最新免疫测定室内质控血清的应用
体外免疫分析室内质量控制
体外免疫分析室内质量控制一、质量控制的目的质量控制方法是用于监测检验方法的分析性能，警告检验人员存在的问题。
质量控制一般通过检测质控品来实行。
根据统计量判断检验结果的质量，是否需要做系统的纠正，患者检验结果是否可接受。
室内质量控制主要是控制每次检测的重复性，即精密度；通过对常规工作进行质量控制，监测测定方法或检测系统的稳定性，按规定的指标对每次测定的质量做出评估，并决定测定结果的取舍，以保证标记免疫分析的精密度和可比性，及时发现和克服造成误差的原因，提高检测的质量。
为此，必须建立检测项目操作规程，完善标本采集、运输、接受与保存过程，严格检测报告核对签发制度，加强仪器与试剂的管理，严格工作分区、制订工作制度，对相关人员制订业务学习与培训计划，完善质量管理记录。
二、质量控制的计划1.规定质量要求根据允许总误差规定质量要求。
允许误差包括随机误差和系统误差，即方法的不精密度和偏倚。
超过此限说明检验质量不可接受。
2.确定方法性能确定分析方法的关键指标：不精密度和偏倚。
除了这两者外，还需了解方法的不稳定性，如：分析误差预期的类型、大小和产生的频率。
对质控品进行重复检测可求出不精密度。
可以根据美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）EP5-A求出不精密度。
在实际工作中，可以测定值与室间质评/能力验证（PT）的均值作为偏倚的估计。
3.制定质量控制策略应确定：检测不同浓度质控品的种类及每种的次数；质控品放置的位置；选择的质控规则。
4.预测质量控制的性能质量控制性能的指标是指误差检出概率和假失控概率。
可根据功效函数图预测不同质量控制规则在不同质控测定结果个数时的误差检出概率和假失控概率。
5.设定质量控制的性能根据预测出的不同质量控制规则的多种特性，结合临床要求和检验工作实际情况，可选定出合适的误差检出概率和假失控概率。
6.选择合适的质量控制规则基于功能函数图、临界误差图和操作过程规范图选择适当质量控制规则、质控品的测定数。
免疫项目实验室内质量控制
精密度
定性测定精密度质量要求
定性免疫测定精密度分析质量指标为C5~C95区间 浓度范围≤C50±20%
精密度
以COI或S/CO比值表示结果的定性免疫测定的精密度
同生化定量试验精密度。 批内精密度（重复性） 批间精密度（中间精密度）
定性测定精密度质要求
批内精密度要求： CV≤10%，且批内CV≤（1+10%）*CV1 注：CV1为试剂盒说明书规定的批内CV
意义 准确度 准确度 测定下限 交叉反应 准确度
准确度
准确度（accuracy）：分析物的测定结果与真实结果之间的接 近程度。准确度的定义在定性测定，是指样本阳性或阴性测定 结果与其真实结果的一致性程度。通常通过方法学比较来实现。
精密度
定性测定的精密度 以COI或S/CO比值表示结果的定性免疫测定的
可重复检测 出待测物质 的最低浓度 水平。不同 类型标本检 测下限可能 不同。
一种检测方 法仅对样本 中的待测物 质反应，而 与其他物质 不发生反应 的能力。
当特定疾病 存在时，患 者标本检测 结果为阳性 或超过正常 值范围的比 率。
当特定疾病 不存在时， 患者标本检 测结果为阴 性或者在正 常值范围内 的比率。
3. 分析敏感性（检出下限） 4. 对转化血清盘的检测能力 5. 分析特异性（交叉反应） 6. 干扰因素
敏感性 特异性 分析敏感性 分析特异性 临床敏感性 临床特异性
概念
当分析物 存在时， 其检测结 果呈阳性 或超过正 常值范围 的比率。
当分析物 不存在时 ，其检测 结果呈阴 性或者在 正常范围 内的比率 。
特异性：TN/（TN+FP）*100% （分析物阴性中，检测结果呈阴性的比
免疫测定的室内质量控制
Levey-Jennings质控图方法
也称Shewhart质控图，是由美国的 Shewhart于1924年首先提出，并用 于工业产品的质量控制。后来（二十 世纪五十年代初），Levey-Jennings 将其引入临床检验的质量控制 。经 Henry和Segalove的改良，即为目前 常用的Levey-Jennings质控图。
免疫测定的室内质量控制
卫生部临床检验中心 李金明
免疫测定技术的发展
（1）以抗原抗体的结合反应所致的沉淀或凝集现象判断 结果的免疫测定技术，如单双扩，免疫电泳，玻片凝集， 胶乳凝集，红细胞凝集试验等； （2）固相标记免疫测定技术，如放射免疫试验，酶免疫 试验，荧光免疫试验等； （3）均相免疫测定技术，如酶放大免疫测定技术 （EMIT），克隆酶供体免疫测定（CEDIA）等； （4）以单克隆抗体为基础的免疫测定技术的发展； （5） 以基因工程技术为基础的免疫测定技术发展时期； （6）免疫测定的自动化； （7）生物芯片技术（免疫测定的集成化和微型化）。
实验室设施：温湿度控制设备、稳压或不 间断电源
仪器设备及管理：酶标仪、洗板机、全自 动免疫分析仪、加样器等应建立技术档案， 并定期维护和校准
标准操作程序（SOP）的建立
统计质控方法
定性免疫测定质控物浓度的选择 Levey-Jennings质控图方法 “即刻法”质控方法 免疫测定IQC的特殊性 质控图在不同批试剂间的连续
13.210
0.820
0.0
0.333
0.2
1.095
0.5
1.914
1.0
3.771
0.337
2.0
6.809
0.388
5.0
10.095
1.196
ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用分析
ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用分析目的探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用。
方法应用ELISA对我血库收集的血液标本32000份进行HIV抗体检测；同时选择正常人群血清与试剂盒内HIV阳性血清混合稀释，混合恰当比例，冷藏保存使用；同时将自制的质控血清保存1～12个月，对其均匀性、精确性及稳定性进行评价。
结果ELISA法检测结果显示阳性115例，阳性率为0.36%，实际上HIV 抗体为阳性共120例，漏诊率为0.016%；研究结果显示正常人群的血清与试剂盒内HIV阳性血清以10：1的比例进行混合最为恰当；对自制的质控血清为期1～12个月的观察，发现其均匀性、S/CO值、准确性12个月的差异不显著（P＜0.05），无统计学意义。
结论ELISA在HIV抗体的检测中具有较高的准确度，且检测结果能够在短时间内反映，值得临床推广应用；同时发现自制质控血清经济方便，且具有稳定性高的优点，具有较大的应用前景。
标签：ELISA；HIV抗体；质控血清HIV指人类免疫缺陷病毒，HIV病毒对人体的免疫系统造成破坏进而削弱机体的免疫抵抗力，造成健康人群患上获得性免疫缺陷综合征，感染HIV的途径主要包括血液传染、性交、母婴传播。
现阶段，临床上对于艾滋病的治疗尚无显著进展，患者大都以死亡告终，其对人类的身体健康和生命安全产生极大的威脅，引起了国内外医学的高度重视[1]。
目前，艾滋病主要以早发现及早控制为主，ELISA法在HIV抗体的检测中作用显著，然而有诸多因素会导致其检测结果出现偏差，故进行室内控制十分有必要，本文旨在探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用，具体信息如下。
1 资料与方法1.1一般资料由上海纪宁实业有限公司提供的人抗人类免疫缺陷病毒抗体（HIV）酶联免疫试剂盒；由北京万泰生物药业有限公司提供的HIV抗体试剂盒，批准文号：国药准字S2*******；由卫生部临检中心提供的临界值质控血清，批号为NCCL 070049；由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供的酶标仪。
ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用
［］壶垂亘！变垂蚴：ｉ墨墼！鳗生！亘塑圆亟匦画［］
由于很多因素都会影响到ＥＬＩＳＡ法检测结果的准确性． 所以每次检测都应进行室内质控【ｌｌ。我们试制了抗一ＨＩＶ室内 质控血清．并与卫生部临床检测中心生产的ＨＩＶ抗体室内质 控血清进行了对照．考核了其精密性、均匀性和稳定性。现报
告如下．
血清稀释成低值弱阳性．分别以每管０．５ｍ１分装，置一２０℃保 存备用。检测方法分别按照说明书操作步骤严格执行。 １．３统计学处理采用统计学软件ＳＰＳＳ １２．０建立数据库． 通过ｔ检验和卡方检验，以Ｐ＜Ｏ．０５差异有统计学意义。
近的弱阳性外部对照质控血清，反应强度的变化很容易观俨＞ｏ．０５）。提示自制质控血清和标准质控血清的准确性无明 测，并且能指示出改变的检测能力，即能显示半定最分析或 定性分析上的假阴性结果或误差。为了确保ＨＩＶ抗体检测的 显差异。通过两种试剂盒对随机抽取的ｌＯ支自制质控血清 进行测定，ＣＶ分别为１２．１％和１０．８％。与标准（下转第５６８页）
万方数据
・５６８・
第２７卷第５期
２００９年ｌＯ月
实
验
与
检
验
医
学
ＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｖ０１．２７ Ｎｏ．５ Ｏｃｔ．２００９
ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ
ＡＮＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ
正常的上呼吸道有许多常居菌寄生。如鼻咽部的大量甲 型溶血性链球菌、奈瑟氏菌属、类白喉棒状杆菌、卡他布兰汉 菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡葡球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈 瑟菌、流感嗜血杆菌及真菌等。在正常情况下．这些细菌是不 致病的。但是在机体全身或局部抵抗力减低或其他外因影响 下。它们可以致病，并可以侵入下呼吸道引起感染。另外，在 上呼吸道标本的微生物学检验中．几乎每一份日Ｉ！Ｉ拭子都是有 菌的．分离出来的病原微生物是否与疾病有关．需要临床医 生和微生物学检验人员共同根据病原微生物的特点及其检 出数量，病人的临床症状等各方匝综合分折．以作出正确判 断１１Ｉ。 新生儿由于本身的特点．非特异性免疫及特异性免疫功 能均有一定的缺陷。与成年人相比．新生儿的抵抗力较弱．对 细菌、病毒等医院感染不易局限．此诸多方面造成新生儿的 易感性。胎儿和新生儿对感染的高度易感性主要是免疫功能 发育不全１２ｌ：新生儿呼吸道管腔狭窄、黏膜柔软、衄管丰富、纤 毛运动差。易致气管阻塞、感染：呼吸困难及拒乳；同时皮肤 黏膜薄弱易损伤、脐残端未完全闭合．离血管近，细菌易进入
免疫学检验室内质量控制的标准操作程序
目的：室内质量控制〔IQC〕是由实验室的工作人员采用一系列的方法，连续的评价实验室工作的可靠程度，确立报告能否发出。
旨在检测、控制本室常规工作的精密度，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中批间、批内标本检测的一致性。
2.0分析前质控:人员培训: 实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：检验项目的基本原理〔ELISA原理〕；临床意义；熟悉检测技巧，了解易出过失的环节及难点；熟悉检测试剂性能〔包括试剂盒组成，包被片段及其组成〕；熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。
某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
2.2 室内质控血清：采用卫生部或省临床检验中心制备的质控血清卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。
2.4试剂盒评价:试剂评价需要有权威的血清考核盘〔Panel〕进行检测，价格昂贵，操作繁琐，一般实验室不易开展，可以通过以下信息，了解试剂质量。
根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；2.4.2通过询问试剂包被物的组成，如原料来源〔基因工程或合成多肽〕，片段的组合〔按比例混合或化学合成〕，片段的长短等判断试剂的优劣；参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。
根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。
2.5仪器质控:移液器：ELISA加样量小〔5-100ｕl〕，其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中〔或温箱内〕实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。
免疫测定质控血清和标准物质的应用
现 1I U/ ml ≈0. 5ng/ ml
HBsAg室 内 质 控 品 的 选 用
定值
适用试剂
0.2IU/ml Murex， 生 物 梅 里 埃 试 剂
0.5IU/ml 1IU/ml
Ortho， Bio-Rad试 剂 ， 雅 培 i2000和 Axsym检 测 系 统和配套试剂
国 产 试 剂 盒 （ 万 泰 、新 创 、科 华 … … ） ， 血 站 和 医院用
现1NCU/ml≈0.25NCU/ml
适用试剂
国 产 试 剂 盒 （ 新 创 、科 华 、 GBI… … ） 万泰
进 口 试 剂 及 /或 配 套 仪 器 RPR、TRUST
抗 HIV质 控 血 清 定 值 的 调 整 及 选 用
定值 （调 整前）
1NCU/ml 2NCU/ml 4NCU/ml
定值 （调 整后）
• 参 考 文 献 ： Comparison of a measurement result with the certified value
• http://www.irmm.jrc.be/html/reference_materials_catalogue/user_support/us e.htm
免疫测定质 控 血 清和标准物质 的应用
张瑞 卫生部 临 床检验 中心
免疫测定用 室 内质 控 血 清的调 整
HBsAg、抗-HCV和抗HIV-1定值质控血 清被批准为国家二级标准物质 调整含量 改进包装
现有 的室内质 控血 清
项目 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb HBc IgM HAV IgM 抗 HCV 抗 HIV 梅毒螺 旋体抗 体
免疫测定用 室 内质 控 血 清的调 整
临床免疫测定的室内质量控制
洗涤
洗涤是ELISA不同于均相免疫学检测技术的一大特征， 其目的是去除反应体系中与反应无关的成分，包括未 结合的酶结合物以及反应过程中非特异性吸附于固相 载体的干扰物质。洗涤液Tween 20 是一种非离子去 垢剂，既含亲水基团，又含疏水基团，在洗涤中的作 用机制是借助其疏水基团与经疏水性相互作用被动吸 附于聚苯乙烯固相上蛋白分子的疏水基团形成疏水键， 从而削弱蛋白分子与固相的吸附。
温育
温育的温度：育常采用的温度有43 、37℃、室温或 4℃等。37℃是实验室中常用的温育温度，也是大多 数抗原抗体结合的最适反应温度。抗原抗体反应一般 在37℃经1～2 h 产物的生成可达顶峰，为加速反应， 可在一定范围内提高反应的温度并在反应过程中连续 振荡来增加抗原抗体接触的概率。抗原抗体反应在 4℃更为彻底，形成的产物更多、更稳定，但因所需 时间太长，在ELISA检测中一般不予采用。
应加强检测仪器的质量控制
如定量移液器要定期校准；检查吸液和注液速 度，关机运行冲洗程序（双蒸水），清洗吸针 及水箱，仪器外观清洁；酶标仪要定期检查滤 光片是否合格，光源是否稳定，机械系统是否 有故障，保持外观清洁，并定期请厂家工程师 进行保养维修；水浴箱及存放试剂的冰箱要每 天监测温度，并有记录等。
显色 HRP 和碱性磷酸酶（ALP）。HRP可催化的底物为过
氧化氢，参加反应的显色供氢体有邻苯二胺（OPD）、 邻联甲苯胺（OT）及四甲基联苯胺（TMB）等。 TMB 的反应产物为蓝色，目视对比鲜明，其性质稳定， 对人体无毒。若选用各类酸性终止液，则会使蓝色转 变为黄色。TMB作底物时的产物检测波长为450 nm ， ALP 作为标记物，其底物一般采用对硝基苯磷酸酯 （pNPP），产物为黄色的对硝基酚，吸收波长是405 nm。为了保证结果的稳定性，必须要严格按照试剂盒 说明书中规定的温度和时间操作。
室内质控物在血液筛查中的应用及重要性
参考物质-标准物质
标准物质(Reference Material, RM)是具有准确量值的测量 标准，它具有一种或多种足够均匀和很好确定了的特性值， 用以校准设备，评估测量方法或给材料赋值的材料或物质。 有证标准物质，即附有标准物质证书的标准物质(CRM)。标 准物质证书是研制者向使用人员提供的质量保证书，也是指 导正确使用标准物质的说明书。标准物质证书是向用户提供 足够的技术信息和量值溯源性的依据，用户在采用标准物质 之前，应熟读和理解证书的内容，按照证书中所提出的要求 和规范使用和保存标准物质，同时标准物质证书也是用户检 验分析结果所具有溯源性的证明书。使用有证标准物质的优 点是用户能够评定其测量的方法的正确度和精密度，并能够 建立起他的结果的计量溯源性。
5.3
2.4
2.1
2.7
6.6
2.3
（非）±
2.1
1.2
1.0
1.7
3.5
1.4
—
HBsAg质控品比较
试剂厂家 cutoff值 4IU/ml 2IU/ml 1IU/ml 0.5IU/ml 0.2IU/ml
WT 0.105 28.9 21.8 12.4 6.1 3
XC 0.105 27.9 20.3 9.9 4.8 2.2
cutoff 值
0.15
8NCU/ ml 4NCU/ ml 2NCU/ ml 1NCU/ ml 0.5NCU/ ml 0.2NCU/ ml
23.8
16.4
13.5
7.5
22.4
18.9
12.1
10.1
16.5
14.2
16.8
15.2
18.3
13.5
8.2
怎样做好免疫室项目室内质控及防范措施
怎样做好免疫室项目室内质控及防范措施一、免疫室项目室内质量控制的内容1、定性试验所有的ELISA法，包括HCV、HIV、HA V、TP、乙肝五项等。
免疫定性试验质量控制ELISA定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC 要保证试验的灵敏度和特异性。
我们使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对照作为内对照指示反应；另设临界值质控血清，与标本同时检测。
临界值S/C.O应该为2～4之间，正常人血清OD值在0.05~0.07 之间。
临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品，它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平，确保弱阳性反应的标本不漏检。
一般最常用的是Levey-Jennings质控图，以最初20个数据和3-5个月在控数据汇集的所有数值作为质控品有效期内的常用靶值，并以此作为以后室内质控图的平均数。
在求出均值及标准差后确定控制限，±3S作为上下控制限。
2、定量试验化学发光相关项目(AFP、CEA、CA125、CA199、CA153等)免疫定量试验质量控制包括激素类，糖类抗原等，这些物质在体内有一定的量（正常范围），超出这个量才呈病理情况，故需定量测定。
二、质量控制基本概念质量控制是监视全过程，排除误差，防止变化，维持标准化现状的一个管理过程。
这一过程是通过一个反馈环路进行的。
室内质控所用的质控血清是已知的有靶值的血清，在每次的常规检验中加入一份或数份，通过所得结果来了解本次检验的情况。
质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。
如果出现超过允许误差范围的异常结果，提示该检验不合格，应寻找原因，纠正后，重检待测标本。
因此质控血清在质控工作中起重要作用。
质量控制主要采用质控图进行。
质控图是把某一检验的性能数据与所计算出来的预期的"控制限"进行比较的图。
这种性能数据是在按规程正常进行时，按时间顺序而抽选出来的，其目的是检测检验过程中变异的"可追查"性原因。
生化免疫室室内质控管理程序
生化免疫室室内质控管理程序1.目的检测、控制本试验室测定工作的精密度,并检测其准确度的改变,提高常规测定工作的批间、批内标本检测结果的一致性。
室内质控品每批标本检测应与标本检测同时进行。
2.适用范围生化免疫实验室3.术语室内质控(IQC):在实验室内用于满足质量要求的作业技术和活动。
4.职责4.1室组长检查和督促本室各工作站按其室内质控(IQC)要求进行日常监测工作,保证检测质量。
4.2工作站负责人负责各站室内质控程序的制定,设计本实验的室内质控方案,建立室内质控规则,制定失控处理原则及失控原因分析步骤,操作人员的培训,并检查本实验室人员是否遵守室内质控程序做好室内质控工作。
4.3检测技术人员必须按照本实验室的室内质控结果的检测、记录工作,发现质控数据违背质控规则,或质控结果落在可接受以外,应填写失控报告单,上交组长。
组长查明失控原因,确定是真失控或假失控,以便决定是否对失控项目的标本进行复测,操作人员不能擅自处理失控结果和发出失控结果报告单,处理情况和结果需由组长、操作人员共同签名存档。
4.4质量监督员负责对IQC过程进行监控。
5.程序5.1定量检测方法室内质量控制的要求:生化免疫实验室贝克曼DXC600全自动生化分析仪、西门子ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪的常规检验项目按(见《定量检测室内质控项目及其总允许误差(Tea)表》)的要求开展室内质控。
5.1.1质控品的选择5.1.1.1质控品的来源:生化免疫实验室贝克曼DXC600全自动生化分析仪、西门子ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪所做项目使用贝克曼公司及西门子公司生产的质控血清——质控品。
5.1.1.2质控品浓度:使用2个不同浓度及正常和病理两种浓度水平的定制质控血清。
5.1.2质控品的使用和保存购买的冻干定制质控血清到科室后必须有1年到1年半以上的有效期,原包装质控血清的要求储存,使用时按要求加入稀释液或蒸馏水复溶,复溶后的质控血清用1ml带Ependoff管分装,分装后放臵在-20℃冰箱保存(稳定3个月),每天取出1-2只,进行测定,每瓶质控血清可以使用1-2周。
定性免疫测定质控物的应用
定性免疫测定中质控物的应用张 瑞卫生部临床检验中心National Center for Clinical Laboratories定性免疫测定中的质控物标准 室间质 阴阳性 对照 室内质 控品血清盘/样本盘 阳性参考品National Center for Clinical Laboratories物质评样本阳性对照阴性对照室内质控1室内质控2National Center for Clinical Laboratories阴阳性对照判断本次实验的有效性。
National Center for Clinical Laboratories例1：问题：ELISA实验，阴性对照OD值为0.157、 0.191。
试剂盒说明书要求阴性对照OD值 <0.100。
阳性对照正常，室内质控结果未失控。
整板的 结果，弱阳性结果增多，有阴性结果，但多处 于临界值。
实验过程全部按照SOP操作。
原因查找：洗液有细菌污染。
处理：清洁洗液瓶，更换新配制的洗 液。
National Center for Clinical Laboratories室内质控失控分析总体分 析：样本阴阳性结 果；实验过程； 检查仪器设备 等。
重测同一 质控品重测新的 质控品仪器维 护，重新 校准试剂批与 批差异？ 仪器问 题？National Center for Clinical Laboratories例2：问题：ELISA实验，室内质控做了两孔，其中 一孔未失控，另一孔结果略偏高。
阳性对照、阴性对照均没有问题。
检查整板的 结果，与失控的室内质控同一行的样本结果均 为阳性（强阳性或弱阳性）。
实验过程全部按 照SOP操作。
原因查找：洗板机吸液针有渗漏。
处理：更换新的分配头。
National Center for Clinical Laboratories例2：National Center for Clinical Laboratories例3：问题：ELISA实验，室内质控做了两孔，其中 一孔未失控，另一孔结果略偏高。
临床免疫测定的室内质量控制
01
利用酶标记的抗原或抗体与待测物结合，通过酶催化底物显色
反应来测定待测物的方法。
化学发光免疫分析（CLIA）
02
利用化学发光物质在免疫反应中释放能量产生光信号，通过测
量光信号强度来测定待测物的方法。
放射免疫分析（RIA）
03
利用放射性同位素标记的抗原或抗体与待测物结合，通过测量
放射性强度来测定待测物的方法。
不利因素。
均匀性
使用前应充分混匀质量控制样 品，确保样品均匀性。
瓶间差
使用同一批号多个质量控制样 品时，应检查瓶间差是否在可
接受范围内。
异常情况处理措施
失控情况处理
当质量控制结果超出预设的质控范 围时，应立即停止检测，查找原因 并采取相应措施。必要时可重新制 备质量控制样品。
储存异常处理
如发现质量控制样品储存过程中出 现异常情况，如颜色变化、沉淀等， 应停止使用并联系供应商或重新制 备。
04
试剂应存储在干燥、阴凉、通 风良好的地方，避免阳光直射
和高温。
不同种类的试剂应分开存放， 避免相互污染。
定期检查试剂的存储条件，如 温度、湿度等，确保符合要求
。
建立试剂库存管理制度，对试 剂的入库、出库进行记录，确
保试剂在有效期内使用。
仪器校准与维护保养计划
定期对仪器进行校准，确保测量结果 的准确性和可靠性。
批次间差异处理
当使用不同批号的质量控制样品时， 应注意批次间差异对结果的影响。 如有必要，可进行批次间比对实验
以评估差异情况。
仪器故障处理
在仪器故障导致质量控制结果异常 时，应及时联系维修人员进行维修 和校准，并对故障期间的结果进行
评估和处理。
免疫项目室内质控SOP文件
室内质量控制SOP文件冀中能源峰峰集团总医院检验科免疫组一、室内质量控制原则3二、室内质控品3三、室内质控品的正确使用和保存4四、室内质控的实际操作 4所有相关人员上岗前或文件有变动时均应及时阅读此文件并签字。
一、室内质量控制原则1.免疫实验室开展的所有检测项目均要求进行室内质量控制。
2.室内质控应在日常常规工作中进行，以监测方法或者检测系统的稳定性，质控品的测定要与日常标本的检测一致。
3.质控过程要遵守制造商对质控的要求和说明。
测定过程遵循各检测项目的SOP。
4.每个工作日做一次室内质控，每次至少做两个不同浓度水平的质控品。
室内质控图中心线（均值）和控制限（标准差）的设定见下文详细说明。
5.每天检查室内质控结果，依据13s，12s，22s，R4s规则(见下文详细说明)结合质控图分析本次测定结果是否在控。
如违反规则，按失控程序处理(详见下文)并填写失控记录单。
6.每月末打印当月质控图，并对当月质控图进行分析，填写室内质控月报表。
如有无违背其它质控规则，如10x，则分析存在系统误差的可能原因。
二、室内质控品1.室内质控测定项目包括： HbsAg，抗-HCV，抗-HIV。
2.室内质控品特性及说明名称：科美质控品生产厂家：北京科美东雅生物技术有限公司，康彻思坦生物；浓度水平：低浓度；成分：用人血清制备的，采用乙二醇将其稳定。
乙二醇有三重稳定效应。
高渗透性使细菌很难生长，抗氧化性保证组份不易被氧化。
此外，乙二醇会降低凝固点，使得该液在通常的凝固点（-15℃～-20℃）依然保持液态。
液态的质控液可以避免因灌装，干燥，和重新对冻干进行配制而造成的差错。
稳定性: 当密封贮存于-15℃～-20℃时，使用有效期同试剂瓶上标签所标注的时间。
试剂开启后，贮存于2℃～8℃，可保存5天（在有效期内）。
贮存时应避光、隔热、隔绝空气。
溯源性：该质控品中所有分析物可溯源至相应的校准物质。
溯源程序基于prEN ISO 17511。
最新免疫测定室内质控血清的应用
临床考核血清盘
项目 HBsAg
规格 支数/套 0.5ml/支 40
抗HCV 0.25ml/支 40
梅毒螺旋体 0.5ml/支 40 抗体
谢 谢！
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B（S/CO)
0.4 0.7 37.6 43.9 1.5 7.7 0.3 1.6 1.3 0.8 0.6
C（S/CO) D （S/CO)
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免疫测定室内质控血清的应用
免疫测定用室内质控血清的调整
随着临床实验室检验水平的不断提 高和检测试剂质量的不断改进，原有的室 内质控物已经不能满足室内质控工作的需 要，因此部中心对免疫测定用室内质控血 清的含量进行了调整，同时改进了包装。
注意事项
• 室内质控物仅用于相应项目的室内质 量控制，不能用于阴阳性结果的判断。
15 2.42 0.82 0.55 0.65 0.5 0.5 0.5 – – – –
梅毒螺旋体抗体血清盘
检测方法 1.检测非特异性抗体----使用类脂质抗
原的血清学试验 ：RPR、TRUST 2.检测特异性抗体----使用密螺旋体抗
原的血清学试验：FTA-ABS、TPHA、 TPPA 、ELISA 、WB
免疫室室内质控规则
免疫室室内质控规则室内质控是实验室内部对所有影响检测质量的各个环节进行系统控制，目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。
室内质控品的选择质控品应当选用与人血清基质相同、分析物含量均一、无传染危险性、稳定性好、瓶间差小、有较可靠的靶值或预期结果等。
我室目前常规开展了TSH、TT3、TT4、FT3、FT4、AFP、CEA、TPSA等项目的每日室内质控工作。
一、质控品的保存和使用购买回质控品后，严格按照要求及时保存在-20℃以下，并做好标识。
使用时应根据实验用量，有规律、有计划地对其融解，不要一次融解过多，长时间使用。
冰冻状态融化使用时，应轻轻摇匀，切忌剧烈振摇。
未用完部分可在4℃冰箱内保存，避免反复冻融。
另外，在实验过程中应当尽量减少质控血清在室温的放置时间，加样完毕后及时收回放进冰箱。
只有这样才能保证质控血清内各成分相对稳定，从而使监测实验结果的精确性得到保证。
二、均值和质控限的确定在开始室内质控时，首先要确定质控图的均值和质控限，将质控品应与常规标本一起测定。
根据20次质控结果对数据进行离群值检验(剔除超过3s外的数据)，计算出平均数和标准差，作为暂定均值和暂定标准差，以此暂定值作为下一个月室内质控图的均值和标准差进行室内质控。
一个月结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数和累积标准差（第一个月），以此累积平均数和标准差作为下一个月质控图的均值和标准差。
重复上述操作过程，连续三至五个月。
以最初20个数据和三至五个月在控数据汇集的所有数据计算的累积平均数和标准差作为质控品有效期内的常规均值和标准差，并以此作为以后室内质控图的均值和标准差。
三、室内质控图的绘制我室主要采用Levey-Jennings质控图。
四、质控规则的选择1.1_2s：1个测定值超过X士2s质控限，这是L-J质控图的警告限；2.1_3s:1个质控点落在士3s之外，这是L-J质控图的失控限；3.2_2s:连续两个点超过X+2s或X-2s，或同一天不同水平同时超过士2s；4.R4s：连续2个质控点相差超出4s范围；5.41s:连续4个质控点落在同一侧士1s之外；6.10x靶：连续10个质控点落在均值之一侧；7.7t：连续7个质控点呈连续上升或下降，或周期性波动变化。
临床免疫定性试验室内质量控制-郝崇华
三、临床免疫定性试验的性能指标
• CLSI文件规定：
– 1 灵敏度（分析和诊断） – 2 特异性（分析和诊断） – 3 符合率（诊断效率） – 4 重复性（总不精密度）
三、临床免疫定性试验的性能指标
(一)灵敏度(sensitivity )
（1）分析灵敏度（Analytical sensitivity）：一实验的测定反 应对待测物质浓度变化的改变。(即测量示值变化除以相应 的被测量值变化所得的商)。表述是指可以将样品中分析物 检出的最少分析物的量。
• 对于FDA等批准家庭使用的技术，只要求检测装置有内 对照，检测结果满足说明书规定即可；
• 对于需要经验来判定结果的技术仍需在实验室进行，均 有质控的要求，但国际上无具体操作的规定和资料。
• 根据显色或发光直接判定阴阳性的技术，如金标 试纸，美国CDC在“CLIA’88豁免的HIV抗体快 速检测的质量保证指南<2007年版> ”中要求：除 检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使 用弱阳性和阴性外对照作为质控。无判定标准， 一般理解为阴、阳性质控的检测结果分别为阴性 和阳性即表明在控，相反则为失控。
一、质控的目的
• 室内质控是由实验室的工作人员采用一 系列统计学的方法，连续地评价本实验室 测定工作的可靠程度。室内质控的目的是 检测、控制本实验室测定工作的精密度， 并检测其准确度的改变，提高常规测定工 作的批间、批内标本检测结果的一致性 ， 以确定检验报告是否可靠、能否发出的一 项工作。
二、临床免疫检测类型
Levey-Jennings设定靶值和控制限
稳定性较长（效期通常1年以上）的质控品 根据20次或更多次获得的质控测定结果，计 算出均值和标准差,进行离群值检验（剔除 超过3S外的数据），再计算出均值和标准差 ，作为暂定靶值和标准差。
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Hook效应
梅毒螺旋体抗体血清盘
原倍 1：10 1：20 1：40 1：80 1：160 1 3.357 2.946 2.099 1.428 0.936 0.490 4 2.277 2.256 1.970 1.615 1.060 0.603 7 1.703 3.066 2.938 3.023 3.125 2.289 23 2.360 3.089 2.884 2.975 2.258 1.481
谢 谢！
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B（S/CO)
0.4 0.7 37.6 43.9 1.5 7.7 0.3 1.6 1.3 0.8 0.6
C（S/CO) D （S/CO)
0.4
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1.367
+
+++
33
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+
+
++
0.160 0.082
1.329
0.90
0.027
0.662
+
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IgM抗体漏检
使用方法
质控血清都经过灭活处理，但仍应按照有潜在生物传 染性样本对待。 HBsAg，抗HCV，抗HIV，梅毒螺旋体抗体的质控血清加 样时按待测病人原始样本对待，依照试剂盒说明书进 行操作。 实验室收到血清后应将血清保存在–18℃以下，保质 期为1年。使用时将血清在室温复融，应注意待血清完 全融化后平衡至室温并充分混匀。复融后的血清如果 当日未使用完且无污染，可保存在2–8℃，限1周内用 完，避免反复冻融和重新分装质控血清样本。
HBsAg血清盘
灵敏度 特异性 HBsAg变异的检测能力：如G145R等 Hook效应导致的假阴性
HBsAg血清盘
样本 编号
含量(IU/ml)
A（S/CO)
1
6~8
0.2
2
8~10
1.0
10 ﹥2000000
40.8
16 约1600000
40.08阴性源自20.919阴性
9.4
27
阴性
16.6
1、4、7、23号血清稀释结果显示存在hook效应。
梅毒螺旋体抗体血清盘
TP14
TP17
TP45
TP47
EUIg M
EUIgG
A (OD值)
B
C (OD值)
D (OD值)
RPR 胶体金
1
+
++
++
+
0.09 0.736 3.199 27.35 3.776
3.604 ++ +++
4
++++ +
++++
++++
++++ ++
0.335
0.96
7
++++ +
++++
++++
++++ ++
0.256
1.12
23
++++ +/-
++++
++++ +/-
++++ +
0.225
1.13
4.041 27.61 2.169 0.654 31.24 1.215 3.948 30.24 1.897
2.006 ++ +++ 0.978 ++ +++
0.4
0.8
0.5
2.9
7.3
3.0
3.8
1.8
2.4
0.9
1.1
E （S/CO)
7.3 14.9 24.1 35.0 0.7 0.4 0.6 8.5 6.8 3.9 3.0
抗HCV血清盘
不同试剂厂家的ELISA试剂盒所用包被抗原的差异：
目前抗HCV检测ELISA试剂盒均采用HCV的基因工程或合成多肽 抗原（核心区、NS3、NS4和NS5等）包被固相，以间接法进行 测定，上述HCV抗原的组合、来源及用量等方面的差异而造成 检测结果不一致。
• 定值质控物不适合评价试剂盒整体性 能是否合格,但可用于试剂的批内、批 间变异和测定下限的评价质检。如果 需要对试剂进行比较评价和全面质检 请选用相应项目的临床考核血清盘。
临床考核血清盘
项目 HBsAg
规格 支数/套 0.5ml/支 40
抗HCV 0.25ml/支 40
梅毒螺旋体 0.5ml/支 40 抗体
免疫测定室内质控血清的应用
免疫测定用室内质控血清的调整
随着临床实验室检验水平的不断提 高和检测试剂质量的不断改进，原有的室 内质控物已经不能满足室内质控工作的需 要，因此部中心对免疫测定用室内质控血 清的含量进行了调整，同时改进了包装。
注意事项
• 室内质控物仅用于相应项目的室内质 量控制，不能用于阴阳性结果的判断。
梅毒螺旋体抗体血清盘
TP14
TP17
TP45
TP47
EUIgM
EUIgG
A (OD值)
B
C (OD值
)
D (OD值)
RP R
胶体金
1+
++ ++
+
0.09 0.736 3.199 27.35 3.776 3.604 ++ +++
4
++++ +
++++
++++
++++ ++
0.335
0.96
4.041 27.61 2.169
15 2.42 0.82 0.55 0.65 0.5 0.5 0.5 – – – –
梅毒螺旋体抗体血清盘
检测方法 1.检测非特异性抗体----使用类脂质抗
原的血清学试验 ：RPR、TRUST 2.检测特异性抗体----使用密螺旋体抗
原的血清学试验：FTA-ABS、TPHA、 TPPA 、ELISA 、WB
抗HCV ELISA出现假阳性的主要原因有：
1.类风湿因子（RF）的干扰 2.高免疫球蛋白血症 3.标本中超氧化物歧化酶（SOD）的干扰 4.用于固相包被的HCV基因工程抗原不纯
抗HCV血清盘
样本 A
B
C
D
E
编号
FG
RIBA
NS4 NS3 C NS5
28 1.22 1.87 0.65 0.78 0.77 0.67 <0.3 –
+
±
+
33 7.83 11.9 6.32 4.28 6.2 4.76 0.62 ± ++ – –
34 0.92 0.68 0.61 0.84 1.14 0.65 <0.3 +
+
–
±
35 6.41 4.11 1.86 2.99 2.81 2.04 0.34 –
+
+
–
38 1.6 2.06 1.86 0.68 1.68 2.05 1.38 ± + ± ±
2.006
++
+++
7
++++ +
++++
++++
++++ ++
0.256
1.12
0.654 31.24 1.215
0.978
++
+++
23
++++ +/-
++++
++++ +/-
++++ +
0.225
1.13
3.948 30.24 1.897
1.367
+
+++
33 +
+
+
++ 0.160 0.082 1.329 0.90 0.027 0.662 +