粗多糖检测方法(葡萄糖)
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖含量测定方法
粗多糖含量测量：1、称量0.2克的短序落葵薯的根粉末，加水4ml，100摄氏度水浴4小时。
2、4000转每分离心10min，将上清液全部转入另一个新管中（约3ml），加入7ml无水乙醇进行醇降，5000转每分离心10min，倒掉上清液，向每管中加入5ml无水乙醇，震荡起沉淀，然后5000转每分离心10min，倒掉上清，放入烘箱烘干。
3、向每个试管中加入6ml的蒸馏水，放入水浴锅中溶解，用sevag法除蛋白，加入氯仿和正丁醇混合液2ml（氯仿：正丁醇=4:1），5000转每分离心10min，通过几次预试实验后，确定所用多糖溶液的量为10ul，进行测量，具体方法如下：硫酸酚法：1）葡萄糖标准液的配制2）准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
3）2）苯酚液的配制4）准确移取苯酚6 mL，蒸馏水定容至100 mL，即得6％苯酚液，棕色瓶中避光保存。
表1 标准曲线的制作步骤取8支干净的具塞试管按表2方法操作,摇匀后放置5 min,置沸水浴中加热15min,取出迅速冷却至室温,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处测定吸光度。
以葡萄糖浓度Y 为纵坐标（ug/mL），吸光度X为横坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程。
计算百分含量：百分含量=L*600*10^（-6）/0.2蒽酮法：1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为纵坐标，光密度值为横坐标，作出标准曲线。
样品含量测定：百分含量= L*600*10^（-6）/0.2。
分光光度法测定桑黄中粗多糖(以葡聚糖计)的方法研究
2018年10月控制器、日本的SMOC 控制器等已经是较为成熟的控制器。
从这一点来看，石油化工仪表控制系统在先进控制方面做出良好的应用后，很多工作的部署都能够顺利的开展，同时在潜在问题的改善、解决过程中，也可以取得较多的帮助。
2.3制造执行系统通过在石油化工仪表控制系统的应用过程中开展积极的创新，很多地方的工作都取得了较多的肯定，并且对于行业的发展产生了良好的推动作用。
结合以往的工作经验和当下的工作标准，认为石油化工仪表控制系统的应用过程中，还需要在制造执行系统方面投入较多的努力。
首先，制造执行系统的存在，能够促使石油化工仪表控制系统的一些内部协调取得更好的效果，对于不同的仪表搭配，以及功能实践等，都可以取得较好的效果，整体上获得的价值非常突出。
其次，制造执行系统的应用，还必须在计算机、云计算、人工智能等方面投入较多的努力。
这些技术是当代比较先进的内容，而且在研发成果以及硬件搭配上，都能够达到多元化的目标。
通过对这些内容开展积极的融入，可以促使执行制造系统更加的完善，对于石油化工仪表控制系统的日后进步而言，能够提供更多的支持。
3石油化工仪表控制系统的发展新时代的研发工作中，石油化工仪表控制系统是非常有代表性的内容，未来应继续在石油化工仪表控制系统的内容上不断的增加，最大限度的促使系统的可靠性、可行性获得大幅度的提升。
例如，在石油化工仪表控制系统的智能理念上，需要划分出不同的模块，以及差异性的功能，这样才能在具体工作的运作成绩上，不断得到更高的水准。
与此同时，石油化工仪表控制系统的相关硬件搭配，也要得到深入的测试分析，尤其是在承载能力方面，必须做出较多的保障，这样才能对日后工作的进行，提供较多的支持与参考。
4总结我国在石油化工仪表控制系统的研发力度上不断提升，无论是固有问题的解决，还是新的理念拓展，或者是在工作效率的提升上，都能够取得较好的效果。
日后，应继续加强石油化工仪表控制系统的对比分析，充分模拟不同的环境来观察系统的运作效果，从而确保在工作的实践层面上，能够创造出较高的价值。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
粗多糖检测方法
粗多糖的测定方法（分光光度法）本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
1. 方法提要食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
2. 主要仪器（1）分光光度计。
（2）离心机（3000r/min）。
（3）旋转混匀器。
3. 试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
[指导]多糖检测方法（保健品）
![[指导]多糖检测方法（保健品）](https://img.taocdn.com/s3/m/548707a8f021dd36a32d7375a417866fb84ac0ea.png)
A.2 粗多糖A.2.1 方法本方法参照《保健食品功效成分检测方法》（王光亚主编，中国轻工业出版社2002年出版）中“粗多糖的测定方法”中“（一）碱性酒石酸铜滴定法”制订。
A.2.2原理样品中多糖经乙醇沉淀分离后，加酸、加热、回流水解成单糖，以次甲基蓝作指示剂，在加热条件下，滴定经标定过的碱性酒石酸钾钠铜溶液，根据样品液消耗体积，计算其含量。
A.2.3仪器与试剂A.2.3.1全玻璃标准磨口回流装置(500ml)，水解用；A.2.3.2碱性酒石酸铜甲液称取15g硫酸铜(CuSO4·5H2O)，及0.05g次甲基蓝，溶于水并稀释至1000ml。
A.2.3.3碱性酒石酸铜乙液称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，储存于橡胶塞玻璃瓶内。
A.2.3.4葡萄糖标准溶液准确称取1.0000g 经过98~100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后，并以水稀释至1000ml此溶液1ml含1mg葡萄糖，现配现用。
A.2.4 操作方法A.2.4.1 样品处理准确称取均匀研碎的样品粉末2.0g，置于250ml的磨口烧瓶中，精密加入50ml水，称定重量，至沸水浴中加热回流2h，冷却至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml加75ml无水乙醇搅拌均匀，在离心机中以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液，再加15ml热水（温度>90℃），冲洗离心瓶中沉淀物，重复一次后再以4000r/min离心30min，小心用吸管将上层液体吸去。
用离心瓶中醇析物用50ml热水（温度>90℃）少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中加热2h，冷却，然后先用40%的氢氧化钠溶液（约15ml）粗调pH值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于pH计上调整pH在6.8~7.2之间，（不要用pH试纸调）。
多糖测定方法
2.3.4 微藻细胞内、外总糖含量的测定(1) 配制葡糖糖标准溶液（100 μg/mL）①使用数显式电热恒温干燥箱在80℃下将分析纯无水葡萄糖烘干至恒重。
②使用电子精密天平准确称取1g无水葡萄糖。
③加入蒸馏水，使无水葡萄糖溶解。
④充分震荡摇匀后，再加入蒸馏水使之定容至100 mL。
⑤这样就成功配制1 %葡萄糖标准溶液。
⑥准确吸取1mL 1 %葡萄糖标准液，加入蒸馏水，摇匀后，使之定容到100 mL容量瓶中。
(2) 配制蒽酮溶液①使用电子精密天平准确称取0.2 g蒽酮。
②加入100 mL 95 %浓硫酸中。
③充分搅拌使之溶解，然后置于棕色瓶中。
④待用。
最好现用现配。
(3) 制作标准曲线①准确吸取一些葡萄糖标准溶液。
②吸取量分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL。
③放入10 mL的具有塞试管中，分别各添加蒸馏水至到1 mL。
④然后再加入4.0 mL的蒽酮溶液，充分震荡摇匀。
⑤放入电热恒温水浴锅的沸水浴中煮沸10min，然后再用水冷快速冷却至室内温度。
⑥等它们稳定之后，用紫外分光光度计测波长为620 nm的吸光度。
A = 6.8540 C + 0.0027，R2 = 0.9988。
(4) 配制亚铁氰化钾和硫酸锌溶液硫酸锌溶液的配制：①使用电子精密天平准确称取15 g分析纯硫酸锌。
②放入50 mL蒸馏水中，充分震荡搅拌，使之溶解。
亚铁氰化钾的配制：①使用电子精密天平准确称取0.3 g分析纯亚铁氰化钾。
②放入50 mL蒸馏水中，充分震荡搅拌，使之溶解。
(5) 测定总糖含量①测定细胞内总糖含量1)精确吸取藻液10 mL，使用台式离心机在5000 r/min转速下离心。
2)等待10 min后，把上清液吸出，作为待测胞外总糖。
3)放进冰箱冷冻，30min后拿出来融化。
4)然后再放进冰箱，反复3次，藻泥冻融破碎3次后。
5)分别准确加入3 mL PBS溶液，使用数控超声波清洗仪超声破碎，30 min后取出，充分摇晃振荡。
粗多糖检测方法
粗多糖（以葡萄糖计）的测定方法
1． 主要仪器
分光光度计；水浴锅；分析天平等
2． 试剂
蒽酮：分析纯；浓硫酸：分析纯；水为去离子水或蒸馏水。
蒽酮硫酸溶液：精密称取蒽酮0.1g ，加80%的硫酸溶液100ml 使溶解，摇匀。
3． 对照品溶液的制备
取葡萄糖对照品适量，于105℃干燥至恒重，精密称定，加水制成每1ml 含0.1mg 的溶液，即得。
4． 标准曲线的制备
分别精密量取对照品溶液0.2ml 、0.4ml 、0.6ml 、0.8ml 、1.0ml 、1.2ml ，置10ml 具塞试管中，加水至2.0ml ，精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ，摇匀，置沸水浴中加热15分钟，取出，放入冰水浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在625nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5． 供试品溶液的制备
精密量取本品1ml ，置于50ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液2ml 至20ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
6． 测定法
精密量取供试品溶液2ml ，置10ml 具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ），计算，即得。
7． 结果计算
1000
1001⨯⨯⨯=V V m X 式中 X ——样品中粗多糖含量（以葡萄糖计）（g/100ml ）
m ——供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ）
V ——样品稀释倍数
V 1——比色时所取的样品溶液体积（ml ）。
多糖检测方法
多糖的检测方法关于多糖含量测定，业内有两种评价方法。
一种是狭义上严格的多糖测定，即水提取多糖后，以凝胶色谱柱分离、洗脱提纯粗多糖得到较单一分子量的多糖，再水解成各种单糖，以HPLC法分离测定各单糖，即可得到比较严格意义上的多糖含量及其组成。
这种方法是科研级的多糖测定。
另一种评价方法一般是生产企业用于质控的多糖测定：一般过程是水提醇沉粗多糖后，以葡萄糖作为相比较的物质，加入特定显色剂后比色测定粗多糖的含量。
注意，这种方法测得的是以葡萄糖作为折算的多糖含量。
但这种评价方法简单实用，能反映一定的质量指标，作为质控之用可以的了。
包括中国药典和一些国标、行标都采用此方法评价多糖含量，方法大同小异，如硫酸-苯酚法，硫酸-蒽酮法。
但根据不少实际检验人的反映，要想检测结果有很好的重现性，还是有很多细节问题要注意的。
粗多糖测定多糖的测定方法，目前有碱性酒石酸铜滴定法、比色法（蒽酮比色法、硫酸-苯酚法）。
一般说来，比色法的优点是灵敏度高，样品用量少；但缺点是一般做常规检测时使用葡萄糖作标准品，误差较大，应以被测物的纯品作对照品，以求出换算因子，但要制备被测物的纯品并非每个实验室所能做到的，而且保健食品中往往是多种中草药的提取物作为原料而制成，所含多糖是不同相对分子量多糖的混合体，这就给提取纯品增加了难度。
所以当成品中多糖含量大于1%（质量浓度）时，最好选用碱性酒石酸铜滴定。
滴定法1.样品预处理取本品适量，精密称定，置于250ml磨口烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，置沸水浴回流2小时，放置至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml于100ml 离心管中，加无水乙醇75ml，混匀，以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液,再加15ml 热水(温度＞90℃)冲洗离心管中沉淀物,重复一次后再以4000r/min离心30min，弃去上清液，沉淀用乙醇液（水：乙醇=15：75）洗涤两次，离心，弃去洗涤液。
粗多糖检测方法(以葡萄糖计)
A.1粗多糖的测定A.1.1原理样品溶液中粗多糖经80%乙醇沉淀，粗多糖在硫酸作用下，先分解成单糖，并迅速脱水成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490nm成有特征吸收，与标准曲线比较计算含量。
A.1.2试剂和对照品除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682中的蒸馏水。
A.1.2.1硫酸（H2SO4）,ρ=1.84g/mlA.1.2.2无水乙醇(C2H6O)A.1.2.3苯酚(C6H6O)A.1.2.4葡萄糖（C6H12O6），使用前于105℃恒温烘干至恒重。
A.1.2.5 5%苯酚溶液：称取苯酚5g，于100ml烧杯中，加适量水溶解，定溶于100ml容量瓶中，现配现用。
A.1.2.6 100mg/L标准葡萄糖溶液：准确称量0.1000g葡萄糖（A.1.2.4）于100ml烧杯中，加水溶解，定容至1000ml容量瓶中，摇匀，至4℃冰箱密塞贮存。
A.1.3仪器设备及装置A.1.3.1可见光分光光度计A.1.3.2分析天平，感量0.001gA.1.3.3离心机A.1.4试样制备精密量取本品软胶囊内容物10.00g，加10倍量的水，在100℃水浴中煮沸1h，重复3次.提取液过滤，浓缩至1:1（g/ml），加入3倍量无水乙醇，震荡摇匀，静止片刻使沉淀出现，在离心机中以4000r/min离心10min，小心弃去上清液，沉淀用热水溶解转移至100ml容量瓶中，离心管用水洗涤2～3次，洗涤液一并转移至容量瓶中，定容摇匀。
取上述溶液5ml 至10ml容量瓶中，加水定容，摇匀作为样品测定液。
A.1.5操作步骤A.1.5.1标准曲线分别吸取0、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml的标准葡萄糖溶液（A1.2.6）置20ml具塞试管中，用蒸馏水补至1.0ml，向试液中加入1.0ml苯酚溶液（A1.2.5），然后快速加入5.0ml 硫酸（于液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合），静置10min，使用涡旋振荡器使反应液充分混合，然后将试管放置于30℃水浴中反应20min，在490nm处测定吸光度，以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制定标准曲线。
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2） 2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6） 1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7） 20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
多糖含量测定方法
多糖含量的测定粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定，还原糖用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定，多糖含量 = 总糖 - 还原糖。
1、总糖含量测定实验原理：多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙黄色溶液，在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
试剂：浓硫酸（分析纯）、5%苯酚溶液（分析纯）、标准葡萄糖。
操作步骤：①制作标准曲线：准确称取105 ℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1 mg/ml 的标准溶液，用蒸馏水分别配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/ml。
1 ml标准液分别加入 5% 苯酚溶液1 ml，并迅速加入浓硫酸5 ml，静置10 min。
摇匀，30℃放置30 min后于490nm测定OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线。
②样品含量测定：吸取1.0ml样品液，按照上述步骤操作测定OD490，并代入标准曲线计算样品的总糖含量。
2、还原糖含量实验原理碱性条件下，DNS可与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
此物质在煮沸条件下成棕红色，且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。
据此可通过测定OD值确定还原糖含量。
试剂及配制：浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
DNS显色液：称取3.25g DNS溶于少量蒸馏水中并转移至500ml容量瓶中，加入2mol/L的NaOH溶液162.5ml，再加入7.5ml的丙三醇，摇匀，加蒸馏水定容至500ml，摇匀。
操作步骤①标准曲线制作：在6支试管中分别加入1mg/ml葡萄糖标准溶液0.00ml，0.10ml，0.20ml，0.30ml，0.40ml，0.50ml，补蒸馏水至0.5ml，然后加入1 / 2DNS试剂1.5ml，充分混匀。
置于沸水浴中煮沸5min，然后迅速流水冷却，并分别向试管中加入4ml蒸馏水，混匀。
在540nm处读OD值。
保健食品粗多糖的测定-二次沉淀法
A.1 保健食品中粗多糖的测定方法分光光度法本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
1.方法提要食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖含量。
2.主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器3.试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4•5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5×105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。
4.测定步骤（1）样品处理：a. 样品提取：称取混合均匀的固体样品2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
粗多糖提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解粗多糖的基本性质和提取方法。
2. 掌握水提醇沉法提取粗多糖的原理和操作流程。
3. 通过实验验证粗多糖提取效果，并对其含量进行测定。
二、实验原理粗多糖是一类高分子碳水化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
水提醇沉法是一种常用的粗多糖提取方法，其原理是利用多糖在水中的溶解度较高，而在乙醇中的溶解度较低的特点，通过加水提取多糖，然后用乙醇沉淀多糖，从而实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：植物材料（如大麦、玉米等），乙醇，蒸馏水，硫酸铵，苯酚，浓硫酸等。
2. 实验试剂：95%乙醇，NaOH，FeCl3，浓盐酸，氯仿，乙酸乙酯等。
四、实验仪器1. 实验室常用仪器：电子天平，恒温加热器，水浴锅，旋转蒸发仪，离心机，移液器等。
2. 特殊仪器：分光光度计，真空干燥箱等。
五、实验步骤1. 植物材料预处理：将植物材料洗净、晾干，然后研磨成粉末。
2. 水提：将研磨好的植物粉末加入适量蒸馏水，加热煮沸，提取多糖。
3. 醇沉：将提取液冷却至室温，加入95%乙醇，使多糖沉淀。
4. 沉淀分离：将沉淀物用离心分离，弃去上清液。
5. 沉淀干燥：将沉淀物用无水乙醇洗涤，然后在真空干燥箱中干燥至恒重。
6. 粗多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量。
六、实验结果与分析1. 粗多糖提取率：根据实验数据计算粗多糖提取率，并与文献报道进行比较。
2. 粗多糖含量测定：根据苯酚-硫酸法测定粗多糖含量，并与理论值进行比较。
3. 结果分析：分析实验结果，探讨影响粗多糖提取率的因素，如提取时间、提取温度、乙醇浓度等。
七、实验讨论1. 粗多糖提取率的影响因素：实验结果表明，提取时间、提取温度、乙醇浓度等因素对粗多糖提取率有显著影响。
在实验条件下，最佳提取时间为2小时，提取温度为80℃，乙醇浓度为95%。
2. 粗多糖提取方法的优化：通过实验，对水提醇沉法进行了优化，提高了粗多糖提取率。
3. 粗多糖的应用前景：粗多糖具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、降血糖等，具有广泛的应用前景。
功效成分检测方法
粗多糖测定方法第一法本方法参照《保健食品功效成分检测方法》（王光亚、白鸿主编）中“粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法”的方法测定。
1.主要仪器（1）离心机：4000r/min（2）离心管：50ml（3）分光光度计（4）水浴锅（5）漩涡混合器2.试剂实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。
（1）无水乙醇（2）80%（V/V）乙醇溶液（3）葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的分析葡萄糖0.5000g加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。
（4）5%苯酚溶液（W/V）：称取精制苯酚5.0g,加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置于冰箱中可保存一个月。
（5）浓硫酸（比重1.84）。
（6）0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：31.5ml（0.2mol/L）磷酸氢二钠与68.5ml（0.2mol/L）磷酸二氢钠混合。
3.测定步骤（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0~2.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴中加热1小时，冷却至室温后补加水至刻度（V1）。
取50ml上述提取液置于100ml具塞锥形瓶中，加1ml 10%淀粉酶液和0.5ml 0.2M磷酸盐缓冲液，加塞，置55℃~60℃酶解1小时，再加约为样品体积1%的葡萄糖苷酶于60℃以下再水解1小时候取出（用碘液检验是否水解完全，如不完全可延长水解时间至酶解液加碘液不变蓝色为止），于电炉上小心加热至沸腾做灭酶处理，冷却至室温，定容至100ml，过滤，取滤液沉淀粗多糖。
（2）沉淀粗多糖：准确吸取上述滤液5.0ml（V2），置于50ml离心管中，加入无水乙醇20ml，混匀，与4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min 离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。
残渣用水溶解并定容至10~25ml（V3）（根据糖浓度而定），供测定用。
多糖测定
多糖的测定蒽酮比色法原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
仪器、试剂和材料：1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：小球藻操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.小球藻中可溶性糖的提取（1）将生长至平衡期的小球藻液6ml离心（3500r/min）5min,获得新鲜的小球藻藻泥；（2）向藻泥中加入5倍体积的去离子水，置于冰箱（-4℃）中冷冻，然后取出融化，如此反复3次提取水溶物；（3）将冰融后的溶液离心（4500r/min）10min，弃残渣，取上清清液；（4）将上清液在水浴中加热，浓缩至原体积的1/3，然后加入体积分数为3%的三氯乙酸沉淀蛋白，离心（12000r/min）10min,取上清液；（可以再平均分成n份，视量而调整）（5)吸取上清液1ml，加入5倍体积的乙醇溶液（体积分数为95%），所得的沉淀物即为小球藻粗多糖；（6）将粗多糖溶于水，再用体积分数30%乙醇（95%乙醇31.58ml，68.42ml蒸馏水）进行沉淀，最终得到多糖。
粗多糖测定方法
苯酚-硫酸法测定多糖一、原理：多糖或寡糖在浓硫酸作用下水解产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚缩合，生成橙黄色物质，在波长490nm 处和一定浓度范围内，其吸光度与糖浓度呈线性关系，可通过比色法测定其含量。
二、溶液的配制：①80%苯酚储备液：精密称取20.0g苯酚，加入5.0mL蒸馏水，60℃水浴溶解，过滤，备用。
②6%苯酚试剂：由80%的苯酚溶液配制（现用现配）。
③葡萄糖标准溶液的配制：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品12.0mg，置小烧杯中，加蒸馏水溶解，定容至200mL，配成标准葡萄糖浓度为60.0 ug/mL，过滤，备用。
三、标准曲线的绘制：按下表中的配制分别置于20mL具塞试管中，每管加入葡萄糖标准液和水后混匀，加入0.4mL 6%苯酚试剂后，混匀，立即置冰水浴中，加入4.5mL浓硫酸（自然流下），混匀，置于80℃水浴中加热10min，取出水浴冷却10min，于波长492nm处测其吸光度。
以吸光度（A）对葡萄糖浓度（C）作标准曲线。
编号0 1 2 3 4 50 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 标准葡萄糖溶液（mL）蒸馏水（mL） 2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 葡萄糖浓度0 6 18 30 42 54 （ug/mL）6%苯酚（mL）0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 浓硫酸（mL） 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 总体积(mL) 6.9 6.9 6.9 6.9 6.9 6.9 OD值0.0000 0.1034 0.3258 0.5445 0.7600 0.9812四、样品的测定：按下表添加各溶液，按照标准曲线的测定方法进行测定。
编号空白样品蒸馏水（mL） 2.0 0多糖溶液（mL）0 2.06%苯酚（mL）0.4 0.4浓硫酸（mL） 4.5 4.5总体积(mL) 6.9 6.9\。
粗多糖检测方法(葡萄糖)
多糖的检测方法粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法1.方法提要多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚- 硫酸作用成橙红色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。
2.仪器（1）离心机：4000r/min。
（2）离心管：50ml或具塞15ml。
（3）分光光度计。
（4）水浴锅。
（5）旋涡混合器。
3.试剂实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。
(1) 无水乙醇。
(2) 80%（v/v）乙醇溶液。
(3) 葡萄糖标准液：准确称取干燥恒重的分析纯葡萄糖0.5000g加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。
(4) 5%苯酚溶液（W/V）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
(5) 浓硫酸（比重1.84）。
(6) 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：31.5ml（0.2mol/L）磷酸氢二钠与68.5ml（0.2mol/L）磷酸二氢钠混合。
4.测定步骤（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0~2.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml 左右，于沸水浴中加热1小时（如保健食品添加的已是多糖提取物，则加热15min），冷却至室温后补加水至刻度（v1）,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。
(2)沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）5.0ml（V2），置于50ml离心管中（或2.0ml于15ml具塞离心管中），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。
残渣用水溶解并定容至10~25ml（V3）（根据糖浓度而定）。
(3)标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml（相当于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，加入5%苯酚溶液1.0ml，在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10ml，在旋涡混合器上小心混匀，置沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
粗多糖测定方法的比较
一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。
粗多糖含量测定方法学验证范本
粗多糖含量测定方法学研究资料一、仪器与试药 (1)二、方法的研究 (1)1.检测波长的测定 (1)2.样品及对照制备方法 (1)三、方法学验证 (1)1.线性 (1)2.精密度实验 (1)3.稳定性实验 (1)4.重复性试验 (1)5.重现性实验 (1)6.准确度试验 (1)芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。
主要研究资料如下：一、仪器与试药1、仪器(1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发，型号TD25-WS）；(2) 离心管：50ml；(3) 水浴锅（精宏实验设备，型号DK-S26）；(4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）；(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计；(6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器）；(7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（普析通用仪器有限责任公司）；2、试药(1) 葡萄糖：化学试剂厂，分析纯，批号为20110602-1；(2) 无水乙醇：西陇化学股份，分析纯，批号为160802 1；(3) 蒽酮：国药集团化学试剂，分析纯，批号为20131127；(4) 硫酸：化学试剂厂，分析纯，批号为20150404-1；(5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。
(6) 0.1%蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取0.1g蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。
现用现配。
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多糖的检测方法
粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法
1.方法提要
多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚- 硫酸作用成橙红色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。
2.仪器
（1）离心机：4000r/min。
（2）离心管：50ml或具塞15ml。
（3）分光光度计。
（4）水浴锅。
（5）旋涡混合器。
3.试剂
实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。
(1) 无水乙醇。
(2) 80%（v/v）乙醇溶液。
(3) 葡萄糖标准液：准确称取干燥恒重的分析纯葡萄糖0.5000g加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。
(4) 5%苯酚溶液（W/V）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
(5) 浓硫酸（比重1.84）。
(6) 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：31.5ml（0.2mol/L）磷酸氢二钠与68.5ml（0.2mol/L）磷酸二氢钠混合。
4.测定步骤
（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0~2.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml 左右，于沸水浴中加热1小时（如保健食品添加的已是多糖提取物，则加热15min），冷却至室温后补加水至刻度（v1）,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。
(2)沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）5.0ml（V2），置于50ml离心管中（或2.0ml于15ml具塞离心管中），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。
残渣用水溶解并定容至10~25ml（V3）（根据糖浓度而定）。
(3)标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml（相当于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，加入5%苯酚溶液1.0ml，在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10ml，在旋涡混合器上小心混匀，置沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
(4)样品测定：准确吸取上液适量（V4）（含糖0.02~0.08mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，然后按（3）法测定吸光度值。
从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。
5.结果计算 X=4
22311V V m V V ⨯⨯⨯⨯m ×0.9×100 式中 X ──样品中粗多糖含量[mg/100g （ml ）]；
m 1——样品测定液中葡萄糖的质量（mg ）； m 2——样品质量（g 或ml ）； V 1——样品提取液总体积（ml ）； V 2——沉淀粗多糖所用样品提取液体积（ml ）； V 3——粗多糖溶液体积（ml ）； V 4——测定用样品液体积（ml ）； 0.9──葡萄糖换算为粗多糖的系数。