植物DNA提取
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来，以便进行进一步的研究。
以下是常用的植物DNA提取方法：1. CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种表面活性剂，可以溶解脂质，破坏细胞膜，从而释放DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入CTAB缓冲液中并进行润湿，然后加入蛋白酶，破坏细胞膜。
接下来，加入CTAB-蛋白酶混合液，室温静置，使DNA与CTAB结合。
之后，将混合液经过苯酚-氯仿提取，将DNA从其他组分中分离出来。
最后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
2. 硅胶柱法：硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入提取缓冲液中，并加入蛋白酶进行细胞壁降解。
接下来，将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上，使用重力流动分离DNA。
然后，使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。
最后，使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱，并收集纯化的DNA。
3. 高盐法：高盐法适用于粗提植物DNA。
首先，将植物样品细碎，加入高盐缓冲液中，其中含有高浓度的盐和蛋白酶。
高盐浓度可以破坏细胞膜，并使DNA 从蛋白质中解离出来。
然后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
4. 快速提取法：快速提取法是一种高效和便捷的方式，适用于大规模提取植物DNA。
首先，将植物样品经过快速研磨处理，将DNA释放到提取缓冲液中。
然后，使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀，然后洗涤并溶解。
这些方法在植物科学研究中被广泛使用。
在选择提取方法时，需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。
植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整，以获得满意的结果。
需要注意的是，植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。
样品应在低温下保存，以保持DNA的完整性。
此外，处理样品时要避免污染和酶解，以确保提取的DNA质量。
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法提取植物DNA的方法有许多种，下面将介绍其中几种常用的方法。
1. CTAB法CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide法）是一种经典的植物DNA 提取方法，适用于多种植物样本。
其基本步骤如下：（1）取植物样本，如叶片、茎等，将其研磨成细碎的粉末。
（2）将粉末加入含有CTAB（一种能溶解细胞膜的表面活性剂）的提取缓冲液中，加入蛋白酶K（能降解蛋白质）和β-巯基乙醇（能还原核酸）。
（3）在65下进行细胞破裂和DNA溶解。
（4）通过氯仿/异戊醇提取和乙醇沉淀的方法，将DNA从混合物中分离出来。
（5）最后用纯净水洗涤DNA，使其得以纯化。
2. 高盐法高盐法属于常规的DNA提取方法，适用于大部分的植物样本。
基本步骤如下：（1）取捣碎的植物材料加入含有高盐浓度的提取缓冲液中，并加入蛋白酶K和β-巯基乙醇。
（2）在室温下进行混合，并在高温下（如65）进行DNA的溶解。
（3）通过氯仿/异戊醇提取和乙醇沉淀的方法，将DNA分离和纯化出来。
（4）最后用纯净水洗涤DNA，使其得以纯化。
3. 磁珠法磁珠法是一种相对快速、高效的DNA提取方法，基于磁珠与DNA之间的亲和力。
该方法需要使用一些商业化的提取试剂盒，操作过程相对简单，适用于大规模样本的提取。
基本步骤如下：（1）将植物样本加入含有提取缓冲液和蛋白酶K的试管中，同时加入磁珠试剂。
（2）在高温下进行DNA的溶解和蛋白质的降解。
（3）将混合物与磁珠结合，并使用磁力架将DNA磁珠复合物分离出来。
（4）对磁珠复合物进行洗涤和溶解，获得纯化的DNA。
4. 二硫苏糖盐法二硫苏糖盐法是一种用于植物材料中DNA提取的改良方法，适用于纤维素含量较高的植物样本。
基本步骤如下：（1）将植物材料加入二硫苏糖盐提取缓冲液中，加入蛋白酶和β-巯基乙醇。
（2）对细胞质进行破裂和溶解，使DNA释放到溶液中。
（3）通过异丙醇的加入，将DNA从混合物中分离和沉淀。
植物总dna提取的原理及应用
植物总DNA提取的原理及应用1. 植物总DNA提取的原理植物总DNA提取是一种从植物细胞中分离纯化DNA的方法。
它是研究植物基因组的基础，对于植物遗传学和分子生物学的研究具有重要意义。
以下是植物总DNA提取的主要原理：1.细胞破碎：为了释放细胞内的DNA，需要先将植物细胞破碎。
这可以通过机械方法（如研磨）或化学方法（如细胞壁降解酶）来实现。
2.DNA溶解：破碎的细胞释放出来的DNA会与其他细胞组分（如蛋白质和RNA）结合在一起形成复杂的混合物。
在这一步骤中，可以通过加入特定的缓冲液和洗涤剂来溶解细胞组分，将DNA纯化。
3.酒精沉淀：为了将DNA从溶液中分离出来，可以通过加入高浓度的酒精，使DNA以固体形式沉淀。
4.洗涤和纯化：沉淀的DNA表面可能附着有其他颗粒物。
为了去除这些杂质，可以用酒精和洗涤剂进行多次洗涤和离心。
5.DNA溶解：最后，纯化的DNA溶于适当的溶液（如Tris-EDTA缓冲液），以便后续应用。
2. 植物总DNA提取的应用植物总DNA提取的成功应用于以下几个方面：2.1 植物基因组研究植物总DNA提取是进行植物基因组研究的基础。
通过提取植物总DNA，研究人员可以了解植物基因组的组成、结构和功能。
这对于理解植物的遗传特性、进化历史以及种间亲缘关系具有重要意义。
2.2 植物遗传改良植物总DNA提取技术可以帮助研究人员进行植物遗传改良。
通过提取植物总DNA，可以发现植物中的有用基因或性状相关基因，并进行基因定位和序列分析。
这为培育具有优良性状的新品种提供了基础。
2.3 植物种群遗传学研究植物总DNA提取可以用于研究植物种群的遗传结构和变异情况。
通过分析植物总DNA中的遗传标记（如微卫星和单核苷酸多态性），可以推断不同个体和种群之间的遗传关系、基因流和遗传多样性等重要参数，从而深入了解植物的遗传背景和进化过程。
2.4 植物病害诊断植物总DNA提取可以应用于植物病害的诊断。
通过提取植物总DNA，可以检测病原体的存在和种类，从而确定植物是否感染了某种病害，进而采取相应的病害防治措施。
植物基因组DNA的提取与检测
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。
2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。
而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。
3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。
植物DNA提取实验方案
植物DNA提取实验方案一、实验目的本实验旨在通过提取植物组织中的DNA，了解DNA的结构和功能，学习DNA提取技术。
二、实验原理DNA提取实验基于DNA的特性进行，主要包括以下几个步骤：1.组织破碎：通过物理或化学方法将植物组织破碎，使DNA暴露出来。
2.细胞溶解：使用细胞溶解液使细胞膜破裂，释放DNA。
3.蛋白质消化：加入蛋白酶等物质，将DNA周围的蛋白质降解。
4.DNA沉淀：通过加入乙醇等溶剂，使DNA沉淀。
5.洗涤和纯化：通过洗涤和纯化步骤去除杂质。
6.分析和测定：利用凝胶电泳等技术对提取得到的DNA进行分析和测定。
三、实验材料1.植物材料（如香蕉、草莓等）2.液氮或冰块3.细胞溶解液（如PBS缓冲液、CTAB溶液等）4.蛋白酶K溶液5.乙醇6.盐溶液7. DNase-free水8.1.5mL离心管9.离心机10.电磁振荡器11.热水浴12.紫外分光光度计四、实验步骤1.将所需植物材料切碎，放入离心管中。
2.将离心管放入液氮或冰块中，立即研磨材料，直至完全破碎。
3.加入适量的细胞溶解液，如PBS缓冲液，将混合物混合均匀。
4.将混合物置于电磁振荡器中，振荡5分钟。
5.加入适量的蛋白酶K溶液，混合均匀。
6.将离心管置于热水浴中，温度为55℃，孵育1小时。
7.加入相同体积的酒精，轻轻摇匀离心管，将DNA沉淀。
9.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
10.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
11.倒出上清液，加入适量的乙醇，轻轻摇匀离心管，使DNA沉淀。
12.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
13.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
14.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
15. 倒出上清液，用DNase-free水洗涤DNA三次，每次离心5分钟。
16. 将离心管中的DNA溶解于适量的DNase-free水中。
植物提取dna的方法
植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法可以分为以下几个步骤：
1. 选择合适的植物样本，从新鲜植物中或者干燥的植物材料中取出叶片、茎或花等含量高的组织，避免含有过多的黄色物质或酚类物质。
2. 切碎植物组织，使用细刀或者组织绞碎器等工具将样品切碎成小块，以便更好地释放DNA。
3. 加入破碎缓冲液，包含盐类、洗涤剂、螯合剂等物质，可溶解细胞膜和核膜，使DNA释放。
4. 离心，将上述混合物离心，可使悬浮在上层的细胞碎片沉淀到底部。
5. 分离上清液，去除底部的碎片后，将上层的上清液转移到新的离心管中。
6. 加入蛋白酶和/或RNase酶，可去除DNA污染的蛋白质和RNA等。
7. 加入恒温酶或热梯度PCR仪等装置进行PCR扩增，最终得到核酸条带，然后进行分离纯化。
需要注意的是，每个植物物种的DNA提取方法略有不同，因此需要根据实际情
况进行调整和改进。
植物dna提取方法
植物dna提取方法
提取植物的DNA可以通过以下几个步骤：
1. 植物材料准备：选择新鲜的植物组织，如叶片、茎、根或花朵。
使用刀片将组织切碎，将其放入离心管或试管中。
2. 细胞破碎：可以使用物理或化学方法将细胞破碎，以释放DNA。
常用的方法有研钵法、冻融法或特定的细胞破碎缓冲液。
3. DNA溶出：将细胞破碎液加入含有溶出缓冲液的试管中，使DNA从细胞中溶出。
溶出缓冲液通常含有EDTA、盐和洗涤剂等成分。
4. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等蛋白质消化酶，去除DNA溶液中的蛋白质。
蛋白酶K可以在高温下活性化，并能降解多种蛋白质。
5. DNA沉淀：加入等体积的冷乙醇或异丙醇，使DNA分子沉淀。
可以通过离心沉淀DNA，并将上清液倒掉。
6. DNA纯化：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除杂质。
然后用适量的缓冲液重新溶解DNA。
7. DNA检测：可以使用紫外光谱仪或凝胶电泳等方法检测DNA的浓度和质量。
注意事项：
- 实验操作时应注意无菌条件，以避免污染。
- 建议在化学通风橱等无菌环境下进行DNA提取。
- 每个步骤中所用试剂和设备应事先消毒或经过无菌处理。
- DNA提取过程中应尽量避免DNA的降解，可以采取低温、迅速和轻柔的操作方式。
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告
植物DNA提取实验报告。
实验目的，通过本实验，掌握植物DNA提取的方法，了解DNA的结构和性质，培养实验操作技能。
实验材料与方法：
1. 实验材料，新鲜的植物叶片样本、浸泡液（含有盐、洗涤剂和酒精）、离心管、试管、离心机、冰箱等。
2. 实验步骤：
a. 取一片新鲜的植物叶片，放入离心管中；
b. 加入适量的浸泡液，用玻璃棒捣碎叶片，使细胞破裂，释放DNA；
c. 将离心管放入离心机中，进行离心，使DNA沉淀于离心管底部；
d. 倒掉上清液，加入酒精，轻轻摇晃离心管，观察DNA的沉淀。
实验结果与分析：
通过实验操作，我们成功地从植物叶片中提取到了DNA。
在浸泡液的作用下，叶片细胞破裂，释放出DNA，经过离心和酒精沉淀，我们观察到了白色的DNA
沉淀物。
这表明我们的提取方法是成功的。
实验结论：
通过本次实验，我们掌握了植物DNA提取的方法，了解了DNA的结构和性质。
在实验过程中，我们也培养了实验操作的技能，提高了对实验操作的熟练度。
实验注意事项：
1. 实验中需要注意卫生和安全，避免污染样本和实验环境；
2. 实验操作要细心，避免操作失误导致实验失败；
3. 实验后要及时清理实验台和器材，保持实验环境整洁。
实验改进方向：
在今后的实验中，我们可以尝试不同的提取方法，比较不同方法的提取效果，找出更加高效的提取方法。
通过本次实验，我们对植物DNA提取有了更深入的了解，也为今后的实验操作积累了经验。
希望通过不断的实验实践，我们能够更好地掌握实验技能，为科研工作打下坚实的基础。
CTAB法提取植物DNA
清洗
• 将上清液再次离心，去除其中的杂质和蛋白质。 将得到的上清液转移到新的离心管中。
DNA的纯化与溶解
在上清液中加入等体积的异丙醇，混 匀后放置一段时间，使DNA沉淀下来。
将清洗后的DNA晾干，然后加入适量 的TE缓冲液溶解DNA。此时可以得到 高质量的植物DNA样品，可用于后续 的实验或保存备用。
利用ctab法提取的DNA进行遗传多样性 分析，有助于了解植物种群的遗传结构和 演化历程。
在植物育种中的应用
分子标记辅助育种
利用ctab法提取的DNA进行分子标 记辅助育种，能够快速准确地鉴定优 良基因型，提高育种效率。
转基因育种
通过ctab法提取的DNA可以用于构建 基因，为转基因育种提供重要的 基因资源。
DNA浓度测定
根据DNA溶液的吸光度值，计算DNA的浓度。
DNA完整性评估
通过电泳检测DNA片段的大小和完整性，评估DNA的质量。
04 ctab法提取植物DNA的 应用与展望
在植物遗传研究中的应用
基因定位
通过ctab法提取的DNA可用于基因定位 ，确定基因在染色体上的位置和功能。
VS
遗传多样性分析
实验过程中的安全注意事项
实验操作安全
在实验过程中，应遵循实验室安全规定，避免交 叉污染和意外事故的发生。
防护措施
佩戴实验服、手套、口罩等防护用品，确保实验 操作人员的安全。
化学品使用
正确使用和处理实验过程中涉及的化学试剂，避 免对实验操作人员造成伤害。
实验结果的判定与评估
DNA纯度检测
通过紫外分光光度计检测DNA溶液的A260/A280值，判断DNA 的纯度。
参考文献3
CTAB法提取植物DNA的步骤包括将植 物组织研磨成粉末，加入预热的缓冲 液和CTAB，混合均匀后进行离心，取 上清液加入乙醇沉淀，离心后取出 DNA进行洗涤和干燥。在提取过程中 需要注意避免交叉污染和样品间的混 淆。
植物和动物的核酸dna和rna提取方法
提取植物和动物的核酸DNA和RNA是生物学研究中的重要步骤，它们可以帮助科学家们更深入地了解生物的遗传信息和基因表达。
本文将介绍植物和动物核酸DNA和RNA的提取方法，让读者对这一过程有一个清晰的认识。
一、植物核酸DNA提取方法1. 细胞破碎：需要将植物组织破碎，以释放细胞内的DNA。
这可以通过磨粉或切碎的方法来实现。
2. 细胞裂解：接下来，使用裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放DNA分子。
裂解缓冲液的配方可以根据不同植物的特性进行调整。
3. 蛋白质沉淀：通过向裂解液中加入溴化苯酚等物质，可以沉淀掉大部分蛋白质，使得DNA分子得以分离。
4. 乙醇沉淀：将裂解液中的DNA用乙醇沉淀，这样可以将DNA分子从溶液中提取出来。
5. 溶解和纯化：将沉淀的DNA分子溶解在适当的缓冲液中，并进行进一步的纯化和浓缩处理，得到纯净的DNA溶液。
二、植物核酸RNA提取方法1. 细胞破碎：与DNA提取类似，首先需要将植物组织破碎，以释放细胞内的RNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放RNA分子。
不同植物组织的RNA特性可能有所不同，需要根据具体情况进行优化。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使RNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将RNA从裂解液中提取出来，与DNA提取类似。
5. 洗涤和纯化：对得到的RNA进行洗涤和纯化处理，得到纯净的RNA溶液。
三、动物核酸DNA提取方法1. 组织裂解：将动物组织进行细胞破碎，释放细胞内的DNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜，释放DNA分子。
对于硬质组织，可能需要较强的裂解条件。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使DNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将DNA从裂解液中提取出来，与植物DNA提取类似。
5. 溶解和纯化：对得到的DNA进行溶解和纯化处理，得到纯净的DNA溶液。
植物中dna的提取方法
植物中dna的提取方法
1.取植物样品：从植物中选取新鲜的叶片、花、果实、根等样品，避免使用含有腐烂、干枯或受到污染的样品。
2. 切碎植物组织：用刀片或剪刀将植物材料切成小块，放入细碎的研钵中，加入液氮或干冰，迅速研磨碎成粉末状。
3. 加入提取缓冲液：将粉末状样品转移到离心管中，加入含有CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）的提取缓冲液，并加入蛋白酶K。
缓冲液的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
4. 热处理样品：将离心管放入水浴中，用80°C的温度加热30分钟，使细胞壁破裂，释放DNA。
5. 加入有机溶剂：将等体积的氯仿：异戊醇（24:1）加入样品中，充分混合后离心，分离出上清液。
6. 沉淀DNA：将上清液转移到装有冰冷乙醇的离心管中，缓慢倒入样品，轻轻摇晃后静置10分钟，将离心管放入高速离心机中离心10分钟，沉淀出DNA。
7. 溶解DNA：将沉淀的DNA用70%的乙醇洗涤，再用TE缓冲液（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）将DNA溶解。
以上是一种常用的植物中DNA提取方法，可以根据实验需要进行调整和改进。
- 1 -。
植物DNA的提取的几种有效方法
植物ＤＮＡ的ＣＴＡＢ提取法：1 称取新鲜叶片2-3ｇ,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。
2 将粉末转移到的加有7ｍｌ经预热的1 5×ＣＴＡＢ提取缓冲液15ｍｌ离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30ｍｉｎ。
3 取出离心管,冷却至室温,加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,室温下2300×ｇ离心20ｍｉｎ。
4 将上清转移至另一新的15ｍｌ离心管中,加入1/10体积10%的ＣＴＡＢ和等体积的氯仿/异戊醇。
充分混匀,2300×ｇ离心20ｍｉｎ。
5 转移上清至另一新的15ｍｌ离心管中,加入等体积1%的ＣＴＡＢ沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成ＤＮＡ絮状沉淀。
1000×ｇ离心10ｍｉｎ,使ＤＮＡ沉淀于管底。
6 加入1 5-2ｍｌ的1ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ及5μｌＲＮａｓｅ置于56℃水浴中过夜。
待ＤＮＡ完全溶解后,加2-3ｍｌ4℃预冷的95%的冰乙醇使ＤＮＡ沉淀,挑出ＤＮＡ,置于1 5ｍｌ离心管中,用70%乙醇清洗30ｍｉｎ,用离心机甩5ｓ,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5ｍｉｎ,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。
7 将风干的ＤＮＡ直接在4℃保存备用或溶于100μｌＴＥ溶液中于-20℃保存。
植物ＤＮＡ的ＳＤＳ提取法：1 取2-3ｇ新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ｍｌ离心管中。
2 加入5ｍｌ于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30ｍｉｎ(摇动数次),使提取液与样品充分混合。
3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ＬＫＡｃ,剧烈振荡,冰浴保温20ｍｉｎ以上。
4 2700×ｇ离心20ｍｉｎ,将上清液倒入新的15ｍｌ离心管中,(若提取ＤＮＡ用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证ＤＮＡ纯度)。
5 加入4ｍｌ氯仿/异戊醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×ｇ离心15ｍｉｎ。
6 在另一新的15ｍｌ离心管中加入5ｍｌ预冷的异丙醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20℃冷却30ｍｉｎ以上。
分子实验-植物DNA提取
0 1 实验原理
1、破壁：在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞。并减少 研磨过程中各种酶类的作用。
2、溶解：CTAB离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来。
3、分离：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提 液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去 细胞碎片和大部分蛋白质。
三、主要仪器及耗材： 研钵及研钵棒、水浴锅、移液枪及配套枪头、2.0ml离心管、 离心机、 电子天平、通风橱、冰箱、电泳仪、 凝胶成像系统、超微量核酸蛋白测 定仪系统。
04
PART FORE
操作步骤
0 4 操作步骤
1.配置试剂： （1）10 ml 4% CTAB提取缓冲液
CTAB NaCl 1 M Tris- HCl(pH 8.0) 0.5 mol/L EDTA(pH 8. 0) ddH2O
(二)琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA:
1、将溶液加入样品槽时，勿划破或戳破加样孔，勿带入气泡; 2、使用干净的电泳溶液。
THANKS
心管，使之充分作用15 min。
0 4 操作步骤
10.重复第7步骤。 11.在上清液中，加入2倍体积预冷的无水乙醇，轻柔颠倒，充分混匀，
室温放置 10min。 12.12 000 r/min 离心 5 min，弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀2次。 13.室温挥发乙醇5-10min，加入适量的ddH2O溶解。 14.电泳检测。取3 μL提取的植物总DNA，加入 1μL 6x Loading buffer，
0.4g 1.64g 20ml 0.8ml 7.2ml
（2）10ml 70%乙醇
无水乙醇
7ml
水
3ml
0 4 操作步骤
植物提取dna的方法
植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法通常包括以下步骤：
1. 样品收集：选择新鲜的植物组织（如叶片、根部、种子等），避免使用死亡或腐烂的组织。
2. 组织破碎：将植物组织切碎或研磨，以释放DNA。
可以使用刀片、搅拌器、搅拌器研磨器等工具。
3. 细胞破裂：将组织样品置于研磨缓冲液中，并使用低温（如液氮）或高温（如加热至95C）进行热处理，破坏细胞壁以释放DNA。
4. 清理组织混合物：将组织破碎液通过滤纸等过滤，除掉固体残渣，获得纯净的液体样品。
5. 提取DNA：使用DNA提取试剂盒或自制的DNA提取缓冲液，根据试剂盒说明书或简单的化学反应步骤，将DNA从提取液中分离出来。
6. 纯化DNA：通过酒精沉淀、洗涤和干燥等步骤，去除可能存在的杂质和污染物，提高DNA的纯度和浓度。
7. DNA定量和质量检测：使用紫外吸收光度计或荧光探针等方法，测量提取得
到的DNA的浓度和纯度，确保其适合后续实验应用。
需要注意的是，不同植物物种的DNA提取方法可能存在差异，具体步骤和试剂使用可以根据研究目的和样品特点进行调整和优化。
同样，商业化的DNA提取试剂盒也提供了一种方便和快速的方法，避免了自制试剂的繁琐操作和优化步骤。
植物和动物的核酸dna和rna提取方法
植物和动物的核酸dna和rna提取方法DNA和RNA提取是生物学研究中重要的实验步骤之一。
植物和动物的DNA提取方法具有一定的区别，主要取决于细胞壁、细胞膜和细胞核的特性。
下面将介绍植物和动物核酸提取的常见方法。
植物DNA提取方法：1. CTAB法：首先，将植物样本研磨成细胞浆状，加入含有CTAB（阳离子表面活性剂）和EDTA（螯合剂）的提取缓冲液，破坏细胞壁和细胞膜，溶解蛋白质。
然后，使用高盐方法分离蛋白质和DNA，通过加入异丙醇或乙醇沉淀DNA，最后用纯化试剂将DNA纯化。
2. 硅胶基提取法（硅胶柱法）：将植物样本研磨并加入提取缓冲液，离心去除残渣，将混合物通过硅胶柱，硅胶柱能够与DNA结合并去除杂质，然后使用洗涤缓冲液去除有机溶液和杂质，最后用洗涤缓冲液洗脱DNA。
3. 酚、氯仿、异戊醇提取法：将植物样本研磨成细胞浆状，加入提取缓冲液，混合液中加入等体积的酚和氯仿，形成两相体系，离心分离上清液和有机相。
将DNA从有机相中转移到水相中，然后用等体积的异戊醇沉淀DNA，并用洗涤缓冲液清洗、纯化DNA。
动物DNA提取方法：1. 乙酸盐法：将动物组织样本研磨成细胞浆状，加入含有乙酸和SDS（阴离子表面活性剂）的提取缓冲液，细胞膜和细胞核破裂，并溶解蛋白质。
然后，使用乙酸盐和异丙醇沉淀DNA，并用洗涤缓冲液清洗、纯化DNA。
2. 蛋白酶K法：将动物样本切碎，加入含有蛋白酶K和提取缓冲液，蛋白酶K 可降解不溶性蛋白质。
然后，使用酒精沉淀法沉淀DNA，最后用洗涤缓冲液清洗、纯化DNA。
3. 商用提取试剂盒：市场上有多种商用动物DNA提取试剂盒，使用操作简单快捷。
通常，样本经过细胞破碎、蛋白质沉淀、DNA吸附、洗脱等步骤，最终得到高质量的DNA。
RNA提取方法：RNA提取方法除了需要破坏细胞壁和细胞膜外，还需要迅速采取措施以避免RNA降解。
常用的RNA提取方法包括：1. 酚胺法：将样本研磨成细胞浆状，加入含有酚和胺的提取缓冲液，迅速破坏细胞膜和细胞核，并溶解蛋白质。
植物提取物提取dna方法
植物提取物提取dna方法植物提取物提取DNA方法植物提取物提取DNA是进行植物遗传学和分子生物学研究的重要一环。
本文将介绍几种常用的植物提取物提取DNA的方法。
一、CTAB法CTAB法是一种经典的植物提取物提取DNA的方法。
其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为提取试剂，通过蛋白酶K的作用，溶解细胞膜和核膜，释放出DNA。
然后通过酚/氯仿提取和乙醇沉淀的步骤，最终得到DNA。
二、改良的CTAB法为了提高DNA的纯度和产量，研究者们对CTAB法进行了改良。
其中一种常用的改良方法是添加聚丙烯酰胺（PVP）和β-己内酰胺（β-ME）。
PVP能够结合并沉淀多酚等杂质，提高DNA的纯度。
而β-ME可以解除DNA与蛋白质的交联作用，增加DNA的产量。
三、快速法为了节省时间和提高DNA的产量，研究者们开发出了一种快速的植物提取物提取DNA的方法。
该方法利用碱裂解和酚/氯仿提取的原理，通过简化操作步骤和缩短提取时间，快速获取高质量的DNA。
四、商业化试剂盒除了传统的提取方法，市场上也有一些商业化的试剂盒可供选择。
这些试剂盒通常采用快速离心柱或磁珠技术，简化了操作步骤，提高了提取效率和纯度。
研究者们可以根据自己的需求选择合适的试剂盒。
需要注意的是，无论使用哪种提取方法，都需要注意以下几点：1. 植物材料的选择：应选择新鲜、健康的植物组织，避免病虫害或老化组织，以保证提取到高质量的DNA。
2. DNA的保存：提取到的DNA应保存在低温下，避免酶解和降解。
3. DNA的纯度和浓度检测：使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳等方法对提取到的DNA进行纯度和浓度检测，以确保后续实验的准确性。
总结起来，植物提取物提取DNA的方法多种多样，研究者可以根据实际需求选择合适的方法。
无论使用哪种方法，都需要严格操作，保证提取到高质量的DNA。
这些方法的应用将有助于深入了解植物的遗传背景和分子机制，为植物育种和基因工程提供重要的依据。
植物dna提取注意事项
植物dna提取注意事项植物DNA提取是一项重要的实验方法，用于研究植物的遗传特征和基因组结构。
在进行植物DNA提取实验时，需要注意以下几个关键事项：1. 选择合适的植物样本：植物DNA提取前，需要选择新鲜、健康、无病变的植物样本。
避免选择已经受到病菌或虫害感染的植物，因为这可能会对提取的DNA质量产生影响。
2. 避免污染：实验过程中，要严格遵守无菌操作规范，确保实验环境、试剂和仪器的无菌状态。
避免将外部细菌、真菌或其它DNA污染到样本中，以保证提取到的DNA是纯净的。
3. 应用合适的提取方法：不同植物种类或组织类型的DNA提取方法可能有所不同，需要根据具体情况选择适合的提取方法。
常用的提取方法包括CTAB法、酚-氯仿法等。
根据植物的基因组特征，调整提取方法中的试剂用量和操作步骤。
4. 注意试剂质量：确保使用的试剂是新鲜的、高质量的。
避免使用过期或质量不佳的试剂，以免对提取的DNA产生影响。
同时，注意试剂的存储条件，避免暴露在高温或湿度环境中。
5. 控制提取时间和温度：DNA提取过程中，提取时间和温度的控制非常重要。
过长的提取时间或过高的温度可能会导致DNA降解，影响提取效果。
因此，需要根据实验要求和具体情况，控制提取时间和温度的合理范围。
6. DNA提取后的保存：提取到的DNA需要妥善保存，以保持其稳定性和完整性。
常用的保存方法包括冷冻保存和冻干保存。
在保存过程中，注意避免温度波动、光照和氧气的接触，以免影响DNA的质量。
总之，植物DNA提取是一项复杂而关键的实验操作。
在进行实验前，需要充分了解植物的特性，选择合适的样本和提取方法。
实验过程中，要注意无菌操作、试剂质量和提取时间温度的控制。
最后，提取到的DNA需要妥善保存，以确保后续研究的可靠性和准确性。
【2024版】[课件]实验七-植物DNA的提取与纯度鉴定PPT
![【2024版】[课件]实验七-植物DNA的提取与纯度鉴定PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/ec44a4e28662caaedd3383c4bb4cf7ec4bfeb660.png)
提醒 不同种类或同一种类的不同组织因其细
胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照 文献和经验建立相应的提取方法，以获得可 用的DNA大分子，尤其是组织中的多糖和酚 类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的 抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取 基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。
CTAB法实验原理
• 离子型表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵 (hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为 CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate， 简称SDS)等可以有效裂解植物细胞壁，且与DNA 形成可溶于高盐溶液的复合物，当降低盐浓度时 DNA又可沉淀析出，从而与蛋白质及多糖等分离。
实验步骤（2）
• 3、 最后一次加液氮磨样后，立即加入预热的CTAB抽提 液，每克叶片加入8 mL CTAB抽提液，再加入160 L 2－ 巯基乙醇（2-Me）（终浓度2％（v/v））。继续研磨待 CTAB抽提液溶化后，将研磨液转入50 mL离心管；
• 4、 65℃水浴锅温浴0.5-1小时，每10-20分钟摇动一次离心 管；同时65℃预热CTAB/NaCl； 注意：离心管盖子应轻轻搭在管口，千万不能盖紧， 以防加热使盖子冲出，最好离心管壁和盖子同时做好标记。
实验试剂及其配置
4 CTAB/NaCl (10% CTAB, 0.7 M NaCl) （要求配50mL）
•
CTAB
•
NaCl
20 g 8.2 g
• 加入160 mL ddH2O，加热至65℃溶解，补dd H2O定容至200 mL，高压灭菌。
• 注意：此溶液很粘稠，使用时需加热至65℃。
《植物总DNA的提取》课件
植物总DNA的提取也是植物生物技术应用的基础，如基因克隆、基因编辑、基因 转化和基因表达分析等。通过对植物总DNA的提取和操作，可以实现植物遗传改 良和新品种的培育，推动农业生产的可持续发展。
植物总DNA提取的应用
遗传资源保护
通过对不同植物种类的基因组分析，可以了解植物的遗传多 样性和进化关系，为植物种质资源的保护和利用提供科学依 据。同时，通过基因组学的研究，可以实现濒危植物的保护 和复壮。
废弃物处理
实验结束后，应将使用过的废弃物按照规定分类 处理，避免对环境造成污染。
防火防爆
远离火源和易燃物品，避免使用明火，存放和使 用易燃易爆试剂时需特别小心。
实验操作注意事项
试剂配制
严格按照试剂盒说明书或指导手册配制试剂，避免浓度和比例错误 导致实验失败。
样品处理
植物样品需新鲜且无菌，避免样品中存在杂质和微生物污染，影响 DNA提取质量。
使用酸性或碱性溶液使细胞膜破裂，释放出细胞内 的DNA。
离心分离
将破碎后的细胞悬浮液进行离心，使细胞碎 片和DNA沉降，上清液中的其他成分如蛋 白质和RNA得以去除。
DNA的沉淀与洗涤
盐析法
向离心后的上清液中加入高盐溶液，使 DNA沉淀析出。
VS
乙醇沉淀法
在上清液中加入无水乙醇，使DNA沉淀 析出。洗涤沉淀以去除残留的盐分和其他 杂质。
植物总DNA提取的步骤
植物材料的准备
选择适当的植物组织
根据实验需求选择适合的植物组织， 如叶片、根、茎等。确保植物材料新 鲜且无污染。
清洗与剪切
将植物材料清洗干净，剪切成适当大 小的组织块，以便后续操作。
细胞破碎与分离
物理破碎法
使用研磨棒、玻璃珠或匀浆器等工具破碎细 胞，释放出细胞内的DNA。
植物DNA提取
7，倒掉乙醇，用枪头挑絮状DNA到管壁，将管底残余液取出
8，将管倒立于滤纸上烘干3min
9，加50-100μl无菌ddH2O溶解DNA.
试剂：
（1）DNA提取液：100 mmol/L Tris-HCl (Tris饱和酚）(pH 8.0) 15.764g
操ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ步骤
1，取银杏叶片0.5g-1.5g,加入3ml提取液（65°预热60min)研磨。研磨后转入10ml离心管；
2，取700μl至1.5ml离心管中，65°水浴30min，其间温和震荡离心管2-3次。
3，加入等体积氯仿，异戊醇（700μl），摇匀
4,10000r离心10min,分三层，取上清液
5，加800μl无水乙醇，得絮状DNA沉淀反复摇匀
(2)2100 mmol/L NaCl , 122.724g
(3)50 mmol/L EDTA（乙二胺四乙酸）, 14.6125g
（4）20g/L PVP , 20g/L CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）,
140 mmol/Lβ-ME (β-ME在使用前加) (65°预热60min再加入）
（2）氯仿：异戊醇(24:1),无水乙醇, 70%乙醇
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验1 植物DNA的提取
实验目的
采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行纯度分析。
掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。
实验原理
1、原理
核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。
核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中,前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。
在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。
在浓氯化钠溶液(1～2mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA 核蛋白的溶解度很
小；而在稀氯化钠溶液(0.14mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。
因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白的方法有3种：①用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。
用两倍体积95％乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。
如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。
②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。
③用苯酚处理，然后离心分层，DNA或溶于上层水相，或存在于中间残留物中，蛋白变性后则停留在酚层内。
吸出上面水层，将其注入两倍体积的95％乙醇溶液中，得到白色纤维状DNA沉淀。
反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的
DNA制品。
为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用RNA酶处理。
生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。
在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH值4.0—11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。
②物理因素，DNA分子链很长，是双螺旋结构，既有一定的柔性。
又有一定的刚性，故强机械作用如剧烈搅拌会令DNA分子断裂，不利于收集，应加以避免。
③酶的作用，细胞中普遍存在的核酸酶在细胞壁或膜遭到破坏时被释放出来，它会降解DNA分子。
故须用酶的变性剂、抑制剂使之失活。
操作过程最好在低温(0℃左右)下进行。
常用的酶抑制剂有柠檬酸盐、氟化物、砷酸盐、乙二胺四乙酸盐、(ETDA-Na)等。
SDS和苯酚作为蛋白变性剂，同时可使核酸酶被破坏而失活。
2、DNA的提取原理
（1）CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法：先将新鲜的叶片在液氮中研磨，破碎其细胞，然后加入CTAB分离缓冲液，将DNA溶解出来，再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。
（2）SDS法是植物总DNA的提取方法。
先将新鲜的叶片在液氮中研磨以机械力破本碎细胞壁，然后加入SDS使细胞膜破裂，并同时将蛋白质和多糖等杂质与核酸分开。
加入KAc可使SDS—蛋白质复合物转变为溶解度更小的钾盐形式，使沉淀更加完全。
3、DNA的浓度测定和纯度分析
（1）定磷法：是对样品中核酸（DNA和RNA）含量的准确定量。
将样品中的核酸用强酸（硫酸或高氯酸）消化成无机磷，然后用定磷试剂对生成的无机磷酸进行滴定。
定磷试剂是酸性钼酸铵溶液，钼酸铵能与无机磷酸定量结合成磷钼酸络合物，该络合物能被抗坏血酸等还原剂还原成兰色的钼蓝，在660nm处有最大光吸收。
（2）紫外光吸收法：核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。
1ug/mL的DNA溶液A260 = 0.020，1ug/mL的RNA溶液或单链DNA的A260=0.022~0.024。
1个A260相当于50ug/mL的DNA，40ug/mL的RNA。
蛋白质的最大吸收在280nm，多糖的最大吸收在230nm。
纯的DNA的
A260/A280在1.8左右，纯的RNA的A260/A280在2.0左右。
实验材料
(1) 2×CTAB分离缓冲液
2% CTAB，1.4mol/LNacl，20 mmol/L EDTA，100mmol/LTris-HCL(pH8.0)，0.2%巯基乙醇共100mL：2g CTAB，8.18g NaCL，0.74 g EDTA.Na2.2H2O，加入10mL 1mol/L的Tris-HCL (pH8.0)，0.2mL巯基乙醇，加水定容到100mL。
(2) TE缓冲液
10 mmol/L Tris-HCL（pH 7.4），1mmol/L EDTA
(3) 氯仿-异戊醇（24:1）。
(4) 液氮。
(5) 70%乙醇，无水乙醇。
(6) 研钵，恒温水浴（37-100℃），离心机，离心管。
实验步骤
(1) 将2mL CTAB分离缓冲液加入10mL离心管中，置于65℃水浴中预热。
(2) 称取1.5g叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，尽快将叶片研碎。
(3) 取0.2g粉末直接加入预热的CTAB分离缓冲液中，轻轻转动使之混匀。
(4) 样品于65℃保温30分钟。
(5) 加等体积（2mL）的氯仿-异戊醇，轻轻颠倒混匀。
(6) 室温下10000rpm离心10分钟，移上清至另一新管中。
(7) 加入2倍体积的100%乙醇或0.7倍体积异丙醇，会出现絮状沉
淀，-20℃放置30 min或-80℃放置10min，12000rpm离心10回收DNA沉淀。
(8) 用70%乙醇清洗沉淀两次，吹干后溶于适量的灭菌ddH2O中或溶于1~1.5mL TE中，分装后-20℃保存备用。
(13) 取200uL稀释20倍，测定A260，A280，A230，或作出吸收波谱200~400nm并计算浓度和得率。
注意；所有操作均须温和，避免剧烈震荡。
思考题
1、CTAB、EDTA、巯基乙醇的作用是什么？
2、计算所得DNA纯度，并判断提取质量。