常用pH缓冲液
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资料]常用pH缓冲溶液的配制和pH值
常用pH缓冲溶液的配制和pH值
常用pH缓冲溶液的配制和pH值
一、常用溶液的配制
(一)溶液配制注意事项
1.药品要有较好的质量试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteed reagent,
G.R.)、分析试剂(Antalytical reagent,A.R.)化学纯(Chemical pure,C.P.)和实验试剂(Laboratory reagent,L.R.)等等。工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2.药品称量要精确。
3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在5.5~7.0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。
(二)0.067(1/15)Mol/L磷酸缓冲液
1.1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:称取磷酸二氢钾(KH
2PO
4
,A.R.)9.08g,
用蒸馏水溶解后,倾入1 000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1 000ml)。
2.1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制:称取无水磷酸氢二钠(Na
2HPO
4
,A.R.)
9.47g(或者Na
2HPO
4
·2H
2
O 11.87g)用蒸馏水溶解后,放入1 000ml容量瓶内,
再加蒸馏水稀释至刻度(1 000ml)。
3.按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法(单位:毫升)
(三)0.15Mol/L PB液
附表2 0.15Mol/LPB液配制法
Na 2HPO 4·2H 2O 分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含26.7g/L 。 Na 2HPO 4·12H 2O 分子量=358.22 0.15Mol/L 溶液含53.7g/L 。 NaH 2PO 4·H 2O 分子量=138.00 0.15Mol/L 溶液含20.7g/L 。 NaH 2PO 4·2H 2O 分子量=156.03 0.15Mol/L 溶液含23.4g/L 。
(四)0.2Mol/L PB 缓冲液 附表3 0.2mol/L PB 缓冲液配制法
0.2Mol/L Na 2HPO 4·2 H 2O 溶液35.61g/L
Na 2HPO 4·12 H 2O 溶液含71.64g/L
0.2Mol/LNaH 2PO 4·H 2O 溶液含27.60g/L
NaH 2PO 4·2 H 2O 溶液含31.21g/L
欲配0.1Mol/L PB 缓冲液则在0.2Mol/L PB 缓冲液的基础上加H 2O 稀释1倍即可。
欲配制PBS 液时,则在溶液中加0.85%的NaCl 溶液即可。
(五)无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS )
(0.15Mol/L PH 7.2)
NaCl 8.0g KCl 0.2g Na 2HPO 4 1.15g
(如为Na 2HPO 4·12H 2O ,则为2.89g )
KH 2PO 4 0.2g
将上述试剂依次溶于1 000ml 去离子水中,完全溶解后,115℃高压灭菌10min~15min ,存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗
涤细胞培养物。
(六)硼酸盐缓冲液(Borate saline buffer )
1.硼酸(H3BO 3)
0.2Mol/L 硼酸:硼酸12.37g 加水至1 000ml 。
2.硼砂(Na 2B 4O 7)
0.05Mol/L 硼砂:硼砂19.07g 加水至1 000ml 。 附表4 不同pH 的0.2Mol/L 硼酸缓冲液配制法
(七)巴比妥缓冲液
1.pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥钠 47.6g
蒸馏水 3 000ml
1.17N HCl 55.0ml
(1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水)
⑴ 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。
⑵ 加1.17 N HCl 55ml。
⑶ 用HCl调节pH到8.2,并加蒸馏水至4 265ml。
2.pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥 1.84g
巴比妥钠 10.30g
加蒸馏水至 1 000.00ml
3.pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥 1.66g
巴比妥钠 12.76g
加蒸馏水 1 000.00ml
(八)0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5
附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法
(九)三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液(Tris—HCl缓冲液)
不同pH,0.05Mol/L
25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl,加水稀释至100ml(见下表)
附表6 Tris—HCl缓冲液配制法
三羟甲基氨基甲烷(Tris)
分子量=121.14
0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷:Tris24.23g,加水至1 000ml。
0.1NHCl:取HCl8.6ml,加水至1 000ml。
(十)0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液
NaHCO
3
3.70g
Na
2CO
3
0.60g
溶于600.00ml蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。
(十一)甘油磷酸缓冲液
1.配制pH8.0磷酸缓冲液
0.1Mol/L Na
2HPO
4
94.50ml
0.1N NaH
2PO
4
5.50ml
混合即可
2.9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液。
用途:用于免疫荧光试验。