04实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-教案
《分光光度分析》实验四 邻二氮菲分光光度法测定铁
(7) 盐酸溶液(6 mol· -1) L
(8) 铁标准溶液(20 g· -1，200 g· -1配成250mL，见后面) mL mL 说明： (1) - (7) 由实验室教师配制，(8) 每组配制一份
四、实验内容
条件试验
铁含量的测定 摩尔比法测定配合物的组成比、摩尔吸光系 数及反应的平衡常数
亚铁的含量?试拟出一简单步骤。
4. 制作工作曲线和进行其它条件试验时，加入
试剂的顺序能否任意改变?为什么?
50 mL 容量瓶
1 mL盐酸羟胺溶液 摇匀
用水稀释至刻度，摇匀 放置l0 min
X mL 1 mol· -1 NaOH L
l cm比色皿 绘制A与pH关系 的酸度影响曲线
以蒸馏水为参比 在所选择的波长下，测量各溶液的吸光度 (用pH计测量溶液pH值) A
pH
X mL NaOH: 0.00 mL，0.20 mL， 0.50 mL，1.00 mL 1.50 mL，2.00 mL ， 2.50 mL, 3.00 mL
2+
Fe2+ + 3 N N N Fe N
3
lg 3=21.3
Fe3+与邻二氮菲生成1:3的淡蓝色配合物，其lg 3＝14.1
盐酸羟胺还原
2 Fe3++2NH2OH· HCl=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2Cl-
为了尽量减少其他离子的影响，通常在微酸性(pH约5)溶液中
显色。
本法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、
实验四
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验 邻二氮菲分光光度法测定铁
实验邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1、通过分光光度法测定铁的条件实验，学会如何选择分光光度分析的条件及分光光度测定铁的方法。
2、了解分光光度计的性能、结构及其使用方法3、学会使用TU-1810紫外可见分光光度计二、实验原理邻二氮菲(phen)和Fe2+在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 32+，其lgK=21.3，κ508=1.1 ×104L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1～6μg·mL-1范围内遵守比尔定律。
其吸收曲线如图1-1所示。
显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应如下：2Fe3++2NH2OH·HC1＝2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2C1－图1-1 邻二氮菲一铁(Ⅱ)的吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
三、仪器和试剂1．仪器TU-1810紫外可见分光光度计，pH酸度计等2．试剂(1)100ug·mL-1铁标准储备液准确称取0.702 0 g NH4Fe(S04)2·6H20置于烧杯中，加少量水和20 mL 1:1H2S04溶液，溶解后，定量转移到1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(2)10 ug·mL-铁标准溶液用吸量管移取25mL 100ug·mL-1铁标液于250mL容量瓶中，加入4mL6mol·L-1HCl溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
（学生自配）(3)100 g·L-1盐酸羟胺水溶液用时现配。
实验四_邻二氮菲分光光度法测定铁
实验四邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1. 学习721型分光光度计的使用方法；2. 学习测绘吸收曲线的方法；3. 掌握利用标准曲线进行微量成分分光光度测定的基本方法和有关计算。
二、实验原理邻二氮菲(phen)和Fe2+在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 32+，铁含量在0.1-6μg/mL范围内遵守比尔定律。
其吸收曲线如图1所示。
显色前需用盐酸羟胺（或抗坏血酸）将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HC1＝2Fe2+ + N2↑+ 2H2O + 4H+ + 2C1-图1 邻二氮菲一铁(Ⅱ)的吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
三、仪器和试剂1. 仪器721或722型分光光度计。
2. 试剂(1) 标准铁溶液I – 10-3mol/L准确称取0.4822g的NH4Fe(SO4)2·12H2O置于烧杯中，加入80 mL的1:1HCl 及少量去离子水溶解，定量转移到1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(2) 标准铁溶液II-含Fe100微克/毫升准确称取0.8634g的NH4Fe(SO4)2·12H2O置于烧杯中，加入20 mL的1:1HCl 及少量去离子水溶解后，定量转移到1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(3)盐酸羟胺10%水溶液称取10g盐酸羟胺容于100mL水中，用时现配。
(4)邻二氮菲0.15%水溶液称取0.15g的1,10-邻二氮菲于100mL水中，若不溶可稍加热。
避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。
邻二氮菲吸光光度法测定铁实验操作方法.doc
邻二氮菲吸光光度法测定铁实验操作方法.doc一、实验目的：通过邻二氮菲吸光光度法，测定水样中的铁含量。
二、实验原理：邻二氮菲吸光光度法又称为费-利反应，它是一种测定铁含量的重要方法。
当邻二氮菲的溶液与铁离子溶液混合时，铁离子能够与邻二氮菲形成深色络合物，且该络合物的红外吸收峰较强，因此可以利用紫外可见分光光度计测定吸收强度，从而测定铁离子的浓度。
三、实验步骤：1.样品制备将水样加热至90℃，用去离子水将样品稀释至100mL。
2.制备标准铁溶液取一定质量的氯化铁，精密称量，用去离子水将其稀释至100mL，即得1mg/L的标准铁离子溶液。
3.制备邻二氮菲溶液将下列试剂按照指定比例配制成邻二氮菲溶液。
4.进行反应分别取25mL水样，1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L的标准铁溶液，加入滴定管中。
在每个样品管和标准管中加入2mL邻二氮菲溶液和3mL试剂3，加去离子水至刻度线，并用橡胶塞塞紧。
混匀之后，放置于水浴锅中，将水浴锅加热至70℃。
于90℃取出样品管，冷却后，用去离子水洗净吸光度比色皿，用去离子水将样品注入其中，测量吸光度。
在吸光度增加速率最快时，确定所测吸光度。
5.建立标准曲线将标准铁溶液的吸光度测量值用磷酸根校正。
用吸光度与浓度制作标准曲线。
6.测定样品中的铁含量测量待测水样的吸光度，并用标准曲线求得单位体积内铁的含量。
四、实验注意事项：1.实验过程中要避免水样和标准溶液的误差。
2.吸光度比色皿和滴定管等玻璃器皿要清洁干净。
使用前用去离子水洗净并烘干。
在取样时需反复用去离子水进行漂洗，避免残留物影响结果。
3.加入液体试剂时，使用滴管要慢慢滴加，避免气泡产生。
4.实验时应避免阳光直射，室内温度要适宜。
5.对于测量结果不准确的情况，可以重复实验，取多次测量结果的平均值。
6.实验结束后，用去离子水将仪器和器皿彻底洗净，并干燥。
五、实验设备：1.紫外可见分光光度计2.恒温水浴3.取样瓶、铁离子标准溶液、邻氮二菲、试剂3等实验器材和试剂六、实验结果及分析：在标准曲线中，吸光度与铁离子的浓度呈直线关系，从而得出待测水样中铁的含量。
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
实验二邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一、实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法;2．了解分光光度计的构造、性能及使用方法。
二、实验原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9 的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。
配合物的lgK稳＝21.3，摩-1 -1尔吸光系数510＝11000 L m·ol-1·cm-1。
在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。
4Fe3+＋2NH2OH→4Fe2+＋N2O ＋4H＋＋H2O测定时，控制溶液pH＝ 3 较为适宜，酸度高时，反应进行较慢，酸度太低，则二价铁离子水解，影响显色。
用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH 范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。
三、仪器与试剂-11．醋酸钠：l mol L·-1；2．氢氧化钠：0.4 mol L·-1；3．盐酸： 2 mol ·L-1；、4．盐酸羟胺：10％（临时配制）；5．邻二氮菲（0.1%）：0.lg 邻二氮菲溶解在100mL1:1 乙醇溶液中。
6．铁标准溶液（1）10-4mol·L-1铁标准溶液：准确称取0.1961g（NH4）2 Fe（SO4）2·6H20 于烧杯中，用 2 mol ·L-1盐酸15 mL溶解，移至500 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀；再准确稀释10倍成为含铁10 - 4mol·L-l 标准溶液。
（2）10 μg·mL-1（即0.01 mg·mL -1）铁标准溶液：准确称取0.3511g （NH4）2 Fe （SO4）2·6H20于烧杯中，用 2 mol L·-l盐酸15 mL溶解，移入500 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定铁含量
实验报告
五、实验数据记录与处理1吸收曲线的绘制
2显色剂用量的确定
3标准曲线的绘制
吸光度A （510）
C （Fe ）/ g/L
由图像得
Y =0.0891x - 0.0931 R 2 = 0.9944
4判断络合物的稳定性
吸光度A （510）
放置时间（min）
5未知溶液浓度的测定
思考题：
1. 邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？
答：工业盐酸中含有Fe2+和Fe3+，其中Fe2+与邻二氮菲(phen)能生成稳定的桔红色配合物[Fe(phen)3]2+此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 =1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，然后，进行铁的总量的测定。
2、.为什么在测绘标准曲线的时候选择空白试剂为参比？
答：为了减少其他试剂对吸光度测定的干扰，使结果更准确。
邻二氮菲分光光度法测定铁
二、实验原理
3、条件试验(略)
（1）入射光波长：一般情况下，应选择被测物质的最大吸收波长的光 为入射光。 （2）显色剂用量：显色剂的合适用量可通过实验确定。 （3）溶液酸度：选择适合的酸度，可以在不同pH缓冲溶液中加入等量 的被测离子和显色剂，测其吸光度，作A-pH曲线，由曲线上选择合适 的pH范围。 （4）有色配合物的稳定性：有色配合物的颜色应当稳定足够的时间。 （5）干扰的排除：当被测试液中有其他干扰组分共存时，必须采取一 定的措施排除干扰。吸光光度法的实验条件，如测量波长、溶液酸度、 显色剂用量等，都是通过实验来确定的。本实验在测定试样中铁含量 之前，先做部分条件试验，以便初学者掌握确定实验条件的方法。
邻二氮菲分光光度法测定铁
（条件试验和试样中铁含量的测定）
一、实验目的 1.掌握用吸光光度法测定铁的原理及 方法。 2.了解吸光光度分析实验条件的选择。
二、实验原理
1.方法原理
邻二氮菲(phen)是光度法测定微量铁的较好试剂。该法灵敏度高， 稳定性好，干扰易消除，故应用广泛。 在pH为2~9（一般维持在pH=5-6）的溶液中，Fe2+与邻二氮菲 （phen）生成稳定的桔红色Fe(phen)32+: Fe2+ + 3(phen) = Fe(phen)3 其lgk=21.3，摩尔吸光系数ع508 =1.1×104 L· mol-1· cm-1。在还原剂 存在下，Fe(phen)3桔红色可保持几个月不变。 与邻二氮菲作用形成淡蓝色配合物稳定性较差，实际应用中加 +3 Fe ，再与显色剂邻二氮菲作用显色。 +2还原为Fe+3入还原剂盐酸羟胺使Fe
四、实验步骤
2、样品铁含量的测定 移取适量铁样品液(5.00mL)于50mL比色管中，加入 1mL盐酸羟胺，摇匀，再加入2mL邻二氮菲（phen）， 5mLNaAc ，加水至刻度，摇匀放置10min，用1cm比色 皿，以试剂空白为参比，在510nm波长下，测定样品溶液 吸光度。从标准曲线上查出或由回归方程计算样品液中铁 的含量（mg/L）。 3、光度计与比色皿使用 4、结束工作 测量完毕,关闭电源,取出吸收池, 清洗晾干保存.清理工 作台,罩上
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一. 实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。
2．学习标准曲线的制作方法。
3．了解721型分光光度计的构造及使用方法。
二．实验原理在测定微量铁时，通常以盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，在PH为2—9的范围内，Fe2+与邻二氮菲反应生成稳定的橙红色配合物，其lgK fθ=21.3。
该配合物的最大吸收波长为510nm。
本方法不仅灵敏度高（摩尔吸光系数ε=1.1×104），而且选择性好。
相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO2-3，20倍的Cr3+、Mn2+、V(V)、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定。
Fe2+与邻二氮菲在PH=2—9范围内均能显色，但酸度高时，反应较慢，酸度太低时Fe2+易水解，所以一般在PH=5—6的微酸性溶液中显色较为适宜。
邻二氮菲与Fe3+能生成3:1的淡蓝色配合物（lgK fθ=14.1），因此在显色前应先用还原剂盐酸羟胺将Fe3+全部还原为Fe2+（2Fe3++2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl-）。
三．仪器与试剂1. 仪器：(1) 721型分光光度计。
(2) 50mL容量瓶7只/组。
(3) 10mL、5mL、2mL、1mL移液管。
2. 试剂：(1)100µg·mL-1的铁标准溶液：准确称取0.8634gNH4Fe(SO4)2·12H2O于烧杯中，加入20mL1:1的HCl和少量水溶解后，定量转移至1升容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
所得溶液含Fe3+100µg·mL-1。
(2) 10µg·ml-1的铁标准溶液：准确移取25.0mL 100µg·mL-1的铁标准溶液于250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定铁
邻二氮菲分光光度法测定铁实验目的1.学习如何选择分光光度分析的实验条件。
2.掌握分光光度分析中所用器皿的使用方法。
3.了解分光光度分析法测定铁的原理及方法。
基本原理（一）分光光度分析是基于物质对光的选择吸收而建立的分析方法。
包括比色法，可见及紫外光度法：A=kbc当一束光透过含有吸光物质溶液后，吸光度A与吸光浓度c,吸光层厚度b成正比，这是定量分析的基础。
测量时，通常经过称样，溶解，显色及测量等步骤。
（二）p H:2~9橘红色配合物ε508=11000lgβ3=21.3(20。
C)而邻二氮菲与Fe3+生成3:1淡蓝色配合物，lgβ3=14.10Fe3+还原；2Fe2++2NH2OH•HCl=2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl- (pH<3)本方法选择性高，相当于Fe 40倍的Sn2+,Al3+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,S2O32-,20倍的Cr3+,Mn2+,V(v),PO43-,5倍的Co2+,Cu2+等均不干扰测定。
实验步骤（一）绘制吸收曲线1mol 0.001mol/L Fe3+于25ml容量瓶→0.5mol10% NH2OH•HCL 溶液摇匀，放置两分钟→1mol 0.15%邻二氮菲→2.5ml 1mol/LNaAc 溶液→稀释至刻度，摇匀→1ml比色皿，蒸馏水参比，不同波长下，求A→波长为横坐标，A为纵坐标作图（二）测定条件选择1.显色剂浓度的影响6个25ml容量瓶，各加1ml 0.001mol/L标准铁溶液及0.5ml 10%NH2OH•HCl,摇匀放置2分钟→分别加入0.15，0.25,0.5,1.0，，2.0,3.0ml 0.15%邻二氮菲，2.5ml 1mol/LNaAc溶液→稀释至刻度，摇匀→1mol 比色皿，选定波长，蒸馏水为参比，测A→邻二氮菲为横坐标，绘图。
2.溶液pH的影响6个25ml容量瓶→1ml 0.001mol/L标准铁溶液，0.5ml10%NH2OH•HCl,摇匀，放置2分钟→1ml 0.15%邻二氮菲→1mol/L NaOH溶液，0.1，,025,0.5,0.75,1.0,1.25,1.5ml→稀释至刻度→1ml比色皿，选定波长，蒸馏水参比，测A→pH为横坐标，A为纵坐标，绘图。
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。
2．学习标准曲线的制作方法。
3．了解721型分光光度计的构造及使用方法。
在测定微量铁时，通常以盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，在PH为2—9的范围内，Fe2+与邻二氮菲反应生成稳定的橙红色配合物，其lgK fθ=21.3。
该配合物的最大吸收波长为510nm。
本方法不仅灵敏度高（摩尔吸光系数ε=1.1×104），而且选择性好。
相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO2-3，20倍的Cr3+、Mn2+、V(V)、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定。
Fe2+与邻二氮菲在PH=2—9范围内均能显色，但酸度高时，反应较慢，酸度太低时Fe2+易水解，所以一般在PH=5—6的微酸性溶液中显色较为适宜。
邻二氮菲与Fe3+能生成3:1的淡蓝色配合物（lgK fθ=14.1），因此在显色前应先用还原剂盐酸羟胺将Fe3+全部还原为Fe2+（2Fe3++2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl-）。
1. 仪器：(1) 721型分光光度计。
(2) 50mL容量瓶7只/组。
(3) 10mL、5mL、2mL、1mL移液管。
2. 试剂：(1)100µg·mL-1的铁标准溶液：准确称取0.8634gNH4Fe(SO4)2·12H2O于烧杯中，加入20mL1:1的HCl和少量水溶解后，定量转移至1升容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
所得溶液含Fe3+100µg·mL-1。
(2) 10µg·ml-1的铁标准溶液：准确移取25.0mL 100µg·mL-1的铁标准溶液于250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
(3)10%盐酸羟胺溶液（临用时配制）：称取10g盐酸羟胺容于100mL水中。
(4)0.15%邻二氮菲溶液（新近配制）: 称取0.15g 1、10—邻二氮菲于100mL 水中，若不溶可稍加热。
实验_邻二氮菲分光光度法测定铁
实验邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1 掌握研究显色反应的一般方法；2 测定未知试样中的铁含量．二、实验原理由于某些无机离子本身没有颜色或者浓度低颜色过浅，其吸光值与浓度的关系不在线形范围内，则需要显色剂与被测物形成有色配合物。
该配合物的浓度与吸光度能够符合朗伯比尔定律。
因而可以间接测定出被测物的浓度。
(1) 显色剂与被测物的λmax应相距60 nm以上(2) 显色剂的用量：a保证显色完全，b用量过多会产生副反应(3) 显色时间：有些反应瞬时完成，溶液颜色很快达到平衡状态，并长时间保持不变．有些能迅速完成，但褪色较快，有些反应则较慢。
(4) pH值的影响：影响显色剂的溶解和金属的离子状态，进而影响有色配合物的生成和稳定性。
HR＝H- + R+酸浓度改变，平衡移动三、实验步骤(一) 绘制吸收曲线取两个25mL容量瓶，其中一个加入0.3mL铁标准溶液，然后在两国容量瓶中各加入0.5mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置2min。
各加入1.0mL邻二氮菲溶液和2.5mL 醋酸钠溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
用水作参比溶液，分别绘制上述两种溶液的吸收曲线。
再用不含铁的试剂溶液作参比溶液，绘制有色配合物的吸收光谱。
比较上述3种吸收光谱，选取合适的测定波长。
（二）显色剂用量实验：在8个50 mL比色管中，加入0.30 mL铁标准溶液，0.5 mL盐酸羟氨溶液，然后分别加入邻二氨菲溶液0，0.1，0.3，0.5，0.7，1.0，1.5和2.0 mL。
最后在个瓶中加入2.5 mL醋酸钠溶液，用水稀释至25 mL刻度，摇均，用1 mL比色皿，从不含显色剂的溶液作参比溶液，在508 nm下测定吸光度，记下各个吸光度值。
(三) pH值的影响：在7个50 mL比色管中，加入0.3 mL铁标准溶液，0.5 mL盐酸羟氨溶液．静置2 min后，个加入1.0 mL邻二氨菲溶液，然后用滴定管依次加入0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 mL氢氧化钠溶液，用水稀释至25 mL刻度摇均（用pH计测定上列溶液的pH值，记下其数值）．用1 cm比色皿，以水作参比溶液，在508 nm测定吸光度，记下吸光度值。
邻二氮菲分光光度法测铁 实验报告
邻二氮菲分光光度法测铁实验报告一、实验目的1、掌握邻二氮菲分光光度法测定铁含量的基本原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、了解显色条件对测定结果的影响。
二、实验原理邻二氮菲（1,10-菲啰啉）是一种有机显色剂，在 pH 值为 2～9 的条件下，与二价铁离子（Fe²⁺）能形成稳定的橙红色配合物Fe(phen)₃²⁺，其最大吸收波长为 510nm。
通过测定该配合物在 510nm 处的吸光度，可以定量测定溶液中铁的含量。
当溶液中存在三价铁离子（Fe³⁺）时，可用盐酸羟胺将其还原为二价铁离子：2Fe³⁺＋ 2NH₂OH·HCl → 2Fe²⁺＋ N₂↑ ＋ 2H₂O ＋ 4H⁺＋ 2Cl⁻在显色过程中，溶液的酸度、显色剂的用量、显色时间等因素都会影响显色效果和测定结果的准确性。
三、实验仪器与试剂1、仪器722 型分光光度计容量瓶（50mL、100mL）移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）刻度吸管（5mL、10mL）烧杯（50mL、100mL）2、试剂铁标准储备液（100μg/mL）：准确称取 08634g 硫酸亚铁铵(NH₄)₂Fe(SO₄)₂·6H₂O，溶于 50mL 1mol/L 的硫酸溶液中，转移至1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
铁标准使用液（10μg/mL）：准确吸取 1000mL 铁标准储备液于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲溶液（015%）：称取 015g 邻二氮菲，溶于 100mL 乙醇中，摇匀。
盐酸羟胺溶液（10%）：称取 10g 盐酸羟胺，溶于 100mL 水中，摇匀。
醋酸钠溶液（1mol/L）：称取 136g 无水醋酸钠，溶于适量水中，转移至 100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
盐酸溶液（1mol/L）四、实验步骤1、标准曲线的绘制分别吸取 000、100、200、300、400、500mL 铁标准使用液于 6 个50mL 容量瓶中，依次加入1mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，放置2min。
实验教学典型案例 实验名称：邻二氮菲分光光度法测铁 主讲教师：王
实验教学典型案例实验名称：邻二氮菲分光光度法测铁主讲教师：王芬一、实验目的1、掌握用邻二氮菲分光光度法测铁的原理和方法。
2、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理在 pH=3～9 的溶液中， Fe 2+ 与邻二氮菲反应生成一种稳定的橙红色络合物。
显色前需要用盐酸羟胺将Fe 3+ 全部还原为 Fe 2+ ，然后加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应如下：FeN N 32+NN 3 Fe 2+ + 该络合物的最大吸收波长为 508 nm ，可在此波长下测量吸光度,由朗伯比 耳定律计算铁含量。
用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配 制一系列浓度的标准溶液，测定相应吸光度，绘制 AC 标准曲线。
然后测定待 测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度，即可计算试 样中被测物质的质量浓度。
三、试剂和仪器1、仪器 V1100型分光光度计、容量瓶、吸量管2、试剂（1）0.1mgl 1 铁标准储备液 准确称取0.7020g NH 4Fe(SO 4)26H 2O 置于烧杯中，加少量水和20mL 1:1 H 2SO 4 溶液，溶解后，定量转移到1L 容量瓶中，用水 稀释至刻度，摇匀。
（2）10 3 molL 1 铁标准溶液。
（3）100 mgL 1 盐酸羟胺水溶液 。
2Fe 3+ +2NH 2 OH HCl=2Fe 2+ +N 2 +2H 2O +2H + +2Cl （4）15 mgL 1 邻二氮菲水溶液。
（5）10 mgL 1 乙酸钠溶液。
（6）铁未知液。
四、实验步骤1、显色标准溶液的配制 在序号为1——6的 6只50mL 容量瓶中，用吸量管分别人加入 0，0.20，0.40，0.60，0.80 铁准准溶液，分别加入 1mL100gL 1 盐酸羟胺溶液， 摇匀后放置2min ， 再各加入2mL 1.5g∙L 1 邻二氮菲溶液、5 mL1.0 mol∙L 1 乙酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁 一、实验目的 1、学会吸收曲线及标准
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
3、学会722型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4、学会数据处理的基本方法。
5、掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合，此配合物的lgK=21.3，摩尔吸光ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，稳=14.1。
所以在加入显色剂之而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。
本实验采用HAc-NaAc 缓冲溶液控制溶液pH≈5.0，使显色反应进行完全。
为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。
本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+等离子不干扰测定。
但Bi3+、Cd2+、Hg2+、Zn2+、Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀干扰测定。
04实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-教案
04实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-教案实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量教案课程名称:分析化学实验B教学内容:邻二氮菲分光光度法测定铁的含量实验类型:验证教学对象:化工、环境工程、药学、生物科学、应用化学、医学检验、制药、复合材料、生物工程、生物技术授课地点:中南大学南校区化学实验楼401授课学时:4学时一、教学目的与要求1、练习巩固吸量管、比色管(容量瓶)、比色皿的正确使用;2、了解分光光度法的基本原理，学会吸收曲线测绘及选择测定波长和标准曲线的绘制;3、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理、方法和计算;4、学习掌握722S型分光光度计的正确使用，了解其工作原理;5、掌握利用标准曲线法进行定量分析的操作与数据处理方法。
二、知识点分光光度法、朗伯—比耳定律、配位反应、显色反应、标准溶液、吸收曲线、最大吸收波长、标准曲线、吸量管、比色管、比色皿、实验报告的撰写(数据处理三线表表格化)、有效数字三、技能点玻璃器皿的洗涤、吸量管的使用、标准系列溶液的配制、比色皿的使用、分光光度计的使用四、教学重点及难点重点:邻二氮菲分光光度法测定微量铁的基本原理和操作方法难点:722s型分光度计的操作五、教学方法任务驱动法、分组讨论法、阅读指导法、现场讲解指导等六、复习引入1、复习分光光度法有关知识，提问学生:(1) 分光光度法测定对象是什么,(有色溶液物质)(2) 在用分光光度法测定微量铁中，以什么试剂作显色剂,(邻二氮菲) (3) 测定波长如何选择,(吸收曲线)[引入] 分光光度法的应用:邻二氮菲分光光度法测定微量铁-标准曲线法[引言] 铁是最重要的基本结构材料，铁合金用途很广，国防和战争更是钢铁的较量，钢铁的年产量代表一个国家的现代化水平，因而，对各种样品中所含的铁进行测定，有助于对产品的生产进行监督。
测定铁的方法很多，选择不同方法主要是看不同样品中铁的含量，含量高的含铁试样采用滴定分析法测定，含量低的含铁试样采用仪器分析方法测定。
邻二氮菲分光光度测定铁的含量
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量实验报告班级姓名学号成绩：一、实验预习（一）实验目的1、熟悉可见分光光度计的工作原理及操作规程；2、能够运用邻二氮菲分光光度法测定铁的含量。
（二）实验原理从光源钨灯发出的光，经单色器分出一组平行单色光。
当单色光通过待测溶液时，被溶液中具有一定特征吸收的化合物吸收，吸收大小与溶液中待测物浓度的关系符合朗伯—比尔定律：A= logI0/I=KCL式中：A—吸光度I0—入射光强度I—透射光强度K—吸收系数L—光路长度C—溶液中待测物浓度邻二氮菲和Fe2+在pH=3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合，为其吸收曲线如图a所示。
显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。
有关反应式如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl = 2Fe2+ + N2 ↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl-图a 最大吸收曲线用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度（A），以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
（三）实验用仪器和试剂仪器：可见分光光度计、电子天平、5mL量筒、50mL 量筒、50mL容量瓶、100ml烧杯、250mL烧杯试剂：铁标准溶液、10%盐酸羟胺溶液、0.15%邻二氮菲、CH3COONa·3H2O （四）实验步骤1、1 mol·L-1 CH3COONa溶液将100mL烧杯置于电子天平上，归零，取13.6g CH3COONa·3H2O放入100mL 烧杯中，取下烧杯。
用筒量量取50mL蒸馏水倒入装有CH3COONa·3H2O的烧杯中，搅拌至固体完全溶解备用。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
七、思索题 ⒈邻二氮菲分光光度法测定微量铁时 为何要加入盐酸羟胺溶液？ 2参比溶液旳作用是什么？在本试验 中可否用蒸馏水作参比？
3邻二氮菲与铁旳显色反应，其主要 条件有哪些？
参比溶液旳选择应是视详细情况而定。一般 1.当试液、显色剂和所用旳其他试剂在测定波长
都无吸收时，可用纯溶剂作参比溶液； 2.当试液无吸收，而显色剂或其试剂在测定波优
四、试验环节 （一）准备工作 打开仪器电源开关，预热，调解仪 器。 配制20.00μg·mL-1铁原则溶液：移 取100.0μg·mL-1铁原则溶液10.00mL于 100mL旳容量瓶中，并用蒸馏水稀至刻 线，摇匀。
四、试验环节 （二）吸收曲线旳制作 1.在1支50mL容量瓶中，加入 20.00μg/mL铁 原则溶液， 2.再加入1 mL 100g·L-1盐酸羟胺溶液摇匀 3. 5.0 mL pH≈5缓冲溶液 4. 1 mL 1.5g·L-1邻二氮菲溶液， 5.以水稀释至刻度，摇匀。 6.测量：用1cm比色皿，以试剂空白为参比， 在440~560nm处，每隔10nm测量一次吸光度，在峰 值附近每隔 5nm 测量一次吸光度A并统计。以波 长为横坐标，吸光度为纵坐标拟定最大吸收波长。
二、试验原理
邻二氮菲法简介： 邻二氮菲亦称邻菲 咯啉为显色剂，是光度法测定铁旳优良 试剂。在pH=2～9旳范围内，邻二氮菲 与二价铁生成稳定旳橙色配合物 （（Fe(phen)3）2+）。
测定时控制溶液旳酸度为pH≈5较为合适
三、仪器试剂 ⒈仪器：普析T6型分光光度计；1cm 吸收池一套；10mL 吸量管；5mL量筒 50mL 容量瓶或比色管(1＋7个)。 ⒉试剂：100.0μg·mL-1铁原则溶液； 1.5g·L-1邻二氮菲水溶液； 100g·L-1 盐酸羟胺溶液（新配）； pH≈5缓冲溶 液； 20.00μg·mL-1铁原则溶液(自己配)
邻二氮菲分光光度法测定微量铁含量实验报告
邻二氮菲分光光度法测定微量铁含量实验报告邻二氮菲分光光度法测定微量铁含量实验报告一、实验目的本实验的目的是使用邻二氮菲分光光度法来测定微量金属铁的含量。
二、实验原理邻二氮菲分光光度法是利用铁离子与邻二氮菲溶液反应生成一种具有特定波长的黄色螯合物，该波长可以有效反映铁离子浓度的变化。
铁与邻二氮菲反应生成黄色螯合物的反应式如下：Fe2+ + 2 para-dimethylaminobenzaldehyde（pDMnB）→ Fe （pDMnB）2+该反应的波长为555 nm，可以在此处测得离子浓度。
由于邻二氮菲螯合反应是多步反应，在受铁离子影响的情况下，将系中存在的其它配体离子换去，导致螯合反应降解，因而使电导率降低。
因此，可以使用该方法来测定微量金属铁含量。
三、实验步骤1、向容量瓶中加入水样溶液，加至容量瓶的刻度线处，用操作标准液（1000ppm Fe）与水样溶液混匀，在混匀的情况下加入邻二氮菲反应液，搅拌使混合物中的邻二氮菲反应液均匀溶解；2、在光度计中将比较程序设置为“比较”，将比较器设置为“测定”，并将调控器拨至“泻出”位置；3、在操作标准液容器中取1ml操作标准液，根据调控器位置，从容量瓶中泻出0.10ml，将其放入操作标准液容器中，混合使标准液内的铁离子与邻二氮菲反应液反应，谐解效应；4、使用光度计测定该混合液的光度，记下读数；5、将上述步骤重复5次；6、计算出每次实验的平均值并记录，并用它来测定样品中的铁离子浓度。
四、实验结果1、实验数据如下：操作标准液测试：第一次测试第二次测试第三次测试第四次测试第五次测试平均值2.20 2.19 2.20 2.19 2.21 2.20样品测试：第一次测试第二次测试第三次测试第四次测试第五次测试平均值1.07 1.08 1.09 1.08 1.07 1.082、由实验数据中可以看出，在实验中，操作标准液的平均值为2.20，样品的平均值为1.08。
3、操作标准液中的铁离子浓度为1000ppm，而样品的铁离子浓度可以由下式计算：样品铁离子浓度=样品平均值/操作标准液平均值x操作标准液浓度=1.08/2.20x1000ppm=491.83纳克每升五、实验总结本实验通过测定邻二氮菲分光光度，利用铁离子与邻二氮菲溶液反应生成一种具有特定波长的黄色螯合物，使用光度计测定该混合液的光度，从而测出了样品中的铁离子浓度，最后结果为491.83纳克/升。
邻二氮菲分光光度法测定铁含量
五、分光光度计使用方法
3. 测试样品步骤：（整个过程样品池盖关闭） 空白样品调零：1号溶液为空白样品（1号溶液透光率为 100%），利用拉杆（轻轻调节拉杆即可）使光路对准空
白样品进行调零， “模式”按键调到透射比-“100%”
按键（光全部退通过1号溶液，相当于将背景吸光度扣除 掉）
不 同 浓 度 的 同 一 物 质 ， 其 吸 收 曲 线 性 质 相 似 λmax 不 变 。 而 对 于 不同物质它们的吸收曲线形状和 λmax不同。
吸 收 曲 线 可 以 提 供 物 质 结 构 信 息，作为物质定性分析的依据。
二、 Lambert-Beer定律
根据Lambert-Beer定律数学表达式： A = εbc
邻二氮菲分光光度法 测定铁含量
2014年12月
实验目的
1. 通过本实验了解分光光度法的基本原理和基 本方法。
2. 掌握邻二氮菲吸光光度法测定铁的方法。
3. 学习吸光光度法测定铁吸收曲线和标准曲线 的绘制方法。
4. 了解分光光度计的构造、性能及使用方法。
一、分光光度法
分光光度法(spectrophotometry): 根据物质的分子对光的 选择性吸收而建立起来的分析方法，是应用分光光度计测量 溶液在某一波长下的吸光度以确定溶液中被测物质含量的分 析方法。
表5-3 标准溶液和待测溶液的吸光度数据记录
容量瓶编号
1（空白） 2
3
4
56
7（水样）
c稀释（Fe2+）/ mmol·L-1 0.00
吸光度A
0.00
？？
根据标准曲线 读出浓度数值
七、数据记录与结果分析
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课程名称：分析化学实验B
教学内容：邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
实验类型：验证
教学对象：化工、环境工程、药学、生物科学、应用化学、医学检验、制药、复合材料、生物工程、生物技术
授课地点：中南大学南校区化学实验楼401
授课学时：4学时
一、教学目的与要求
1、练习巩固吸量管、比色管（容量瓶）、比色皿的正确使用；
2、了解分光光度法的基本原理，学会吸收曲线测绘及选择测定波长和标准曲线的绘制；
3、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理、方法和计算；
4、学习掌握722S型分光光度计的正确使用，了解其工作原理；
5、掌握利用标准曲线法进行定量分析的操作与数据处理方法。
二、知识点
分光光度法、朗伯—比耳定律、配位反应、显色反应、标准溶液、吸收曲线、最大吸收波长、标准曲线、吸量管、比色管、比色皿、实验报告的撰写（数据处理三线表表格化）、有效数字
ρFe=cx/5
(5)数据记录与处理及结论
(a)吸收曲线的绘制
表1不同波长下的吸光度
波长/nm
430
450
470
490
500
505
510
515
520
530
550
570
590
吸光度A
以吸光度A为纵坐标，以相应波长λ为横坐标，在坐标纸上绘制吸收曲线。
(b)标准曲线的绘制与铁含量的测定
表2不同浓度长下的吸光度
(d)测定样品的吸光度A。
[讲解注意事项]
1、试剂的加入必须按顺序进行；
2、定容后必须充分摇匀后进行测量；
3、分光光度计必须预热30min，稳定后才能进行测量；
4、比色皿必须配套，装上待测液后透光面必须擦拭干净；切勿用手接触透光面；
5、在进行条件试验时，每改变一次试液浓度，比色皿都要洗干净；
6、同一组溶液必须在同一台仪器上测量；
(4)标准曲线（获得线性范围）及测定分析样品的吸光度A
用1cm比色皿，以试剂空白（1号）为参比溶液，在选定波长下，测定各溶液的吸光度。在坐标纸上，以铁含量（浓度单位是××μg/25ml）为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。依据试液的A值，从标准曲线上即可查得其浓度，计算出原含铁分析试液中含铁含量(以mg·L-1表示)。(按下式计算)
3、分析误差产生原因：取液不当；溶液没有摇匀；显色时间不足；改动了仪器的工作条件等因素。
[布置作业]：根据你的测定，我们本地区的水中铁的浓度在什么范围？(写出测定实验操作步骤、实验数据和测定结果)
测定溶液中的微量铁，一般采用邻二氮菲分光光度法。即在pH=3～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+，反应如下：
2Fe3+ + 2NH2OH·HC1＝2Fe2+ +N2↑+2H2O+4H++2C1－
根据朗伯—比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。采用标准曲线分析方法，测定被测物质中微量铁的含量。
(1)分光光度法测定对象是什么？(有色溶液物质)
(2)在用分光光度法测定微量铁中，以什么试剂作显色剂？(邻二氮菲)
(3)测定波长如何选择？(吸收曲线)
[引入]分光光度法的应用：邻二氮菲分光光度法测定微量铁-标准曲线法
[引言]铁是最重要的基本结构材料，铁合金用途很广，国防和战争更是钢铁的较量，钢铁的年产量代表一个国家的现代化水平，因而，对各种样品中所含的铁进行测定，有助于对产品的生产进行监督。
(2)722s型分光度计操作步骤
(a)开机
(b)定波长入=510nm
(c)打开盖子调零T=0。
(d)关上盖子，调满刻度至T=100(A=0)。
(e)参比溶液比色皿放入其中，均合T=100调满(A=0)。
(f)第一格不动，二，三，四格换上标液（共计六个点）调换标液时先用蒸馏水清洗后，再用待测液（标液）清洗，再测其分光度
测定铁的方法很多，选择不同方法主要是看不同样品中铁的含量，含量高的含铁试样采用滴定分析法测定，含量低的含铁试样采用仪器分析方法测定。常用的仪器分析方法有分光光度法、原子吸收分光光度法、原子发射光谱法等，其中邻二氮菲分光光度法测定微量铁的含量是国际国内规定的标准分析方法，因而生产和实验室中广泛采用标准曲线法邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法测定样品中微量铁的含量。
[新授]课题：邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-标准曲线法
[提出任务]教师提出本课题的学习任务：
1、邻二氮菲分光光度法测定铁的基本原理是什么？
2、邻二氮菲吸光光度法测定微量铁的实验中，吸收曲线与标准曲线有何区别?
3、邻二氮菲分光光度法测定铁的操作方法。
[任务探索]
1、邻二氮菲分光光度法测定铁的基本原理是什么？
[学生回答]
(1)邻二氮菲分光光度法测定铁中的铁主要是由什么价态形式存在？如何保障溶液中的铁离子是以邻二氮菲络合铁的价态形式存在？
邻二氮菲分光光度法测定铁中的铁主要是以Fe2+离子形式存在的。通常在酸性条件下，加入盐酸羟胺或抗坏血酸来保障溶液中的铁离子是Fe2+离子形式存在。
(2)邻二氮菲络合铁时，溶液pH值最好控制在多少？用什么缓冲溶液调节溶液pH？
(c)原含铁分析试液中含铁含量
序号
ρ（Fe）/ mg•L-1
平均值
s
RSD
7
8
9
结论：铁未知液中铁的含量ρFe=
95%置信度下平均值的置信区间ρFe=
[小结]用邻二氮菲分光光度法测定铁是国际国内规定的标准分析方法。在酸性条件下，加入盐酸羟胺，保障溶液中的铁离子是Fe2+离子形式存在，在pH=5的醋酸缓冲溶液中，以邻二氮菲为显示剂，与Fe2+生成一种稳定的桔红色络合物Fe(phen) 32+，用分光光度法测定物质的含量。定量测定方法一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度(A)，以溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度值，即可计算试样中被测物质的质量浓度。
(3)吸收曲线（获得最佳工作波长）
选用1cm比色皿，以试剂空白（1号）为参比溶液，取4号比色管试液，在440～560nm波长范围内，每隔10nm测一次吸光度，其中500～520nm之间，每隔5nm测定一次吸光度(每改变一次波长，都要在参比溶液下调整T=0、T=100、A=0)。以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长λ为横坐标，在坐标纸上绘制A与λ的吸收曲线。从吸收曲线上选择最大吸收波长λmax作为测定波长。
7、标准曲线的质量是测定准确与否的关键，标准系列溶液配制时，必须严格按规范进行操作
待测溶液一定要在工作曲线线形范围内，如果浓度超出直线的线性范围，则有可能偏离朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，就不能使用吸光光度法测定。
[学生分组]以每两个同学一组分为12～16个小组
[学生实训]测定样品中的铁含量并完成实验报告。教师巡回指导
2、邻二氮菲吸光光度法测定微量铁的实验中，吸收曲线与标准曲线有何区别?
[讲解]吸收曲线和标准曲线是两个完全不同用途的曲线，吸收曲线一般是指做全波段扫描时候的信号曲线，为吸光度-波长曲线，用于确定测定样品所用的最佳波长;标准曲线一般是在定波长测定时，用不同浓度的标准样品作为不同的样品点，测定绘制而成的吸光度-浓度曲线，根据样品测得的吸光度值，可从曲线上查找或计算出样品的浓度。
[交流讨论]引导学生说出自己完成任务的情况(成功或失误之处)
[试验小结]教师小结本课题实验完成情况。
1、吸量管的规范操作：克服多加或少加的现象；
2、分光光度计使用时的注意事项：（1）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿命。（2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。（3）比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。
比色管号
标准溶液
未知液
1
2
3
4
5
6
7
8
9
移取含铁液的体积/ml
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
5.0
5.0
5.0
含铁总量/[μg·(25mL)-1]
吸光度A
以铁含量（浓度单位是××μg/25ml）为横坐标，吸光度A为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。依据未知液的A值，从标准曲线上即可查得其对应浓度。
3、邻二氮菲分光光度法测定铁的操作方法。
[阅读]指导学生阅读实验报告中的实验步骤。
[讨论]四个学生一组，归纳测定操作要点。
[提问]学生代表小组发言：邻二氮菲分光光度法测定铁的测定步骤
(1)系列标准溶液及分析试液的配制
取6只25mL比色管，用5ml吸量管分别加入铁标准工作溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL，另取3只25mL比色管，分别加入含铁分析试液5.00mL，然后加入1mL盐酸羟胺，2.00mL邻二氮菲，5mLNaAc溶液，每加入一种试剂都应混匀。用去离子水定容至刻度，充分摇匀，放置10min，待测。
三、技能点
玻璃器皿的洗涤、吸量管的使用、标准系列溶液的配制、比色皿的使用、分光光度计的使用
四、教学重点及难点
重点：邻二氮菲分光光度法测定微量铁的基本原理和操作方法
难点：722s型分光度计的操作
五、教学方法
任务驱动法、分组讨论法、阅读指导法、现场讲解指导等
六、复习引入
1、复习分光光度法有关知识，提问学生: