血清LDH及其同工酶测定
LDH测定作业指导书
LDH测定1 测定方法酶动力学法。
2 测定原理依据标准化方法的紫外检测方法- 样品和加试剂R1（缓冲液/乳酸）- 加试剂R2（辅酶）和启动反应：LDHL-乳酸＋ NAD+ 丙酮酸＋ NADH ＋ H+LDH 催化L-乳酸向丙酮酸的转换；同时使NAD还原为NADH。
NADH 形成的初速度和直接LDH的催化活力呈比例。
在340nm 检测吸光度的增加。
3 标本请注意：研究显示，使用EDTA 血清会引起LDH活力降低（约10％）。
用标准样品管收集血清。
肝素锂、钠或铵与EDTA 钾、钠的抗凝血浆。
其他的抗凝剂有干扰。
分离的血清或血浆应立即分析。
稳定性：储存在20~25℃，尽可能立即检测。
不可冷藏和冰冻。
在检测前应离心去除沉淀。
4 试剂4.1试剂来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末R1：打开后机上稳定28天R2：打开后机上稳定28天准备：R1， R2：直接使用。
4.2 校准物来源：ROCHE配套校准物,符合WHO标准，具体如下：S1:0.9%NaClS2:C.f.a.s贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
准备：直接使用。
定标频率：A 试剂盒在仪器上放置28天后 B试剂批号更换后 C 由质控结果决定4.3 质控物来源：Precinorm (罗氏正常值质控)Precipath (罗氏病理值质控)其它适合的质控品贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。
质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5 仪器ROCHE MODULAR P生化分析仪。
6 上机操作见仪器作业指导书。
7 参考范围男性：135-225U/L；女性：135-214U/L。
8 性能指标本法线性范围为5-1000U/L，不准确度允许范围X±20%，不精密度CV=3.3%，本法灵敏度5U/L。
心肌酶谱
心肌酶谱的组成及临床意义一、组成：α-羟丁酸脱氢酶（α-HBD）乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、谷草转氨酶（AST）、。
二、α-羟丁酸脱氢酶（α-HBD）测定及医学意义1．正常参考值72～182 U/L2．临床意义HBD与LD、AST、CK及CK-MB共同组成心肌酶谱，对诊断心肌梗死有重要意义。
健康成人血清LD/HBD比值为1.3～1.6，但心肌梗死患者血清HBD活性升高，LD/HBD比值下降，为0.8～1.2。
而肝脏实质细胞病变时，该比值可升高到1.6～2.5。
需要注意的是这些比值与各实验室的测定方法或测定条件不关，必须确立本实验室的比值。
另外，活动性风湿性心肌炎、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血等，因LD1活性增高，所以HBD活性也可增高。
三、血清乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及意义乳酸脱氢酶是体内能量代谢过程中的一个重要的酶。
此酶几乎存在于所有组织中，以肝、肾、心肌、骨骼肌、胰腺和肺中为最多。
这些组织中的LDH的活力比血清中高得多。
所以当少量组织坏死时，该酶即释放血而使其他血液中的活力升高。
测定此酶常用于对心梗、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
正常参考值1．速率法（LDH-L法）：100～240 U/L 比色法：190～310 U/L2．临床意义：①心肌梗塞：心肌梗塞后9～20h开始上升，36～60h达到高峰，持续6～10天恢复正常（比AST、CK持续时间长），因此可作为急性心肌梗塞后期的辅助诊断指标。
②肝脏疾病：急性肝炎，慢性活动性肝炎，肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸等。
肿瘤转移所致的胸腹水中LDH往往也升高。
③血液病：如白血病、贫血、恶性淋巴瘤等，LDH升高。
④骨骼肌损伤、进行性肌萎缩、肺梗塞等。
⑤恶性肿瘤转移所致胸、腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。
⑥正常新生儿LDH水平很高，可达775～2000U/L，满月后为180～430 U/L，以后随年龄增长逐渐降低，12岁后趋于恒定。
乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因
乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）同工酶高在临床检测中是常见的现象，常见于多种疾病和健康问题。
本文将从多个角度探讨乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因，分析可能的病因，以及对策和建议。
一、乳酸脱氢酶（LDH）同工酶高的原因1. 炎症反应乳酸脱氢酶属于细胞内酶，其同工酶高常见于组织损伤和炎症反应。
细胞受损或炎症导致细胞膜通透性增加，LDH释放入血液中，引起其同工酶浓度升高。
2. 心肌梗死急性心肌梗死时，心肌组织受损，LDH从心肌细胞释放入血液中，导致其同工酶浓度升高。
3. 肝脏疾病肝脏疾病如黄疸、肝炎、肝硬化等也会导致LDH同工酶高。
肝脏受损使得LDH释放入血液中增加。
4. 肌肉损伤肌肉损伤如挫伤、拉伤、运动过度等也会导致LDH同工酶高。
肌肉损伤使得细胞内LDH释放入血液中增加。
二、肌酸激酶（CK）同工酶高的原因1. 肌肉损伤肌酸激酶同工酶高的最常见原因是肌肉损伤，特别是骨骼肌损伤。
运动过度、挫伤、拉伤等导致的肌肉损伤可以使得肌酸激酶释放到血液中，引起其同工酶浓度升高。
2. 心肌梗死与LDH类似，心肌梗死导致心肌细胞损伤，CK释放到血液中增加，导致其同工酶浓度升高。
3. 肌无力慢性肌无力症患者也常伴有CK同工酶高。
肌无力症导致肌细胞的破坏和修复过程不断进行，CK不断释放入血液中。
4. 药物一些药物如他汀类药物、胰岛素等在长期或过量使用时也会导致CK同工酶高。
三、其他因素除了上述常见原因外，还有一些其他因素也可能导致LDH和CK同工酶高，如高温、中毒、代谢性疾病、感染、内分泌疾病等。
总结起来，乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因非常多样化，包括炎症反应、肌肉损伤、心肌梗死、肝脏疾病、肌无力、药物等因素均可能导致同工酶水平升高。
在临床实践中，对于LDH和CK同工酶高的患者，需要仔细分析病史，结合其他相关检查，以明确疾病的诊断和治疗方案。
通过合理的用药、规范的运动、健康的生活习惯等方式，可以预防LDH和CK同工酶高的发生。
医学检验·检查项目：血清乳酸脱氢酶同工酶(LDHI)_课件模板
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简介：
LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上 腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。后来从 睾丸和精子中发现了LDHx，其电泳迁移率 介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型) 和M(骨骼肌型)两类亚基组成，分别形成 LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、 LDH4(HM3)、LDH5(M4)。
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临床意义：
血清LDH4>LDH5较为常见。 肾皮质以LDH1 和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和LDH5活 性较强。患急性肾小管坏死、慢性肾盂肾 炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时， 血清LDH5均可增高。 肺含LDH3较多，肺 部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时 LDH3和LDH4相等，LD
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正常值： DH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5。
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相关检查： 血清乳酸脱氢酶（LDH）、血清α-羟丁酸 脱氢酶（α-HBDH）、乳酸脱氢酶同工酶、 乳酸脱氢酶(LDH,LD)。
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临床意义：
肠梗阻等。 肌营养不良病人肌肉中LDH1、 LDH2明显增高，LDH5显著下降;而血清则 相反，LDH1、LDH2明显减少，LDH4、LDH5 显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉 组织。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1、 LDH2下降，LDH4、LDH5升高。
乳酸脱氢酶LDH检测在临床应用论文
乳酸脱氢酶LDH检测在临床的应用摘要：目的：关键词：【中图分类号】r446.19【文献标识码】b【文章编号】1672-3783（2012）10-0161-01乳酸脱氢酶英文名称： ldh正常范围：血清 100～300u/l；尿 560～2050u/l；脑脊液含量为血清的1/10。
检查介绍：乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。
乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高，乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶。
几乎存在于所有组织中。
同功酶有五种形式，即ldh-1（h4）、ldh-2（h3m）、ldh-3（h2m2）、ldh-4（hm3）及ldh-5（m4），可用电泳方法将其分离。
ldh同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。
正常人血清中ldh2>ldh1。
如有心肌酶释放入血则ldh1>ldh2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。
临床意义：（1）急性心肌梗塞发作后，早期血清中ldh1和ldh2活性均升高，但ldh1增高更早，更明显，导致ldh1/ldh2的比值升高。
（2）肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时ldh5都会升高。
（3）患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病ldh1也可升高。
（4）恶性病变时ldh3常增高。
血清乳酸脱氢酶（ldh）同工酶测定及意义人组织中的乳酸脱氢酶（ldh）用电泳法可以分离出5种同工酶区带，根据其电泳迁移率的快慢，依次命名为ldh1，ldh2，ldh3，ldh4，ldh5。
不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同，存在明显的组织特异性，人心肌、肾和红细胞中以ldh1和ldh2最多，骨骼肌和肝中以ldh4和ldh5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以ldh3最多。
后来从睾丸和精子中发现了ldhx，其电泳迁移率介于ldh4和ldh5之间。
ldh是由h（心肌型）和m（骨骼肌型）两类亚基组成，分别形成ldh1（h4）、ldh2（h3m）、ldh3（h2m2）、ldh4（hm3）、ldh5（m4）。
血清乳酸脱氢酶LDH测定
血清乳酸脱氢酶LDH测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，LDHNADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。
L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+3 标本：3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或EDTA血浆。
3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸62.5mmol/LTris缓冲液 100mmol/L试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
第四章实验五乳酸脱氢酶_LDH_同工酶的分离纯化
NAD+：10 mL NBT：10 mL PMS：2 mL 0.5 M PH7.6 Tris-HCl: 15 mL 0.5 M乳酸钠：15 mL 0.1NaCl：5 mL 去离子水：43 mL
共计100 mL
四、实验操作
1.样品处理：1 g 组织切碎，加 pH 7.4 Tris-HCl缓 冲液10 mL，匀浆，10,000 g ，4℃，离心10 min，上
离子交换剂结构：以Sephadex-QAE A-50为例
葡聚糖 -N+(CH3)3 –Cl基质 功能基团 平衡离子
电荷基团 反离子
离子交换剂的种类
1 按基质种类不同： 离子交换树脂，离子交换纤维素，离子交换凝胶等
2 按功能基团不同： 强酸型 含磺酸基团 (R-SO3H)， 中等酸型 含磷酸基团 (-O-PO2H4) 弱酸型 含酚基、羧基 强碱型 含季胺基团 [-N+(CH3)3]，弱碱型 含叔胺、伯胺基团[-N(CH3)2] 3 按平衡离子的性质不同：
ABC
D
E
A280
5 10 15 20 25 30 35 40 50
洗脱体积
4.聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定：活性电泳 只做分离胶，胶倒好直接插上试样梳，进行聚合
编号 1 2 3 4 5
总体积
溶液名称 30% Acr –0.8% Bis pH 8.9 Tris -HCl TEMED 10% AP H2O
三、实验试剂
1、20 mM Tris-HCl，pH 7.4缓冲液； 2、A液: 20 mM Tris-HCl，pH 6.3缓冲液 3、B液: A液含60 mM NaCl 4、C液: A液含100 mM NaCl 5、D液: A液含150 mM NaCl 6、E液: A液含240 mM NaCl 7、QAE-Sephadex A-50准备：取1克QAE-Sephadex A-50于烧杯中加入100 mL A
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶科技名词定义中文名称：乳酸脱氢酶英文名称：lactate dehydrogenase;LDH定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。
L-乳酸脱氢酶(编号：EC 1.1.1.27)作用于L-乳酸；D-乳酸脱氢酶(编号：EC 1.1.1.28)作用于D-乳酸，两者均以NAD ＋为氢受体。
在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布催化机理编辑本段基本信息英文名称： LDH（lactate dehydrogenase）序列信息：1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围：血清 135.0～215.0U/L；尿 560～2050U/L；脑脊液含量为血清的1/10。
编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。
它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。
LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化（为逆反应）。
LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。
由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。
在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。
由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。
LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3．LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。
有关乳酸脱氢酶同工酶的论述
有关乳酸脱氢酶同工酶的论述
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）是一种重要的酶，它在糖代谢中起着关键作用。
而LDH同工酶则是指在不同组织或
不同生物个体中，同样具有乳酸脱氢酶活性、分子量相近、但电泳分
离时迁移率不同的酶，是在LDH基础上衍生出的多个亚型。
LDH同工酶有多种分离技术，一般采用凝胶电泳和柱层析法进行
分离。
凝胶电泳是将酶样品作为电泳样品，在凝胶电泳系统中通电进
行迁移，并使用染色剂直接染色分析。
而柱层析法则是通过不同介质
分离出各自的酶亚型，再进行进一步分析。
LDH同工酶在医学研究中有着广泛的应用。
由于不同组织中LDH
同工酶的组成和比例不同，因此可以通过分析血清中的LDH同工酶来
诊断疾病。
例如，心肌细胞中主要含有LDHⅠ，因此在心肌梗死的病人体内，LDHⅠ的比例会大量增加，利用这一点可以对心肌梗死进行诊断。
此外，肝脏和肌肉也可以通过LDH同工酶比例的变化来进行检测。
除了在医学研究中的应用外，LDH同工酶在生物学研究中也有一
定的意义。
通过比较同一物种不同个体之间及不同物种之间的LDH同
工酶组成情况，可以挖掘出物种间的亲缘关系信息，并进一步探究生
物进化的规律。
此外，在植物学研究中，LDH同工酶也常被用于鉴别植物品种和探究植物代谢途径的不同。
总之，LDH同工酶作为一类重要的酶，在不同领域都有着广泛的
应用。
其在医学和生物学领域中的应用已经创造了不少科研和临床的
重要成果。
未来，随着研究手段的不断完善，我们相信它在这些领域
中的应用空间还将不断扩大。
(修改版)琼脂糖电泳检测LDH同工酶
一、实验目的
1. 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 及琼脂糖凝胶板的制备； 2. 熟悉琼脂糖凝胶电泳分离LDH同工酶的方法 及组织匀浆的制备、制点样槽、点样、 显色。
二、实验原理
带电粒子在直流电场中向所带电荷相反的方 1.电泳：
向移动的现象。
能催化功能相同而酶的分子结构、理化 2.同工酶： 性质及免疫学特性不同的一组酶，称为同工酶。
六、实验结果
乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱
七、方法学评价
(一)电泳法
琼脂糖凝胶法
1. 优点：灵敏度高，样品取量少，无拖尾现象。 2. 缺点：点样不能过多，否则影响区带效果。 醋酸纤维薄膜法 1.优点:应用普遍、简便、快速、分离清晰
2.缺点：点样量少，LDH4和LDH5易受电热的影响而失活。
聚丙烯酰胺凝胶法 1.优点：分辨率高 2.缺点：试剂昂贵，有一定的毒性，操作繁琐
八、临床意义
八、临床意义
1.急性心肌梗死：LDH1、 LDH3↑
LDH1/ LDH2 ↑>1 2.肝细胞受损:LDH ↑ LDH5 ↑↑ LDH4↑
3.胃癌、结肠癌、胰腺癌:LDH3↑ 4.前列腺癌: LDH5/ LDH4↑>1 5.骨骼肌急性损伤: LDH4、 LDH5↑
思考题
正常成年人血清LD同工酶活力电泳结果为
电泳结束后，加显色凝胶加载凝胶玻片上，
置37℃烤箱中，15分钟。
五、注意事项
1. 标本需新鲜，室温保存，PBS液浸泡。 2. 底物显色液须临用前配制，用棕色试剂瓶装， 避光保存于50 ℃水浴箱，复溶后无效。 3. LDH4、LDH5对冷热均敏感，应严格控制温 度，底物显色液如超过50℃，血清标本放置 温度过低，均容易破坏LDH4、LDH5。
第八章-血清酶类测定
ALT速率法测定中酶偶联反应式为：
ALT
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 L-谷氨酸 + L-丙酮酸
LD
丙酮酸 + NADH + H+
L-乳酸 + NAD+
上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，可在340nm检测 吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-△A／min)，计算出ALT的活 性浓度。
肝硬化
ALT增高程度与肝硬化的活动度和肝组织炎症改变及肝细胞损害 程度相一致。对ALT进行监测有助于对肝硬化病情的判断。若是 静止性肝硬化，则ALT维持正常 ；肝硬化病人的转氨酶出现较大 幅度的升高，提示病情可能发展成活动性，须引起警惕。
肝癌
80%—90%肝细胞都是在肝硬化基础上发生的，因此，在早期，ALT是否 增高主要决定于肝硬化的活动程度。若是静止性肝硬化，则ALT维持正常， 因为肝细胞发生癌变时，细胞并没有坏死破坏，ALT没有释放出来，因此， ALT没有升高，或ALT有轻度或中度增高。
[参考区间]
速率法： 男性：5～40 U/L 女性：5～35 U/L
[临床意义]
ALT广泛分布于全身各组织器官，尤以肝细胞中含量最 多，其次是肾脏、心脏及骨骼肌，通常只有极少量释放入 血液，所以血清中此酶的活力很低，当这些组织病变时， 细胞坏死或通透性增加，细胞内酶大量释放入血，使血清 中该酶活力显著增高。
标本（血清或血浆）
临床酶学测定酶之前，标本还要经过采集、分离和储存等一系列处理过程。 而酶在血中处于一个动态变化过程，血液离开机体后还会有一定变化。 因此在其中任何一个阶段处理不当，都有可能引起测定值的变化。
标本应避免溶血：
大多数酶在血细胞中的含量比在血浆中高得多 ，少量 血细胞的破坏就可能引起血浆中酶明显升高。如红细胞 内的LD、AST和ALT活性分别较血清中高150、15和7 倍左右，故测定这些酶时，样品应避免溶血。
乳酸脱氢酶同工酶电泳结果
乳酸脱氢酶同工酶电泳结果摘要：1.乳酸脱氢酶同工酶电泳的简介2.乳酸脱氢酶同工酶结果分析3.乳酸脱氢酶同工酶的作用4.乳酸脱氢酶同工酶检测方法5.乳酸脱氢酶同工酶的临床意义正文：乳酸脱氢酶同工酶电泳结果是一种检测乳酸脱氢酶同工酶的方法，乳酸脱氢酶同工酶的检测方法包括电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法等，但迄今最好的和用得最多的是电泳法。
乳酸脱氢酶同工酶电泳（ldhisol）可将人组织中ldh 分离出5 种同工酶区带，它们分别是ldh1、ldh2、ldh3、ldh4、ldh5。
乳酸脱氢酶同工酶结果分析显示，不同疾病会导致不同同工酶的升高。
例如，急性心肌梗塞发作后，血清ldh1 和ldh2 活性均升高，但ldh1 增高更早，更明显，导致ldh1/ldh2 的比值升高；肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时ldh5 都会升高；患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血时，病人的血清ldh 同工酶的改变与心肌梗塞相似。
此外，ldh1/ldh2 比值>1 还见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。
乳酸脱氢酶同工酶的作用主要体现在对疾病的诊断和鉴别诊断上。
通过检测乳酸脱氢酶同工酶的水平，医生可以了解患者是否患有心脏疾病、肝脏疾病、骨骼肌损伤等疾病。
然而，乳酸脱氢酶同工酶水平的升高并不能确定具体疾病，还需要结合其他临床表现和检查结果进行综合判断。
乳酸脱氢酶同工酶检测方法有多种，其中电泳法最为常用。
电泳法通过对乳酸脱氢酶同工酶进行分离和检测，可以清晰地了解患者体内不同同工酶的水平，为临床诊断提供有力依据。
除了电泳法，离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法等方法也可以用于乳酸脱氢酶同工酶的检测，但应用较少。
乳酸脱氢酶同工酶的临床意义在于对疾病的诊断和鉴别诊断。
通过检测乳酸脱氢酶同工酶的水平，医生可以了解患者是否患有心脏疾病、肝脏疾病、骨骼肌损伤等疾病。
最新各项心肌酶检查的意义
各项心肌酶检查的意义各项心肌酶检查的意义血清酶测定为诊断心梗的重要手段。
心肌酶是用于诊断心肌梗死的血清酶的统称，主要包括天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）及其同工酶）。
1.血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性测定：主要用于对急性心肌梗死的诊断，心梗后6～12小时开始升高，24～48小时达高峰，3～7天恢复正常。
升高尚可见于：病毒性肝炎、中毒性肝炎、肝坏死、肝硬化、肝癌、阻塞性黄疽、心包炎、骨骼肌坏死、脑坏死、急性胰腺炎、皮肌炎、胸膜炎、进行性肌营养不良，以及使用安定、鲁米那、氯丙嗪、利福平后。
分析AST时需注意：①AST 存在于心、脑、肝、肾等组织内，心肌最多；②AST升高时，应同时检测ALT，若AST大于ALT，提示心肌病变，若ALT大于AST，提示肝脏病变；③还应做相应的有关检查，以便全面进行分析。
2.血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定：主要用于肝脏疾病的诊断和鉴别诊断，尤其对无黄疽、无自觉症状的病毒性肝炎、中毒性肝炎，可以帮助早期诊断。
增高尚见于：心肌梗、肝外阻塞性黄疽、胰腺炎、胆囊炎、胆石症、急性风湿热、伤寒、败血症、肌病及脑血管病变。
分析LAT时需注意：①不能单凭一次增高而进行诊断，应动态观察其变化；②ALT广泛存在于肝、肾、心、骨骼肌及脑组织细胞内，以肝细胞含量最高；③注意对ALT/AST比值分析，同时结合其他检查进行综合分析。
3.血清肌酸激酶（CK）活性测定：正常人血清中含量甚微，肌肉收缩时生成增加。
主要用于骨骼肌疾病和心肌梗死的诊断。
心梗时CK 显著增高，在发病后4～6小时开始升高，24～36 小时达高峰，8～7天恢复正常，其增高幅度与心肌梗死程度成正比。
分析CK时需注意：①在急性心梗时CK较 AST、ALT、LDH等更为灵敏，有更高的特异性：②CK是一种器官特异性酶，广泛分布在骨骼肌、脑组织、心肌、平滑肌、肾组织内。
LDH的测定
2，酶活性的测定
加入物(ml) 加入物(ml) 测定管 对照管 血清 0.01 0.01 NAD＋ NAD＋底物缓冲液 0.5 0.5 37度水浴 37度水浴5min 度水浴5min NAD＋ NAD＋溶液 0.1 － 37度水浴 度水浴15min 37度水浴15min 2,4二硝基苯肼 2,4二硝基苯肼 0.5 0.5 NAD＋ NAD＋溶液 － 0.1 37度水浴15分钟 37度水浴15分钟 度水浴15 0.4mol/L溶液 0.4mol/L溶液 5.0 5.0 混匀，室温放置5min 5min后 440nm波长处比色 比色杯光径为1.0cm 波长处比色， 1.0cm， 混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm， 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查 校正曲线，得酶活性。 校正曲线，得酶活性。 单位定义： 100ml血清 37度 作用底物15min 产生1umol 血清， 15min， 1umol丙酮酸为 单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min，产生1umol丙酮酸为 一个金氏单位。 一个金氏单位。
乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋ ＋（正向L 乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋H＋（正向L-P，逆 向P－L）。 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2，4二硝 基苯肼作用生成丙酮酸－二硝基苯腙，后者在酸性环境中 呈草黄色，在碱性溶液中显棕红色，颜色的深浅与丙酮酸 的浓度成正比，与标准浓度的丙酮酸生成的苯腙进行比色， 可推算LDH的活力。 可推算LDH的活力。 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 位，
肝功能检查
⑶急性心梗后6~8小时AST增高，18~24小时达高峰， 可高达参考值上限的4~10倍，与心梗范围和程度 有关，4~5天恢复酶及同工酶检查
血清酶及同工酶检查
（一）血清氨基转移酶 ALT(丙氨酸氨基转移酶） 0~40U/L （酶动力学法） AST（天门冬氨酸氨基转移酶） 0~40U/L （酶动
力学法）
临床意义：⑴急性病毒性肝炎：ALT、AST均显著
增高，通常ALT>300U/L、AST>200U/L， AST/ALT<1是诊断急性病毒性肝炎的重要检测手 段，且转氨酶升高程度与肝脏损伤严重程度无关
临床意义：⑴胆道阻塞性疾病：GGT明显增高， 可达参考值上限10倍以上，且ALP、血清胆 红素呈平行增加。
⑵急性肝炎时GGT呈中等度升高；慢性肝炎、 肝硬化的非活动期酶活性正常，若GGT持续 升高提示病变活动或病情恶化。
⑶GGT显著升高是酒精性肝病的重要特征，而 转氨酶轻度升高或正常。
血清酶及同工酶检查
⑵骨骼疾病：纤维性骨炎、佝偻病、骨软化症、 成骨细胞瘤及骨折愈合期，ALP增高。
⑶其他：营养不良、严重贫血、重金属中毒等， ALP有不同程度的增高。
血清酶及同工酶检查
（三）GGT(γ-谷氨酰转移酶) 0~58U/L
在肝脏中广泛分布于肝细胞的毛细胆管 一侧和整个胆管系统，因此肝内合成亢 进或胆汁排出受阻时，血清GGT升高。
胆红素代谢检查
肝脏 非结合性胆红素 结合性胆红素
尿液排出 尿胆红素
排入肠道
经肠道重吸收 通过肝转化
胆红素肝 肠循环
LDH
1
一、目的要求
学习和掌握琼脂糖凝胶电泳分离乳酸脱氢酶 同工酶的原理和方法
2
二、实验原理
琼脂糖凝胶分离各组分后，用活性染色鉴定 琼脂糖凝胶分离各组分后，
3
1、关于乳酸脱氢酶 、
1959年Markert等用电泳的方法将纯化的心肌乳酸脱 年 等用电泳的方法将纯化的心肌乳酸脱 氢酶(LDH)分离出 条区带，由阳极到阴极依次命名为 分离出5条区带 氢酶 分离出 条区带，由阳极到阴极依次命名为LDH1、 LDH2、LDH3、LDH4、LDH5，它们均具有 它们均具有LDH催化活性， 催化活性， 催化活性 同工酶的概念 同工酶是由H 从而首先提出了同工酶的概念。目前已知LDH同工酶是由 同工酶是由 从而首先提出了同工酶的概念。目前已知 亚基按不同比例组成的四聚体。 和M亚基按不同比例组成的四聚体。 亚基按不同比例组成的四聚体
14
4
1、关于乳酸脱氢酶 、
LDH升高而且 升高而且LDH1>LDH2，可见于心肌损 升高而且 ， 急性心肌梗塞、心肌病、溶血性贫血、 伤、急性心肌梗塞、心肌病、溶血性贫血、 恶性贫血、肺栓塞等。 恶性贫血、肺栓塞等。 LDH5升高而且 升高而且LDH5>LDH4，可见于肝硬化、 升高而且 ，可见于肝硬化、 肝癌、急性肝炎、肌炎、骨骼肌损伤。 肝癌、急性肝炎、肌炎、骨骼肌损伤。 LDH5>LDH4都升高以 都升高以LDH4更明显，可见于 更明显， 都升高以 更明显 阻塞性黄疸。 阻塞性黄疸。
LDH同工酶广泛存在于动植物及微生物中，动物各组织中LDH 同工酶广泛存在于动植物及微生物中，动物各组织中 同工酶广泛存在于动植物及微生物中 同工酶各组分含量不同。临床上对LDH及同工酶的检测可作 同工酶各组分含量不同。临床上对 及同工酶的检测可作 为某些疾病诊断的依据之一。 为某些疾病诊断的依据之一。
血清LDH同工酶测定课件
LDH同工酶的种类与分布
LDH同工酶有五种，分别为LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5，它们在人体 内的分布具有差异性。
LDH1主要分布在心肌、红细胞和肾脏，LDH2主要分布在血小板和白细胞， LDH3主要分布在肺、脾和淋巴结，LDH4和LDH5则广泛分布于人体各个组织。
LDH同工酶的生物学功能
质量控制记录
记录实验过程中的质量控制情况， 以便进行追溯和改进。
06 血清LDH同工酶 测定的发展趋势 与展望
新技术与新方法的应用
自动化技术
利用自动化仪器和设备，实现血清LDH同工酶测 定的快速、准确和高效。
免疫学方法
利用抗体技术，提高血清LDH同工酶测定的特异 性和灵敏度。
分子生物学技术
利用基因测序和蛋白质组学技术，深入了解血清 LDH同工酶的分子结构和功能。
THANKS
感谢观看
01
LDH同工酶参与糖酵解和糖异生 过程，其中LDH1和LDH2催化乳 酸与丙酮酸之间的氧化还原反应，
02 而LDH3、LDH4和LDH5则参与
其他代谢过程。
LDH同工酶还参与细胞凋亡和坏 死等细胞死亡过程，以及免疫应 答和肿瘤发生等生物学过程。
LDH同工酶的代谢特点
LDH同工酶的代谢特点与它们的分布和生物学功能密切相关。 例如，LDH1和LDH2主要参与糖酵解和糖异生过程，其代谢 特点是快速周转和高效能量转换；而LDH3、LDH4和LDH5 则具有较慢的周转速度和较低的能量转换效率。
临床意义与价值
临床意义
血清LDH同工酶测定对于鉴别诊断心 肌梗死与其他原因引起的胸痛、评估 肝病的严重程度、监测恶性肿瘤的病 情发展等方面具有重要价值。
价值
血清LDH同工酶测定不仅有助于疾病 的早期发现和诊断，还能为临床医生 制定治疗方案提供依据，提高疾病的 治疗效果和患者的生存率。
血清LDH同工酶测定
同工酶的应用
是否人种间在差异呢？这个答案不 得而知，但有一点是明确的，那就是LDH同
工酶在人体不同器官和组织间是有差异的，
从医学角度来讲，利用这种特异性临床上对
LDH同工酶的检测可作为某些疾病诊断的依据
之一。
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同工酶的应用
在临床检验方面，通过观测病人血清中LDH同
工酶的电泳图谱，辅助诊断哪些器官组织发生病变 ，远较单纯测定血清LDH总活性的方法敏感。例 如，心肌受损病人血清LDH1含量上升，肝细胞受 损者血清LDH5含量增高。
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6、图谱分析-1
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6、图谱分析-1
正常： LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5
参考值(琼脂糖电泳法)：
LDH1（28.4〒5.3）%； LDH2（41.0〒5.0）%； LDH3（19.0〒4.0）%； LDH4（6.6〒3.5）%； LDH5（4.6〒3.0）%。
LDH4活性极高时，常示预后不良；原发性肝癌以血清LDH4＞LDH5较为常见
，阻塞性黄疸时LDH4 与LDH5 均增高，但以LDH4 尤为明显。
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6、图谱分析-3
文献：血清乳酸脱氢酶同工酶在肝脏疾病中的检测及意义 摘要:目的 探讨血清乳酸脱氢酶同工酶检测在肝脏疾病中的临床意义。方法 LDH 同工酶测定采用琼脂糖电泳法，统计学处理采用t检验。结果 LDH1在急性肝炎
LDH同工酶广泛存在于动植物及微生物中，动物
各组织中LDH同工酶各组分含量不同，具有明显
的物种间差异可作为动物分类的生化依据。
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同工酶的应用
文献：鲿科四种鱼LDH同工酶谱的研究 【摘要】：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对鲿科四种 鱼血清中LDH同工酶进行电泳分析,结果表明:四种鱼 血清LDH同工酶图谱的区带分布具有种的特异性;四 种鱼血清LDH同工酶A、B亚基比例关系反映的各品种 间亲缘的关系与形态学特征分析结果吻合,为鲿科四 种鱼分类提供进一步的理论依据.
血清乳酸脱氢酶测定
血清乳酸脱氢酶测定1. 实验原理LDHL-乳酸+ NAD ————→丙酮酸+ NADH在波长340nm处测定NADH生成速率，计算出LDH活力。
2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
避免溶血。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：中生乳酸脱氢酶试剂盒（试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成试剂1：2×65 ml 试剂2:1×70 ml06.1.2 试剂准备：试剂为双液即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为12个月。
试剂必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂空白吸光率A340nm(1.0cm)＞0.6，或有混浊和可见颗粒时，请不要再使用。
6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。
请勿吞服。
6.2 校准品：使用OLYMPUS公司提供的多项校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。
8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪操作规程.SOP 文件。
9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
血清LDH及同工酶检测
血清LDH及同工酶检测LDH作用乳酸脱氢酶lactate dehydrogenase LD或LDH在辅酶INAD为氢受体时催化L-乳酸为丙酮酸 L-乳酸丙酮酸NAD NADHH1 方法 1 分光光度法 1利用顺向反应pH 88-98340nm处连续观察NADH的产生速度 2利用逆向反应pH 74-78340nm处连续观察NADH的消失速度分光光度法能利用顺逆双相反应线性范围较广但要求保持测定体系于最适温度下否则会影响测定的准确性 2 比色法测定LD总活性1 原理乳酸脱氢酶LD 乳酸丙酮酸丙酮酸 24-二硝基苯肼丙酮酸-二硝基苯腙碱性溶液中呈棕红色颜色的深浅与丙酮酸的浓度呈正比 2 试剂基质缓冲液pH 88 NAD溶液113mmolL 丙酮酸标准液05mmolL 24-二硝基苯肼溶液1mmolL 氢氧化钠溶液04mmolL 单位定义以100ml血清37℃与基质作用15min生成1umol丙酮酸为一个金氏单位参考值血清LD190-437金氏单位 3 操作步骤1 LD活性测定加入物对照管测定管血清- 005 基质缓冲液05 05 混匀放37°C水浴5min NAD溶液 - 01 混匀放37°C水浴15min 24-二硝基苯肼溶液 05 05NAD溶液 01 - 混匀放37°C水浴15min 04molLNaOH 50 50 ※室温放置5min进行比色波长440nm 2 LD校正曲线制作加入物ml B 1 2 34 丙酮酸标准液 0 005 01 015 020 基质缓冲液 05 045040 035 030 蒸馏水 015 015 015 015 015 24二硝基苯肼05 05 05 05 05 混匀放37°C水浴15min 04molLNaOH50 50 50 50 50 LD活性单位 0 250 500 750 1000临床意义①心肌损害心肌梗塞充血性心衰心肌炎②肝脏疾病病毒性肝炎肝硬化原发性肝癌③其它骨骼肌的损伤恶性肿瘤白血病淋巴瘤等肺梗塞等注意事项①标本不能溶血也不能用草酸盐抗凝血②由于LD4LD5对冷不稳定不宜冰箱存放血清标本在室温下可稳定2-3天 LD同工酶的测定人体某些组织中LDH同工酶电泳图谱二测定方法柱层析法免疫化学法热稳定性和抑制法电泳法原理根据LD同工酶一级结构和等电点的差异在一定电泳条件下使LD在支持物上被分离乳酸脱氢酶LD 乳酸丙酮酸 NADH 氧化型PMS 还原型PMS NAD 还原型PMS 四氮唑盐类氧化型PMS 甲臢当有LD活性的区带存在即显紫红色颜色深浅与酶活性成正比借助于扫描仪或光密度仪可进一步求出相对含量试剂巴比妥缓冲液pH 86 巴比妥盐酸缓冲液0082molL pH 82 EDTA-Na2溶液10mmolL 缓冲琼脂糖凝胶8gL和 5gL 底物显色液和固定漂洗液 3操作①凝胶板制备②加样③电泳④显色⑤固定和漂洗 4计算A总吸光度总和 A1 A2 A3 A4 A5 A1A5 相应为LD同工酶LD1LD5的吸光度 LD同工酶的百分比为 LD1 A 1 A总× 100 LD2 A 2 A总× 100 LD3A 3 A总× 100 LD4 A 4 A总× 100 LD5 A5 A总× 100 临床意义①心脏疾病心肌梗塞 LD1 ＞ LD2 充血性心衰心肌炎 LD1 ＞ LD2 ②肝脏疾病病毒性肝炎 LD5 ＞LD4 肝硬化原发性肝癌 LD5↑↑LD5＞LD4 ③恶性肿瘤白血病结肠癌等 LD3↑LD3＞LD1 ④肌肉疾病肌肉损伤肌萎缩 LD5↑注意事项①不宜用溶血标本②严格控制温度LD4和LD5特别是LD5对热敏感如底物显色液温度超过50℃LD5易失活③底物显色液需避光保存因PMS对光敏感否则显色后的凝胶板背景颜色深而影响结果④LD同工酶对冷的敏感性不同尤其是LD5对冷不稳定因此血清标本应该放室温保存分布骨骼肌心肌脑组织平滑肌胃肠道子宫在肝及红细胞中测不到CK的活性ADP 磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶丙酮酸 ATP 丙酮酸-24-二硝基苯腙实验操作加入物B S U 血清- - 01 标准- 01 - 1mmolL200UL H2O 01 - - 酶试剂 05 05 05 37℃ 15min DNP O5 05 05 37℃ 15min NaOH 4 4 4 室温 5min 440nm比色临床意义 1引起血清CK活性升高的疾病 1心脏疾病急性心肌梗塞病毒性心肌炎心外膜炎 2肌性疾病进行性肌营养不良多发性肌炎皮肌炎肌萎缩 3中枢神经系统疾病脑血管意外脑膜炎颅脑外伤 4肺疾病肺栓塞等 2引起血清CK活性降低的疾病较少甲状腺功能亢进全身性红斑狼疮严重感染败血症等 7注意事项1本实验的许多试剂都易失效故最好在每次实验前临时配制 2肌酸呈色不稳定振荡充分与否直接影响呈色的深浅及过程用旋涡混合器充分振荡15s37℃水浴5min后颜色可达最高点并持续30min以上 1 电泳法测定CK-MB• 琼脂糖介质醋酸纤维素薄膜酶定位 CK-BB —白蛋白区 CK-MB —α2 ～β区CK-MM —γ区 CK-Mt —γ后参考值 CK-BB 0CK-MB 0 ～ 3CK-MM 97 ～ 100CK-Mt 0CK-MB 阳性决定水平为5试剂 150mmolL Tis-巴比妥缓冲液pH 80 230mmolL Tis-巴比妥缓冲液pH 8635gL 琼脂糖 4400mmolL Bis-Tis缓冲液pH 70 5辅酶溶液 6底物显色液 7混合底物显色液操作 1制备凝胶玻片 2加样 3电泳 4显色 5固定和漂洗 6观察结果参考值 1CK-BB 0 2CK-MB 0 3 3CK-MM 97 100 4CK-Mt 0 引起CK-BB升高的疾病急性颅脑外伤脑血管疾病急性细菌性脑膜炎引起CK-BM升高的疾病急性心肌梗塞心肌炎进行性肌营养不良注意事项1电泳需较高的pH值酶反应需较低pH 2CK不稳定对光热及高pH敏感最好将及时分出的血清充CO2后塞紧管口置冰室或-30℃保存至少可稳定半个月及时测定效果更好 3血清CK活性随温度升高而升高直至45℃更高温度时CK活性迅速下降56℃很快失活琼脂糖电泳法测CK同工酶时决不能像作LD同工酶用温度较高的琼脂糖底物显色液否则CK活性丧失而非脱氢酶NDH反应显著心肌梗死诊断的实验室指标的特性－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－实验室分子量生理半衰期升高时间峰值时间恢复正常时间指标 KD h h h d －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－CK 86 17 312 1224 34 CK-MB活性86 13 312 122423 CK-MB质量 86 13 26 12243 早期急性心肌梗死的诊断灵敏度－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－胸痛后时间 h 指标原理CK分子是由M和B两种亚单位组成的二聚体在细胞质内存在三种CK同工酶CK-BB 脑型CK-MM 肌型CK-BM 混合型CK-Mt线粒体内。
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总之：复基因位点同工酶在生物体内可以各个 同工酶独自存在，也可以以杂化体形式存在。
LD1
H
LD2
LD3
LD4
LD5
单位定义： 以 100ml 血清， 37℃与基质作用 15min ， 生成1umol丙酮酸为一个金氏单位。
参考值： 血清LD：190-437金氏单位。
3)操作步骤
1 LD活性测定
对照管 0.5 混匀，放37°C水浴5min NAD+溶液 混匀，放37°C水浴15min 2，4-二硝基苯肼溶液 0.5 NAD+溶液 0.1 混匀，放37°C水浴15min 0.4mol/LNaOH 5.0 ※室温放置5min进行比色，波长440nm 加入物 血清 基质缓冲液 测定管 0.05 0.5
M
二、测定方法：
柱层析法
醋酸纤维素薄膜 聚丙烯酰胺凝胶 琼脂糖
免疫化学法
热稳定性和抑制法
*电泳法：
原理： 根据LD同工酶一级结构和等电点的差异，在一 定电泳条件下，使LD在支持物上被分离。
乳酸脱氢酶（LD） 乳酸 丙酮酸
Biblioteka NADH + 氧化型PMS
还原型PMS + 四氮唑盐类
还原型PMS + NAD+
氧化型PMS + 甲臢
当有 LD 活性的区带存在即显紫红色，颜 色深浅与酶活性成正比，借助于扫描仪 或光密度仪，可进一步求出相对含量。
（-）
（ +）
例如，LDH同工酶
LDH2、LDH3、LDH4、LDH5都比LDH1有较多的碱 性氨基酸，在pH8.6的巴比妥缓冲液中LDH1带 有更多的负电荷，因而向阳性泳动最快。
血清LDH及其同工酶测定
刘湘帆
LDH作用：
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LD
或LDH）在辅酶I（NAD+）为氢受体时，催化L乳酸为丙酮酸。 LDH
L-乳酸
丙酮酸
NAD+
NADH+H+
分布：特异性差 心肌、骨骼肌、肾脏 、肝、脾、胰、肺、肿瘤、 红细胞 肾 ＞ 心肌 ＞ 骨骼肌 ＞ 肝 ＞ 脾 ＞ 胰 ＞ 肺
1 方法
(1) 分光光度法 1 ）利用顺向反应（ pH 8.8-9.8 ）： 340nm 处 连续观察NADH的产生速度。 2）利用逆向反应（pH 7.4-7.8）：340nm处 连续观察NADH的消失速度。 分光光度法能利用顺、逆双相反应，线性范围 较广。但要求保持测定体系于最适温度下，否 则会影响测定的准确性。
注意事项
①不宜用溶血标本。 ②严格控制温度（LD4和LD5，特别是LD5对热敏感， 如底物显色液温度超过50℃，LD5易失活）。 ③底物显色液需避光保存，因PMS对光敏感，否则 显色后的凝胶板背景颜色深而影响结果。 ④LD同工酶对冷的敏感性不同，尤其是LD5对冷不 稳定。因此血清标本应该放室温保存
0.1
0.5 5.0
2 LD校正曲线制作
加入物（ml） B 1 2 3 4 丙酮酸标准液 0 0.05 0.1 0.15 0.20 基质缓冲液 0.5 0.45 0.40 0.35 0.30 蒸馏水 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 2,4二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，放37°C水浴15min 0.4mol/LNaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 LD活性单位 0 250 500 750 1000
(2)比色法测定LD总活性
1） 原理：
乳酸脱氢酶（LD） 乳酸 丙酮酸 2,4-二硝基苯肼 丙酮酸
丙酮酸-二硝基苯腙
碱性溶液中呈棕红色颜色的深浅与丙酮酸的浓度呈正比。
2） 试剂： 基质缓冲液（pH 8.8） NAD+溶液（11.3mmol/L） 丙酮酸标准液（0.5mmol/L） 2,4-二硝基苯肼溶液（1mmol/L） 氢氧化钠溶液（0.4mmol/L）
（4）计算：
A总（吸光度总和）= A1 + A2 + A3 + A4 + A5 （A1~A5 相应为LD同工酶LD1~LD5的吸光度。） LD同工酶的百分比（%）为： LD1 = A 1/ A总 × 100% LD2 = A 2/ A总 × 100% LD3 = A 3/ A总 × 100% LD4 = A 4/ A总 × 100% LD5 = A5 / A总 × 100%
CK及其同工酶的检测
肌酸激酶（Creatine Kinase ，CK） ，系统名为三磷 酸腺苷：肌酸磷酸转移酶。广泛存在于各种组织中，与 ATP 的再生有关。
试剂： 巴比妥缓冲液（pH 8.6） 巴 比 妥 盐 酸 缓 冲 液 （ 0.082mol/L ， pH 8.2） EDTA-Na2溶液（10mmol/L） 缓冲琼脂糖凝胶（8g/L和 5g/L） 底物显色液和固定漂洗液
（3）操作 ①凝胶板制备 ②加样 ③电泳 ④显色 ⑤固定和漂洗
临床意义
①心肌损害： 心肌梗塞、充血性心衰、心肌炎 ②肝脏疾病:病毒性肝炎、肝硬化、原发性肝癌 ③其它:骨骼肌的损伤、恶性肿瘤（白血病、淋巴 瘤等）、肺梗塞等
注意事项： ①标本不能溶血，也不能用草酸盐抗凝 血。 ②由于LD4，LD5对冷不稳定，不宜冰箱存 放，血清标本在室温下可稳定2-3天。
临床意义
①心脏疾病 心肌梗塞 LD1 ＞ LD2 充血性心衰，心肌炎 LD1 ＞ LD2 ②肝脏疾病 病毒性肝炎 LD5 ＞LD4 肝硬化，原发性肝癌 LD5↑↑，LD5 ＞LD4 ③恶性肿瘤 白血病、结肠癌等 LD3↑，LD3＞LD1 ④肌肉疾病 肌肉损伤、肌萎缩 LD5↑
LD同工酶的测定
LD同工酶
H亚单位 M亚单位
LD1 （H4） LD2 （H3M） LD3 （H2M2） LD4 （HM3） LD5 （M4）
心肌 肌肉
心肌 心肌 肺、脾 肝、骨骼肌 肝、骨骼肌
正常成人：LD2>LD1>LD3>LD4>LD5
人体某些组织中LDH同工酶电泳图谱
LDH1 LDH2 LDH3 LDH4 LDH5