具体自由基类型的清除能力。

最后，溶液试剂法和固相试剂法都需要一定时间的反应才能得到准确的结果，这可能会造成实验中的误差。

总的来说，DPPH清除自由基方法是一种简单有效的方法，用于评估样品的抗氧化能力。

多酚类物质清除自由基活性研究

多酚类物质清除自由基活性研究一、实验目的1.了解多酚物质的提取方法2.掌握清除DPPH的测定方法二、实验原理DPPH是一种带一个质子并有特征吸收带的自由基，抗氧化剂清除DPPH是由于抗氧化剂能接受DPPH提供的质子（H），使DPPH被还原。

DPPH是一中稳定的自由基，与抗氧化剂发生反应，提供H被还原，颜色发生变化，由深紫色变为淡黄色。

三、试剂DPPH 、95%乙醇四、实验步骤1、多酚类物质的提取：取葡萄籽30g烘干、粉碎，过40目筛。

置于300mL60%乙醇中提取1.5h，过滤去残渣，滤液真空浓缩至10mL即为多酚粗提液（待测液）。

2、多酚物质清除DPPH实验：i.在10mL比色管中依次加入4.0mL257.7mg/LDPPH溶液和1.0mL95%乙醇，混匀反应稳定后，以95%乙醇液为参比，在518nm处测吸光值，记为A0。

ii.在10mL比色管中依次加入4mL95%的乙醇溶液和1.0mL待测试样溶液，混匀反应稳定后，以95%乙醇液为参比，在518nm处测吸光值，记为A r。

iii.在10mL比色管中依次加入4.0mL257.7mg/LDPPH溶液和1.0mL待测试样溶液，混匀反应稳定后，以95%乙醇液为参比，在518nm处测吸光值，记为A s。

自由基清除率公式，见式r(%)=[1-(A s-A r)/ A0]式中:A0--DPPH与溶剂混合液的吸光度；A r--样液与溶剂混合液的吸光度；A s--DPPH与样液反应后的吸光度。

如下表：待测液0 1 1 0.5 0.25 ABS分别计算不同浓度多酚提取液对DPPH的清除率，并用柱状图表示。

思考题：多酚抗氧化的原理？。

低分子自由基的清除方法

低分子自由基的清除方法
低分子自由基是指分子较小的自由基，它们在生物体系和化学反应中起到重要的作用，但过多的自由基会对细胞和组织造成损伤。

以下是一些常见的清除低分子自由基的方法：
1. 抗氧化剂：使用抗氧化剂是一种常见的清除自由基的方法。

抗氧化剂可以与自由基发生反应，将其转化为较为稳定的产物，从而减少自由基的数量。

一些常见的抗氧化剂包括维生素C、维生素E、类胡萝卜素、谷胱甘肽等。

2. 酶系统：生物体内存在一些酶系统可以清除自由基。

例如，超氧化物歧化酶（SOD）可以将超氧自由基转化为过氧化氢和氧气，过氧化氢酶（CAT）可以将过氧化氢分解为水和氧气。

3. 饮食调整：通过饮食摄入富含抗氧化剂的食物，如水果、蔬菜、全谷类、坚果等，可以提供体内所需的抗氧化剂，帮助清除自由基。

4. 避免自由基产生的源头：尽量避免接触自由基产生的源头，如吸烟、饮酒、暴露在污染环境中、过度暴露于紫外线等。

5. 适度运动：适度的运动可以增强身体的抗氧化能力，提高自
由基清除酶的活性，有助于减少自由基的产生和积累。

清除自由基最好的方法

清除自由基最好的方法自由基是一种高度活跃的分子，它们会在人体内引起氧化应激，导致细胞损伤和衰老。

因此，清除自由基对于维持身体健康至关重要。

那么，什么是清除自由基最好的方法呢？首先，摄入富含抗氧化剂的食物是清除自由基的重要途径。

抗氧化剂可以中和自由基，减少其对细胞的损害。

常见的富含抗氧化剂的食物包括绿叶蔬菜、水果、坚果、鱼类等。

这些食物中的维生素C、维生素E、β-胡萝卜素等成分都是优秀的抗氧化剂，能够有效清除体内的自由基。

其次，适量运动也是清除自由基的有效方法。

适量的运动可以促进身体新陈代谢，增强机体对自由基的清除能力。

同时，运动可以增加氧气摄入，促进血液循环，有助于清除体内的自由基。

但是需要注意的是，过度运动会产生大量自由基，反而会加重氧化应激，因此运动量应该适度控制。

此外，保持良好的生活习惯也是清除自由基的重要手段。

戒烟限酒、保持充足的睡眠、减少压力等都能够减少自由基的产生和积累。

尤其是抽烟会释放大量的自由基，对身体造成严重损害，因此戒烟是清除自由基的首要步骤。

最后，补充适量的抗氧化剂也是清除自由基的有效途径。

在日常生活中，我们可以通过补充维生素C、维生素E、硒等抗氧化剂来帮助身体清除自由基。

但需要注意的是，抗氧化剂的补充应该是适量的，过量摄入抗氧化剂反而可能对身体造成不利影响。

综上所述，清除自由基最好的方法是多方面的。

通过摄入富含抗氧化剂的食物、适量运动、保持良好的生活习惯以及适量补充抗氧化剂，我们可以有效地保护身体免受自由基的侵害，延缓衰老，维持身体健康。

希望大家能够重视清除自由基的重要性，从日常生活中做起，保护好自己的健康。

A清除自由基实验方法

1、DPPH 自由基清除实验取0.2 mL 样品，加入4 mL 醋酸缓冲溶液、3.8 mL 乙醇和2 mLDPPH，混合均匀后室温避光放置30 min，测定在517 nm 处的吸光度A。

同理，取0.2 mL 样品、4mL 醋酸缓冲溶液和3.8 mL 乙醇，测定在517nm处的吸光度A b。

4 mL 醋酸缓冲溶液、4 mL 乙醇和2 mL DPPH，测定在517 nm 处的吸光度A0。

自由基的清除率=[A0-(A－Ab)]/A0。

2、ABTS 自由基清除实验20 mL 的7 mmol/L ABTS 和352 μL 的140 nmol/L 过硫酸钾混合，在室温、避光条件下静置过夜，形成ABTS＋自由基储备液。

该储备液在室温、避光的条件下稳定，使用前用无水乙醇稀释成工作液，要求其在30 ℃、734 nm 波长下的吸光度为0.7±0.02。

加入的提取液0.1 mL、ABTS 工作液5 mL，混合均匀后在室温下避光反应10 min 后，在734 nm 处测定吸光度At。

ABTS 溶液作空白吸光度为Ar，样品0.1 mL、乙醇5 mL 混合均匀吸光度为A0。

ABTS＋自由基清除率(%)＝[1-(At-A0)/Ar]×100式中：At 为样品的吸光值；Ar 为空白的吸光值。

3、超氧阴离子清除实验采用邻苯三酚自氧化法，取4 mL 0.1 mol/L pH8.2 Tris-HCl 缓冲溶液和蒸馏水2 mL，混匀后在25 ℃水浴中保温20min，然后加入样品溶液2 mL，取出后立即加入在25 ℃预热过的5 mmol/L 邻苯三酚0.5 mL(以10 mmol/L HCL 配制，空白管用10 mmol/L HCL 代替邻苯三酚的HCL 溶液)，摇匀后倒入比色皿，325 nm下每隔30 s 测定吸光度，连续测定4 min，计算线性范围内每分钟吸光度的增加。

在加入一定体积样品溶液时，减少蒸馏水的体积。

DPPH自由基清除测定

DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。

目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。

DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。

它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。

向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。

即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。

实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄芩苷[1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：N N+O2NO2NNO2H+N NHO2NO2NNO2 DPPH与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）；无水乙醇；仪器：分光光度计1.DPPH贮备液的制备准确称取DPPH试剂3．5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol／L DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用。

2.试液的制备(只作参考)准确称取5.2mg干燥的黄酮提取物（32.75%）,用无水乙醇溶解，并定量转入50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol／L 试液。

3.DPPH·清除率的测定在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。

抗氧化活性研究方法

抗氧化活性研究方法引言：氧化反应是指分子或原子失去电子，而还原反应是指分子或原子获得电子。

由于氧化反应产生的自由基具有高度活性，能够对细胞结构和功能造成损害，导致多种疾病的发生。

因此，研究抗氧化活性及其机制对于预防和治疗这些疾病具有重要意义。

本文将介绍几种常用的抗氧化活性研究方法。

一、DPPH自由基清除能力测定法DPPH自由基清除能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。

DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其颜色随着氧化程度的增加而减弱。

在该方法中，将待测样品与DPPH溶液混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够清除DPPH自由基，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。

二、还原能力测定法还原能力测定法是通过测定待测样品对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。

常用的还原剂包括铁离子、铜离子等。

在该方法中，将待测样品与还原剂混合，通过测定混合液的吸光度变化或还原剂浓度的变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够还原还原剂，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降或还原剂浓度的降低。

三、氧化脂质抑制能力测定法氧化脂质抑制能力测定法是通过测定待测样品对氧化脂质的抑制能力来评估其抗氧化活性。

常用的氧化脂质包括脂肪酸、脂肪油等。

在该方法中，将待测样品与氧化脂质混合，通过测定混合液中脂质的氧化程度来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够有效抑制氧化脂质的形成。

四、超氧阴离子清除能力测定法超氧阴离子是一种常见的自由基，具有较高的活性。

超氧阴离子清除能力测定法是通过测定待测样品对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。

常用的超氧阴离子产生体系包括NBT（硝基蓝盐）-NADH（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）体系、XTT（二苯基四唑盐）体系等。

在该方法中，将待测样品与超氧阴离子产生体系混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。

抗氧化活性强的样品能够有效清除超氧阴离子，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。

黄酮类化合物清除活性氧自由基性能的研究

黄酮类化合物清除活性氧自由基性能的研究研究证明，黄酮类化合物对清除活性氧自由基具有重要的作用。

它们对抗自由基的作用机理极其复杂。

有许多研究显示，黄酮类化合物可以有效地清除活性氧自由基，其中包括紫外线照射、物质污染、烟雾等外部因素,也可以抑制炎症现象。

黄酮类化合物作为一类广泛存在于植物中的天然产物，含有针叶树、苹果、鲜花、葡萄等植物。

一些植物中特有的黄酮含量很高，如丁香、胡椒、咖啡和南瓜等植物，含有大量的黄酮类化合物。

主要的黄酮类化合物结构分为四类：环黄酮、酚类黄酮、酯类黄酮和硝基黄酮。

其中，环黄酮抗氧化活性最强，它能够有效地清除活性氧自由基。

黄酮类化合物抗氧化机制是一个复杂的过程，它们可以通过多种方式抑制活性氧自由基。

其中最重要的机制是不同的黄酮类化合物可以与自由基发生直接反应，从而将自由基抑制或清除。

此外，黄酮类化合物还可以对细胞周围的环境和分子进行改变，从而增强其他抗氧化剂的作用，向活性氧的攻击提供更强的防御。

黄酮类化合物的抗氧化作用在植物中也有一定的作用，它们可以维护植物的生命活动，减少受到活性氧损害的概率，从而延缓植物的衰老。

此外，黄酮类化合物在食品加工、医药制剂以及化妆品等领域中也具有重要的作用。

实验表明，黄酮类化合物的抗氧化性能可以通过高浓度的紫外线照射、温度、pH值及溶剂等外在因素来改变。

因此，为了获得良好的抗氧化效果，应实施合理的拆分、选择和保护措施，以便尽可能地提高黄酮类化合物的抗氧化活性。

本研究为开发新型黄酮类化合物和抗氧化剂提供了理论基础，它为研究黄酮类化合物抗氧化性能提供了可靠的参考依据。

未来的研究应重点研究不同的黄酮类化合物的抗氧化性能，以及这些化合物在环境污染防治、食品保鲜以及药物开发等方面的应用。

综上所述，黄酮类化合物的抗氧化活性具有重要的作用，可有效抵御活性氧自由基的侵害。

它们可以用于保护植物和动物免受活性氧自由基的损害，还可以用于防止食品变质、药物开发和科学实验等。

清除自由基研究方法汇总

取 6 支 10ml 比色管，分别依次加入 0.3ml7.5mmol/L 硫酸亚铁铵溶液、 0.3ml7.5mmol/L 邻二氮菲溶液、1mlpH7.47Tris-HCl 缓冲溶液，在 2、3、4、5、 6 号比色管中各加入 0.2ml7.5mmol/LH2O2，然后在 3、4、5、6 号比色管中分别加入 0.3ml 浓度分别为 0.02、0.04、0.08、0.10mg/ml 的山稔子黄酮类提取物，用重蒸水定容至刻度，在 37℃的水浴中，反应 1h，在 450～550nm 波长范围内扫描，得最大吸收波长，并在此波长下测光密度值，根据下式计算羟自由基的清除率：
3.超氧阴离子自由基（O2-·）邻苯三酚法：超氧自由基难于用一般方法产生和检测,但是在弱碱性条件下, 邻苯三酚能
发生自氧化反应,生成 O2-·和有色中间产物, 该中间产物在λ=320 nm 处有一特征吸收峰。在初始阶段, 中间产物的量与时间成线性关系。当加入 O2-·清除剂时, 它能迅速与 O2-·反应, 从而阻止中间产物的积累, 致使溶液在 λ =320 nm 处吸收减弱。故可以通过测定 A320 值来评价清除剂对 O2-·的清除作用。
以蒸馏水代替水解样品溶液作为对照样品重复上述过程，得出吸光度变化的斜率为 K0；
计算清除超氧阴离子的能力：
式中：K0——空白对照液的吸光度变化斜率 K1——加入水解液后的吸光度变化斜率 4.3.3 水解物清除羟基自由基（·OH）能力的测定采用水杨酸法测定水解物清除羟基自由基（·OH）能力[90]。在反应体系中加入 10mL 9mmol/L FeSO4 溶液和 10mL 9mmol/L 的水杨酸乙醇溶液，然后加入浓度为 80g/L 的水解样品溶液 10mL，最后加入 10mL 8.8mmol/LH2O2 启动反应。对照液中以 10mL 蒸馏水替换同体积的水解液，37℃ 条件下保温 0.5h。以蒸馏水为参比液，在 510nm 测定其吸光值。计算清除羟基自由基的能力：

DPPH自由基清除实验教学(详细版)

DPPH实验步骤一、原理：DPPH是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。

作为一种稳定的自由基，DPPH可以捕获("清除")其他的自由基。

因此通过加入DPPH后观察某一化学反应的速率是否减慢，来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。

由于DPPH自由基在以520nm为中心处具有强烈的吸收，因此在溶液中呈现深紫色，并且在被中和之后会变为无色或浅黄色。

DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。

有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。

此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。

二、实验步骤：1.配制0.1mM的DPPH溶液：配两次，每次取0.002gDPPH溶于50mL乙醇，避光保存。

2.配制0.5mg/mL的Vc溶液，至少2mL（设为阳性对照，选择性做）3.配制一定浓度的样品溶液，至少2mL母液（也可以配制不同溶度梯度样品，计算IC50）4.上板（避光操作，上完板后，室温避光30分钟，测吸光度）96孔板，三组，每组设3个复孔，每孔加入量及96孔板分布如下：sample（样品组）：样品溶液100uL+ DPPH醇溶液100uL (每个浓度3个孔)blank（空白组）：样品溶液100uL+无水乙醇100uL （每个浓度3个孔）control（对照组）：DPPH 醇溶液100uL+水100uL （一块板可共用一个对照组,3个孔）样品VC浓度 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 sampleblankcontrol5.检测并计算清除率测517nm处的吸光度，取平均値，计算每个浓度的DPPH清除率，做出折线图。

体外抗氧化清除自由基能力测定方法总结

体外抗氧化清除自由基能力测定方法总结1 总还原力的测定采用Lee等[14]方法,略修改.取1.0 mL浓度为25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 150μg/mL和200μg/mL的样液,加入2.5 mL磷酸缓冲液(0.2 mol/L,pH 6.6),然后加入2.5 mL 1%六氰合铁酸钾(K3Fe(CN)6), 50℃水浴30 min后加入2.5 mL 10%的三氯乙酸,混匀1 500 g离心10 min,取上清液2.5 mL加2.5 mL水和0.5 mL 0.1%的三氯化铁混匀,于700 nm处比色测定.以25~200μg/mL维生素C为标准溶液做标准曲线,以维生素C相当含量(mg/g)表示样品总还原力.2 DPPH·自由基清除率的测定采用Yamaguchi等[15]方法,取0.2 mL浓度分别为25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 150μg/mL和200μg/mL的样液同1.0 mL 95%的DPPH乙醇溶液混匀,于37℃反应60 min后在517 nm处比色.DPPH自由基清除率用以下方程式计算: Y= [(OD517对照-OD517样品)/OD517对照]×100式中:Y为清除率,%;OD517对照为517 nm下对照品的吸光度值;OD517样品为517 nm下不同浓度样品的吸光度值.3 羟基自由基(·OH)清除率的测定桦褐孔菌多酚的羟基自由基(·OH)清除率由改动后的Nicholas Smirnoff[11]法测得。

反应体系(4 mL)包括:1 mL H2O2(8.8 mmol/L),1 mL FeSO4(9 mmol/L),1 mL水杨酸(9 mmol/L),1 mL多酚溶液(0.4mg/mL)。

H2O2最后加入以启动整个反应。

反应体系在37℃条件下温育60 min,在15 000×g条件下离心6 min。

30种中草药清除自由基的研究

30种中草药清除自由基的研究随着现代社会环境的恶化，人类受到自由基对身体健康的严重威胁。

自由基是一种高度活跃的氧化物，它可在短时间内大量破坏人体细胞，导致衰老、癌症等疾病。

因此，抗氧化剂（如中草药）可能是一种有效的解决方案，可以帮助人们清除自由基，从而减少有害氧化物产生的健康问题。

本文将讨论近30种中草药对清除自由基的研究。

1、什么是自由基？自由基是一种高度活跃的氧化物，它会破坏人体细胞，导致细胞老化和癌症等疾病。

这是因为它的电子结构不完整，不能保持电子的完整性。

因此，自由基可以在短时间内大量破坏人体细胞，使人体受到潜在的威胁。

从环境污染和生活方式来看，人们每天都会接触到大量的自由基，这为其健康构成了严重的威胁。

2、中草药清除自由基的研究为了减少自由基对人体健康的影响，科学家们开展了大量研究，以发现有效的解决方案。

研究发现，中草药能够抑制自由基的活性，从而减少有害氧化物的产生。

目前世界上有30多种不同的中草药，可以有效抑制自由基的活性，从而保护人体免受自由基的伤害。

其中，玉竹具有强大的抗氧化能力，可以有效清除自由基，从而减少衰老和疾病的发生。

研究表明，玉竹中的抗氧化成分（如维生素E）可以有效抑制自由基的反应，从而减少对人体健康的损害。

此外，叶黄素在清除自由基方面也有一定的作用。

一项研究表明，叶黄素可以抑制自由基的活性，从而有效预防多种疾病的发生。

此外，研究表明，绿茶、山药、山楂、芒果、西洋参等中草药对抑制自由基也有显著的影响。

绿茶中的抗氧化成分（如维生素C）可以有效抑制自由基的反应，从而减少对人体健康的损害。

另外，山药中的维生素E也可以有效抑制自由基的反应，从而减少衰老和疾病的发生。

此外，山楂、芒果和西洋参中的抗氧化成分也可以有效抑制自由基的反应，从而减少对人体健康的损害。

3、结论综上所述，在现代社会，人们每天都会接触到大量的自由基，这对人体健康构成严重威胁。

因此，人们需要找到有效的解决方案，以降低自由基对人体健康的影响。

ABTS自由基清除法SOP

主要目的：
——为了测定样品清除ABTS自由基的能力。

主要原理：
——用K2S2O8与ABTS 直接生成稳定的阳离子自由基ABTS+，抗氧化物质与ABTS+发生反应而使反应体系褪色。

实验室签章
一、试剂
——K2S2O8水溶液
——ABTA溶液
——乙醇（分析纯）
——PBS 溶液
二、仪器设备
——96孔酶标板
——UV-Vis可见多功能酶标仪——移液枪
——200 µL量程枪头
三、实验方法
◆前期准备
ABTS储备液（7.4 mmol/L）取ABTS 96 mg，加蒸馏水25 mL。

K2S2O8储备液（2.6 mmol/L）取K2S2O8 378.4 mg，加蒸馏水10 mL。

将5 ml 7.4 mmol/L ABTS储备液与88 µL 2.6 mmoL/L K2S2O8混匀，静置12-16小时，配制成ABTS工作液。

◆ABTS自由基清除法
0.4 mL ABTS工作液，用PBS 溶液稀释，要求在常温下734nm 处吸光值为0.7±0.02。

0.2 mL ABTS+·工作液与10uL 不同浓度受试物混合，常温避光静置6min，在734 nm 波长处测吸光度，平行3次。

ABTS自由基清除能力由下式计算：
清除率（%）=[A0-A i/A0]×100%
式中：A0为不加样品，加入ABTS 的吸光度；A i为加入样品和ABTS 的吸光度。

红曲粗提取物的自由基清除实验报告

红曲粗提取物的自由基清除实验报告实验目的：
本实验旨在评估红曲粗提取物在清除自由基方面的活性。

实验材料与方法：
材料：红曲粗提取物（可以购买或自行提取）、DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）自由基试剂、甲醇
方法：
1. 准备不同浓度的红曲粗提取物溶液。

2. 准备DPPH溶液，用甲醇稀释至浓度为0.1 mM。

3. 取一定体积的红曲粗提取物溶液，加入相同体积的DPPH溶液，使最终浓度分别为0.1 mg/ml、0.2 mg/ml、0.3 mg/ml、0.4 mg/ml
和0.5 mg/ml。

4. 在室温下将溶液静置反应30分钟。

5. 使用紫外可见光分光光度计测量吸光度，记录每个样品的吸
光度值。

6. 计算每个样品的自由基清除率，公式为：自由基清除率(%) = [1 - (吸光度样品 / 吸光度对照)] × 100%。

实验结果：
根据实验数据计算每个红曲粗提取物浓度下的自由基清除率。

实验讨论：
根据实验结果，我们可以评估红曲粗提取物的自由基清除活性。

较高的自由基清除率表示红曲粗提取物对自由基具有较好的清除能
力。

可以根据实验结果评估红曲粗提取物在抗氧化方面的潜力。

结论：
红曲粗提取物在不同浓度下表现出不同程度的自由基清除能力。

根据实验结果，我们可以认为红曲粗提取物具有潜在的抗氧化活性，可能对防止自由基引起的氧化损伤有一定的保护作用。

几种天然抗氧化剂清除自由基能力的比较研究

能力。
关键词天然抗氧化剂；自由基；ＰＨ・苯三酚ＤＰ；连中图分类号Ｑ０文献标识码Ａ５３文章编号
０１ — ６１２０）６０１１０５７６１（８０ — ２８ — ３０
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安徽农业科学，ｕｌｆｎｕ．Ｓｉ２０。６６：１１１３ＪｍａｏＡｈｉｏＡｃ．０８３（）２８ —２８
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几种天然抗氧化剂清除自由基能力的比较研究

清除自由基研究方法汇总

电子自旋共振法（ESR）、高效液相色谱法、化学发光法、比色法、分光光度法自由基清除剂也称为抗氧化剂，可清除体内多余的自由基，减轻它们对机体的损伤。

目前常用超氧阴离子自由基体系（O2-·）、羟基自由基体系（·OH）、二苯代苦味酰基自由基体系（DPPH·）对某抗氧化剂的体外清除自由基能力进行了研究。

其中ESR法和气相色谱法、HPLC 法对自由基的检测灵敏度高，但对设备要求较高，操作复杂，无法在一般实验室普及。

而其中的分光光度法、化学发光法、荧光分析法等不需要昂贵的仪器，易于被一般实验室所采用，但测定过程中的干扰因素较多，容易对测定的准确性和灵敏度造成影响。

分光光度法最常用。

原理部分：1.DPPH·法测试机理DPPH·（二苯代苦味脐基自由基）的甲醇溶液呈深紫色，可见光区最大吸收峰为492nm。

当自由基清除剂加入到DPPH·溶液中时，DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度减少，而且颜色变浅的程度与配电子数成化学计量关系，因此，可通过吸光度减弱的程度来评价自由基被消除的情况。

2. 羟基自由基（·OH）1）邻二氮菲法[70]实验原理：邻二氮菲可与Fe2+形成络合物，此络合物在510nm 处有最大吸收峰，是一常用的氧化还原指示剂，其颜色变化可敏锐地反映溶液氧化还原状态的改变。

H2O2/ Fe2+体系可通过Fenton 反应产生羟自由基，邻二氮菲－Fe2+水溶液被羟自由基氧化为邻二氮菲－Fe3+后，其510nm 最大吸收峰消失。

如果反应体系中同时存在羟自由基清除剂，则Fenton 反应产生的羟自由基将被此清除剂全部或部分清除，邻二氮菲－Fe2+络合物受到的破坏将会随之减少。

根据这一原理，可建立以A510变化反映自由基清除剂对羟自由基清除作用的比色测定法。

2）水杨酸法[71]实验原理：羟自由基易攻击芳环化合物产生羟基化合物，因此可用水杨酸捕集Fenton 反应体系中的·OH，生成的2,3－二羟基苯甲酸用乙醚萃取，用钨酸钠和亚硝酸钠显色，然后用分光光度计测定其在510nm 处的吸光值，此吸光值可反映体系中的羟自由基浓度。

自由基清除机理

自由基清除机理一、酶促防御机制酶促防御机制是生物体内的一种重要防御机制，它通过一系列酶促反应来清除自由基，保护细胞免受氧化损伤。

其中，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是酶促防御机制中的关键酶。

SOD能够催化超氧阴离子自由基（O2-）转化为过氧化氢（H2O2），进一步被CAT和GPx催化分解为无害的水和氧气，从而有效地清除自由基。

此外，CAT和GPx还能够催化其他有机过氧化物分解，以防止其进一步形成有害的自由基。

二、非酶促防御机制除了酶促防御机制外，生物体内还存在非酶促防御机制，包括维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、硒等抗氧化物质。

这些物质能够直接与自由基反应，将其转化为无害的物质，从而保护细胞免受氧化损伤。

三、修复机制当自由基攻击细胞膜、蛋白质或DNA时，细胞内会启动修复机制。

对于DNA的损伤，细胞内存在DNA修复酶，能够识别并修复损伤的DNA。

对于蛋白质的损伤，细胞内存在蛋白质修复系统，能够识别并修复损伤的蛋白质。

对于细胞膜的损伤，细胞内的一些抗氧化物质能够与自由基反应，保护细胞膜免受损伤。

四、抑制机制自由基的产生受到多种因素的影响，包括环境因素、营养状况、生活习惯等。

因此，预防自由基的产生也是清除自由基的重要手段之一。

通过改善生活习惯、增加富含抗氧化物质的食物摄入、避免暴露于有害的环境因素等措施，可以有效地抑制自由基的产生。

五、凋亡机制当细胞受到严重的氧化损伤时，细胞内的凋亡机制会被激活，导致细胞死亡。

凋亡机制是一种程序性细胞死亡过程，它有助于清除受损的细胞，维持机体的稳态。

在某些情况下，凋亡机制的激活有助于防止自由基对机体的进一步损伤。

超氧自由基清除

超氧自由基清除
超氧自由基在细胞内可以通过超氧化物歧化酶（SOD）被清除。

此外，人体摄入的抗氧化剂也可以清除超氧自由基，其清除能力常用连苯三酚法进行检测。

抗氧化剂分为酶类清除剂和非酶类清除剂两大类，其中酶类清除剂主要包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）等。

目前最常用的自由基清除测定方法包括ABTS法、DPPH法、ORAC法、羟自由基清除能力和超氧自由基清除能力。

这些方法可以用于评价样品清除超氧阴离子自由基的能力。

例如，邻苯三酚法是在弱碱性条件下，通过邻苯三酚的自氧化反应来测定超氧阴离子自由基的清除能力。

此外，芥子碱硫氰酸盐也被研究用于清除超氧阴离子自由基，并通过化学发光法进行了测定。

因此，超氧自由基的清除主要依赖于体内自身的抗氧化酶系统以及通过摄入抗氧化剂来实现。

dpph自由基清除实验

DPPH自由基清除实验引言自由基是一类具有不成对电子的化学物质，它们高度活跃且能够引发细胞氧化损伤。

因此，寻找有效的抗氧化剂来清除自由基对细胞和健康的影响至关重要。

DPPH（2，2-二苯基-1-苦味肼）是一种常用的化学试剂，被广泛用于评估抗氧化剂的活性。

本实验旨在使用DPPH自由基清除实验来评估抗氧化剂的抗氧化性能。

实验步骤1.准备实验样品，可以选择不同的抗氧化剂，如维生素C、维生素E等。

2.准备DPPH溶液，将适量的DPPH溶解在乙醇中，摇匀使其充分溶解，最后得到0.1 mM的DPPH溶液。

3.取一定量的DPPH溶液（如2 mL），加入试管中。

4.分别将不同浓度的抗氧化剂溶液（如0.1 mM，0.2mM，0.3 mM等）加入不同的试管中。

5.快速摇匀试管，使DPPH和抗氧化剂充分接触。

6.将试管放置在室温下静置15分钟，使反应充分进行。

7.使用分光光度计测定每个试管中溶液的吸光度，记录下数值。

数据处理1.计算抗氧化剂的清除率，清除率的计算公式为：（A₀ - A₁）/ A₀ × 100%。

其中，A₀为对照组（只有DPPH 溶液）的吸光度，A₁为实验组的吸光度。

2.绘制抗氧化剂浓度与清除率之间的曲线图，以展示不同浓度下清除率的变化趋势。

结果与讨论根据实验数据绘制的曲线图，可以看出抗氧化剂的清除率随着浓度的增加而增加。

这说明抗氧化剂对DPPH自由基具有较好的清除能力。

其中，浓度为0.3 mM的抗氧化剂表现出最大的清除率，清除率超过90%。

而浓度较低的抗氧化剂，如0.1 mM的清除率较低，仅为50%左右。

通过本实验可以初步评估抗氧化剂的抗氧化性能。

然而，需要注意的是实验中使用的DPPH自由基只是模拟体内自由基的一种方式，实际中还需要进一步研究抗氧化剂在体内的表现和效果。

结论本实验使用DPPH自由基清除实验评估了不同浓度抗氧化剂的抗氧化性能。

结果表明抗氧化剂的清除率随浓度的增加而增加，0.3 mM浓度的抗氧化剂表现出最佳的清除能力。

几种常见蔬菜清除自由基活性的研究

Ｓｉｎｅ＆ｔｃｎｌｇｉｗｃｅｃｅｈｏｏｙｖｅ
科教前哨
科技视界
２１年８０１月第２期４
几种常见蔬菜清除自由基活性的研究
卢青
（城大学东昌学院聊
【摘
山东
聊城
２２５）５０９
要】文选用乙本醇做为提取剂，用紫外可见分光光度法考察了采辣椒、卜生菜、萝、油菜这几种蔬菜的提取物对羟基自
用固定反应时间法，５０ｍ处测量含被测物的反应液的吸在１ｎ
光度，与空白液比较，能测定被测物对・Ｈ的清除作用。便Ｏ
１．样品液的提取．２２
以生菜的乙醇提取液为例，将生菜洗净干燥，准确称取
自由基清除剂具有广泛的生物活性，因而有关研究受到世界各国的普遍重视。目前已发现的天然自由基清除剂主要包括酶和非酶两大类。酶类如：超氧化物歧化酶（Ｏ、ＳＤ）过氧化氢酶（Ａ）谷胱甘肽过氧化物酶（Ｓ — Ｘ）ＣＴ、ＧＨＰ等。非酶类有：肽
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