分子生物学大实验报告
分子生物学综合大实验实验报告
分子生物学综合大实验实验报告分子生物学综合大实验实验报告外源基因SOC1的扩增和重组载体的构建与筛选班级姓名学号实验目的通过PCR技术克隆外援基因SOC1的目的片段。
通过质粒提取，酶切和连接技术，把SOC1基因重组进TA克隆载体并完成筛选。
实验用品材料：植物叶片，TA克隆载体试剂：DNA提取液（1L）TE缓冲液；琼脂糖；核酸染料；；DNAmarker；6×上样缓冲液（0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、30%甘油）、DNA聚合酶、dNTP、上下游引物器材：研钵，恒温水浴，离心机，离心管，PCR仪、生化培养箱、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统，去离子水、超净工作台，低温台式离心机，分光光度计，水浴锅，高压灭菌锅，酒精灯等。
实验原理通过配制DNA提取液，利用研磨法获得DNA模板，然后采用PCR技术扩增基SOC1基因获得目的片段，然后通过酶切和连接方法把SOC1基因连接到TA载体上。
大肠杆菌感受态细胞中加入质粒，则质粒DNA与Ca2+形成的复合物粘附于细胞表面，经过42℃短暂的热激处理后，DNA与Ca2+形成的复合物进入大肠杆菌细胞，在不含抗生素的培养基中短暂培养，使转入大肠杆菌质粒上的抗生素抗性基因表达，在含相应抗生素的选择培养基上可将转化菌（含质粒）与未转化细菌分开，转化细菌经过不断分裂增殖形成菌落，而未转化的细菌则不能。
并通过氨苄抗性筛选获得重组子实验方法步骤1、植物基因组DNA的小量提取（1）剪取新鲜幼嫩的植物叶片1~2片于1.5 mL离心管中.（2）先加入少量的DNA提取液100 μL，用研磨棒充分研磨尽量避免提取液溅出。
（3）再加入600 μL的DNA提取液，使DNA提取液的总体积为700μL，上下颠倒混合均匀。
（4）放入高速离心机4℃条件下12 000 rpm离心15 min。
（5）取上层水相，移入标有相应序号的新的离心管中，加入600 μL的异丙醇（与加入DNA 提取液的总体积相同），上下颠倒混匀。
分子生物学实验总结报告
实验总结报告摘要1、通过PCR 扩增，琼脂糖凝胶电泳回收得到外源基因parb,进行BglⅡ和Xba I 双酶切；抽提质粒pIJ86601，进行BamH I和Xba I 双酶切；将两者的酶切产物通过连接转化，培养后抽提质粒进行电泳，测序，检测重组质粒是否构建成功。
测序结果显示未构建成功。
2、用相同的方法构建表达载体PGEX-sco3330，由于时间问题尚未完成。
3、诱导蛋白表达，蛋白纯化，蛋白脱盐，bradford法进行蛋白含量测定以及SDS-PAGE电泳和免疫印迹试验（Western Blotting）。
实验内容：一、构建质粒pIJ86601-parb(一)获取外源基因parb1.PCR扩增PCR体系：200µl体系中，高保真pfuDNA聚合酶10X buffer，40 µl；10mM Mixed dNTP，5 µl；PrimerA，5 µl；PrimerB，5 µl；高保真pfu酶，2 µl；DMSO，20 µl；双蒸水，120 µl；模板1μl。
PCR程序设定Temp[℃] Time next turns Gradient[℃]1: 98.0 10min2: 98.0 30S3: 60.0 30S 30.04: 72.0 30S 2 3 45: 72.0 10min6:16.0 1h2.琼脂糖凝胶电泳切胶回收目的DNA1)通过电泳将目的片段与其他DNA尽可能分开,然后用干净的手术刀割下含需回收DNA的琼脂块,放入1.5ml离心管中。
2)按每300µl/100mg的比例加入Binding Buffer,置于50-60℃水浴中10分钟,使胶彻底融化。
加热融胶时，每2分钟混匀一次。
3)将融化的胶溶液转移到套放在2ml收集管内的UNIQ-10柱中，12,000rpm室温离心2 min。
4)取下UNIQ-10柱,倒废液，将柱放回同一收集管, 加入500µl WashSolution,12,000 rpm室温离心30秒。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告
实验目的：
通过本次实验，我们旨在探究DNA复制、基因表达和蛋白质合成等分子生物学的基本原理，加深对分子水平生物学过程的理解，培养实验操作技能和科学思维能力。
实验材料与方法：
1. 实验材料：大肠杆菌（E. coli）细菌菌斑、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、琼脂糖电泳试剂、PCR扩增仪、电泳仪等。
2. 实验步骤：
a. DNA提取：取一支含E. coli细菌菌斑的移液管，用DNA提取试剂盒提取DNA。
b. PCR扩增：将提取的DNA加入PCR试剂盒中进行PCR扩增反应。
c. 原核表达：将扩增后的DNA片段转入大肠杆菌进行原核表达。
d. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品加入琼脂糖凝胶，通过电泳进行蛋白质分子量的分离。
实验结果与分析：
1. DNA提取：成功提取到E. coli细菌的DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳观察到DNA的带型。
2. PCR扩增：成功扩增出目标DNA片段，并经过验证测序结果正确。
3. 原核表达：大肠杆菌成功表达了目标蛋白质，通过SDS-PAGE电泳观察到目标蛋白质的条带。
4. SDS-PAGE电泳：观察到蛋白质的分子量差异，验证了蛋白质的分离效果。
结论与讨论：
通过本次实验，我们成功实现了DNA提取、PCR扩增、原核表达和蛋白质分离等分子生物学实验步骤，从而全面了解了分子生物学过程的基本原理。
实验结果表明，实验操作规范，结果可靠，为今后的科研工作和实验基础奠定了坚实的基础。
同时，也发现了实验中的一些不足之处，提出了改进的建议，为进一步的研究工作提供了参考。
参考文献：
无。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告重组质粒的pcr验证（目的基因的pcr扩增）姓名:xxx学号：xxx专业：xxx界别：xxx同组者：xxxx一．实验目的（1）自学掌控pcr反应的基本原理和实验技术。
（2）了解引物设计的基本要求。
1.pcr基本原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，简称pcr，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增dna，类似dna的细胞内复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链dna变性为单链dna、单链dna能与引物复性（退火）成为引物-dna单链复合物、以及在dntps存在下dna聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链dna（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个pcr循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的dna片段。
pcr技术的基本原理类似dna的天然激活过程，其特异性依赖与靶序列两端优势互补的寡核苷酸引物。
pcr由变性--淬火--延展三个基本反应步骤形成：①模板dna的变性：模板dna经加热至90~95℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板dna与引物的淬火(复性)：模板dna经冷却变性成单链后，温度降到55℃左右，引物与模板dna单链的优势互补序列接合融合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的复制链。
经过“变性—淬火—延展”三个过程就可以赢得代莱dna分子，而且这种崭新dna分子又可以沦为下次循环的模板。
因此，变性、淬火和延展循环反复25~30次后，即可从少量的模板dna中扩充出来大量的目的产物。
pcr引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列，因此，引物的优劣直接关系到pcr的特异性与成功与否。
分子生物学实训报告
一、实训背景分子生物学是研究生物大分子如蛋白质、核酸的结构与功能的一门学科。
随着生命科学技术的不断发展，分子生物学在医学、农业、环境保护等领域发挥着越来越重要的作用。
为了更好地理解和掌握分子生物学的基本理论和技术，我们开展了为期两周的分子生物学实训课程。
本次实训旨在通过实际操作，加深对分子生物学理论知识的理解，提高实验技能，培养科研素养。
二、实训目的1. 熟悉分子生物学实验室的基本操作规程和安全规范。
2. 掌握DNA提取、PCR扩增、酶切、电泳等分子生物学实验技术。
3. 理解基因克隆、基因表达、蛋白质分析等分子生物学实验原理。
4. 提高团队协作和沟通能力，培养科研素养。
三、实训内容1. 实验室基本操作与安全规范（1）熟悉实验室布局，了解各种仪器的使用方法。
（2）学习实验室安全操作规程，掌握实验室废弃物处理方法。
（3）进行实验前的准备工作，如配制试剂、消毒、无菌操作等。
2. DNA提取（1）了解DNA提取的原理和常用方法。
（2）学习酚-氯仿法提取DNA。
（3）对提取的DNA进行质量检测，如A260/A280比值、琼脂糖凝胶电泳等。
3. PCR扩增（1）了解PCR扩增的原理和步骤。
（2）设计PCR引物，进行PCR反应。
（3）对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
4. 酶切（1）了解酶切原理和酶切反应条件。
（2）学习限制性内切酶的用法。
（3）进行酶切反应，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
5. 电泳（1）了解电泳原理和电泳技术。
（2）学习琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等电泳技术。
（3）对DNA、蛋白质等生物大分子进行电泳分离和检测。
6. 基因克隆、基因表达、蛋白质分析（1）了解基因克隆、基因表达、蛋白质分析的基本原理。
（2）学习相关实验技术，如载体构建、重组表达、蛋白纯化等。
（3）对克隆的基因、表达的蛋白进行检测和分析。
四、实训过程1. 实验前准备（1）查阅相关文献，了解实验原理和操作步骤。
（2）配制实验试剂，确保实验用品齐全。
现代分子生物学实习报告
实习报告现代分子生物学实习报告一、实习目的与背景本次实习旨在通过实际操作，加深对现代分子生物学理论的理解，掌握分子生物学实验技能，培养实验设计和解决问题的能力。
分子生物学是生物学领域的一个重要分支，它涉及到生物大分子的结构、功能和相互作用。
随着科学技术的不断发展，分子生物学在生物科学研究和生物产业中发挥着越来越重要的作用。
二、实习内容与过程1. 实习内容本次实习主要包括以下内容：DNA提取、PCR扩增、DNA测序、基因克隆、蛋白质表达和纯化等。
2. 实习过程（1）DNA提取首先，我们使用了酚-氯仿法提取基因组DNA。
将适量的植物组织放入研钵中，加入一定的石英砂和缓冲液，充分研磨。
将研磨好的组织混合物转移到离心管中，加入酚-氯仿混合液，充分振荡后放置一段时间，使DNA与蛋白质等物质分离。
然后，在离心机中进行离心，取上清液，加入适量的异丙醇，沉淀DNA。
最后，用70%的酒精洗涤DNA沉淀，晾干后加入适量的TE缓冲液溶解。
（2）PCR扩增接下来，我们使用了PCR技术扩增目的基因。
首先，设计引物，引物应覆盖目的基因的两端。
然后，将提取的DNA作为模板，加入引物、dNTPs、Taq酶等反应物，进行PCR反应。
PCR反应包括变性、退火和延伸三个阶段。
最后，通过琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。
（3）DNA测序为了验证PCR产物的准确性，我们进行了DNA测序。
将PCR产物送至生物公司进行测序，测序结果通过生物信息学软件进行分析，确定目的基因的正确性。
（4）基因克隆将测序正确的目的基因克隆到载体中，然后将载体转化到宿主细胞中。
通过筛选和鉴定，获得含有目的基因的克隆细胞。
（5）蛋白质表达和纯化最后，我们对目的基因进行了蛋白质表达和纯化。
首先，设计合适的表达载体，将目的基因插入到载体中。
然后，将载体转化到宿主细胞中，诱导蛋白质表达。
表达后的蛋白质通过凝胶过滤层析、离子交换层析等方法进行纯化。
三、实习收获与体会通过本次实习，我对现代分子生物学实验技术有了更深入的了解，掌握了实验操作技能，培养了自己的实验设计和解决问题的能力。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验目的：探究基因在DNA复制过程中的作用及其表达机制。
实验材料与方法：材料：1. DNA模板：提取自大肠杆菌细胞中的质粒DNA。
2. DNA聚合酶：用于合成新的DNA链。
3. 引物：用于DNA聚合酶的引导和定向合成DNA。
4. dNTPs：脱氧核苷酸三磷酸盐，提供新的核苷酸单位供DNA聚合酶使用。
方法：1. DNA复制反应：将DNA模板、DNA聚合酶、引物和dNTPs混合在一起，加入适量缓冲液和镁离子，并在适温条件下进行DNA复制反应。
2. DNA扩增：通过PCR技术，利用引物的特异性，从DNA模板中扩增目标序列。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离和检测PCR产物，通过电泳迁移率差异判断扩增产物的大小。
实验结果：1. DNA复制反应成功进行，获得了新的DNA链。
2. PCR反应成功扩增目标序列，观察到明显的放大带。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示PCR产物的大小符合预期。
实验分析与讨论：本实验通过模拟DNA的复制过程，成功合成了新的DNA链，并通过PCR技术扩增了目标序列。
这一结果验证了基因在DNA复制过程中的作用。
在DNA复制过程中，DNA聚合酶是关键的酶类。
DNA聚合酶能够识别DNA的模板链，并根据模板链的信息合成新的互补链。
在实验中，添加了引物和dNTPs，引物可以定向和引导DNA聚合酶的合成，dNTPs则提供了能量和碱基单位，支持DNA聚合酶的复制活动。
PCR技术是一种重要的生物分子技术，其通过引物的特异性识别和引导，扩增目标序列。
实验中，选择了适当的引物序列，使其能够与目标序列特异性地结合，并保证扩增反应的特异性和选择性。
PCR反应可以在短时间内扩增大量的目标DNA序列，为后续的分析和研究提供了足够的样品。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过电场驱动DNA分子在凝胶中迁移，根据分子大小的差异来判断扩增产物的大小。
在实验中，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出明显的PCR产物带，与预期的目标序列大小相符，说明PCR扩增反应成功，目标序列得到了扩增。
生物大分子实验报告
高级生物化学与分子生物学综合实验报告一、实验目的以特定酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达和纯化为主线，进行基因操作、蛋白质表达、亲和层析纯化等的训练，通过集中训练熟练生物化学和分子生物学实验操作，为独立开展研究生课题研究奠定实验基础。
二、实验原理利用基因重组技术，将目的基因与载体质粒DNA在体外进行重组，然后把这种重组DNA转化到感受态细胞，通过一定的诱导条件，使之在受体细胞内增值表达相应的目标蛋白。
为了得到相应的目标蛋白，需要通过亲和层析等手段纯化目标蛋白。
三、实验内容一）内容一：重组质粒的分离、鉴定与转化实验1. 重组质粒的分离、纯化及检测实验2. 质粒的酶切及琼脂糖凝胶电泳回收实验3. 感受态细胞的制备、连接与转化二）内容二：重组蛋白在大肠杆菌中的表达实验4. 细菌的大量培养及重组蛋白的诱导三）内容三：重组蛋白的提取、纯化与鉴定实验5. 细菌的收集、破碎与目标蛋白的纯化实验6. 目标蛋白的SDS-PAGE鉴定实验1 质粒DNA的分离、纯化及检测材料、设备及试剂一、材料转化的细菌，1.5ml塑料离心管,离心管架。
二、设备微量取液器(20μl,200μl,1000μl)，台式高速离心机，恒温振荡摇床，高压蒸汽灭菌锅，涡旋振荡器，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置和恒温水浴锅等。
三、试剂1. LB液体培养基(Luria-Bertani) ：称取蛋白胨(Tryptone)5 g，酵母提取物(Yeast extract)2.5g，NaCl 5g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调pH至7.5, 加去离子水至总体积500 mL，高压下蒸气灭菌20分钟。
2. LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉，高压灭菌。
3. 氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)母液：配成 50mg/ml水溶液, -20℃保存备。
4. 质粒提取试剂盒。
操作步骤1. 细菌的培养和收集将含有质粒的菌种用无菌牙签挑取平板上的单菌落接种到2-5ml LB液体培养基(含50μg/ml Amp)中，37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。
分子生物学综合实验报告
分子生物学综合试验报告综合实验Ⅰ.Southern杂交（质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、地高辛标记的Southern杂交）一.实验目的1.学习Southern杂交的原理及操作方法。
2.学习碱裂解法提取质粒的原理。
3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。
4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。
二.实验原理利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=4.8的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。
PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。
每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。
DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。
DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。
最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。
对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。
一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。
通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。
分子生物学实验报告全解(有图有真相)
分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常用的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验二从 cDNA 文库中靶片断扩增（ 4h ）一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。
2.掌握移液枪和PCR 仪的基本操作技术。
二、实验原理：PCR 技术，即聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR）。
经典的PCR 过程包括：变性（denaturing step ）、退火（annealing step ）和延伸（extension step ）三个步骤。
变性过程，即在高温94℃ ~98 ℃下，模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之形成两条单链ssDNA 。
随后，模板DNA 与引物的退火（复性）过程中，温度降至55℃左右，特异序列的引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；之后，引物的延伸过程，DNA 模板-引物结合物在耐热的DNA 聚合酶（如：Taq 酶）的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4 分钟，2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR 反应的成分和作用：总体积：一般为25μ l ～100 μl（一）无Mg2+buffer ：由纯水、kcl 、Tris 组成。
Tris 用于调节反应体系pH 值，使Taq 酶在偏碱性环境中反挥活性。
kcl 可降低退火温度，但不能超过50 mmol/L ，否则会抑制DNA 聚合酶活性。
（二）Mg2+: 终浓度为 1.5 ～ 2.0mmol/L ，其对应dNTP 为200 μ mol/L ，注意Mg2+ 与dNTPs 之间的浓度关系，由于dNTP 与Taq 酶竟争Mg2+ ，当dNTP 浓度达到 1 mmol/L 时会抑制Taq 酶的活性。
Mg2+能影响反应的特异性和产率。
分子医学实验实验报告
一、实验名称分子生物学实验：基因表达调控研究二、实验日期2023年3月20日三、实验目的1. 了解基因表达调控的基本原理和方法；2. 掌握分子生物学实验操作技术；3. 研究特定基因在不同条件下的表达调控情况。
四、实验原理基因表达调控是指生物体内基因转录和翻译过程中，通过一系列分子机制对基因表达水平进行精确调控的过程。
本实验采用实时荧光定量PCR技术，检测特定基因在不同条件下的表达水平，以研究其表达调控机制。
五、主要仪器与试剂1. 仪器：实时荧光定量PCR仪、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等；2. 试剂：DNA模板、引物、PCR反应试剂、实时荧光定量PCR试剂、DNA提取试剂盒等。
六、实验步骤1. DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取细胞总DNA；2. 引物设计：根据基因序列设计特异性引物；3. PCR扩增：以提取的DNA为模板，进行PCR扩增；4. 实时荧光定量PCR：将PCR产物进行实时荧光定量PCR，检测基因表达水平；5. 数据分析：分析实时荧光定量PCR结果，比较不同条件下基因表达水平的差异。
七、注意事项1. DNA提取过程中，应避免DNA降解；2. 引物设计应保证特异性，避免非特异性扩增；3. PCR扩增过程中，应控制好反应条件，避免假阳性结果；4. 实时荧光定量PCR过程中，应严格控制反应条件，保证数据准确性。
八、实验结果1. DNA提取：成功提取细胞总DNA；2. 引物设计：设计特异性引物；3. PCR扩增：成功扩增目的基因；4. 实时荧光定量PCR：检测到目的基因在不同条件下的表达水平差异。
九、讨论1. 实验结果表明，目的基因在不同条件下具有不同的表达水平，表明基因表达受到多种调控因素的影响；2. 通过实时荧光定量PCR技术，成功研究了目的基因的表达调控机制，为后续研究提供了实验依据；3. 本实验采用的技术手段较为成熟，为分子生物学实验提供了参考。
十、实验结论1. 成功提取细胞总DNA，设计特异性引物；2. 实时荧光定量PCR技术成功检测到目的基因在不同条件下的表达水平差异；3. 本研究为基因表达调控研究提供了实验依据，为进一步研究提供了参考。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】分子生物学实验报告专业：******班级：***指导老师：**学生姓名：***目录：实验一质粒DNA的小量制备实验二DNA的含量、纯度与分子量的电泳法测定实验三感受态细胞的制备及转化实验四PCR扩增技术与琼脂糖凝胶电泳检测分子生物学基础实验分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。
为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。
它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。
实验一质粒DNA的小量制备一、实验原理要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。
载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。
作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。
细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。
质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。
质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。
分子生物学试验报告
分子生物学实验报告实验一真核基因组DNA的制备与分析一、实验步骤1、材料处理（1）取0.5cm的老鼠尾巴组织块，用生理盐水洗净，剪碎至糜状。
（2）将上述组织碎末加入盛有500uL裂解液的2mL离心管中，37℃水浴1h。
2、用蛋白酶K和苯酚处理细胞裂解液（1）加50uL蛋白酶K，温和的将酶混入粘滞的溶液中。
（2）将裂解细胞的悬浮液置于55℃水浴3h，不时的温和旋动该粘滞溶液，至看不到明显的组织块为止。
（3）将溶液冷却至室温，加500uL的Tris平衡酚，缓慢的来回颠倒离心管至两相混合形成乳浊液，于室温以5000g离心10min，使两相分开。
（4）用大口径移液管将上层粘稠的水相移到一洁净的离心管中，用酚重复抽提2次。
（5）第三次酚抽提后，将水相移至另一离心管中，于室温加100uL的10M乙酸铵和1000uL 的乙醇，转动离心管使溶液充分混合，DNA立即形成沉淀，通常可用吸管将沉淀从乙醇溶液中移除。
如果DNA沉淀为碎片，则与室温离心收集。
（6）DNA沉淀用70%的乙醇洗涤，离心收集。
将离心管于室温下放置实验台上，直至乙醇挥发殆尽。
不要使DNA沉淀完全干燥，否则极难溶解。
（7）待沉淀将近透明后加适量的TE溶解DNA，通常需要12-24小时使DNA完全溶解，将DNA 溶液存于4℃.3、DNA琼脂糖凝胶电泳检测（1）制备0.6%的琼脂糖凝胶。
（2）取适量DNA样品，与凝胶上样缓冲液混合，加至上述凝胶上样孔内。
（3）取适量标准DNA溶液同样加至凝胶上样孔内。
（4）电泳，电压为1V/cm，距离以阳极至阴极为准。
（5）电泳结束后，将凝胶放入含溴化乙锭（0.5ug/mL）的水中室温浸染10min，用紫外灯观察凝胶和照相。
二、实验结果如上图所示，基因组DNA在0.6%琼脂糖凝胶上跑出30kb左右的单一条带（λDNA/Hin d III Marker），但有个别组的样没有明显的条带出现。
三、结果分析提取的基因组DNA片段只有30kb左右，偏小。
分子生物学检验实习报告
一、实习背景分子生物学检验是现代医学检验的重要分支，通过分子生物学技术对生物大分子进行定性和定量分析，为疾病的诊断、治疗和预防提供科学依据。
为提高自身专业技能，本人于2022年8月至2023年8月在XX医院分子生物学检验科进行了为期一年的实习。
二、实习目的1. 熟悉分子生物学检验的基本原理和操作技术；2. 掌握实验室管理、生物安全等相关知识；3. 培养严谨的工作态度和团队协作精神；4. 提高临床应用能力和综合素质。
三、实习内容1. 实习期间，我主要参与了以下工作：（1）学习分子生物学检验的基本原理，包括DNA、RNA的提取、纯化、扩增、检测等；（2）掌握PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR等分子生物学技术；（3）熟悉基因测序、基因芯片等高通量检测技术；（4）参与临床样本的接收、处理、检测和结果分析；（5）协助带教老师进行实验室管理、生物安全管理等工作。
2. 在实习过程中，我重点学习了以下内容：（1）DNA、RNA的提取：掌握了不同来源样本的DNA、RNA提取方法，包括酚-氯仿法、试剂盒法等；（2）PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR：熟悉了PCR原理、操作步骤和结果分析，掌握了实时荧光定量PCR技术；（3）基因测序：了解了基因测序的基本原理、操作流程和数据分析方法；（4）基因芯片：学习了基因芯片的原理、应用和数据分析方法；（5）实验室管理：了解了实验室安全管理、生物安全管理等相关知识。
四、实习收获1. 技术能力：通过实习，我掌握了分子生物学检验的基本原理和操作技术，能够独立进行PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR等实验操作，为今后的工作打下了坚实的基础。
2. 理论知识：实习期间，我深入学习了分子生物学、遗传学等相关理论知识，提高了自己的综合素质。
3. 实践能力：通过参与临床样本的检测和结果分析，我提高了自己的临床应用能力，为今后从事相关工作积累了宝贵经验。
4. 团队协作：在实习过程中，我学会了与同事沟通、协作，共同完成工作任务，培养了团队精神。
检验科实习报告分子生物学
检验科实习报告：分子生物学在过去几个月的实习期间，我有幸参与了检验科分子生物学实验室的工作，从中获得了丰富的实践经验和专业知识。
在此期间，我深刻体会到分子生物学在临床诊断和疾病研究中的重要性，并逐步掌握了相关检验技术。
一、实习内容1. 熟悉实验室设备和工作流程在实习初期，我在导师的指导下，了解了实验室的基本设备和工作流程。
通过学习，我熟悉了分子生物学实验室的各种仪器设备，如PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪等，并掌握了它们的使用方法。
同时，我还学习了实验室的安全操作规程，确保实验过程中能够严格遵守。
2. 学习分子生物学检验技术在实习过程中，我学习了多种分子生物学检验技术，如聚合酶链反应（PCR）、基因测序、基因芯片等。
通过实际操作，我了解了这些技术在临床诊断和疾病研究中的应用，并掌握了实验操作要领。
3. 参与科研项目在实习期间，我参与了实验室的一个科研项目，研究某疾病的分子诊断方法。
在项目中，我负责部分实验操作，如样本提取、PCR扩增、电泳分析等，并协助导师分析实验数据。
通过参与项目，我提高了自己的实验能力和科研素养。
4. 参加培训和学术讨论为了拓宽知识面，提高自己的专业素养，我参加了实验室组织的培训和学术讨论。
通过培训，我学习了实验室质量控制、实验数据处理等知识。
在学术讨论中，我了解了最新的分子生物学研究进展，并与同事们交流了实验经验。
二、实习收获1. 提高了实验技能通过实习，我掌握了分子生物学实验室的基本操作技能，如样本提取、PCR扩增、电泳分析等。
这些技能为我今后从事相关领域的研究和工作打下了坚实基础。
2. 增强了科研能力参与科研项目的过程使我学会了如何设计实验、分析数据和撰写实验报告。
这些科研经验将对我今后的工作和学术发展产生积极影响。
3. 拓展了知识面实习期间，我了解了分子生物学在临床诊断和疾病研究中的应用，并学习了最新的研究进展。
这使我对分子生物学领域的知识有了更全面的了解。
4. 培养了团队合作精神在实习过程中，我与实验室的同事们共同完成各项任务，学会了团队合作和沟通。
分子生物学实验
分子生物学实验报告一.实验内容1.基因组的获取DNA/RNA的提取和电泳2.将基因组进行PCR扩增,电泳3.将DNA电泳片断切胶回收4.扩增,回收后进行连接载体（PMD18 puc18 载体）A.B片断比例1:25.转化连接的片断转化到感受态细菌中二.实验目的1.基因组的获取:掌握最常用的提取基因的方法，了解琼脂糖电泳的基本原理，掌握基本的操作方法2.PCR过程:了解反转录PCR(RT-PCR)的基本原理,并掌握RT-PCR的基本操作过程3.切胶回收:了解分离纯化DNA片段中的污染物方法和原理4.连接载体:学习提取基因工程菌中运载基因的载体，掌握最常用的体躯质粒DNA的方法5.转化:以质粒转化感受态细胞为例，学习转化的基本原理及方法6.主要目的：通过掌握质粒的提取、RNA的提取、RT-PCR技术、琼脂糖凝胶电泳以及胶回收、DNA的转化和酶切等实验，将这些实验连成一片，掌握一套验证目的基因功能的流程。
三.实验原理1.基因组的获取①DNA提取本实验采用碱裂解法进行质粒的小量制备。
十二烷基磺酸钠（SDS SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。
用SDS 处理细菌后，会导致细菌细胞破裂，释放出质粒DNA 和染色体DNA 。
两种DNA 在强碱环境都会变性。
当加入pH4.8 的酸性乙酸钾降低溶液pH 值后，质粒DNA 将迅速复性，而染色体DNA 分子巨大，难以复性。
通过离心，大部分细胞碎片、染色体DNA 、RNA 及蛋白质沉淀（SDS 的作用下）除去，而质粒DNA 留在上清中。
再用异丙醇沉淀、乙醇洗涤，可得到纯化的质粒DNA 。
②RNA提取Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
TRIzol的主要成分是酚。
主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。
酚虽可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。
分子生物学实习报告总结
分子生物学实习报告总结篇一:2012年分子生物学组实习小结分子生物学室实习报告前言分子诊断学作为一门新兴的学科，在疾病的诊断、疗效监测等多方面都逐渐扮演起了重要的角色，但真正能很好的将分子生物学诊断信息运用好的医务工作者还只是少数，不少医生目前仍对传统的检验项目的临床意义和可信度仍然怀有质疑的态度，更不用说一些刚发展起来的检验项目。
因此检验专业的实习生不仅要掌握分子诊断学常用检验项目的原理、方法，更应该孰知其临床意义，更好的与临床进行沟通，才能更好的运用先进的检验诊断技术为患者服务。
实习目的: 熟悉分子室常规的检查项目，掌握标本的签收和处理，掌握PCR的原理，核酸(DNA和RNA)的提取，PCR仪的使用，熟悉核酸杂交的原理和操作方法及杂交仪的使用。
了解各检测项目的临床意义。
1实习内容:1(HBV DNA检测(定性和定量)、HCV RNA检测(定量):核酸提取是扩增前最主要的步骤，每个环节都要注意防止交叉污染。
主要步骤:每个EP管加100微升DNA浓缩液，再加100微升待测血清，震荡混匀，离心12000rpmx10min，用加样枪弃上清，加30微升DNA提取液，震荡，金属浴(100?)10min，离心12000 rpmx5min。
提取后，配试剂，加样，扩增1h45min，扩增仪型号为7300。
分析结果。
注意，金属浴过程中，金属浴箱要盖上，每个EP管要盖严，防止加热过程中发生爆管，造成实验室的污染。
若发生爆管，详细记录好发生爆管的标本编号，爆管发生的原因，时间等情况。
HSV-II型病毒DNA检测(定量)、HPV病毒(6、11型和16、18型)DNA检测(定量)的标本均为分泌物，标本加生理盐水，震荡，取1ml至EP管，离心12000rpmx5min，弃上清，注意沉淀易漂起，不要讲沉淀弃掉，加50微升DNA 提取液，震荡，金属浴(100?)10min。
然后配试剂，加样，扩增1h20min，PCR仪为7600。
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分子生物学实验：专业：学号：目录实验一细菌培养实验二质粒DNA提取实验三琼脂糖凝胶电泳实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验五聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA 实验六地高辛标记的Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常用的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。
加入去离子水至总体积为lL，在15 lbf／in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20分钟。
这样得到是LB液体培养基。
LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。
（二）细菌的培养（１）在液体培养基中培养1.过夜培养（1）先在LA液体培养基中加入氨苄青霉素，50μl/50ml。
（2）取3~4ml液体培养基加入一只无菌的试管中。
（3）用接种环或灭菌牙签挑一个单菌落，接种于培养液中。
（4）盖好试管，在摇床上以60r/min速度，于37℃过夜培养。
２.大体积培养（1）按1∶100（V/V）的比例将过夜培养物加入到一无菌烧瓶中，烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。
（2）于37℃，约200r/min剧烈摇动培养。
（２）在固体培养基中培养细菌在固体培养基上培养主要是为了获得单菌落和短期保存。
平板划线法分离单菌落（1）采用无菌技术，用接种环将接种物从平板的一侧开始划线。
（2）重新消毒接种环，从第一划线处将样品划线至平板的其余部分，重复划线直至覆盖整个平板。
（见下图）（3）于37℃培养直至长出单菌落。
五、实验结果与讨论LB液体培养基是淡黄色清液，接种大肠杆菌过夜培养后，若有细菌生长，则培养基变浑浊（说明菌体复生长）。
本次实验成功得到大肠杆菌培养液。
实验二质粒DNA的提取一、目的学习碱裂解法提取质粒的原理二、原理质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，具有双链闭环结构的DNA分子。
它具有自主复制能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
目前，经人工改造的质粒已广泛用作基因工程中目的基因的运载工具——载体。
质粒DNA的提取是依据质粒DNA分子较染色体DNA分子小，且具有超螺旋共价闭合环状的特点，从而将质粒DNA与大肠杆菌染色体DNA分离。
现在常用的方法有：碱裂解法、密度梯度离心法、煮沸裂解法等。
实验室普遍采用的碱裂解法具有操作简便、快速、得率高的优点。
其主要原理：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=4.8的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料含质粒的大肠杆菌DH5α（二）试剂1. LB液体培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，溶解于1000mL蒸馏水中，用NaOH调pH至7.0。
高压灭菌20分钟。
2. LB平板培养基：在每1000mL LB液体培养基中中加入15g琼脂，高压灭菌20分钟。
（三）仪器1. Eppendorf管、离心管架2. 10，100，1000μl微量加样器3. 台式高速离心机4. 摇床、高压灭菌锅四、操作步骤（一）培养细菌将带有质粒的大肠杆菌接种于LB平板培养基上，37℃培养24小时，然后从平板上挑取单菌落，接种于5ml液体培养基中，37℃培养12小时。
（二）提取步骤1、柱平衡步骤：向吸附柱CP3 中（吸附柱放入收集管中）加入500μL 的平衡液BL，12,000rpm（~13,400×g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2、取1-5 mL 过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，10000rpm（~13,400×g）离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL 溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
【现象：均匀振荡，直至看不见菌块，菌液变为乳白色。
注意：如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低】4、向离心管中加入250μL 溶液P2，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。
【现象：此时菌体裂解，菌液变得清亮粘稠。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA断裂片段。
该步骤操作应快，所用时间不超过5分钟，以免质粒受到破坏。
如果未变得清亮，可能是由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
】5、向离心管中加入350μL 溶液P3，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。
12,000rpm（~13,400×g）离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
【现象：产生白色絮状物。
注意：P3加入后应立刻混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
】6、将上一步收集的上清液（只转移800μL上清液）用移液器转移到吸附柱CP3 中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。
12,000rpm（~13,400×g）离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3 放入收集管中。
7、向吸附柱CP3 中加入600μL 漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm （~13,400×g）离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3 放入收集管中。
8、重复操作步骤7。
9、将吸附柱CP3 放入收集管中，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
【漂洗液中的乙醇残余会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
为确保下游实验不受残留乙醇的影响，将吸附柱CP3开盖，置于超净工作台上风干五分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
】10、将吸附柱CP3 置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100μL 洗脱缓冲液EB，室温放置2 min，12,000rpm（~13,400×g）离心2min 将质粒溶液收集到离心管中。
(三) 琼脂糖凝胶电泳法检测提取的质粒DNA五、实验结果与分析注：泳道5为Ladder，最上方条带为2kb分析：由结果与Ladder比对可知，成功提取出3.5kb的质粒。
六、讨论（一）P1，P2，P3的成分P1：葡萄糖（提供渗透压，避免细胞破裂），RNA酶，盐酸，EDTA（螯合出核酸酶的金属离子，避免DNA被降解）P2：SDS（一种去污剂，易起泡，溶解细胞膜），NaOH（碱性物质，促进肽聚糖水解，帮助裂解细胞膜）P3：醋酸和醋酸钾，PH≈4.8~5.2（二）P1，P2，P3的作用P1：起着悬浮细菌的作用,PH值为中性。
P2：起着裂解细菌的作用,为碱性,这一步又称为碱裂解。
P3为酸性,中合P3.P2加了一倍,P3也加一倍,同样起到中和的作用.当然,如果你用试剂盒提,最后离心上柱的液体量会多一些,一次加不完可两次加入.电泳时在样品中加入溴酚蓝的目的，以及在溴酚蓝中加入甘油和蔗糖的原因1、加入溴酚蓝的目的:（1）溴酚蓝呈蓝色，而蛋白质是白色，在凝胶中不明显。
（2）溴酚蓝的相对分子量比蛋白质(绝大部分)小，电泳时速度比蛋白质稍快，因此可用作指示。
（3）可以根据溴酚蓝电泳产生的蓝色条带位置判断电泳结束时间（一般当溴酚蓝跑到末端时停止电泳）。
若无溴酚蓝，不好把握蛋白质电泳到槽底的时间。
如果所有的蛋白质都电泳到了底部，就不能区别出其移动速度对应于相对分子质量的关系。
2、加入蔗糖和甘油的目的: 跑胶前都会在Buffer(缓冲器)里的，并要和样品充分混合，只是因为蔗糖和甘油比重大，可以使样品沉到点样孔中，在点样孔底部铺成一线，避免样品漂逸，从而可以最大限度地跑到胶里去，得到更好的实验结果。
实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA一.目的学习琼脂糖凝胶电泳，检测DNA的纯度，DNA的构型，含量以及分子量的大小。
二.原理琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中最常规的实验方法，它简单易行，只需少量的DNA就能检测。
其原理是溴化乙啶在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物；使得DNA发射的荧光，增强几十倍。
而荧光的强度正比于DNA的含量，如将已知浓度的标准样品做琼脂糖凝胶电泳的对照，就可比较出待测样品的浓度。
电泳后的琼脂糖凝胶块直接在紫外光下照射拍照，只需5~10ng DNA，就可以从照片上比较鉴别。
如肉眼观察，可检测到0.01~0.1ng的DNA。
在凝胶电泳中，DNA分子的迁移速度与分子量的对数值成反比。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应，前者由分子所带净电荷的多少而定，后者则主要与分子大小及构型有关。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电荷。
在电场中向着正极移动，在用电泳法检测DNA分子时，应当尽量减少电荷效应。
增加凝胶的浓度可以在一定程度上降低电荷效应，使得分子的迁移速度主要由分子受凝胶阻滞程度差异所决定，提高分辨率。