初始污染菌实验方法验证审批稿
初始污染菌检验方法验证方案
初始污染菌检验方法适用性验证方案文件编号：编制/日期：审核/日期：批准/日期：XXXX有限公司1.验证目的---------------------------------------------------------32.范围-------------------------------------------------------------33.验证小组成员及职责-----------------------------------------------34.参考资料---------------------------------------------------------35.检验仪器及器具---------------------------------------------------36.菌种信息---------------------------------------------------------47.试验环境---------------------------------------------------------48.产品选择---------------------------------------------------------49.方法适用性验证---------------------------------------------------410.修正系数（校正因子）--------------------------------------------611.测试结果--------------------------------------------------------712.再验证周期------------------------------------------------------713.结论------------------------------------------------------------714.附表------------------------------------------------------------81.验证目的证明本公司医疗器械产品初始污染菌洗脱培养计数检验方法的适宜性和准确性。
初始污染菌实验方法验证
【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请：3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版 5.验证计划：5.1实验操作人员确认；验证组 姓名 职务 单位黄燕 组长 质量管理部经理江西狼和医疗器械股份有限公司龙章宏 组员 化验员 苏俊 组员 化验员 胡梓鹏组员化验员批 准经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方法进行验证。
批准人： 年 月 日5.2实验室实验设备及器材的确认；5.3产品取样及方法确认。
6.验证内容：6.1菌种和菌液制备6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
6.1.2菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
初始污染菌实验方法验证(文件模板)
电子天平
已校量
在有效期内
符合要求
电热恒温培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
霉菌培养箱
已校量
在有效期内
符合要求
确认人/日期：
审核/日期：
3.2 使用材料及菌种：胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄 糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂 对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌 种购买单位均为微生物种质资源库）。
该实验使用仪器及器具主要有：灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、 小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温 培养箱、霉菌培养箱。
设备名称
是否校量
是否在有效期内
结论
灭菌锅 百级工作台 生物安全柜
已校量 已校量 已校量
在有效期内 在有效期内 在有效期内
符合要求 符合要求 符合要求
表1
培养基菌落数 cfu
结论
加入菌种 铜绿假单胞菌
培养
胰酪大豆胨琼脂
条件 胰酪大豆胨琼脂培 胰酪大豆胨琼脂对照 培养基/胰酪大豆
养基
培养基
胨琼脂对照培养
基
平均值
金黄色葡萄球菌 平均值
枯草芽孢杆菌 平均值
白色念珠菌
33℃,48 小时
菌落形 态大小于对 照培养基上 的菌落一致
平均值 黑曲霉
23℃,72 小时
菌悬液若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2〜8 ℃在 24h 内使用。黑 曲霉孢子悬液存在 2〜8℃，在验证过的贮存期内用。
3.4 培养基适用性检查 3.4.1 需氧菌的计数 分别取 1ml 的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、 铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在 30-35℃，培养不超过 3 天；白色念珠菌、黑曲霉在 20-25℃， 培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养 基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.2 霉菌和酵母菌的计数 分别取 1ml 的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过 5 天。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的 对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 3.4.3 结果判定 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养 基管比较，试验菌应生长良好。 3.4.4 试验结果见表 1
2024初始污染菌实验方法验证
2024初始污染菌实验方法验证
2024年初始污染菌实验的方法验证可以包括以下几个方面的内容：
实验目的、实验设备和材料、实验步骤、实验结果及讨论等。
实验目的：验证2024年初始污染菌实验的方法是否可靠、有效，能
够准确测定菌的数量和种类。
实验设备和材料：实验设备包括培养皿、培养基、试管，实验材料包
括空气样品、表面拭子、蘑菇、硒酸纸等。
实验步骤：以下为可能的实验步骤，但实际步骤可能因具体实验设计
而有所不同。
1.收集空气样品：在实验环境中放置一定数量的培养皿，在一定时间
内吸取一定体积的空气样品。
2.采集表面拭子：使用含有菌落细栏的纹理拭子通过轻轻刷拭的方式
采集表面的微生物。
3.采集其他样品：根据具体实验设计，采集其他可能受污染的样品，
如食品、水源等。
4.制备培养基：按照一定比例配制适当的培养基，可以包括营养琼脂、血琼脂等。
5.接种培养基：将收集到的空气、表面拭子等样品分别接种到培养基中。
6.孵育培养基：将接种好的培养基置于恰当的温度和湿度条件下，进
行孵育。
7.菌落计数：根据特定的方法和标准，对培养基上的菌落进行计数，并记录下来。
8.分离和鉴定菌株：对菌落进行分离，选取单个菌落进行进一步的培养和鉴定，可以通过形态学、生理生化等方法鉴定。
实验结果及讨论：根据实验结果，分析验证的方法在初始污染菌实验中的可靠性和准确性，讨论可能存在的问题和改进方向，提出实验方法的优化建议。
总结：通过以上实验验证方法，可以确保2024年初始污染菌实验结果的准确性和可靠性，为后续的相关研究和实验提供了基础数据和方法参考。
2020初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请：3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：5.1实验操作人员确认；5.2实验室实验设备及器材的确认；5.3产品取样及方法确认。
6.验证内容：6.1菌种和菌液制备6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加人3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
初始污染菌验证方案
初始污染菌验证方案、报告文件编号：起草人：质管部：日期：审核人：质管部：日期：批准人：日期：有限公司1 验证目的：为减少初始污染菌对产品的影响，更有效的控制产品质量，对一次性使用无菌溶药器、一次性使用无菌注射器带针、一次性使用输液器带针、一次性使用静脉输液针、一次性使用延长管产品的初始污染菌进行控制。
2 验证依据GB15980—1995《一次性使用医疗用品卫生标准》3 验证小组：负责验证过程的组织指导工作。
：负责验证现场人员的安排组织工作。
：负责验证过程检测工作。
4 验证方案在有效环境监控下，任意连续三批取产品进行初始污染菌检测5 验证方法使用仪器设备：压力蒸汽灭菌器、超净工作台、天平、HH.B11.360型电热恒温培养箱，202—A0型台式干燥箱（以上设备经上海市计量测试技术研究院检定合格）以及试管、培养皿Φ9cm、刻度吸管、有盖广口瓶、玻璃注射器、营养琼脂（均经无菌处理）。
操作步骤：制备检验液，取产品剪碎后浸泡在有100ml灭菌生理盐水的有盖广口瓶中，充分震荡后制备成1：10的检验液，用灭菌吸管吸取2ml，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml，另取1ml 注入到9ml灭菌生理盐水试管中，更换1支吸管，并充分混匀，使成1：100稀释液。
吸取2ml，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml，另取1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中，更换1支吸管，并充分混匀，使成1：1000稀释液.将溶化并冷至45℃—50℃的营养琼脂培养基傾注于平皿内，每皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。
随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后翻转平皿，置30℃—35℃培养箱内培养48小时。
6 验证确认：通过3批对产品的初始污染菌检测，确认每批产品初始污染菌在有效的环境监控下是能达到要求的。
7 方案会签表1.验证目的：为减少初始污染菌对产品的影响，更有效的控制产品质量，对一次性使用无菌溶药器、一次性使用无菌注射器带针、一次性使用输液器带针、一次性使用静脉输液针、一次性延长管5个产品的初始污染菌进行控制。
2015初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证方案产品名称:一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核: 日期：批准: 日期：江西狼与医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1。
概述2。
验证目得３.职责与验证申请4.验证依据5．验证计划6。
验证内容初始污染菌实验方法验证方案1、概述：初始污染菌得数量可以反映出车间环境卫生得清洁度,与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系,故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性,从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品得安全性.2、目得:ﻫ通过实验验证检测方法得适用性及计数用培养基得适用性。
3、职责与验证申请:３、1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
３、2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表４、依据:《中国药典》2０15版5、验证计划：5、１实验操作人员确认；5、2实验室实验设备及器材得确认;５、３产品取样及方法确认。
6、验证内容:6、1菌种与菌液制备6、1、1 菌种试验用菌株得传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0 代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性.6、１、２菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌得培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上,３0〜35℃培养18〜２4小时;接种白色念珠菌得培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20〜25℃培养2—３天，上述培养后得新鲜培养物用PH7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或０、9％无菌化钠溶液制成每ｌｍl菌数小于１0０cfu（菌落形成)得菌悬液.接种黑曲霉得培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上,20〜2５℃培养5〜7天,加人３〜５ml 0、05%（ml/ml) 聚山梨酯80得pH7、０无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后,采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用0、0５％（ml／mｌ)聚山梨醋80得pＨ7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成每lｍl孢子数量小于1０0cfｕ得孢子悬液.菌悬液若在室温下放置,应在2小时内使用；若保存在2〜8 ℃在２4h 内使用。
3 产品初包装初始污染菌的验证报告
产品初包装初始污染菌的验证报告编号：YFB100301编制：评审：评审组成员批准：日期：有限公司一、验证目的确定公司产品初包装高密度聚乙烯袋在贮存过程中不破损、无污染，具有防护能力,并确定高密度聚乙烯袋的贮存期限。
二、验证范围适用于本公司产品（XXXXXX）的初包装-xxxxx的贮存时限的验证。
三、验证依据GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准聚乙烯袋四、验证小组成员五、验证项目产品初包装高密度聚乙烯袋初始污染菌在产品初包装贮存过程中的变化情况,并确定高密度聚乙烯袋的贮存期限。
六、验证过程及结果1.对采购进厂的初包装在进厂时和贮存3个月、6个月、9个月及12个月后的初始污染菌分别进行检测。
2.检测结果：1.运输包装医用XXXXX 的应该以 个为单元装入双层聚乙烯塑料袋内，再装入纸箱。
纸箱应能充分保护小包装在运输贮存过程不受损坏、污染。
2.小包装的贮存时间储存3个月、6个月、9个月的的初始污染菌符合要求。
储存12个月的高密度聚乙烯袋的初始污染菌虽然合格，但已接近不合格范围了，所以小包装自进厂之日起最长贮存时间不得超过9个月。
八. 验证的周期产品初包装高密度聚乙烯袋初始污染菌的验证周期为2年贮存期 细菌数(cfu/ 100cm 2)真菌数(cfu/ 100cm 2)大肠埃希菌(cfu/ 100cm 2)进厂时 3个月 6个月 9个月 12个月九．附表：产品初包装高密度聚乙烯袋初始污染菌微生物检查记录内包装袋微生物限度检查记录检验人：日期：年月日复核人：日期：年月日内包装材料初始污染菌微生物检查记录检验人：日期：年月日复核人：日期：年月日。
产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案
初始污染菌和微粒污染控制验证方案1. 目的通过设计试验确认XX半成品的储存环境和存放有效期。
其可能存在的环节如下：（1）在内包装封口前初始污染菌是否满足控制要求（定期监控）；（2）等待灭菌的产品，密封严实存放在外包间，其初始污染菌随储存时间变化。
2. 适用范围本验证方案适用于本产品，通过试验研究，以确定在各种情况下的储存有效期。
3. 发放范围管理者代表、生产部和质量部等有关部门及人员。
4. 规范性引用文件《中华人民共和国药典》2015版附录微生物限度检查法5. 组织和职责根据验证工作量的大小，本公司成立验证组，由公司管理者代表任组长，生产部、质量部、有关部门及人员任组员。
验证小组职责：负责验证方案的起草、批准；负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施；负责验证数据结果的审核；负责验证报告的审批；负责发放验证证书；负责确定该项验证的再验证周期。
主责部门本方案的主责部门为公司管理者代表，其职责为：负责审批验证方案和验证报告，颁发验证证书。
相关部门本方案的相关部门为质量部，其职责为：按标准操作规程及验证方案进行各项确认，及时报告确认结果，形成验证报告；负责操作培训和现场监督。
6. 步骤和方法计划及进度本验证由质量部提出完整的验证计划，经验证小组批准后实施，由质量部完成，整个验证活动分为两个阶段完成：运行确认（0Q）从 _________ 年_月______________ 日到_________ 年________ 月__________ 日性能确认（PQ）从 _________ 年_______ 月 _______ 日到_________ 年________ 月__________ 日初始污染菌和微粒检测方法及可接受标准抽样方法和抽样规律以每一个生产批为产品抽样批，随机抽取样品1片（长宽约5cm X 2cm）记为1单位，在洁净条件下精确称重，并标记。
需要临时或长期存放时间预计不超过30天（1个月），综合细菌的生长规律及可能存在的存放天数，其抽样检测的时间设计为存入后：第1天、第2天、第3天、第5天、第7天、第15天、第30天。
产品初始污染菌检测方法适用性验证方案-wm
产品初始污染菌检测方法适用性验证目录1.概述2.验证目的3.适用范围4.验证依据5.验证小组成员及职责6.试验材料7.样品洗脱方法回收率验证8.技术方法验证9.验证方案的评定和建议10.验证方案的最终审核意见11.产品初始污染菌检测方法适用性验证报告产品初始污染菌检测方法适用性验证1.概述初始污染菌是用于检测产品未灭菌前屏障系统表面或内在的活微生物数量。
初始污染菌回收率用于补偿无法从产品中完全取出的微生物的数值。
是用特定的技术从产品上移除并培养微生物的方法，测定灭菌前产品细菌总数可用来判断产品受细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对产品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，可为下一步灭菌提供参考依据。
确保本企业所生产的成品符合产品标准要求。
2.验证目的确定产品初始污染菌检测方法3.适用范围本公司产品的初始污染菌检测4.验证依据《中国药典》2015版通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法；ISO11737-1:2006 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定；GB/T19973-12005 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计；GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准；5.验证小组成员及职责6.试验材料6.1.试验产品：6.2.仪器与设备：DSX-280B手提式压力蒸汽灭菌器，SPX-150型生化培养箱，SW-CJ系列洁净工作台，MJK-150型霉菌培养箱，BSC-1000ⅡA2生物安全柜，ZW型集菌仪，GZX-9076MBE电热鼓风干燥箱。
6.3.其他试验材料：微孔滤膜（孔径≤0.45um，直径约50mm）、量筒、镊子、吸管、酒精灯、试管、75%乙醇棉签、灭菌刻度吸量管（1ml）、灭菌硼硅酸玻璃培养皿（φ90mm×15mm）、锥形瓶，灭菌手术剪、无菌烧杯等。
6.4.培养基及稀释液：胰酪大豆胨琼脂培养基沙式葡萄糖琼脂培养基PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液0.9%NaCl溶液6.5.菌种：金黄色葡萄球菌白色念珠菌7.样品洗脱方法回收率验证7.1.方法描述验证试验应进行3次独立的平行试验，每次试验时，先将已知菌落数的悬液菌液涂布于样品上，然后对同一样品进行多次洗脱处理，每次洗脱后的供试液通过薄膜过滤法过滤，培养并计数，得出回收率。
初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请：质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：实验操作人员确认；实验室实验设备及器材的确认；产品取样及方法确认。
6.验证内容：菌种和菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，3035℃培养1824小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，2025℃培养57天，加人35 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
中转库库存产品初始污染菌验证方案
中转库配件最大库存周期文件编号：（2016年）验证方案XXXX医疗器械有限公司一.验证目的通过检验中转库库存零配件在不同的库存时间的初始污染菌是否符合相关要求，从而验证中转库配件的最大库存时间。
二.验证人员XXX：负责组织、协调、指导验证，审核验证方案和报告；XXX：负责具体的检测操作和记录，完成验证报告。
三.验证依据GB15980-1995 《一次性使用医疗用品卫生标准》四.验证项目及标准1.抽取中转库各类库存零配件若干，分别在库存时间一个月、二个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月各检测一次初始污染菌。
2.产品的初始污染菌数应内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次。
五.验证标准GB15980-1995 《一次性使用医疗用品卫生标准》六.检验程序1.检验用品：蒸汽压力消毒锅、恒温培养箱、试管、吸管、棉拭子、直径9cm培养皿、营养琼脂、生理盐水2.检验前准备：（1）将所有与试验接触的器具、棉拭子、生理盐水等置于压力蒸汽灭菌器内120℃灭菌30分钟备用。
（2）将营养琼脂置于压力蒸汽灭菌器内115℃灭菌30分钟备用；3.采样和检验方法（1）中转库的零配件按洁净车间要求存放在带盖的周转箱中、双层薄膜塑料袋和防静电的布袋中；（2）取输液器配件药液过滤器、静脉输液针、瓶塞穿刺器模拟实际库存方法，装带盖的周转箱中，存放在中转库中，等待不同时间取样检测初始污染菌；（3）取注射器、配药器的芯杆和外套模拟实际库存方法，装防静电布袋中，存放在中转库中，等待不同时间取样检测初始污染菌；（4）取注射针拟实际库存方法，装双层塑料薄膜袋中，将袋子口捆扎结实，存放在中转库中，等待不同时间取样检测初始污染菌；（5）每次抽样10个检测初始污染菌，将药液过滤器、静脉输液针、瓶塞穿刺器、注射针分别浸没在适量灭菌生理盐水中，制得外部供试液；将注射器、配药器的芯杆和外套分别用浸有灭菌生理盐水的棉拭子擦拭样品外部，擦拭完成后，将棉拭子剪去手捏部分，浸没在灭菌生理盐水中，制得外部供试液；（6）从各支样品的外部供试液中各取2ml分别接种到2个直径9cm培养皿中，再分别加入约45℃的营养琼脂培养基15-20ml混匀，待凝固后翻转，置于37℃培养箱内培养48小时，同时做空白对照；（7）培养完成后观察菌落数，并作记录。
产品初始污染菌和微粒污染控制验证方案
初始污染菌和微粒污染控制验证方案1。
目的通过设计试验确认XX半成品的储存环境和存放有效期.其可能存在的环节如下：(1）在内包装封口前初始污染菌是否满足控制要求（定期监控）;（2）等待灭菌的产品,密封严实存放在外包间，其初始污染菌随储存时间变化.2。
适用范围本验证方案适用于本产品，通过试验研究，以确定在各种情况下的储存有效期。
3.发放范围管理者代表、生产部和质量部等有关部门及人员。
4。
规范性引用文件《中华人民共和国药典》2015版附录微生物限度检查法5. 组织和职责根据验证工作量的大小，本公司成立验证组，由公司管理者代表任组长，生产部、质量部、有关部门及人员任组员。
验证小组职责：负责验证方案的起草、批准；负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施；负责验证数据结果的审核;负责验证报告的审批；负责发放验证证书;负责确定该项验证的再验证周期。
5.1 主责部门本方案的主责部门为公司管理者代表,其职责为：负责审批验证方案和验证报告，颁发验证证书. 5。
2 相关部门本方案的相关部门为质量部，其职责为：按标准操作规程及验证方案进行各项确认,及时报告确认结果，形成验证报告；负责操作培训和现场监督.6.步骤和方法6.1计划及进度本验证由质量部提出完整的验证计划,经验证小组批准后实施，由质量部完成，整个验证活动分为两个阶段完成：运行确认（OQ）从年月日到年月日性能确认（PQ）从年月日到年月日6.2 初始污染菌和微粒检测方法及可接受标准6.2。
1抽样方法和抽样规律以每一个生产批为产品抽样批，随机抽取样品1片（长宽约5cm×2cm）记为1单位，在洁净条件下精确称重,并标记。
需要临时或长期存放时间预计不超过30天（1个月），综合细菌的生长规律及可能存在的存放天数,其抽样检测的时间设计为存入后:第1天、第2天、第3天、第5天、第7天、第15天、第30天.6.2.2 供试液制备1）取0。
9%的生理盐水溶液10ml，盛于已灭菌的试管内；2) 将取样依次投入试管，充分摇匀。
初始污染菌方法验证
常州贺利氏医疗器械有限公司初始污染菌方法检查验证方案编制: 日期：审核：日期：批准：日期：初始污染菌检查验证方案目录1. 验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证小组及职责5. 合格标准6. 试验材料：7. 菌液制备8. 菌液计数9. 培养基的制备10.细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证11.菌回收率计算公式12.结果及结论1. 验证目的：建立本公司医疗器械产品表面微生物限度检查方法，本公司产品初始污染菌系采用平皿法现对该方法进行验证，以确认该方法适合于产品表面初始污染菌的检查。
2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
3. 验证项目：本公司医疗器械产品表面微生物限度检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
4.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。
4.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。
4.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。
初始污染菌回收率方法验证
类别：编号：部门：页码：初始污染菌回收验证方案版次：□新订□替代:制定人: 年月日审批会签:**人：***生效日期：年月日1．验证目的初始污染菌是产品屏障系统表面或内的活微生物数量。
初始污染菌回收率用于补偿无法从产品和/或培养基中完全取出的微生物的数值。
也是对某一特定的技术从产品上移除和/或培养微生物的能力的测定值。
2．适用范围适用于我公司一次性使用活检钳的初始污染菌的检测3．检验依据《中国药典》2010版附录微生物限度检查法ISO11737-1:2006 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定GB/T19973-1 2005 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准4．实验设备与材料4.1 设备百级超净工作台、无菌检查膜过滤器、电动吸引器、电热干燥箱、电热恒温培养箱、生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、pH计、冰箱。
4.2 培养基及稀释液营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1%蛋白胨溶液。
4.3 其他实验材料微孔滤膜（孔径≤0.45um，直径约50mm）、量筒、剪刀、镊子、吸管、酒精灯、三角烧瓶、试管、培养皿。
5．实验程序5.1 抽样。
从每个清洗批次的产品中随机抽样，抽取3件。
5.2 洗脱在阴性实验室里以无菌操作方式将实验样品分别浸入装有已知容量的300ml的0.1%蛋白胨溶液的适当容器中，运用手工振动法洗脱产品上的微生物，用于洗脱产品外表面初始污染菌。
5.3 接种5.3.1 采用薄膜过滤法，将供试液平均倒入两个滤杯中进行抽滤，用100ml(每张滤膜每次冲洗量) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜冲洗三次，将滤膜（菌面朝上）分别置于营养琼脂和玫瑰红钠琼脂平板上培养。
将冲洗过的供试品以上述方法再冲洗两次，共三次。
再将剩余供试品加入灭菌好融化的50ml营养琼脂培养基中作为琼脂覆盖。
初始污染菌实验方法验证
初始污染菌实验方法验证背景在生命科学领域，微生物污染在实验中是一个非常普遍的问题。
不仅会影响实验结果的准确性和可靠性，还会影响重要的生产过程。
因此，为了保证实验的成功，必须开发出一种可靠的方法来验证实验室中的物品是否存在微生物污染。
本文将介绍一种简单的方法来验证初始污染菌。
必备材料•无菌纯水•Tryptic Soy Broth（TSB）•青霉素和链霉素组合液•离心管•移液器•微量移液器步骤步骤一：制备TSB培养基取适量的TSB培养基，按照说明书的指示加入适量的无菌纯水，在无菌条件下进行混合并调整pH值至7.2-7.4。
步骤二：检查无菌水和青霉素和链霉素组合液的无菌性取适量的无菌纯水和青霉素和链霉素组合液，并在15ml的离心管中进行热处理。
在121℃下进行30分钟烘烤。
热处理之后，检查管子是否依然无菌。
步骤三：制备初始污染菌样品选取一种已知的细菌菌株，并放入无菌纯水的250ml Erlenmeyer三角瓶中，密封好瓶口，并在温育箱中以37℃的恒温培养24小时，制备出初始污染菌样品。
步骤四：制备验证菌液取一定量的TSB培养基，加入青霉素和链霉素组合液（最终浓度为10ug/ml），并进行热处理，待培养基冷却后，取一定量的初始污染菌样品用微量移液器加入到青霉素和链霉素培养基中，制备出验证菌液。
步骤五：分配验证菌液将验证菌液分别加入到无菌纯水的离心管中，接种量为1ml、0.1ml、0.01ml、0.001ml、0.0001ml等不同容量，序列号编好，每种容量配制三个重复。
这些离心管可在30℃下进行24小时的培养，检查有无微生物的生长。
步骤六：观察结果观察离心管培养基中有无微生物的生长。
如果所有序列号中均无微生物的生长，即可认为实验室物品无微生物污染，反之则有微生物污染。
初始污染菌实验方法验证可以有效地检查实验室物品中的微生物污染情况。
它易于操作，实验过程简单明了，并且针对不同容量的接种进行了细致的设计，以检查有无微生物生长。
初始污染菌回收率验证方案.doc
初始污染菌回收验证方案版 次：口新订□替代： ________________-------- —日a制定人^ ----------- 审批会签---------- 批准人: ___________ 生效日期:1.验证目的初始污染菌是产品屏障系统表面或内的活微生物数量。
初始污染菌冋收率用于补偿无法从产品和/或培养基中完全取出的微生物的数值。
也是对某一特定的技术从产品上移除和/或培养微生物的能力的测定值。
2.适用范围适用于我公司自粘绷带的初始污染菌和敷料的检测3 •检验依据IS011737-1:2006医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定4.实验设备与材料4.1设备百级超净工作台、无菌检查膜过滤器、电热干燥箱、电热恒温培养箱、生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、PH试纸、冰箱。
4.2培养基及稀释液胰酪大豆陈琼脂培养基、0. 9%氯化钠洗脱液4.3生化培养箱温度胰酪大豆腺琼脂培养基设置温度30°C-35°C培养3天；4.4其他实验材料微孔滤膜（孔径W0.45um,直径约50mm）.量筒、量杯、剪刀、锻子、吸管、立式打火机、锥形瓶、试管、培养皿。
4.5培养基和洗脱液准备培养基的制备：根据文件制备胰酪大豆腺琼脂培养基1000ml;《培养基的制备》一一3IINQ-MT55；洗脱液的制备：根据文件制备0.9%氯化钠洗脱液13L；《洗脱液的配制》一一3 HNQ-MT56；4.6蒸汽灭菌将配制好的培养基、洗脱液以及试验时需要使用的器材：培养皿、量筒、量杯、银子、剪刀等放入已经注入7L纯水的高压蒸汽灭菌锅中，盖上锅盖，拧紧阀门，将左后侧排气阀打开至两个处，温度设置121°C,时间20min进行高压灭菌。
4.7恒温干燥将灭菌完毕的培养皿、量筒、量杯、锡子、剪刀等放入电热干燥箱150°C干燥两小时；5.实验程序5.1抽样。
从正常生产批次中抽取已包装完成的未灭菌产品，尺寸15mm*5yds,抽取3件。
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初始污染菌实验方法验证YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。
3.职责与验证申请：质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。
生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版5.验证计划：实验操作人员确认；实验室实验设备及器材的确认；产品取样及方法确认。
6.验证内容：菌种和菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。
黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。
计数培养基适用性检查需氧菌的计数分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。
金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
霉菌和酵母菌的计数分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。
在20-25℃，培养不超过5天。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
试验结果见表1计数方法验证供试液的制备：洗脱液用%的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进行。
接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。
为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。
（1）试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。
（2）供试品对照组取制备好的供试液, 以稀释液代替菌液同试验组操作。
（3）菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。
如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适应性试验。
抗菌活性的去除或灭活供试液接种后，按下列“微生物回收”规定的方法进行微生物计数。
若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性。
⑴增加稀释液或培养基体积。
⑵加入适宜的中和剂或灭活剂。
微生物的回收按照的计数培养基所用的试验菌逐一进行微生物回收试验，回收试验采用平皿法和薄膜过滤法。
平皿法--倾注法取6个直径90mm 的无菌平皿。
2个分别注入照上述“试验组”制备的供试液1ml；2个分别注入照上述“供试品对照组”制备的供试液1ml；2个分别注入照上述“菌液对照组”制备的供试液1ml。
每个平皿注入15～20ml 温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
计算各试验组的平均菌落数。
平皿法试验结果见表2薄膜过滤法薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于μm,直径一般为50mm,若采用其他直径的滤膜,冲洗量应进行相应的调整。
选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。
滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。
使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。
供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml。
总冲洗量不得超过1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。
取照上述“试验组”、“供试品对照组”和“菌液对照组”制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml 或10cm2 的供试品, 若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液中,混匀,过滤。
用适量的冲洗液冲洗滤膜。
每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。
若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。
薄膜过滤法计数方法验证实验结果见表3初始污染菌实验方法验证报告报告编号：报告时间：目录初始污染菌实验方法验证报告1、目的2、概述3、测试方法与试验结果4、结论5、重新验证条件1.目的：参照《中国药典》2015版，通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性，从而验证现在使用初始污染菌实验方法是否准确合格。
2.概述：产品型号为26型：批号为：3.测试方法及检验结果：实验设备及器材：该实验使用仪器及器具主要有：灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。
使用材料及菌种：胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌种购买单位均为微生物种质资源库）。
菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。
黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。
培养基适用性检查需氧菌的计数分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。
金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
霉菌和酵母菌的计数分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。
在20-25℃，培养不超过5天。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
试验结果见表1表1计数方法验证供试液的制备：洗脱液用%的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进行。
接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。
为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。
（1）试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。
（2）供试品对照组取制备好的供试液, 以稀释液代替菌液同试验组操作。
（3）菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。
如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适应性试验。
抗菌活性的去除或灭活供试液接种后，按下列“微生物回收”规定的方法进行微生物计数。
若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性。
⑴增加稀释液或培养基体积。
⑵加入适宜的中和剂或灭活剂。
微生物的回收按照的计数培养基所用的试验菌逐一进行微生物回收试验，回收试验采用平皿法和薄膜过滤法。
平皿法--倾注法取6个直径90mm 的无菌平皿。
2个分别注入照上述“试验组”制备的供试液1ml；2个分别注入照上述“供试品对照组”制备的供试液1ml；2个分别注入照上述“菌液对照组”制备的供试液1ml。