T淋巴细胞功能测定
T淋巴细胞亚群检测，帮助了解你的免疫力
一次传染病的爆发，就可充分体现免疫系统的重要作用。
没有什么灵丹妙药，也没有什么神奇的事情发生，唯一能依靠的，就是免疫系统。
人的身体抵抗力强，就不容易生病。
反之，许多疾病就会趁虚而入。
所以身体的免疫力和疾病的发生和发展有很大的关系。
淋巴细胞亚群是一种反映自身免疫力的指标，也是进行人体免疫功能研究的一种主要方向，它可以用来判定人体的细胞免疫和体液免疫的程度，反应出人体目前的免疫功能、状态和平衡水平，还可以帮助进行一些疾病的诊断，可以帮助分析病因，观察疗效，判断预后。
我们现在就来看一看关于 T淋巴细胞亚群的具体情况吧！1简述免疫系统免疫系统作为人体的一种重要的防御系统，除了可以抵抗外界微生物的入侵之外，还能在体内将衰老、变异、恶化、甚至凋亡的细胞及时清除，从而确保身体的健康。
免疫系统由三个主要的部分组成：免疫器官，免疫细胞，免疫分子。
保持人体的免疫功能比较稳定，主要靠的就是免疫系统中各个部分发挥作用。
而在人体内，淋巴细胞是免疫系统最基础的组成成分，其中， T、 B淋巴细胞是机体免疫应答的中心环节。
在正常状态下， T、 B淋巴细胞在体内维持着一个固定的数量与比例，它们之间也会互相调节，以保持自身的免疫机能。
由于各种亚群的比例及数目的异常，会引起一系列的病理性改变及免疫功能紊乱，从而引发多种疾病。
2什么是T淋巴细胞亚群？T细胞、 B细胞、 NK细胞等都是人体内的免疫细胞。
负责细胞免疫的 T淋巴细胞亚群，它不仅可以对抗病毒，还可以调整人体的免疫系统。
其细胞功能，取决于T淋巴细胞总值（CD3）及其亚群（CD4、CD8）相对组成。
成熟 T淋巴细胞（CD3）用来表达机体的 T细胞总量，反应机体的免疫机能状态；CD4是一种诱导性的/辅助型 T细胞，作为人体免疫系统的核心，也被称为“人体免疫系统的指挥官”；CD8细胞是一种具有抑制/细胞毒的 T淋巴细胞，它可以对病原体进行直接的识别和杀死，和CD4一起对抗外来入侵。
3淋巴细胞亚群检测的临床意义3.1淋巴细胞亚群检测与肿瘤肿瘤的生长与转移主要通过两种途径实现，即获得能量并逃逸机体的免疫监控。
豚鼠t淋巴细胞的测定实验报告
豚鼠t淋巴细胞的测定实验报告了解豚鼠T淋巴细胞表面标志物的测定方法及处理数据的方法。
实验原理：T淋巴细胞是细胞免疫应答的主要细胞种类之一。
T细胞表面有许多不同的分子，在T细胞的功能和调控中起到重要的作用。
流式细胞术是目前用于检测单个细胞表面标志物的常用方法之一。
它能够对细胞表面的化学结构进行快速和准确的定量分析。
实验材料：1. 豚鼠外周血单个核细胞悬液2. FITC抗鼠CD3表面标志物抗体3. PE抗鼠CD4表面标志物抗体4. APC抗鼠CD8表面标志物抗体5. PBS6. FACS Canto II流式细胞仪实验步骤：1. 取60μl外周血单个核细胞悬液加入96孔板中。
2. 向细胞悬液中加入FITC抗鼠CD3表面标志物抗体、PE抗鼠CD4表面标志物抗体和APC抗鼠CD8表面标志物抗体，并充分混合。
3. 在4℃避光下孵育30分钟。
4. 加入200μl冰冷PBS洗涤3次，每次转速1200rpm，离心5min除去上清液。
5. 向细胞沉淀中加入5mlPBS悬浮均匀，用FACS Canto II流式细胞仪测定成像。
实验结果：1. 关于T细胞的分类T淋巴细胞可以通过CD4和CD8分子的表达进行分类，CD4+细胞被称为辅助性T细胞，而CD8+细胞被称为细胞毒性T细胞。
本实验中，CD4+细胞被PE 标记，CD8+细胞被APC标记，因此可以通过细胞的表面标志物是否被检测到来确定分子类型。
2. 豚鼠T淋巴细胞的比例在本实验中，通过流式细胞仪检测T细胞表面标志物的含量，计算出3种不同类型的T细胞在单个核细胞中的比例。
例如，CD4+ T细胞的百分比可以用以下公式计算：CD4+ T细胞的数目/总细胞数*100。
结论：通过本实验，可以了解到T细胞表面标志物检测方法的基本原理和流程，掌握豚鼠T细胞的分类和比例的测定方法。
此外，本实验还可以为制定更有效的免疫诊断和治疗方案提供参考。
t淋巴细胞亚群测定检测内容
t淋巴细胞亚群测定检测内容
淋巴细胞亚群检测主要包括以下内容：
1. T细胞亚群测定：T细胞是淋巴细胞中的一类重要的免疫细胞，根据表面标志物的不同，可以将其分为多个亚群。
常见的T细胞亚群包括CD4+ T细胞和CD8+ T细胞，它们在免疫调节和杀伤病原体方面起着重要作用。
2. B细胞细胞亚群测定：B细胞是淋巴细胞中的另一类免疫细胞，可以分泌抗体并参与体液免疫反应。
B细胞亚群测定可以确定不同类型的B细胞数量及功能状态。
3. 自然杀伤细胞（NK细胞）测定：NK细胞是淋巴细胞中的一类重要细胞，具有自然杀伤、分泌细胞因子等免疫功能。
NK细胞亚群测定可以了解NK细胞数量和杀伤活性。
4. 调节性T细胞（Treg细胞）测定：Treg细胞是T细胞中的一种特殊亚群，具有免疫抑制和免疫调节功能。
Treg细胞测定可以评估免疫调节的状态。
这些淋巴细胞亚群测定可以通过流式细胞术（Flow Cytometry）等实验方法进行。
这些检测内容可以帮助评估患者的免疫功能状态、了解免疫细胞亚群的数量及活性，对于诊断和治疗免疫相关疾病具有重要意义。
2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群测定及意义
2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群测定及意义1. 背景糖尿病是一种常见的代谢性疾病，2型糖尿病是其中最常见的类型。
2型糖尿病患者的免疫系统功能可能有所改变，这种改变可能与疾病的发展和治疗有关。
T 淋巴细胞是免疫系统中的一部分，具有多种亚群。
测定2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群可以帮助我们更好地了解其免疫系统功能的情况。
2. T淋巴细胞亚群及其意义T淋巴细胞是免疫系统中的一种白细胞，可分为多种亚群。
常见的T细胞亚群有CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。
CD4+ T细胞是主要的免疫调节细胞，可以调节其他免疫细胞的功能，包括B淋巴细胞、巨噬细胞和其他T淋巴细胞。
CD8+ T细胞是杀伤病原体感染的细胞，它们可以通过产生毒素来杀死感染病原体的细胞。
2型糖尿病患者的T淋巴细胞亚群可能会发生改变。
例如，2型糖尿病患者的CD4+ T细胞数量可能会减少，导致免疫调节功能下降；CD8+ T细胞数量可能会增加，导致对胰岛细胞的杀伤作用增强，从而进一步损害胰岛功能。
因此，测定2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群可以帮助我们更好地了解其免疫系统功能的情况，为糖尿病的防治提供指导意义。
3. 测定方法测定2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群可以使用多种方法。
目前常用的方法有流式细胞术和酶联免疫吸附法（ELISA）。
3.1 流式细胞术流式细胞术是一种能够对细胞进行快速和准确分析的方法。
它可以同时测定多个表面标志物，包括T细胞亚群标志物。
通过识别细胞表面的标志物，可以将T 细胞区分为不同的亚群。
流式细胞术具有高灵敏度、高分辨率、低样本量的优点，广泛应用于生物科学领域。
3.2 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法（ELISA）是一种基于抗体与抗原结合的方法。
通过在试剂盒中加入特定的抗体，可以将T细胞亚群分离出来，并且通过添加染色剂来检测分离出的T细胞亚群的量。
ELISA具有操作简单、成本低的优点，在一定程度上可以取代流式细胞术。
但是，它的灵敏度和准确性可能会受到影响。
检测淋巴细胞功能、T淋巴细胞增殖实验设计
③细胞培养至56h，每孔内加入3H-TdR工作液 各20 μl，轻轻震荡混匀后置37°c CO ₂培养箱内 继续培养至72h终止培养
④终止培养时，用多头细胞收集器将细胞收 集在49型玻璃纤维滤膜上，将滤膜置烤箱内烤干
⑤滤膜冷却后移入存有5ml闪烁液的闪烁杯中， 避光放置一段时间后，用FJ-2107液闪计算器测量 放射性，结果用刺激指数（SI）表示
实验步骤：
①静脉采血肝素抗凝，充分摇匀后加入 细胞微量培养板内（20 μl/孔）每个样品设自 发转化孔和分裂原刺激孔均为三个复孔
②自发转化孔每孔内加完全RPMI-1640液 0.2ml，分裂原刺激孔每孔内加PHA液0.1ml， RPMI-1640液0.1ml。加样后，轻轻震荡混匀， 置37°c CO ₂培养箱内培养
管、玻片等常规实验仪器。 三、PHA、瑞氏姬姆萨染液，肝素，Hanks液
等常规实验试剂。
1、T淋巴细胞功能的测定（T细胞转化、增 殖实验、迟发性超敏反应的检测、T细胞分 泌细胞因子的检测、CTL细胞介导的细胞毒 试验）
2、B淋巴细胞功能的测定 3、单核巨噬细胞、NK细胞等的功能测定 4、细胞因子的检测 5、CD分子、表面受体、黏附分子的检测
问题背景：
市场上有一广告产品， 据说有免疫增强作用请设 计一个方案证实之。（从 影响淋巴细胞功能、T淋巴 细胞增殖的角度考虑。）
T淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原 （PHA、PWM和ConA）刺激均能使细胞发生转 化。T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免 疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。
酶联免疫斑点试验（ELISPOT）
① 稳定、特异，且抗原用量少； ②可同时检测不同抗原诱导的抗体分泌，并可定量检测 ③可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞
评价t淋巴细胞功能的试验
评价t淋巴细胞功能的试验
淋巴细胞是免疫系统中的重要细胞，能够识别和攻击入侵体内的病原体。
而评价淋巴细胞功能的试验就是通过检测淋巴细胞的不同功能来评估免疫系统的活性和健康程度。
其中，最常用的试验包括：
1. T细胞反应试验：通过检测T细胞对特定抗原的反应来评估其功能状态。
例如，用特定抗原刺激T细胞，观察其是否能够产生足够的细胞因子和分泌物，从而反映出其活性。
2. B细胞功能试验：通过检测抗体水平、抗体产生速度等指标来评估B细胞的功能。
例如，用不同的抗原刺激B细胞，观察其是否能够迅速产生足够的抗体，反映其活性和敏感性。
3. NK细胞活性试验：通过检测NK细胞对靶细胞的杀伤作用来评估其活性状态。
例如，用靶细胞刺激NK细胞，通过检测杀伤率来反映NK细胞的功能状态。
除了以上试验，还有其他一些用于评估淋巴细胞功能的试验，如细胞增殖试验、淋巴细胞亚群分析等。
这些试验能够帮助医师准确地评估免疫系统的活性和健康状况，为临床诊断和治疗提供重要参考。
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项目十七 T淋巴细胞表面标志和功能检测
项目十七T淋巴细胞表面标志和功能检测一、E花环形成试验(Erythrocyte rosette formation assay)【实验原理】人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。
此试验用于计数T细胞数量，进而可判断机体细胞免疫状况。
由于T 细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et 花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用，立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。
【试剂和器材】1．肝素抗凝剂用Hanks液将肝素配成500U/ml，分装，每管0.1ml，置4℃备用。
2．淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。
3．小牛血清56℃加热灭活30min，按2:1比例与沉积SRBC混合，置37℃30min，离心，收集血清备用。
4．0.5％SRBC悬液取脱纤维或Alsever液保存的羊血，用5～10倍量生理盐水洗3 次。
第3次2500r/min离心10min，弃上清液，用生理盐水配成0.5％的SRBC悬液(约108个细胞/ml)。
5．0.8％戊二醛取30.25ml 4.5 g/L NaCl 盐水，加入1ml 25％戊二醛即可。
6．姬姆萨-瑞氏染液取磷酸缓冲液(PB：1/15 mol/L, pH7.0～7.4)10ml，加入姬姆萨染液6滴及瑞氏染液1滴。
7．Alsever液、Hanks液(无Ca2+和Mg2+, pH7.2～7.4)、PB(1/15 mol/L, pH7.0～7.4)、生理盐水。
8．离心机、水浴箱、电冰箱、显微镜、离心管、载玻片、盖玻片、吸管、吸球、注射器。
【步骤和方法】1．淋巴细胞悬液的制备取2ml肝素抗凝血，加入2ml Hanks液，叠加于2ml 淋巴细胞分离液上，水平离心2000 r/min 20 min。
取出单个核细胞层，用4~5倍Hanks液洗2次，每次离心1000r/min 10min。
t淋巴细胞检测指标
t淋巴细胞检测指标1.引言1.1 概述概述部分的内容应该对淋巴细胞检测指标进行简要介绍，概括其意义和作用。
以下是一种可能的写作方式：淋巴细胞检测指标是评估人体免疫功能及疾病诊断的重要指标之一。
淋巴细胞作为免疫系统中的主要细胞类型，发挥着抗体产生、细胞毒性反应和免疫调节等重要功能。
因此，通过对淋巴细胞数量和功能的检测，我们能够了解人体免疫状态的稳定性、免疫应答的活跃程度以及疾病发展的可能性。
淋巴细胞检测指标主要包括淋巴细胞总数、淋巴细胞亚群比例、淋巴细胞功能等。
淋巴细胞总数是了解人体免疫系统整体状况的重要指标，通常通过血液样本中的淋巴细胞计数得出。
而淋巴细胞亚群比例则是指不同亚群淋巴细胞（如CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、B细胞等）在总淋巴细胞中所占的比例，通过测量不同亚群的数量可以更准确地评估免疫系统的功能和状态。
淋巴细胞功能方面的检测，如免疫细胞活化标志物表达、细胞增殖能力和细胞因子产生等，能够进一步揭示免疫系统的活跃程度和具体机制。
例如，通过测量特定的细胞因子（如白介素-2、干扰素-γ等）的产生，可以间接评估特定疾病（如肿瘤、传染病等）的发展情况，并为治疗方案的选择提供依据。
综上所述，淋巴细胞检测指标在临床医学中具有重要的意义。
它不仅可以用于评估免疫功能的状态，还可以为疾病的早期诊断和治疗提供参考。
随着检测技术的不断发展和深入研究的推进，相信淋巴细胞检测指标将会在医学领域中发挥更大的作用。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以是：文章结构是指文章整体组织和框架的安排方式，它决定了文章思路的清晰度和逻辑性。
本文按照以下结构展开：第一部分是引言部分，包括概述、文章结构和目的。
在引言部分，我们将介绍淋巴细胞检测的重要性以及本文的目的和结构安排。
第二部分是正文部分，包括了两个要点。
在第一个要点中，我们将详细介绍淋巴细胞检测的背景和意义。
我们将探讨淋巴细胞检测的作用、相关的检测方法和常用的指标。
在第二个要点中，我们将深入讨论淋巴细胞亚群检测及其相关指标的意义和应用。
淋巴细胞功能测定
免疫学技术原理与应用PAIT-12淋巴细胞功能测定孙汭中国科技大学生命科学学院免疫学研究所PMIT-12淋巴细胞功能测定一、常用的淋巴细胞功能测定二、T淋巴细胞功能测定三、B淋巴细胞功能测定四、NK细胞细胞毒试验一、常用的淋巴细胞功能测定1、淋巴细胞增殖试验① 3H-TdR掺入法原理：淋巴细胞在丝裂原或特异性抗原刺激下转化为淋巴母细胞，发生转化过程中，细胞DNA合成大量增多。
此时在细胞培养液中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-Thymidine riboside, 3H-TdR), 使3H-TdR掺入新合成的DNA中，经β-液体闪烁仪检测淋巴细胞DNA 的3H-TdR掺入量，根据掺入细胞内的核素的量可判断淋巴细胞增殖的程度。
② MTT比色法原理：MTT（（3-4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑）是一种黄色可溶性噻唑盐，掺入细胞后，在细胞活化增殖时通过线粒体能量代谢过程，MTT代谢形成蓝色的甲攒（Formazan)沉积于细胞内或细胞周围，形成甲攒的量与细胞增殖程度成正相关。
甲攒经异丙醇溶解后呈紫蓝色，借助酶标仪测定OD值，可反映细胞增殖水平。
2、细胞毒试验①51Cr释放法原理：用放射性核素51Cr（Na251-CrO4，鉻酸钠）标记靶细胞，51Cr即可进入靶细胞，与胞浆蛋白结合。
然后将51Cr标记的靶细胞与待检细胞（效应细胞）共同孵育一定时间后，若待检细胞能够杀伤靶细胞，则51Cr从靶细胞释放出来。
51Cr的释放量与效应细胞的活性成正相关。
即靶细胞被杀伤的越多，释放到上清中的游离51Cr越多，用γ计数仪测定上清中51Cr的放射活性（cpm）值，以计算待检细胞的细胞毒活性。
（一）、用51Cr铬酸钠标记靶细胞1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。
用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。
加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。
免疫T淋巴细胞检测——帮助了解你的免疫力
免疫T淋巴细胞检测——帮助了解你的免疫力免疫力是人体抵御疾病的重要依靠，而T淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分。
T淋巴细胞检测是一种现代化的检测方法，可以帮助人们了解自己的免疫状态，有助于保持免疫系统的健康。
本文将向大家介绍免疫T淋巴细胞检测的相关知识，帮助大家正确认识自己的免疫力。
T淋巴细胞是什么？T淋巴细胞是一种白细胞，是免疫系统中的核心细胞之一，主要负责识别和攻击病原体、癌细胞等异物。
T淋巴细胞在人体免疫系统中起着重要作用。
它们通过产生特异性抗体、杀伤病原体和调节免疫反应等方式来保护身体免受疾病侵害。
T淋巴细胞的种类和数量各不相同，包括CD4+ T淋巴细胞、CD8+ T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞等。
它们各自承担着不同的免疫功能。
例如，CD4+ T淋巴细胞主要负责指挥和调节免疫反应，激活其他免疫细胞，如B淋巴细胞和巨噬细胞等；CD8+ T淋巴细胞则是通过直接杀死病原体和癌细胞来保护身体免受侵害，T淋巴细胞数量过低可能意味着免疫系统出现了问题，进而导致身体容易感染疾病。
T淋巴细胞检测的作用是什么？1. 了解免疫系统的状况：T淋巴细胞检测可以帮助确定免疫系统的状况，包括T淋巴细胞的数量和比例。
通过了解自己的T淋巴细胞状态，可以判断免疫系统是否正常工作，是否存在免疫功能异常或免疫系统亢进的情况。
2. 预防和诊断疾病：T淋巴细胞检测可以帮助医生预防和诊断一些疾病。
例如，艾滋病、白血病等。
某些疾病会导致T淋巴细胞数量异常，通过检测T淋巴细胞的数量和比例，可以及早发现这些疾病的存在。
3. 判断免疫功能：T淋巴细胞检测可以帮助判断免疫功能的强弱。
免疫功能强的人，T淋巴细胞数量和比例通常在正常范围内。
而免疫功能较弱的人，会存在T淋巴细胞数量不足或功能异常的情况，容易导致感染和疾病的发生。
如何进行T淋巴细胞检测？1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过样本细胞的荧光染色，使不同的T淋巴细胞呈现不同的颜色，然后采用流式细胞仪器进行检测的方法。
淋巴细胞功能检测T淋巴细胞转化试验3HTdR
＝实验组cpm均值/对照cpm均值
参考值：SI < 2
二、T淋巴细胞转化试验：
—— 形态学观察法
步骤：肝素抗凝血+PHA孵育涂片Giemsa 染色 计数淋巴细胞，计算淋巴母细胞转化 率。
转化率 =
转化的淋巴细胞(X个)
％
计数的淋巴细胞总数(200 个)
正常参考值：60.1±7.6％ 临床意义：转化率↓— 免疫缺陷性疾病
第六部分 淋巴细胞功能检测
一、T淋巴细胞转化试验： —— 3H-TdR掺入法
原理：T细胞＋PHA(ConA) 淋巴母细胞，摄取大 量3H-TdR来合成新的DNA。
步骤：T 细胞 ＋PHA(ConA) 淋巴母细胞 + 3H标记 胸腺嘧啶核苷(3H-TdR) β-液体闪烁仪测 定cpm值
刺激指数（SLeabharlann ）
T淋巴细胞功能测定
10-12
spleen Cell+
ConA 10µ g/ml
spleen Cell+ ConA 10µ g/ml thymus Cell+ ConA 10µ g/ml thymus Cell+ ConA 10µ g/ml
N.S. OVA N.S. OVA
八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺 每孔加入100 µ l调好的细胞悬液 1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液， 100 µ l 4-6孔加入2.5 µ g/ml的Con A, 7-9孔加入5 µ g/ml的Con A, 10-12孔加入10 µ g/ml的Con A, 100 µ l 100 µ l 100 µ l
加 样 方 法
v v v v v
NOTE:ConA用10%FCS-IMDM培养液配制
本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!
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1-3
A B C D
spleen cell+ 10% IMDM spleen cell+ 10% IMDM thymus cell+ 10% IMDM thymus cell+ 10% IMDM
摘眼取血 摘眼取血 无菌取脾 胸腺 无菌取脾/ / 胸腺
获取血清 获取血清
研 脾 研磨 磨成单 成单细胞 细胞悬液 悬液 (1/ (1/2 2 脾/胸 /胸 腺 M 腺+2ml +2ml I I M DM DM（ （无 无 FCS) FCS)
操 作 步 骤
细胞计数 ? //ml 】 细胞计数【 【 ? ml 】 取 数液 取20µ 20µl 细 l 细胞 胞 +980µ +980µl 的计 l 的计 1W 数液
t淋巴细胞亚群测定检测内容
t淋巴细胞亚群测定检测内容淋巴细胞是免疫系统中的重要细胞群，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。
其中，T淋巴细胞又可分为多个亚群，如辅助性T细胞（CD4+ T细胞）、细胞毒性T细胞（CD8+ T细胞）等。
这些不同的淋巴细胞亚群在免疫应答中发挥着不同的作用，具有重要的生理功能。
T淋巴细胞亚群的检测对于研究免疫功能的状态、诊断某些免疫相关疾病、评估治疗效果等具有重要意义。
通过测定T淋巴细胞的各个亚群的比例和数量，可以了解机体的免疫状态及炎症程度。
例如，在免疫抑制治疗后，CD4+ T细胞数量减少，容易导致感染的发生。
而在某些自身免疫性疾病中，CD8+ T细胞可能异常激活，导致炎症反应增加。
T淋巴细胞亚群的检测方法有多种，常用的包括流式细胞术、酶联免疫吸附法等。
这些方法在具体的实验室操作中都有一定的局限性，需要严格控制实验条件，确保检测结果的准确性和可靠性。
此外，对于正常值的确定和不同实验室之间的结果比对也是一个重要的问题，需要更多的研究和标准化操作的制定。
除了在科研领域中的应用，T淋巴细胞亚群的检测在临床诊断和治疗中也有着广泛的应用。
例如，在HIV感染者的监测中，CD4+ T细胞计数是评估疾病进展和治疗效果的重要指标之一。
通过监测CD4+ T细胞的数量，可以及时调整治疗方案，有效控制病情发展。
在肿瘤的免疫治疗中，T淋巴细胞亚群的检测也可以辅助判断患者的免疫状态，选择最合适的治疗方案。
在未来，随着免疫疗法的发展和个体化治疗的需求增加，T淋巴细胞亚群的检测将变得越来越重要。
我们需要进一步深入研究不同T淋巴细胞亚群在免疫反应中的作用机制，发现新的治疗靶点，并开发更加灵敏、准确的检测技术。
通过不断地探索和创新，我们可以更好地利用T淋巴细胞亚群的信息，为免疫相关疾病的诊断和治疗提供更好的支持。
知识科普：T淋巴细胞亚群检测，帮助了解你的免疫力，建议收藏
知识科普：T淋巴细胞亚群检测，帮助了解你的免疫力，建议收藏淋巴细胞主要有淋巴器官产生，存在于血液和淋巴液内，常见症状有淋巴肿大、发热、盗汗等。
淋巴细胞亚群检测可以了解细胞、免疫缺陷病以及资得很免疫疾病的免疫功能。
淋巴细胞亚群无论增高还是降低都提示免疫功能紊乱。
T淋巴细胞亚群通常是用来评估人体的细胞免疫功能，能够对HIV病毒感染进行有效的判断。
在进行T淋巴细胞亚群的测定时，还可以对自身免疫性病变，比如系统性红斑狼疮以及免疫缺陷病进行辅助诊断，同时还可以帮助体内所出现的恶性肿瘤以及血液病进行判断。
那么，为什么需要进行T淋巴细胞亚群检测呢？T淋巴细胞亚群检测的意义是用于评价细胞免疫功能。
T淋巴细胞亚群的测定是判断机体细胞免疫功能的重要指标，如自身免疫病、恶性肿瘤、免疫缺陷病、血液病、变态反应性疾病等，分析患者患病的几率，治疗后用于观察疗效和判断预后有重要意义。
淋巴细胞亚群检测可以通过检测B淋巴细胞、T淋巴细胞等数量，辅助检查免疫缺陷病、变态反应性疾病、血液病等。
如B细胞升高提示病毒感染，下降提示免疫缺陷；T细胞中CD4+T细胞（一种免疫细胞）下降原因主要是病毒感染，如HIV病毒感染等。
T淋巴细胞亚群的测定异常结果有CD4淋巴细胞减少、CD8淋巴细胞增多、CD4/CD8比值异常。
检查前不要暴饮暴食和剧烈运动，需要在平静状态下空腹抽取静脉血检查。
检查时注意血清标本不被污染，及时送去检测。
有相关疾病患者和免疫力低下者均可检查，在检查前有关的注意事项可以向医生咨询。
如果检测结果异常，应在医生指导下给予治疗。
平时注意劳逸结合，合理饮食，保持心情舒畅，增强身体免疫力。
那T细胞亚群又有哪些检测方法呢？1、酶免疫染色技术：常规分离MNC，调整细胞浓度为1×105~106个/ml，取细胞用不同亚群的McAb(一抗)和酶标抗体（二抗）或与酶抗体复合链接物，在相应底物作用下显色，普通光镜计数阳性细胞，计算出各亚群的百分比。
T淋巴细胞功能及检测方法(1)
［１９］于大平，傅瑜．耐多药肺结核１３３例外科治疗效果探讨［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２００９，３２（６）：４５０-４５３．［２０］ＴａｏＹ，ＫｉｔａｓａｔｏＹ，ＫａｗａｓａｋｉＭ，ｅｔａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇ-ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ—ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｔｈｅＫｙｕｓｈｕｒｅｇｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎ２００４ａｎｄ２００９［Ｊ］．Ｋｅｋｋａｋｕ，２０１１，８６（８）：７５１-７５５．［２１］ＢｅｎｊａｍｉｎＪＰ，ＪｏｓｅｐｈＣＣ，ＨｅａｔｈｅｒＫ，ｅｔａｌ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙｒｅｓｅｃｔｉｏｎｆｏｒｍｕｌｔｉｄｒｕｇ-ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．ＪＴｈｏｒａｃｉｃａｎｄＣａｒｄｉｏｖａｓＳｕｒｇ，２００１，１２１（３）：４４８-４５３．［２２］梁海峰，苗朝良．耐多药肺结核手术治疗的临床分析［Ｊ］．现代中西医结合杂志，２０１４，２３（１）：８０-８２．［２３］邱美华．纤维支气管镜下给药治疗气管支气管结核４５０例［Ｊ］．浙江中西医结合杂志，２０１４，２４（１）：３１-３２．［２４］吕康言，刘桑，岳静．经皮肺穿刺空洞内置管注药治疗耐多药空洞肺结核疗效观察［Ｊ］．临床肺科杂志，２０１１，１６（１０）：１５５０-１５５１．［２５］孙鹏，邢玉慧，张金萍，等．介入治疗与内科治疗耐多药肺结核的疗效分析［Ｊ］．中国实用医药，２０１１，６（２９）：１４１-１４２．［２６］谭红玉．纤维支气管镜介入治疗耐多药肺结核４０例报道［Ｊ］．临床肺科杂志，２０１０，１５（４）：４９３-４９４．［２７］弓显凤，张熙祎，张锦博，等．中医辨证配合化疗治疗肺结核５４例［Ｊ］．陕西中医，２０１２，３３（２）：１８３-１８５．［２８］杜志荣．补气滋阴方治疗肺结核７０９例［Ｊ］．陕西中医，２０１０，３１（１０）：１３５４-１３５５．［２９］李凫坚，周敏，崔岩飞，等．芪百合剂对耐多药肺结核患者免疫功能的影响［Ｊ］．浙江中西医结合杂志，２００９，１９（３）：１３７-１３８．［３０］赵粹英，陈汉平，严华，等．隔蒜灸治疗难治性肺结核的临床观察［Ｊ］．中国针灸，１９９６，１６（３）：１-３．［３１］田红，姚艳红，刘莲花．隔蒜灸治疗复治耐多药肺结核的临床观察［Ｊ］．中国中西医结合杂志，２００８，２８（６）：５６０-５６１．（收稿日期：２０１４-１０-１２）·综 述·Ｔ淋巴细胞功能及检测方法*但 刚，刘晨霞综述，吴丽娟△审校（成都军区总医院临床实验医学研究与保障中心检验科，四川成都６１００８３） 关键词：Ｔ淋巴细胞； 免疫； 分化； 功能检测DOI：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３-４１３０．２０１５．０３．０３９文献标识码：Ａ文章编号：１６７３-４１３０（２０１５）０３-０３７７-０４ 经典免疫反应中Ｔ淋巴细胞是参与机体细胞免疫反应，并在免疫应答中起重要调节作用的免疫细胞。
T、B淋巴细胞增殖能力测定、NK细胞活性测定及T淋巴细胞亚群测定的方法
实验前24h将靶细胞YAC-1传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×105个/mL。无菌取脾，制备脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10 min（1000 r/min）。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水裂解红细胞，20 s后再加入0.5 mL 2倍Hanks液及8 mL Hanks液，离心10 min（1000r/min），用1mL含10 %小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1 %冰醋酸稀释后计数，调整细胞浓度为1×107个/ mL。将靶细胞加入96孔培养板，每孔100μL，试验孔加入100μL脾细胞（效靶比50：1），自然释放孔加入100μL培养液，最大释放孔加入100μL 2%NP40，37℃培养4 h，离心，取上清100μL置96孔酶标板中，加入LDH基质液100μL，反应8 min，以30μL1mol/L的HCl终止反应，在酶标仪492nm处测定OD值。
T、B淋巴细胞增殖能力测定、NK细胞活性测定及T淋巴细胞亚群测定的方法
一、T、B淋巴细胞增殖能力测定
无菌条件下取大鼠的脾脏，加适量Hank’s液研磨，以200目不锈钢网滤过，1500r/m离心5分钟，弃上清，加Hank’s液重复洗涤2次。收集脾细胞，加适量RPMI 1640培养液混悬，以0.4%台盼兰拒染法计数，活细胞数不小于95%，加RPMI 1640完全培养液稀释，并调整细胞浓度至1×107个/mL。于96孔微量板中，每孔加100L脾细胞悬液（1×107cell/mL）和等体积的ConA溶液（终浓度为5μg/mL）、LPS溶液（终浓度为10μg/mL）或RPMI1640培养液，重复3孔。另设空白对照组。37℃、5%CO2培养44h后，各孔加入50μL MTT溶液（2mg/mL），继续培养4h。1000r/min离心5分钟，弃去各孔上清，分别加150μL酸性DMSO溶液，振荡，于室温暗处放置15min，以酶标仪于波长578nm处测定OD值，并按下式计算刺激指数（SI）：SI（刺激指数）=加有丝分裂原培养物的OD值/不加有丝分裂原培养物的OD值。
项目十七 T淋巴细胞表面标志和功能检测
项目十七T淋巴细胞表面标志和功能检测一、E花环形成试验(Erythrocyte rosette formation assay)【实验原理】人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。
此试验用于计数T细胞数量，进而可判断机体细胞免疫状况。
由于T 细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et 花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用，立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。
【试剂和器材】1．肝素抗凝剂用Hanks液将肝素配成500U/ml，分装，每管0.1ml，置4℃备用。
2．淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。
3．小牛血清56℃加热灭活30min，按2:1比例与沉积SRBC混合，置37℃30min，离心，收集血清备用。
4．0.5％SRBC悬液取脱纤维或Alsever液保存的羊血，用5～10倍量生理盐水洗3 次。
第3次2500r/min离心10min，弃上清液，用生理盐水配成0.5％的SRBC悬液(约108个细胞/ml)。
5．0.8％戊二醛取30.25ml 4.5 g/L NaCl 盐水，加入1ml 25％戊二醛即可。
6．姬姆萨-瑞氏染液取磷酸缓冲液(PB：1/15 mol/L, pH7.0～7.4)10ml，加入姬姆萨染液6滴及瑞氏染液1滴。
7．Alsever液、Hanks液(无Ca2+和Mg2+, pH7.2～7.4)、PB(1/15 mol/L, pH7.0～7.4)、生理盐水。
8．离心机、水浴箱、电冰箱、显微镜、离心管、载玻片、盖玻片、吸管、吸球、注射器。
【步骤和方法】1．淋巴细胞悬液的制备取2ml肝素抗凝血，加入2ml Hanks液，叠加于2ml 淋巴细胞分离液上，水平离心2000 r/min 20 min。
取出单个核细胞层，用4~5倍Hanks液洗2次，每次离心1000r/min 10min。
实验一 T淋巴细胞的检查
T淋巴细胞的检查
一、实验目的和要求
1.掌握T淋巴细胞E花环试验的原理、正常值，了 解其方法和用途。 2.熟悉光镜下E花环的形态和计数方法。
抗原递呈细胞：单核吞噬细胞等
免疫细胞 免 疫 系 统 T细胞
淋巴 B细胞 细胞 NK细胞
免疫活性细胞
K细胞 其他免疫细胞：肥大细胞、粒细胞等 免疫器官：胸腺、肾脏、脾脏 免疫分子：抗原、抗体
三、实验材料
E花环切片、显微镜 四、实验结果与分析 油镜检查：淋巴细胞呈蓝色，SRBC呈红色围 绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有3个或3个以 上SRBC者为花环形成细胞（即E阳性细胞）。 计数200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并 推测其T淋巴细胞百分率。 花环形成百分率% =
E花环
Hale Waihona Puke 二、实验内容和原理淋巴细胞经瑞氏染色液染色后呈蓝色。T细 胞表面具有能与绵羊红细胞（SRBC）表面糖肽结 合的受体，称为E受体（CD2）。已证实E受体是 人类T细胞所特有的表面标志。当T细胞与SRBC混 合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。 通过花环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成 试验。根据花环形成的多少，可测知T细胞的数 目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断 疾病的发生，考核药物疗效等。
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Rotation
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ELISA
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实验步骤
❖ 单细胞悬液的制备：
1. 小鼠脱臼处死，用酒精棉球擦拭皮毛消毒。 2. 于超净台内取出脾和胸腺组织(各1/2)，分别放入预先盛有2ml
IMDM培养液的平皿内。 3. 将3-4层纱布覆盖到组织上，用直头镊子固定组织，用弯头镊子轻
根根据据细细胞胞的的大大小小，，核核与与胞胞浆浆的的比比例例，，胞胞浆浆的的染染色色性性和和 核核结结构构以以及及有有无无核核仁仁等等特特征征，，分分别别计计数数淋淋巴巴母母细细胞胞、、 过过渡渡型型母母细细胞胞和和核核丝丝分分裂裂相相细细胞胞以以及及成成熟熟的的小小淋淋巴巴细细 胞胞，，以以前前三三者者为为转转化化细细胞胞，，每每份份标标本本计计数数220000个个细细胞胞，， 按按下下式式计计算算转转化化率率：：
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N.S. OVA N.S.
OVA
❖ 八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺
加 ❖ 每孔加入100 µl调好的细胞悬液
样 ❖ 1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液， 100 µl
方 法
❖ 4-6孔加入2.5 µg/ml的Con A,
100 µl
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❖ 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎 ❖ fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来
源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评 价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗 体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台
NOTE:在稀释前一定将原细胞悬液混匀，否则细胞长时间沉淀使细胞数不准。
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细胞计数板
4
❖ 查出四个大方格的总细胞数(X) ❖ 算出每个大方格的细胞数：Y=X/4 ❖ 每个大方格的体积为V=1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3=10-4ml ❖ 制备的细胞悬液的细胞浓度（/ml)=Y ×104×稀释倍数(50)
❖ 动物及试剂
1. 小鼠
2只/组
(NS,OVA)
2. 培养液（IMDM) 无FCS 100ml/room
3. 培养液（IMDM)20%FCS 30ml/room
4. ConA（2.5,5,10µg/ml) 各1.5ml/tube
5. 白细胞计数液（2%冰醋酸）2瓶/room
6. MTT（5mg/ml)
100 µl
❖ 7-9孔加入5 µg/ml的Con A,
100 µl
❖ 10-12孔加入10 µg/ml的Con A,
100 µl
NOTE:ConA用10%FCS-IMDM培养液配制
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N.S. OVA N.S.
OVA
ccppmm SI Con对A照刺管激c管pmcp值m值
MMTTTT法法
((本本次次实实验验采采用用))
M TT法
期期活活的的/增/增细细殖殖胞胞
能能线线量量粒粒代代体体谢谢
琥琥珀珀酸酸脱脱氢氢酶酶 MMTTTT掺掺入入
MMTTTT
还还 原原
甲甲臜臜颗颗粒粒 ffoorrmmaazzaann
测测AA值值
原理
Lymphocytes(B/T) Mitogens Proliferation Nucleic Acid↑
Specificity Ag Transformation Protein ↑ Lymphoblast
检测方法
形形态态学学方方法法
形态学方法
淋淋巴巴母母细细胞胞主主要要表表现现有有体体积积明明显显增增大大，，是是成成熟熟淋淋巴巴细细 胞胞的的33--44倍倍；；染染色色质质疏疏松松，，核核仁仁清清晰晰可可见见；；胞胞浆浆丰丰富富并并 形形成成空空泡泡。。
保保健健品品、、中中草草药药及及生生物物制制品品 卫卫生生毒毒理理学学的的研研究究
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实验分组及材料
分组： 每组四人，两人一只小鼠，其中一人胸腺，一人脾脏
❖ 器材Biblioteka 1. 酒精棉球若干2. 无菌纱布块
1块/组
3. 无菌平皿
3377℃℃ 55%% CCOO22 继继续续培培养养22小小时时
淋巴细胞转化试验的应用
检检查查患患者者细细胞胞免免疫疫功功能能 估估计计疾疾病病的的疗疗效效及及预预后后 细细胞胞配配型型抗抗原原的的检检查查：：移移植植免免疫疫 免免疫疫药药理理学学：：具具有有免免疫疫调调节节的的药药物物、、
1.5ml/room
7. 二甲亚砜（DMSO)
5ml/组
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免疫血清分离过程
摘眼球取血
RT for 2hrs
Double diffusion
1.5ml EP
Store at 4℃
Transfer serum to
a new EP
溶溶解解
细细胞胞内内/周/周围围
SI
ConA刺激管 A值 对照管 A值
OOVVAA免免疫疫//生生理理盐盐水水
摘摘眼眼取取血血
获获取取血血清清
无无菌菌取取脾脾//胸胸腺腺 研研磨磨成成单单细细胞胞悬悬液液(1(1//22脾脾//胸胸
腺腺++22mmllIIMM DDMM（（无无FFCCSS))
11..双双向向琼琼脂脂扩扩散散试试验验 22..酶酶联联免免疫疫吸吸附附试试验验（（ EELLIISSAA））
1块/组
4. 无菌吸头（大、中、小）4盒/room
5. 无菌96孔培养板
1块/组
6. 可调微量加样器
4套/room
7. 细胞计数板
1套/组
8. 显微镜
1台/组
9. EP管
若干
10. 眼科剪、小镊子
4套/room
11. 细胞培养箱（37℃ 5%CO2)
12. 酶标仪 13. 离心机 14. 超净台
2个/room 2个/room
❖ 结果测定： 1. 结果测量：用酶标仪测定光密度值：A570nm（用空白孔调零），记录 结果。 2. 结果判定： SI（刺激指数）=Con A刺激孔 A值 / 对照孔A值
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预习内容
❖ 单克隆抗体的制备（理论P70，实验P106） ❖ 双向免疫扩散（理论P241，实验P116）
2011
教学要求
❖ 掌握小鼠血清的分离 ❖ 掌握淋巴细胞转化试验
的基本原理及基本操作
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淋巴细胞转化试验 (Lymphocyte transformation test)
❖ 原理 ❖ 检测方法 ❖ 操作步骤 ❖ 应用
压组织，将其捣碎。然后用1000µl加样器隔着纱布将细胞悬液吸 出，放入1.5ml EP管中。
❖ 细胞计数：
1. 取上述制备好的细胞悬液混匀后取出20µl，加到盛有980µl计数液 的EP管中，在显微镜下计数，计数方法见后。
2. 调细胞浓度至1×107/ml，所需量为1.5ml，设需要的细胞悬液体 积为Aml,可按公式：?/ml×A=1.5×1×107
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❖ 细胞培养： 1. 按图所示加板。 2. 将板做好标记，在倒置显微镜下观察细胞，然后放于37℃ 5%C02培养箱 中，培养48小时。
❖ MTT掺入：（隔一天 下午2:00） 1. 在终止培养前2小时，在显微镜下观察细胞转化情况。 2. 每孔内加入MTT（5mg/ml) 10µl，加完后轻轻搕板，使MTT和细胞混 匀。 3. 在37℃ 5%C02培养箱中继续培养2小时，然后离心2000rpm，5min， 轻轻弃去上清，（注意不要将孔底部的颗粒物弃出）。 4. 加入100µl 二甲亚砜（DMSO)，将颗粒溶解。 （隔一天 下午4:00）
操 作 步 骤
细细胞胞计计数数【【??//mmll】】 取取2200µµll细细胞胞++998800µµll的的1计W 计数数液液
调调细细胞胞浓浓度度 ??//mmll××AA==11.5.5××11××110077
加加板板((三三复复孔孔)) ((加加法法见见附附图图))
小小心心弃弃去去上上清清，，加加入入110000µµl/l/ 孔孔 DDMMSSOO振振荡荡，，使使颗颗粒粒全全部部溶溶解解
❖ 八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺
加 ❖ 每孔加入100 µl调好的细胞悬液
样 ❖ 1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液， 100 µl
方 ❖ 4-6孔加入2.5 µg/ml的Con A, 100 µl
法 ❖ 7-9孔加入5 µg/ml的Con A,
100 µl
❖ 10-12孔加入10 µg/ml的Con A,