试验技术路线
研究、试验方法和技术路线
化学成分分析法：因不同地区土壤成分各不相同，使得吸收土壤养分的植物花粉的化学成分不尽相同，从而导致不同地域不同蜜源的蜂蜜化学成分有所差别。本研究采用相应的检测方法，对蜂蜜的多种化学成分进行检测分析，找出不同蜜源中具有特征差别的化学成分，利用不同模式识别的方法将数据进行分析和处理，建立对蜂蜜地理标志产品的产地溯源模型。
将以上所建立的模型加以分析和比较，并运用到实际样品中进行蜂蜜地理标志产品的产地溯源研究，对上述四种方法所得模型相互比较分析，相互验证，根据验证来对不同的模型进行优化。尝试对同位素法、无机元素法和化学成分分析法所得的识别模型数据进行再处理，并对处理后的数据进行整合，得到新的识别模型，使拟合后的模型能更加全面的反映出不同地域蜂蜜的特征同位素、无机元素和化学成分差别，使得该模型能更加准确的对蜂蜜地理标志产品的产地相关检测技术、模式识别技术等，具体技术路线如下：
1)对所要判别的样本分布、品种等情况进行调研，确定样品来源。
2)根据调研情况，采集相应的品牌蜂蜜样品，并建立样本集。
3)对采集的样品采用中红外光谱法、同位素法、无机元素法和化学成分分析法进行检测分析。
4)对采用不同方法检测所得数据进行分析校正。
五、采用的研究、试验方法和技术路线（包括工艺流程）
研究方法：
中红外光谱法：本研究采集蜂蜜地理标志产品，采用中红外光谱技术，对不同蜜源的蜂蜜进行检测，得到样品所对应的光谱图，对光谱图进行分析处理，利用模式识别方法建立蜂蜜溯源的识别模型。
同位素法：采用同位素法对蜂蜜中的特征同位素进行分析检测，根据蜂蜜样品中特征同位素含量的差异来对蜂蜜进行定性判别，根据检测数据建立模式识别模型，对蜂蜜地理标志产品进行产地溯源。
课题研究的技术路线怎么写(精选8篇)
课题研究的技术路线怎么写(精选8篇)引言课题研究的技术路线是指在一项研究项目中，根据研究目标和研究内容的要求，所制定的技术实施方案。
一个合理的技术路线将直接影响到研究项目的有效性和科研成果的质量。
本文将基于实际研究经验，总结出八篇关于课题研究技术路线的精选文章，以供参考。
第一篇：明确研究目标和内容在研究开始之前，首先需要明确研究的目标和内容。
明确研究目标可以帮助确定研究的方向和重点，而明确研究内容则能够帮助研究人员确定所需的技术路线。
在这一篇文章中，我们将探讨如何明确研究目标和内容，并将其转化为具体的技术实施方案。
第二篇：选择适合的研究方法研究方法的选择对于课题研究至关重要。
在这一篇文章中，我们将介绍不同的研究方法，并讨论其优缺点以及适用场景。
通过选择适合的研究方法，可以提高研究的效率和准确性，从而更好地实现研究目标。
第三篇：确定实验设计和数据采集方法实验设计和数据采集方法是课题研究中不可或缺的环节。
在这一篇文章中，我们将详细介绍如何设计合理的实验和选择合适的数据采集方法。
通过科学的实验设计和有效的数据采集方法，可以保证研究的可靠性和可重复性。
第四篇：选择适当的数据处理和分析方法在课题研究中，数据处理和分析是评价研究成果的关键环节。
在这一篇文章中，我们将探讨不同的数据处理和分析方法，包括统计分析、机器学习等。
合理选择适当的数据处理和分析方法，可以提高研究的可信度和科学性。
第五篇：利用现有资源进行研究在进行课题研究时，合理利用现有的资源可以节约研究成本并提高研究效率。
在这一篇文章中，我们将介绍如何利用现有的设备、技术和数据等资源进行研究。
通过充分利用现有资源，可以为研究项目提供更好的支持和保障。
第六篇：保证研究的可靠性和可重复性在科学研究中，可靠性和可重复性是评估研究成果的重要指标。
在这一篇文章中，我们将讨论如何保证研究的可靠性和可重复性，包括数据质量控制、实验过程规范等方面。
保证研究的可靠性和可重复性，可以提高研究的科学性和可信度。
某科研项目拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析
某科研项目拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1. 技术路线备注：蓝色背景填充部分为前期已完成工作。
2. 研究方法2.1 X、Y在结肠癌发生、发展中的作用和预后相关性1)回顾性收集肠癌临床标本500例，取手术切除的肠癌组织、匹配的肝脏转移灶手术和穿刺标本，新鲜组织液氮保存标本200例，石蜡块300例，全部病例均通过临床、影像学、病理诊断，术前未进行辅助治疗，来自某某医院2008-2013年临床收治病例，随访资料齐全。
2)免疫组化检测组织切片中X、Y蛋白的表达及定位，分别设立阴性对照、肿瘤对照、肝转移对照。
3)SPSS16.0统计软件对X、Y表达及定位与临床标本进行病理关联性分析和预后统计分析，了解X、Y表达情况与相关临床资料之间的关系，单因素生存分析对临床各项指标与结肠癌生存期进行相关性分析，建立Cox比例风险回归模型，综合探讨临床各因素和X、Y表达与结肠癌肝转移、转移灶形成及预后的相关性。
2.2 体外、体内水平研究X、Y基因在肠癌肝转移中的调节功能1)制备X-shRNA慢病毒，建立X稳定沉默的细胞株，以无义序列作为阴性对照，利用MTT实验观察X沉默后细胞的生长曲线；克隆形成实验检测X沉默后细胞的克隆形成能力；流式细胞术结合PI单染、Annexin-V双染检测细胞周期和凋亡情况；细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞运动能力的变化。
与此同时，制备过表达X的慢病毒载体。
2)在稳定沉默X的结肠癌细胞中，导入过表达Y的慢病毒载体，利用细胞生长曲线观察X沉默且Y过表达后细胞的增殖能力变化；细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞运动能力的变化。
同样地，在稳定沉默Y的结肠癌细胞中，导入过表达X的慢病毒载体，利用细胞生长曲线观察Y沉默&X过表达后细胞的增殖能力变化；细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞运动能力的变化。
3)制备结肠裸鼠皮下移植瘤模型，观察肿瘤生长情况，建立生长曲线，统计分析Y和X对结肠癌细胞体内成瘤能力的影响，明确Y和X在结肠癌恶性增殖的作用。
技术路线图实验报告
技术路线图实验报告一、路线图过程1.1 前期准备1.1.1 资料搜集在本次正式的实验之前，本组人员分别进行了市场、产品、技术三个方面资料的搜集。
市场方面主要是搜集各类咨询机构所编写的行业调查报告，产品层面则搜集了各类主流品牌的产品族、产品种类信息，资料来源是各个品牌的官网。
技术层面则分为两部分，一部分是了解自行车的结构、组件，一部分是了解应用在自行车上的新技术，主要参考资料是知乎、百度上的精选回答和报道，以及B站等视频平台的介绍。
市场、产品、技术三个层次的信息分为了四个部分之后，就分配给各个组员去进行资料搜集，发到群里进行共享与讨论。
1.1.2 流程梳理&角色安排根据实验资料，实验当天需要进行市场、产品、技术、制图四个研讨会，每个研讨会的规定议程都有3.5个小时。
作为组长，我担心起实验当天的流程安排会无法完成，于是决定压缩标准研讨会的流程，但是也意识到每个环节的头脑风暴和阶段性成果输出不能省略，因此想到了根据角色设定来分工。
在梳理了每个研讨会的议程之后，我首先设定了角色，并且和前期安排的资料搜集分工联系到一起，根据市场环节，设置了市场经理2个、业务经理（生产运营经理）1个，负责内外驱动因素的梳理总结；根据产品环节，设置了产品经理2个，负责产品性能的梳理总结；根据技术环节，设置了技术经理2个，负责梳理技术演化路径、现有技术表现等。
各部门经理加上CEO已经8人，考虑到当日结束就要进行PPT汇报，因此还专门设置了一个做PPT的工作，以及整个环节的记录员，刚好10人。
设定好角色后，便可以将四个研讨会的工作流程进行搭接，实验的主线以头脑风暴和总结为主，具体的分析由每个环节的对应角色去做，其余人员展开下一环节的讨论，而CEO负责在两个并行环节中去引导讨论、修改和确定结果（见图1）。
比如在市场环节的头脑风暴结束之后，市场经理便退出讨论，根据记录员的记录进行驱动因素的排序和SWOT分析，而其余人则继续进行产品环节的头脑风暴，CEO则负责一方面引导讨论，一方面分析市场部的产出。
技术路线的写法及示例
技术路线的写法及示例技术路线的写法及示例技术路线一般是指研究的准备，启动，进行，再重复，取得成果的过程。
多见于理工科和软科学。
技术路线是指申请者对要达到研究目标准备采取的技术手段、具体步骤及解决关键性问题的方法等在内的研究途径。
合理的技术路线可保证顺利的实现既定目标。
技术路线的合理性并不是技术路线的复杂性。
技术路线是指进行研究的具体程序的操作步骤，应尽可能详尽.每一步骤的关键点要阐述清楚并具有可操作性。
如有可能，可以使用流程图或示意图加以说明，以达到一目了然的效果。
1、研究背景研究背景即提出问题，阐述研究该课题的原因。
研究背景包括理论背景和现实需要。
还要综述国内外关于同类课题研究的现状：①人家在研究什么、研究到什么程度？②找出你想研究而别人还没有做的问题。
③他人已做过，你认为做得不够（或有缺陷），提出完善的想法或措施。
④别人已做过，你重做实验来验证。
2、目的意义目的意义是指通过该课题研究将解决什么问题（或得到什么结论），而这一问题的解决（或结论的得出）有什么意义。
有时将研究背景和目的意义合二为一。
3、成员分工成员分工应是指课题组成员在研究过程中所担负的具体职责，要人人有事干、个个担责任。
组长负责协调、组织。
4、实施计划实施计划是课题方案的核心部分，它主要包括研究内容、研究方法和时间安排等。
研究内容是指可操作的东西，一般包括几个层次：⑴研究方向。
⑵子课题（数目和标题）。
⑶与研究方案有关的内容，即要通过什么、达到什么等等。
研究方法要写明是文献研究还是实验、调查研究？若是调查研究是普调还是抽查？如果是实验研究，要注明有无对照实验和重复实验。
实施计划要详细写出每个阶段的时间安排、地点、任务和目标、由谁负责。
若外出调查，要列出调查者、调查对象、调查内容、交通工具、调查工具等。
如果是实验研究，要写出实验内容、实验地点、器材。
实施计划越具体，则越容易操作。
5、可行性论证可行性论证是指课题研究所需的条件，即研究所需的信息资料、实验器材、研究经费、学生的知识水平和技能及教师的指导能力。
研究方法、技术路线、实验手段和关键技术的写法
研究方法、技术路线、实验手段和关键技术的写法参考一、1、研究方法。
说明研究所采用的方法，一是通用的方法，如调查研究法、案例分析法、实证研究等；二是具体领域的方法，如数据挖掘的聚类分析、异常检测等方法。
2、技术路线。
就是研究的思路和方案，根据研究内容，写出各部分的解决方案，一步一步论述清楚。
具体提出解决科学问题和实现研究目标的思路和步骤。
如何解决科学问题，如何探索科学本质，怎样发现新的现象。
对复杂的技术路线和研究方法采用流程图或图表来说明。
3、实验手段。
与技术路线对应，包括计划做那些实验，如何做，用何实验手段，实验步骤和方法，需要控制的技术指标及最后达到的目标等。
4、关键技术。
解决关键问题采用的技术。
总之，通过这几部分的论述，让评审专家看到针对主要研究内容提出的研究方法和技术路线合理、可行，能够达到研究目标对在研究中拟采用的关键技术做较详细的说明。
不同的写法：1.本文讨论了在研究过程中不同阶段的研究方法所使用的技术。
2.关键问题是课题的突破的关键过程，关键及时是在壳体过程应用的突破的尖端技术3.关键技术, 是手段。
关键问题，有两写法：一你需要克服什么样的困难才能完成研究、达到目的；二你要解决的学术问题的核心是什么。
不论哪种写法都不要写太内容，写多了，让人担心你能不能完成这项研究工作。
4.主要看在你的项目中是否是关键的。
当然大多数情况下都是已经成熟的。
如果用不确定、不成熟的手段去进行研究，得到的结果也是不确定的。
即使得到了认为有意义的结果，但是手段未等到公认，其可信程度也是要打折的。
探讨一种新手段本身就可以申报国自然了参考二、在项目申报书写中，尤其是创新创业类报告书写中，经常遇到一个很难分辨的问题，就是研发内容、创新点、关键性技术、技术路线该怎么写？无论是初学者，还是有经验的写手，都经常被这四点的写法感到不知所措，甚至出现了大量的重复语言，觉得创新点就是关键性技术，技术路线之类的。
今天我就为大家仔细解答一下这四个内容的区别。
《实验技术路线》课件
2 保证实验准确性
通过标准化的操作流程， 减少人为因素的影响，保 证实验结果的准确性。
3 提高实验可重复性
通过统一的实验技术路线， 使得不同实验者在相同条 件下能够获得相似的实验 结果。
实验前的准备工作
在进行实验前，必须进行一系列的准备工作，包括：
控制实验室内的光线和噪音，提供良好的工作环境。
3 实验台面和工具清洁
保持实验台面和工具的清洁，避免杂乱和交叉污染。
实验材料的准备
实验材料的准备是实验的前提和基础，包括： 1. 选购和准备实验所需的化学试剂和实验材料。 2. 标记和储存实验材料以确保其完整性和可用性。 3. 检查实验材料的有效期和质量，避免使用过期或受损的材料。
实验细节的注意事项
在进行实验时，需要注意以下细节，以确保实验的顺利进行和结果的准确性： • 按照实验技术路线的步骤和顺序进行实验操作。 • 掌握实验操作的正确姿势和标准操作方法。 • 注意实验中的时间控制和实验条件的控制。 • 及时记录和整理实验数据，并保证数据的准确性和完整性。
实验中的数据记录和分析
1
定义
实验技术路线是指在科学实验中，按照一定的步骤和顺序进行操作的过程。
2
目的
实验技术路线的目的是保证实验的顺利进行，有效地获取准确的实验结果。
3
特点
实验技术路线具有规范性、指导性和可重复性等特点，能够提高实验的效率和可靠性。
实验技术路线的重要性
实验技术路线在科学实验中起着重要的作用，它能够：
1 提高实验效率
实验目标和要求
明确实验的目标和要求，为实验的顺利进行提 供明确的指导。
实验材料和设备
实验方法及技术路线
实验方法及技术路线引言本文档旨在介绍实验方法及技术路线，以帮助研究人员在实验设计过程中得到参考和指导。
实验目标明确实验目标，确保实验设计能够满足研究需求。
实验步骤1. 确定研究问题：首先确定研究问题，明确要解决的科学问题或假设。
确定研究问题：首先确定研究问题，明确要解决的科学问题或假设。
2. 文献综述：进行文献综述，了解已有研究和方法，为实验设计提供依据。
文献综述：进行文献综述，了解已有研究和方法，为实验设计提供依据。
3. 实验设计：根据研究问题和文献综述结果，设计实验方案，包括实验组、对照组、样本量、实验条件等。
实验设计：根据研究问题和文献综述结果，设计实验方案，包括实验组、对照组、样本量、实验条件等。
4. 实验准备：准备所需实验材料和设备，确保实验的顺利进行。
实验准备：准备所需实验材料和设备，确保实验的顺利进行。
5. 实施实验：按照实验设计进行实验操作，记录实验数据。
实施实验：按照实验设计进行实验操作，记录实验数据。
6. 数据分析：对实验数据进行统计分析，运用合适的方法验证研究假设。
数据分析：对实验数据进行统计分析，运用合适的方法验证研究假设。
7. 结果解读：解读实验结果，得出结论，并与研究问题和文献综述进行比较。
结果解读：解读实验结果，得出结论，并与研究问题和文献综述进行比较。
8. 讨论与展望：分析实验结果，并讨论可能的限制和改进方向。
讨论与展望：分析实验结果，并讨论可能的限制和改进方向。
9. 撰写实验报告：编写实验报告，详细描述实验设计、步骤、数据结果和结论。
撰写实验报告：编写实验报告，详细描述实验设计、步骤、数据结果和结论。
技术路线根据不同的实验问题和研究需求，可以采用多种技术路线，常见的技术路线包括：1. 实验室基础技术路线：包括但不限于PCR、酶切、凝胶电泳、免疫印迹等基础实验技术，用于分析DNA、RNA、蛋白质等生物分子。
实验室基础技术路线：包括但不限于PCR、酶切、凝胶电泳、免疫印迹等基础实验技术，用于分析DNA、RNA、蛋白质等生物分子。
实验技术路线
实验技术路线一、总RNA 提取（SV Total RNA Isolation System Kit，Promega）1.低于30mg的样品中加入175µl 裂解缓冲液(SV RNALysis Buffer＋BME)，充分匀浆。
2.加入350µl 蓝色的RNA 稀释缓冲液（SV RNA DilutionBuffer），颠倒3-4次使样品充分混合。
3.放入70℃水浴中裂解3min。
注：温育时间不要超过3分钟，否则可能破坏RNA的完整性。
4.14，000g 离心10 min。
小心用移液器将上清液转移到新的Eppendorf 管中。
注：①若是组织中脂肪含量较高，需重复几次此步骤；②避免吸到颗粒物。
5.加入95%的乙醇200µl于上清液，用枪头冲吸3-4 次。
6.将其全部转移到带有滤膜的微型柱中，14,000g, 离心1min，弃滤液。
7.加入600µl冲洗缓冲液（SV RNA Wash Solution）,14,000g, 离心1 min，弃滤液。
注：确保SV RNA Wash Solution已用乙醇稀释过。
8.按样品数量准备DNA 酶Ⅰ混合液，用于降解DNA。
每样需40µl黄色缓冲液, 5µl 0.09M的MnCl2和5µl DNA 酶Ⅰ配制的DNA 酶Ⅰ混合液。
注：①DNA 酶Ⅰ必须在冰上解冻；②温柔用移液器混合，不可涡旋。
9.确保加50µl DNA 酶Ⅰ混合液到滤膜中间，室温保持15min。
10.加入200µl 终止反应缓冲液（SV DNase StopSolution），14,000g, 离心1 min，不必弃滤液。
注：确保SV DNase Stop Solution中已加入乙醇。
11.加入600µl 冲洗缓冲液（SV RNA Wash Solution），14,000g，离心1 分钟，弃滤液。
实验设计技术路线的三个基本要素
实验设计技术路线的三个基本要素
（1）实验设计的目的：实验设计的目的是使研究者能够更好地了解研究问题，了解试验对象的行为及其规律，实施尽可能精确而有效的实验，以便得出所需要的一致结论。
（2）实验设计技术路线：研究者在实验中应该考虑以下要素：①实验对象：应该仔细筛选研究对象，以便筛选出符合实验要求的对象；②实验材料：根据实验目的选择将获取准确结果的材料，并预测实验结果和操作；③必要的实验设备：选择有效的实验设备，保证实验的准确性和可靠性；④实验步骤：让研究对象按照规定的标准和纪律实施实验；⑤实验解释：为了更好地认识实验的深层含义，进行实验的解释和评价。
（3）实验设计技术路线的结论：正确的实验设计技术路线有利于减少错误实验，使整个实验过程尽可能地有效和准确，以产生可靠的实验结果。
当研究者对实验设计技术比较熟悉后，他们就能够在实验设计的全过程中应用这些技术，以便在实验过程中不断地进行调整，以期达到最佳实验效果。
拟采取的研究方法技术路线实验方案及可行性分析
[22]宗学宝,陈春香,张晓媛.GI.在金属矿山地质灾害信息管理中旳应用.电脑知识与技术数据库及信息管理,2023:1221-1222
[23].陈娟浓，张锦瑞，岳志新，马丹祥，祁佳睿.应.GI.技术对采煤塌陷区综合管理.北京：煤炭科学技术，.3.卷.1.期，2023.12
[41]王勇民.煤炭开发与环境保护旳管理机制探讨[J].中国软科学,2023,(4):29-32.
[42]刘波,部时林,谷珊等.GIS在矿产资源评价中旳应用[J].金属矿山,2023,(2):128-132.
[43]丁娟.地学信息图谱在南屯矿区生态环境研究中旳应用[D].山东师范大学,2023.
[44]李迎新?地质灾害分类与防治[J].西部探矿工程,2023,21(4):42-46.
③在对项目进行研究时, 笔者通过实地考察搜集大量旳一手地质资料, 建立了专门旳GIS数据库, 并运用GIS旳空间分析功能评价其对地质环境旳影响。
４. 选题研究及论文工作计划
论文计划在 个月旳时间内完毕。
（1）选题
起止时间: 2023年 月 日至2023年 月 日
（2）进行文献资料检索和阅读
起止时间: 2023年 月 日至 月 日
[38]丁佩,谭志祥,周复旦等?矿区塌陷土地复垦与可持续运用[J].煤炭工程,2023,(5):58-60.
[39]李义龙.对我国矿产资源可持续发展旳初步思索[J].现代经济(现代物业巾旬刊),2023,8(4):122-123,36
[40]丁丽.陇南金矿区矿山环境遥感监测与GIS评价研究[D].中南大学,2023.
2研究分析峰峰矿矿区地质环境问题旳重要特性
技术路线图(国自然)
初步分子 机制
体外功能实验 +/-功能验证
增殖曲线 细胞周期 克隆形成 迁移实验 侵袭转移实验
在体水平动物实验： 裸鼠成瘤
XX在体水平功能证实
XX在抑制乳腺癌癌变发生中发 挥关键作用
XX在乳腺癌中确切的分子调控机 制
深度测序分析XX改变引起 Pathway Array检测凋亡、侵
的基因表达谱的改变
袭转移相关通路蛋白表达变化
实验万事屋出品技术路线例子1蓝色已完成紫色为实验目的深度测序分析xx改变引起的基因表达谱的改变pathwayarray检测凋亡侵袭转移相关通路蛋白表达变化根据下游靶分子群利用生物信息软件genes2networksgoanaslysis建立xx调控相关的信号通路总结xx发挥调控作用的精细分子机制收集临床300例乳癌样本制备组织芯片检测分析xx的表达亚细胞定位回顾性分析xx和肿瘤预后分型的相关性验证xx下游关键调控分子在临床样本中的表达情况证实xx抑制癌变发生的功能作用和效应通路gstpulldown联合coip实验验证与xx直接相互作用的蛋白制备互作蛋白突变体分析相互作用结合位点chip联合芯片技术鉴定与xx发生相互作用的基因dna组织标本证实xx是重要的抑癌因子前期工作已发表scixx在乳腺癌组织中表达下调缺失癌旁高表达xx细胞实验功能验证xxrnai初步分子机制侵袭转移实验迁移实验xx在乳腺癌中确切的分子调控机肿瘤组织和癌旁组织亚细胞定位不同体外功能实验功能验证mdamb231细胞较高表达mcf7细胞低表达xx过表达细胞周期增殖曲线克隆形成xx在抑制乳腺癌癌变发生中发挥关键作用xx在体水平功能证实rnai回复过表达实验验证xx对下游信号通路的调控作用qpcr实验验证xx的结合目的基因dna结合验证emsa实验验证xx的结合目的基因xx蛋白结构生物信息学分析实验万事屋出品例子2细胞水平组织水平分开画图如果有动物水平再另外画一个1细胞水平
课题的技术路线和实验方法
实验步骤（一）：兔子椎间盘退变模型的建立将15只同龄体重相仿（6月龄, 体重2.5 ＋or－0.5kg,）且X片检查无畸形的新西兰大白兔随机分为两组: 纤维环穿刺组( A组10只) 和假手术对照组( B组2只)。
所有动物以氯胺酮0 2 g /安定10 mg 成比例混合进行肌肉注射麻醉。
腰背部剃毛备皮约20 cm —15 cm, 取左侧卧位固定四肢。
由髂嵴至第12肋缘作纵切口长约10 cm, 从腹外斜肌与背肌之间剪开, 经腹膜外入路进入, 根据髂嵴定位(平L6 椎体), 暴露L2、3、L3、4椎间盘。
A组: 以16号针头在椎间盘侧前方平行终板方向刺入椎间盘中央, 控制刺入深度为5mm, 维持5 s, 然后拔出穿刺针并逐层缝合创口。
B 组: 暴露椎间盘后不作特殊处理, 逐层缝合创口。
所有动物分别于术前和手术结束时肌肉注射青霉素80万U, 术后置于标准条件下自由喂养。
分别于术后4周进行腰椎MR I 检查，如MRI示退变则处死兔子取椎间盘组织。
(二)：PCR实验技术1．总RNA提取a. 取新鲜椎间盘组织50~100mg，加入1ml TRIzol试剂。
室温充分匀浆，静置5min。
b. 加入0.2 ml氯仿，振荡15秒，室温静置10分钟。
c. 4℃，12000g×15分钟，取上清至清洁EP管。
d. 加入0.5 ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10分钟。
e. 4℃，12000g×10分钟，胶样RNA沉于管底部，弃上清。
f. 加入1 ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。
4℃，7500g×5分钟，弃上清。
2. RT-PCR每20μL逆转录体系中含4μL总RNA、1μL OligodT、2μL 10*Buffer、 2μL (25mmol/L)、2μL DDT(0.1mol/L)、1μL dNTP（10mmol/L）、1μ Superscript Reverse MgCl2Transcriptase Ⅱ。
物理仿真实验技术路线拟解决的问题及预期成果
物理仿真实验技术路线拟解决的问题及预期成果1. 什么是技术路线所谓的技术路线是以研究假设为核心将研究内容、研究方法、研究步骤有机组合的逻辑结构。
这个概念中，有两个至关重要的概念，一个是“以研究假设为核心”，二是“逻辑结构”。
（一）第一个关键概念“以研究假设为核心”“研究假设”也是课题申报书中需要撰写的一个内容，“研究假设”要解决的问题是：预期成果的达成是有若干路径的，这些路径是基于教育理论和科学方法框架下构想出来的，如果能够有计划、有步骤地进行实施，就可以达成预期成果。
“以研究假设为核心”这个概念。
其中“核心”这个概念可以明确表达出：技术路线的主要框架就是研究假设的框架。
“研究假设”写好了，则技术路线的基本思想和内容就定调了。
（二）第二个关键概念“逻辑结构”什么“逻辑”？“逻辑”是思维的规律和规则，也就是说：你是如何建构事物之间的关系的。
“结构”就是框架，框架是可视化的。
逻辑结构，就是把思维的规律和规则以可视化框架的方式呈现出来。
此时，我们再看“技术路线”这个概念就会清晰一些。
其核心要义便是在研究假设的基础上，把理论支撑、研究内容、研究方法、研究步骤、研究成果之间的逻辑关系清晰的呈现出来。
2.为什么要撰写“技术路线”“技术路线”是课题研究进程中，体现诸多要素之间逻辑关系的闭环结构。
要体现三个方面的价值。
第一，技术路线能够体现出课题研究的思路。
其二，技术路线能够体现出研究方法、路径的使用问题。
其三，技术路线把研究过程中诸多研究要素的逻辑关系呈现出来。
科学、清晰的技术路线，可以让参与研究者知道：这个课题是从哪里来，要到哪里去，如何去等问题。
反之，技术路线不清晰的话，就会出现：我们刚一出发，就迷路了；或是发出久了，忘记了为何而出发；还可以这样比喻：我们上战场，不知敌人在哪，也没有带武器，回来时还忘了归家的路。
3.如何呈现技术路线一般情况下，技术路线要以图的方式呈现出来，称其为技术路线图。
我们把研究过程中的诸多要素，放在一张图中，呈现它们之间的逻辑关系。
【实验设计及技术路线】
竞赛设计及技术路线1.研究目的本课题针对严重影响植物生长的安全因素——软腐害，在前期课题组研究植物生物防治和保护的基础上，选取南方红豆杉为研究材料，通过对南方红豆杉内生菌进行分离和纯化，进一步通过拮抗实验，探索其对半夏软腐病菌、白菜软腐病菌、番茄软腐病菌等植物软腐病菌的抑制效果，以期为半夏等中药材、白菜等农作物等植物软腐病的生物防治提供优良的菌株材料，从而为植物的绿色、安全、健康生长提供理论和技术支撑。
2.研究意义南方红豆杉，作为植物资源库中的一株奇葩，在材质、药用等方面起着非常重要的作用，鉴于其富产紫杉醇等多种药用活性物质的优点，本课题旨在将南方红豆杉资源进一步优化利用，深入挖掘其在抗菌性、抗病性等方面的潜在价值。
植物内生菌，作为一种新型微生物资源，目前受到了广泛的关注，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物已成为国内外研究的又一热点，近年来已发现了一些有医用、农用价值的菌株和化合物。
本文主要以南方红豆杉为研究对象，研究其内生菌的多样性，并从中分离出对植物软腐病菌具有抑制作用的拮抗菌株，以进一步加强南方红豆杉植株内生菌的菌种研究，深化对植物软腐病的防治作用研究，并为生物防治菌剂的开发和研制积累理论基础。
为深入研究植物软腐病的生物防治机理奠定基础，为南方红豆杉的资源应用开辟新的途径。
3.实验方案及技术路线3.1 实验方案3.1.1样品采集南方红豆杉植株采集时间为2012年5月至8月, 采集于浙江省金华市婺城区南部山区，选取1-3块代表性种植地，采用五点采样法，采集南方红豆杉整个植株，每点5株，分别采取南方红豆杉的根、茎、叶，存入牛皮纸带，做好记录，立即带回实验室进行内生菌的分离。
3.1.2样品处理及消毒3.1.2.1表面消毒取采集的南方红豆杉植株根、茎、叶,用自来水充分冲洗后，分装在三个平板上，移至已灭好菌的超净台上，点燃酒精灯，用酒精擦拭手，首先将根用无菌水冲洗2次，再移至70%乙醇浸泡20S，再用2%次氯酸钠浸泡2min，无菌水冲洗3次。
解决化学实验问题的技术路线
作为气体的收集装置：收集密度大于空气的气体。
改进1：可收集密度大于空气的气体[图8─（1）]。（谁说装置必须“正着放”？）
改进2：瓶内装满水，短管进气长管出气，可用于排水法收集气体。[图8─（2）]（谁说气体必须长管进气短管出气？）
改进3：瓶内装满水，将装置掉转180°，长管进气短管出气，仍可用于排水法收集气体。[图8─（3）]
（4）在实验过程中不能持续加热的理由是：；
（5）C装置用来收集二氧化硫，其中冰盐水的作用是：；若用ag铜跟足量浓硫酸反应制二氧化硫，实验结束时得到bg三氧化硫，该实验中二氧化硫的转化率不小于：；
（6）为了减轻实验对环境的污染，请你设计尾气处理装置，用简要文字说明：
。
答案
（1）2SO2(g)+O2(g) 2SO3(g);△H=-196.6kJ·mol-1
试回答：
（1）B中反应的化学方程式为：。
（2）D中的反应开始前，需排除装置中的空气，应采取的方法是：。
（3）D中反应化学方程式为：。
（4）装置（Ⅰ）的主要缺点是：。
（5）装置（Ⅱ）的主要缺点是：。
如果选用此装置来完成实验，则必须采取的改进措施是：。
答案
（1）MnO2+4HCl(浓) MnCl2+Cl2↑+2H2O
可见，两种路线虽有不同，但殊途同归。不过它们对学生能力的要求有所侧重，训练的侧重点也有所不同。考试时可以扬长避短，而平时则应该就学生“弱项“进行有针对性的训练。我们设想，如果将两者很好地结合起来，将会使学生的学习水平达到一个更高的标准。
最后应该指出的是，不管你的分析有多么准确到位，你的理解有多么深刻，最终都要对题设问题作出正确且简练的回答。为此你不仅要准确把握题目要求，还要有较好的文字表达能力。
如何正确设计技术路线、实施方案
如何正确设计从生物样品中分离纯化生物大分子的技术路线和正确实施设计方案一、通用的技术路线设计方案：1、确定要分离提纯的生物大分子的目的和要求不论是学生学习简单的分离提纯方法，还是科研人员进行研究、开发或者探索新物质，一个明确的目的和要求都是必不可少的。
本课题要求对生物大分子进行分离提纯，也即在了解生物大分子（即蛋白质、核酸、脂质、糖类）的前提下，进行尽可能完善的提纯，同时也应注意满足现实设备情况。
2、建立相应可靠的分析测定方法分离提纯最为重要的就是最终的“纯度”，所以一套完善可靠地分析测定方法就是进行工作的前提条件。
没有这双“眼睛”，将无法得到最终的实验结果。
3、查阅文献调研和预备性实验要进行分离提纯就必须掌握四种生物大分子的一般理化性质以及需要提纯的产物的一些特殊理化性质，只有这样才能进行分离提纯的工作。
4、生物材料的破碎和处理需要分离的生物大分子往往贮存在生物体内，而根据生物种类的不同，如微生物、动物、植物等，有不同的生物材料处理方式，而处理方式的得当与否，往往也决定着最终的提取率的高低甚至实验的可行性。
5、分离纯化方案的选择和探索同样的一类物质往往有很多种方案可以进行分离提纯，但如何根据所需生物大分子的种类、它所处的生物环境、客观因素等种种条件来选择最好的一种分离纯化方式，是整个实验最为困难的步骤。
而在一些尖端领域，甚至需要研究人员自行探索新的方案，这无疑又大大加大了这一步的难度。
所以可以说，这一步是整个实验过程中最为困难的一步，也应是投入精力最多、选择最仔细的一步。
6、生物大分子纯度的检测根据提纯的生物大分子种类不同，选用相应的检测方式进行检测。
7、产物的浓缩、干燥与保存二、常用的检测方法：1、物理、化学方法：比色法、气相/液相色谱法、光谱法（紫外／可见、红外和荧光等分光光度法）、电泳法、以及核磁共振等。
但应注意，必须同时采用 2～3 种不同的纯度鉴定法才能确定。
2、生物学的测定法：酶活测定、蛋白质含量测定、免疫化学方法、放射性同位素示踪法等；三、要了解的主要理化性质：1、在水和各种有机溶剂中的溶解性。
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12小时后做纵切切片， 利用生物胞过行为 学软件分析损伤 后的运动能力， 判断损伤程度
判断损伤的位置与大 小是否与符合
前期实验：
手术建模： 手术组（n=68） 假手术组（n=68）
建模成功性分析：每周分析术 后运动能力，连续跟踪7周
取脊髓（损伤位点以下1cm）： 术后4hour, 12hour, 6day, 11day组
基因芯片分析： 提总RNA
分析全部基因 的表达水平， 统计分析各个 基因表达变化
定量PCR： 提总RNA 反转录 检测sema4e 和plxnd1 相
对内参 GADPH表达 水平的变化
原位杂交： 制作切片 制作探针 检测sema4e和 plxnd1 mRNA的 表达水平变化及 表达细胞
能的相互作用后观察轴突生长情 况
转染的仓鼠肾细胞与血管内皮 细胞共培养，观察血管内皮细 胞增殖情况，并通过相应抗议 抑制sema4e 与plxnd1可能的相
互作用后观察血管内皮细胞的 增殖情况
组织水平
损伤 6周后做神经轴突反向追踪， 观察轴突生长通过损伤面情况
损伤 6周后，做组织切片，血管
免疫染色，统计损伤处的血管 密度
Westen Bolt： 提总蛋白 检测sema4e 和plxnd1蛋
白表达水平 的变化
sema4e与plxnd1关系研究：
sema4e特异性肽段的 设计与合成 噬菌体展示技术淘选抗体 ELISA检测抗体活性 ELISA检测抗体专一性
sema4e与plxnd1 免疫共定位
sema4e活性片段 DNA的扩增 sema4e表达载体的构建
活体水平 整体水平
损伤6周后，于第一次损伤位点 以下5mm 显微注射示踪剂 Alexa Fluor Red Dextran,12 小时后活 体观察神经元轴突的生长通过损
伤面情况
损伤 6周后，活体观察在血管内 皮细胞内表达 GFP的转基因斑
马鱼的脊髓损伤处血管密度
手术后给 sema4e; plxnd1; control morpholino. 6 周后做运动能力分 析，统计比较修复速度
表达载体的导入
转染细胞的筛选与培养
表达蛋白的提取
表达蛋白的活性检测
sema4e免疫磁珠的制作 sema4e与plxnd1 免疫共沉淀
sema4e与plxnd1在斑马鱼脊髓损伤修复中的作用研究：
细胞水平
转染的仓鼠肾细胞与神经元共培 养,观察轴突生长情况，并通过相 应抗议抑制 sema4e 与plxnd1 可
10X sham
10X 4hour
10X 12hour
10X 11day
10X anti-sense probes
10X sham
10X 4hour
10X 12hour
10X 11day
通过双光子显微镜活体观察斑马鱼 脊髓内的血管
plxnd1 在血管内皮细胞上表达
10X
20X
技术路线
双光子激光建立斑马鱼脊髓损伤模型的探索：
14dpf 幼年斑马鱼 0.033%MS222麻醉
明场下对脊髓定位，利用双光子强 激光对脊髓进行深度扫描切割损伤
对损伤后的斑马鱼 进行解剖，观察扫 描处的脊髓及周围 组织的损伤情况
同时在损伤位点以下 2mm注射反向示踪剂 生物胞素
12小时后做纵切切 片，利用GAFP抗
前期结果
图1：斑马鱼脊髓损伤后的运动能力的变化 Before lesion
Red: sham operation (n=10) Blue: operation (n=10)
Real time PCR
change folds
time points
sema4e:
10X anti-sense probes plxnd1: