流感病毒采集规范
流感采样方法
流感采样方法
1 采样标准
严格规范采样标准，是保证流感病毒采样阳性率上升的关键，有以下两点：（1）体温≥38℃，且不超过3天的发热病人：（2）伴有咳嗽、咽痛。
2 采样方法
2.1 患者沟通告诉患者采样的目的、意义、方法以及操作过程中的注意事项以取得患者的合作。
2.2 采样前准备采样者二级防护，采样材料有病毒保存液、注射器、一次性无菌平皿、易折专用无菌拭子、压舌板、剪子。
2.3 采样过程在采样管外写上病人的名字、性别、采样日期。
（1）漱口液：患者面向采样者坐于靠背椅上，先沾湿两支无菌拭子，然后嘱患者用5ml采样液漱喉，漱时让患者头部未仰，发“噢”声，让采样液在咽部转动，吐于平皿。
（2）鼻拭子：患者面向采样者坐于靠背椅上，头后仰45℃左右，将一支沾湿的拭子平行于上鄂的角度轻轻地左右转动从一侧鼻孔插入，一般当拭子插入有阻力时再将拭子停留2到3秒后缓慢转动退出，另一侧鼻孔重复操作。
（3）咽拭子：嘱患者头后仰张大嘴巴发出“啊”声，将另一支沾湿的拭子左右两面及拭子头部快速较用力地分别刮去扁桃体腺两侧和咽后壁的分泌物。
将两支拭子放于空采样管，用剪子或者折断手接触部分，然后用注射器吸取平皿里的漱口液于采样管里，加盖旋紧，最后将样本放于冷藏包中，在24小时内送至实验室。
3 讨论
由于很难采到双份血清标本，不建议采取血清标本，根据病人的情况也可以单采鼻拭子或者咽拭子，咽拭子采样时动作轻巧、快速、准确，而鼻拭子要求动作缓慢、轻巧、稳重，主要用的检测方法是实时荧光定量RT-PCR。
流感病毒的收集与纯化标准操作规
流感病毒的收集与纯化标准操作规程（编号：054）1、目的及适用范围该SOP用来规范流感病毒的收集和纯化标准操作。
2、主要仪器试剂超净工作台、冷冻立式超速离心机（BeckmanXL90）、冷冻台式高速离心机、天平、超速离心管、50mL离心管、0.01 mol/L PBS pH7.4、30%、40%、50%、60%蔗糖3、操作步骤3.1将病毒接种于SPF鸡胚，48 h收集尿囊液以5000 rpm（#3334）离心30 min，取上清液；或者将病毒接种于细胞，待细胞基本病变收取上清。
12000rpm（#3332），离心15min，去上清。
3.2 将上清液以100000g（Ti40）离心2 h，将沉淀物用1 mL 0.01 mol/L PBS pH7.4悬浮，振荡均匀；3.3 加至依次由30%、40%、50%、60%蔗糖制成的密度梯度上，以100000g（SW40）离心2h，取沉淀条带；3.4 取沉淀条带加10倍量PBS悬浮、振匀，再次以100000g （Ti80）离心2 h，取沉淀用200μL 0.01 mol/L PBS pH7.4或20 mM Hepes/20mM Mes/130mM NaCl, pH7.5悬浮、振匀，-80℃保存。
4、注意事项4.1 注意对称平衡。
使用天平，进行配平，保证离心对称平衡。
4.2 如离心管盖子密封性差液体就不能加满（针对高速离心且使用角度头），以防外溢。
外溢后果污染转头和离心腔，并失去平衡，影响感应器正常工作。
最高液面查离心机相应说明书。
4.3 SW40超速离心时，液体一定要加满离心管，只余留2mm空间，超离时需抽真空，只有加满才能避免离心管变形。
4.4 使用角度头时别忘盖转头盖，如未盖，离心腔内会产生很大的涡流阻力和摩擦升温，这等于给离心机的电机和制冷机增加了额外负担，影响离心机的使用寿命。
113。
流感标本鼻咽拭子采样
标本储存及送输：
• 1、24小时内能检测的标本可置于4℃保存，24小时 内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存。
• 2、用A类（感染性物质，可感染人的）编号UN2814 包装运输。
• 3、标本上送时要附送样单。送样单要单独放置不 要与样品混放。
流感标本鼻咽拭子采样
个人防护
• 做好标本采集时的个人防护，建议： • 1、呼吸防护装备—检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备。 • 2、鞋套 • 3、前封式手术服 • 4、双层手套 • 5、眼部防护装备（护目镜或面罩） • 拭双侧咽扁桃体及咽后壁， 将拭子头浸入含2～3ML采样液的螺口塑料管中，尾部弃去，旋紧 管盖。
• 4、送样箱要清洁，未受标本污染，送样时最好由 专业人员亲自送达，当面交接。
鼻拭子采集方法
鼻拭子、用合成纤维的拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后 缓慢转动退出。取另一根拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。每 侧1根擦拭后与咽拭子放在同一塑料管中。
标本采集要求：
• 1、标本采集应使用头部为合成纤维的病毒采样拭子，铝或塑料柄， 不推荐棉拭子和木柄。
• 2、标本采集管应包含3毫升采样液。 • 3、标本采集后应置于无菌病毒采样液或生理盐水中，并立即用冰
人禽流感标本采集及实验室检测技术方案
人禽流感标本采集及实验室检测技术方案为及时、科学地采集和运送人禽流感病例或疑似污染环境等各种类型的标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，明确诊断或开展相关科学研究，特制定本方案。
1 采集对象1.1 人禽流感医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例。
1.2 其它需要进行人禽流感诊断或排除者。
1.3 需要采集的环境标本。
2 采集要求2.1 从事人禽流感检测标本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。
在标本采集过程中，采样人员参照（附件5）规定的防护措施进行安全防护。
2.2 住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾病预防控制机构专业人员指导下采集。
2.3 标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。
2.4 密切接触者标本由当地疾病预防控制机构负责采集。
2.5 根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。
3 标本种类每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本；需要排除人禽流感的死亡病例则依据《传染病病人或疑似传染病病人尸体解剖查验规定》（中华人民共和国卫生部令第43号）的规定采集尸体标本，没有条件进行尸体解剖的，可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本。
3.1 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。
最佳采集时间为发病后3天内。
3.2 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。
3.3 尸检标本：病人死亡后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检，主要采集肺、气管组织标本，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。
3.4 血清标本：每一病例必须采集血清标本，须采集急性期、恢复期双份血清。
第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后第3～4周采集。
采集量要求5ml，以空腹血为佳，建议使用真空采血管。
3.5 其它标本：如果病例有腹泻症状，可在发病后采集粪便标本；有胸水者可采集胸水标本。
流感病毒核酸检测标本采集、送检、处理流程
流感病毒核酸检测标本采集、送检、处理流程1. 引言流感病毒核酸检测是一种常用的检测方法，可以用于流感的早期诊断和监测。
本文档旨在提供流感病毒核酸检测标本采集、送检和处理的详细流程，以确保准确、及时和安全的检测结果。
2. 标本采集标本采集是流感病毒核酸检测的第一步，正确的采集方法对于后续检测结果至关重要。
以下是标本采集的步骤：1. 选择合适的采集时间：流感病毒在病程初期时最容易检测到，因此最好在症状开始后的48小时内采集标本。
2. 选择合适的采集方法：常见的标本采集方法包括咽拭子采集、鼻拭子采集和咳痰样本采集。
根据临床需要和采集者的经验选择合适的采集方法。
3. 采集过程：采集者应使用无菌手套，并根据操作要求进行准确的采集。
在采集过程中，要避免其他污染源的接触，确保标本的纯净度。
4. 标本保存和运输：采集后，标本应立即储存于适当的中，并在规定的时间内送往实验室进行处理。
3. 送检送检是将采集的标本送往实验室进行核酸检测的步骤。
以下是送检的流程：1. 填写申请单：在送检前，检测人员应填写标本的相关信息，如姓名、性别、年龄等，并注明流感病毒核酸检测的要求。
2. 标本包装：将已采集的标本放入密封袋中，确保袋子密封良好，避免标本在运输过程中的泄漏。
3. 运输方式：根据实验室的要求，选择适当的运输方式。
一般情况下，标本应使用专用的运送盒，采取冷链运输以确保标本的质量。
4. 相关文件：将申请单和相关的送检文件一同放入密封袋中，以便实验室对标本的追踪和管理。
4. 处理流程实验室收到标本后，需要进行一系列处理步骤以获得准确的核酸检测结果。
以下是处理流程的主要步骤：1. 样本接收：实验室收到标本后，应及时确认标本的完整性和相关信息的准确性，并记录相关数据。
2. 样本处理：对标本进行必要的预处理，如离心、去除细胞和红细胞沉淀等，以提取标本中的核酸。
3. 核酸提取：使用合适的提取试剂和方法，从标本中提取核酸。
在提取过程中，应采取相关措施以防止实验室内的交叉污染。
人禽流感标本采集、运送、处理及保存的操作规程
人禽流感标本的采集、运送、处理及保存操作规程一、目的规范人禽流感标本的采集、运送、处理及保存操作。
二、适用范围本操作规程适用于人禽流感标本的采集、运送、处理及保存。
三、简介人禽流感检测过程中，采集的标本包括鼻咽拭子、漱口液、血液等。
本实验室一般用鼻咽拭子或漱口液进行病毒分离与分子生物学检测，血清用于人禽流感抗体检测，采集血液部位一般位于前臂肘静脉。
四、器材1、用于血液收集的基本耗材包括：医用（5ml和10ml）一次性注射器、一次性乳胶手套、止血带、碘酒、无菌拭子、血清储藏管、标本标签、创可贴、可封口塑料袋、标本采集表格、带有冰袋的冰壶、棉拭子、污物桶、笔、试管架。
2、用于鼻咽拭子、漱口液等收集的基本耗材包括：一次性乳胶手套、防护服、十二层口罩（或N95口罩）、采样无菌棉签、采样液（螺口塑料管装）、可封口塑料袋、带有冰袋的冰壶、污物桶、样品登记表、笔、试管架。
附：血清保存管：2 ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）；鼻咽拭子保存管：10 ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）；尸检组织冻存管：50ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)；记号笔：油性，防水。
五、人禽流感标本采集操作规程（一）标本采集要求1．采样人员须以无菌操作采集各类标本。
采集标本所使用的容器、采样液等均应无菌。
编制：福建省疾控中心病毒性疾病防治科审核：沈晓娜批准：严延生2. 每份标本必须标明标本编号、标本种类及采集日期。
采集单位应指定专人负责标本的登记、收集和管理，并认真填写“人禽流感标本采集登记表。
”3.所有标本的收集、运输和保藏都应装在有螺旋盖的塑料管中，以防止开、关标本管时产生气溶胶，并用两层清洁塑料袋包裹严实。
4.采集的标本应立即送当地疾病预防控制机构，同时附上标本送检单。
如不能立即送交，可置-20℃以下冰箱短暂保存（24小时之内）。
（二）标本采集种类与方法标本采集的时间、位置及质量对能否分离到病毒或提取到有活性的RNA至关重要，而标本保存与运输不当，也会影响病毒的分离。
人甲型H1N1流感病例标本采集和实验室检测指南
人甲型H1N1流感病例标本采集和实验室检测指南（暂行）甲型H1N1流感病毒的检测所有甲型H1N1流感疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测甲型H1N1流感病毒。
推荐采集的呼吸道标本：疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。
如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。
气管插管的病人也应收集气管吸取物。
标本应置于无菌病毒运输液（ VTM ），并立即用冰块或冰排保存或置于4 ℃（冰箱），并马上运送至实验室。
临床样品收集人员及实验室人员的感染控制指导请见相关文件。
理想的情况下，标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做杆。
不推荐棉拭子和木杆。
不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。
标本采集管应包含3毫升病毒运输液（例如，含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）。
临床标本储存所有呼吸道标本应保存在4℃，并尽快放置在-70℃。
如果没有-70℃度冰箱，标本应保存在4℃，但不应超过4天。
临床标本运输临床标本应按照A类包装要求运送，并用干冰运输。
所有标本应标示清楚。
疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。
检测程序呼吸道标本应首先应用real time RT-PCR方法检测A型流感病毒的M基因、Swine （ H1N1）的HA基因和NP基因，以及质控对照RNP基因。
同时，接种MDCK细胞或SPF 鸡胚进行病毒分离，并测定病毒的全基因组序列。
推荐的检测方法用Real-time RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒。
其他检测方法快速流感抗原检测一些商用快速检测可以区分A和B型流感病毒。
快速检测实验A型流感阳性的病例符合可能病例的标准（见上文）。
这些实验对检测人感染猪流行性感冒（ H1N1病毒）病毒临床标本的敏感性和特异性未知，而且检测季节性流感病毒的灵敏度不佳。
因此，快速检测阴性结果可能是假阴性，不能作为甲型H1N1流感感染的最后诊断。
免疫荧光法（或装配的IFA ）免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。
流感监测样本采集有关事项
标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的
塑料管里，拧紧； 每袋装一份标本；
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；
在采样管上用油性记号笔做好标记用塑料袋密封。
同时填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记 表”，用另一塑料袋密封； 然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的 材料。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同 一个塑料袋内再次做密封。所有容器必须有生物 危险标识。
标本采集种类包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子。标 本采集后放入含3-4ml采样液的采样管中。
临床样本收集的注意事项
• 要做好自我保护，操作要细心，严防标本间交叉
污染
• 采集禽流感疑似度 • 标本采集后应迅速至于冰上或者4 ℃以下保存，
因为流感病毒对热很敏感
暴发疫情标本采集
采集发病3天内流感样病例的鼻、咽、咽鼻拭子标 本，必要时可采集急性期（发病7天内）和恢复期 （发病2-4周）双份血清标本。每一起暴发疫情至少 采集10份咽、鼻拭子标本（如果现症病例在10例以 下的，应全部采样）。 不能明确病原的可增加采样批次和数量。 标本运输：4℃条件下，于24小时内运送至流感监 测网络实验室 。
临床标本处理
鼻、咽拭子：为带有聚丙烯纤维的拭子标本，应 先将带有聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取 出。 鼻咽抽取液：用干净灭菌的毛细吸管在无菌条件 下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，置4℃ 待其自然沉淀5～10min，取上清。上清液可直 接接种或低温保存。 组织标本的处理：取肺组织标本放至平皿中，用 灭菌生理盐水清洗肺组织2～3遍，研磨成组织悬 液，配置成10％～20％的组织悬液，2000rpm离 心10min，加入抗菌素，取上清直接接种。 如原始采样液中未加入抗菌素，应在标本接种前 补加，庆大霉素终浓度为10mg/mL，青/链霉素 （终浓度:青霉素G 100U/mL,硫酸链霉素 100μg/mL），混匀后置4℃过夜或作用2h后进行 接种。
4 流感病毒标本采集、运输、分离检测及注意事项
在采样管上用油性记号笔做好标记用塑料袋密封。同时填 写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记表”，用另一 塑料袋密封；
将装标本的密封袋放入专用运输箱内，放入冰排，然后以 柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料。同一患者 2份以上的密封标本，可以放在同一个塑料袋内再次做密 封。所有容器必须有生物危险标识。
感病毒对热很敏感 • 标本管标识明确：医院名称，标本号，患者姓名，性别，
采样日期 • 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。
24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 ℃或以下
血清学标本注意事项
• 血清学最好采集急性期和恢复期的双份血清塑料管里， 拧紧；
膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界限 标记出鸡胚的气室与尿囊的界限、胚胎头部
的位置 如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育
不全、或表面有好多渗水孔，应弃掉
流感病毒操作要求生物安全规程
禁止在同一实验室，同一时间处理接种未知临床 标本和已知标准病毒
禁止在同一实验室，同一时间处理接种采自不同 动物的标本
国家流感中心 张烨
标本种类
临床标本
鼻拭子、咽拭子、鼻咽吸取物、漱口液等
血清标本
病人的急性期和恢复期血清双份血清
临床样本的选择
采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物 ）、人禽流感待 查病例
流感样病例:发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者， 而缺乏其它的实验室确定诊断依据
采集时间：病人发病后的头三天
RT-PCR 组成成分
PCR的基本原理
• PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点
94 温 度 72 （℃）
流感病毒临床标本的采集方法运输保存
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
八、临床标本的的处理原则
临床标本处理后，将原始标本分为三 份:一份（40％）用于鸡胚接种，一份 （30％）用于MDCK细胞接种，一份 （30％）保存待复核用。对于病毒分离 阳性的标本－70℃保存6个月
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
七、临床标本的处理方法
• 含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤 维的拭子在管壁反复挤压后取出
• 鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。置4℃ 待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可 直接接种或低温保存
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无 菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液， 同样置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存
• 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素
• 标本采集后应立即放入适当的采样液中低 温保存
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
Eagel`s基础培养基
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
采样液抗生素含量
抗生素名称 庆大霉素 抗真菌素
终浓度 0.1mg/ml 2Ug/ml
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
六、临床标本的处理原则
• 新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应 尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的 可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下 保存
• 冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行 病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离 的标本应置-70℃或以下保存
人感染H7N9禽流感病毒标本采集
人感染H7N9禽流感病毒标本采集
及送检策略
一、标本采集、转送和检测
（一）标本采集。
医疗机构应当及时采集病例的相关临床标本。
采集的临床标本包括病人的上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等。
应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4 周的恢复期血清。
如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本。
为避免标本反复冻融，保证标本检测质量，采集的呼吸道标本每份分为3 管，每管不少于1ml。
血清标本每份分为2 管，每管不少于0.5ml。
并填写不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表。
（二）标本转送和检测。
H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。
病例的临床标本采集后，区疾病预防控制中心和病例收治的医疗机构要密切配合，按照生物安全的相关规定进行包装，在24 小时内送到当地流感监测网络实验室进行检测。
流感病毒采集规范
流感病毒采集规范第一篇：流感病毒采集规范附件5：流感监测实验技术操作规范一、流感监测临床标本的采集、运送、处理及流感病毒株的运输（一）、流感临床标本的采集病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。
标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。
采样液常用的采样液有以下五种：普通肉汤、pH7.4～7.6的Hank's、Eagle's、水解乳蛋白液或不加抗菌素的生理盐水（漱喉液）。
为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素，其终浓度为0.1mg/ml,和抗真菌药物，其终浓度为2mg/ml。
加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管4ml,-20℃冻存。
采样方法有以下几种：1)鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。
以另一拭子拭另侧鼻孔。
将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。
2)咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。
先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次。
4)漱口液：用10 ml 生理盐水漱喉。
漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集洗液5)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
（二）、临床标本运送新鲜的临床采集标本应在4℃条件下24小时内运送至全国流感监测网络实验室。
未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存。
甲型H1N1流感标本采集、运输和生物安全
二、标本保存和运输
1、标本的包装 2、标本的保存 3、标本的运输
疑似人感染甲型H1N1感染病例标本 列为A 类（ 感染性物质，可感染人的）
编号UN2814包装和运输。
填写疑似甲型H1N1感 染病例标本送检单 （甲型H1N1流感监测方案附表2）
运输的包装
使用三 层包装 第一和第二层要防水 所用包装容器必须标有生物危害标识
标本的运输
原则：不 污染环境，不影响检测
要求：运输过程要冷藏，标本从采集现 场运送到实验室，专车专送。
省、市疾控中心公布标本接受联系方式， 运送标本要提前通知，并获得接收单位 同意后，同时将拟送标本的信息报告当 地卫生行政部门。
采样同时填写疑似人感染甲型H1N1流感病例采样单
姓名
附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单
性 年 职业 别 龄※
现住址
发病日 期
标本# 种类
标本 量 （g或 ml）
采集 日期
备注
※选项：参照传染病报告卡。
#选项：A鼻咽拭子、 B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、
F其他（如为其他，请在表格中注明）
最后摘口罩。
防护材料要求
防护服：使用防水面料防护服， 口罩：应当配有鼻夹，具有良好的表面抗湿性， 应适合本人的脸型， 防护眼镜：应具备宽阔视野、高透光度和良 好防溅性的产品。
生物安全条例和规定
《病原微生物实验室生物安全管理条例》 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种 或 样本运输管理规定》 《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 （WS 233-2002）》 《实验室生物安全通用要求（GB19489－2 004） 》
流感病毒标本采集运输
若采集的是鼻咽拭子，同一时间采集的标本可 放入同一管内
注意：采集禽流感疑似病人标本 最好是下呼吸道吸取物
（一）、临床标本的采集
• 鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的拭子轻轻插入鼻 道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以另一 拭子拭另侧鼻孔。将拭子头浸入采样液中，尾部 弃去。
流感病毒标本采集、运输 及注意事项
流感病毒标本采集
• 标本种类
临床标本
鼻拭子、咽拭子、鼻咽吸取物、漱口液等
血清标本
病人的急性期和恢复期血清双份血清
流感病毒标本采集
• 临床样本的选择
采样对象：流感样病例、甲型H1N1流感待查病例
流感样病例:发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛 之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据
• 注意：严禁通过公共交通工具运输
• 咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭双侧咽 扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入采样液中， 尾部弃去。 注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采 样管中，以便提高分离率，减少工作量。流感病毒标本采集临床样本收集的注意事项
• 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我 保护
• 采集禽流感疑似病人的标本，最好采集下呼吸道 吸取物
• 采集标本要有一定力度 • 标本采集后应迅速至于冰上或者4 ℃以下保存，
因为流感病毒对热很敏感 • 标本管标识明确：医院名称，标本号，患者姓名，
性别， 采样日期 • 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒
分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放70 ℃或以下
流感病毒标本采集
• 血清学标本注意事项
• 冻存的临床采集标本
应在冻存的条件下，低温送至实验室
• 运输样本，应严格按照《病原微生物实验室生物 安全管理条例》及《可感染人类的高致病性病原 微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求 运送，应当有专人护送，护送人员不得少于两人；
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附件5：流感监测实验技术操作规范一、流感监测临床标本的采集、运送、处理及流感病毒株的运输（一）、流感临床标本的采集病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。
标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。
采样液常用的采样液有以下五种：普通肉汤、pH7.4～7.6的Hank's、Eagle's、水解乳蛋白液或不加抗菌素的生理盐水（漱喉液）。
为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素，其终浓度为0.1mg/ml,和抗真菌药物，其终浓度为2mg/ml。
加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管4ml,-20℃冻存。
采样方法有以下几种：1)鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。
以另一拭子拭另侧鼻孔。
将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。
2)咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。
先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次。
4)漱口液：用10ml生理盐水漱喉。
漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集洗液5)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
（二）、临床标本运送新鲜的临床采集标本应在4℃条件下24小时内运送至全国流感监测网络实验室。
未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存。
标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存。
冻存的临床采集标本应在冻存的条件下，低温送至实验室。
冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。
如未能分离的标本应置-70℃或以下保存。
临床标本采集管建议使用带螺口的塑料管。
（三）、临床标本处理临床采集标本送至实验室后，须经处理后再进行病毒的分离接种。
含聚丙烯纤维的拭子的采集标本，先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出。
鼻腔或咽部洗液的标本，充分振荡标本管，将粘液打碎。
置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5ml。
上清液可直接接种或低温保存。
鼻咽漱液或抽取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。
上清液可直接接种或低温保存。
注：如采样液中尚未加抗菌素，应在接种前补加，用量同上前，混匀后置4℃过夜或室温作用数小时后可接种。
临床标本处理后，将原始标本分为三份，一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。
对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月，在收到国家流感中心复核鉴定报告后，按照生物安全有关规定处理；病毒分离阴性的标本随时按生物安全的有关规定处理。
（四）、血清标本的采集与处理血清标本多用于流感暴发时的血清学核实诊断及人禽流感待查病例的诊断。
血清标本采集应该包括急性期和恢复期双份血清。
急性期血样应尽早采集，可在采集病毒分离标本时同时采集，但不能晚于发病后7天。
恢复期血样则在发病后2～4周采集。
一般采集空腹血。
单份血清不能用作诊断。
取一根至少能装3 ml以上，干净和灭过菌的血清管做好标记，并进行登记，登记的内容包括：医院名称，患者姓名，性别，急性期（Acute，A）或是恢复期（Convalescence，C），采样日期（年，月，日）。
1．从患者手臂静脉采2 ml血，放入准备好的上述血清管中。
2．然后置室温数小时待血完全凝固。
3．1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于1.5ml无菌xx，做好标记。
4．血清可置4℃存放一周，存放超过一周需置-20℃或以下保存。
（五）、流感病毒株的运输需送国家流感中心实验室检测的病毒分离物，填写“流感/人禽流感毒株送检单”，在冻存后，在低温条件下，送至中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感中心进行复核，运输时遵守国家生物安全的有关规定。
1．流感毒株的送检要求（1）自国家级流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的全部毒株。
（2）自其它流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，单向血凝抑制效价与国家流感中心提供的标准参照血清相比，有4倍或4倍以上差异的毒株。
（3）自其它流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，HA<8,且网络实验室不具备RT-PCR鉴定能力。
（4）暴发时采样分离到的所有流感毒株。
（5）HA阳性，用国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均≤20的毒株。
（6）所送检的毒株要求每份3ml，并且无细菌污染。
（7）全国流感监测网络实验室直接将毒株送至国家流感中心，填写“流感/人禽流感毒株送检单”。
监测网络实验室中的市级实验室送检毒株时，应同时送省级疾控中心实验室备份。
（8）送检毒株在HI试验完成后，每两周送至国家流感中心。
（9）HA阳性，用国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均≤20的毒株，应在HI试验完成后24小时内送至国家流感中心。
2．寄送流感中心的流感毒株标本的包装、运输（1）病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。
盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本。
（2）将密闭后的病毒标本放入大小适合的塑料袋内密封。
（3）直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里。
（4）将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料。
（5）标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法国家流感中心联系方式为：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心地址：xxxx迎新街100号联系电话：010－传真：010－4（六）、标本的接收送检的标本（毒株）送到实验室后，由专人在生物安全柜内打开标本的包装。
记录收到日期、送检实验室名称、核对并记录送检标本（毒株）标编号是否与送检单相同。
收到的毒株后，国家流感中心给送检单位及时反馈。
附件3.人猪流感（H1N1）病例标本采集和实验室检测指南（暂行）猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒的检测所有猪流行性感冒（H1N1病毒）疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测猪流行性感冒（H1N1病毒）的病毒。
推荐采集的呼吸道标本：疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。
如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。
气管插管的病人也应收集气管吸取物。
标本应置于无菌病毒运输液（VTM），并立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上运送至实验室。
临床样品收集人员及实验室人员的感染控制指导请见相关文件。
拭子理想的情况下，标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做杆。
不推荐棉拭子和木杆。
不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。
标本采集管应包含3毫升病毒运输液（例如，含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）。
临床标本储存所有呼吸道标本应保存在4℃，并尽快放置在-70℃。
如果没有-70℃度冰箱，标本应保存在4℃，但不应超过4天。
临床标本运输临床标本应按照A类包装要求运送，并用干冰运输。
所有标本应标示清楚。
疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。
检测程序呼吸道标本应首先应用real time RT-PCR方法检测A型流感病毒的M基因、Swine（H1N1）的HA基因和NP基因，以及质控对照RNP基因。
同时，接种MDCK细胞或SPF鸡胚进行病毒分离，并测定病毒的全基因组序列。
推荐的检测方法用Real-time RT-PCR方法检测猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒。
其他检测方法快速流感抗原检测一些商用快速检测可以区分A和B型流感病毒。
快速检测实验A型流感阳性的病例符合可能病例的标准（见上文）。
这些实验对检测人感染猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒临床标本的敏感性和特异性未知，而且检测季节性流感病毒的灵敏度不佳。
因此，快速检测阴性结果可能是假阴性，不能作为猪流感感染的最后诊断。
免疫荧光法（或装配的IFA）免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。
检测A型流感阳性的病例符合可能病例的标准（见上文）。
免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测人感染猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒临床标本的敏感性和特异性未知。
因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为猪流感感染的最后诊断。
病毒培养可用MDCK细胞和SPF鸡胚分离猪流感（H1N1病毒）病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。
病毒分离阴性并不能排除感染猪流感（H1N1病毒）病毒。