微生物学检验(第3版)13分枝杆菌属和诺卡菌属(自制)
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第十三章
分枝杆菌属和诺卡菌属
学习要求
• 熟练掌握结构分枝杆菌的生物学特性、微 生物学检验和临床意义。 • 熟悉麻风分ห้องสมุดไป่ตู้杆菌生物学特性、微生物学 检验和临床意义。 • 熟悉诺卡菌属的生物学特性、微生物学检 验。
第一节 分枝杆菌属
• 分枝杆菌属是一类细长、略带弯曲、呈分枝状生 长的杆菌。
• 本菌属的主要特点是细胞壁含有大量的脂类，这 与染色性、抵抗力、致病性有密切相关。 • 因其具有抗酸性，一旦着色后能抵抗盐酸乙醇的 脱色作用，故又称抗酸杆菌。
（三）临床意义
• • • • 致病物质 所致疾病及临床表现 免疫性与超敏反应 结核菌素试验
1、致病物质
• 不产生内毒素、外毒素，无荚膜、无侵袭 性酶 • 主要是机体对菌体成份及代谢产物引起免 疫损伤及超敏反应
• 蛋白质
–是结合菌素的主要成分，和蜡质D结合后能使 机体发生超敏反应。
• 脂质
–索状因子：与索状生长现象有关、抑制白细胞 游走和引起慢性肉芽肿、 –磷脂：与结核结节的形成及干酪样坏死有关 –硫酸脑苷脂：抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体 的结合，使细菌能在吞噬细胞中长期存活。 –蜡质D：迟发型超敏反应
报告方式
分枝杆菌培养阴性
分枝杆菌培养阳性菌落 ** 个 分枝杆菌培养阳性(+) 分枝杆菌培养阳性(++) 分枝杆菌培养阳性(+++)
无菌落生长
菌落占斜面面积小于1/4 菌落占斜面面积1/4 菌落占斜面面积1/2 菌落占斜面面积3/4
分枝杆菌培养阳性(++++)
菌落呈菌苔生长
如培养阴性，应以“培养阴性”报告，不得以：“—”表示
–阴性：未感染过、未接种卡介苗、细胞免疫力功能低下
二、麻风分枝杆菌
• 俗称麻风杆菌，引起麻风，是一种慢性传 染病
（一）生物学特性
• 形态与染色 抗酸杆菌，比结核菌粗短，抗酸着色 圴匀。典型的胞内寄生菌，有麻风杆菌存 在的细胞胞质有泡沫，形成麻风细胞。 • 培养特性 体外人工培养未成功
（二）微生物学检验
• 纯蛋白衍化物(purified protein derivative，
PPD)
结核菌素试验
• 原理：迟发型超敏反应的机制
• 方法
–PPD 5个单位两前臂皮内注射 –48～72h后，红肿硬结≥5mm者为阳性，≥15mm为强阳性， ＜5mm为阴性
• 结果分析：
–阳性：感染过TB或接种卡介苗成功 –强阳性：活动性结核病
• 主要包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌
一、结核分枝杆菌
（一）生物学特性 （二）微生物学检验 （三）临床意义
（一）生物学特性
1、形态与染色
• 典型形态是直或弯曲、两端钝圆、菌体细长，单 个散在或呈分枝状排列，菌体常扭集在一起呈绳 索状、束状或堆积成团。 • 无芽胞，无鞭毛、无荚膜 • 革兰染色阳性，但不易着色。 • 萋-尼氏抗酸染色后呈红色。
1、标本采集
2、标本直接检查
读片及报告方式
未发现麻风分枝杆菌300个视野
+
++ +++ ++++
1-10条菌/100个油镜视野
1-10条菌/10个油视野 1-10条菌/平均每个油视野 10-100条/菌平均每个油视野
麻风分枝杆菌
狮面
第二节
诺卡菌属
1.需氧 2.含分枝菌酸 3.分布：土壤中，多数：非致病菌 4.致病菌： 星形诺卡菌（N. asteroides） 巴西诺卡菌（N. brasiliensis） 豚鼠诺卡菌（N. caviae）
–采集方法：即时痰、晨痰、夜间痰
–痰的性状：合格的痰标本应是患者深呼吸后由 肺部深处咳出的分泌物，如干酪痰、血痰、黏 液痰
• 其它标本
（2）废弃标本和污染物的处理
• 痰盒和废弃标本等污染物
– 高压蒸汽灭菌后才能按《医疗废物管理条例》 丢弃或清洗，严禁不经灭菌随意处理
• 痰检工作面的消毒
– 高压蒸汽灭菌 – 消毒液擦拭 – 紫外线灭菌灯
3、分离培养
• 改良罗氏培养基培养法 • 标本前处理
– 去污染、液化标本
• 接种、培养与观察
– 每份标本同时接种两支
• 结果
– – – – 3天内有菌落——报告非分枝杆菌生长 7天内有菌落，并经抗酸染色确认——非结核分枝杆菌 7天以后有菌落，并经抗酸染色确认——分枝杆菌 8周内仍无菌落——培养阴性
2、所致疾病及临床表现
• 可通过呼吸道、消化道、皮肤黏膜损伤等多种途 径感染
• 全身各器官组织皆可受染，以肺结核最为常见。
• 继发感染亦称复活感染，发痊愈的原发感染可以 复活，成为活动性结核病。继发性感染亦可由外 界新入侵的结核分枝杆菌引起，其特征是慢性肉 芽肿炎症，形成结核结节、干酪化和纤维化。
镜检读片
结果分级报告标准：
抗酸杆菌阴性 (－)： 连续观察300个不同视野， 未发现抗酸杆菌。 报告抗酸杆菌菌数： 1-8条抗酸杆菌/300视野。 抗酸杆菌阳性（1＋）: 3-9条抗酸杆菌/100视野。 抗酸杆菌阳性（2＋）：1-9条抗酸杆菌/10视野。 抗酸杆菌阳性（3＋）：1-9条抗酸杆菌/每视野。 抗酸杆菌阳性（4＋）：≥10条抗酸杆菌/每视野。
3、免疫性与超敏反应
• 结核的免疫属于感染免疫，又称有菌免疫。 即此种免疫力随结核分枝杆菌或其成分在 体内存在而存在。 • 属胞内感染菌，其免疫主要是以 T 细胞为 主的细胞免疫。 • 迟发型超敏反应
4、结核菌素试验
• 是应用结核菌素来测定机体能否引起皮肤
迟发性超敏反应的一种试验。 • 旧结核菌素（old tuberculin，OT)
2、培养特性
• 专性需氧 • 生长缓慢:15-20h 繁殖一代
• 生长适宜温度35-37℃，PH 5.5-7.2，营养要求 较高。 • 在改良罗氏培养基上的菌落：粗糙、凸起、厚， 呈颗粒、结节或菜花样，边缘薄且不规则、乳白 色或淡黄色，无可溶性色素。
结核杆菌菌落
3、生化反应
• • • • 不发酵糖类 触酶（+） 硝酸盐还原试验（+） 耐热触酶、耐热磷酸酶试验阴性，加热 68℃后丧失活性
2、显微镜检
• 抗酸染色镜检
– 涂片 – 染色 – 镜检 – 报告
涂片抗酸染色检查方法-5
Z－N染色步骤
涂 痰 膜 自 然 干 燥
复 红 加 热 初 染 5 分 钟 5% 盐 酸 酒 精 脱 色 1-3 分 钟
流 水 冲 洗
流 水 冲 洗
美 兰 复 染 30 秒
流 水 冲 洗
自 然 干 燥
镜 检
生物学性状
形态：菌体为丝状，称为菌丝或菌线体，也 可以为杆状或球杆状，革兰染色阳性 抗酸染色：阳性 硫磺样颗粒: 渗出液、痰或脓汁中有时可见淡黄、 红色或黑色小颗粒。 呈菊花状，中心G+，边缘G-
营养要求：不高（沙氏或普通琼脂培养基） 气体环境：需氧，有气生菌丝
培养温度：室温或37℃
生长速度：缓慢生长，约1周 色素：星形诺卡菌：黄色或深橙色，无白色菌丝 巴西诺卡菌：有白色菌丝 菌丝断裂： 5天后镜检可见链球状或链杆状
4、抵抗力
• 耐干燥：干燥痰内可存活6-8个月，黏附在 尘埃能保持传染性8-10天 • 对湿热和紫外线敏感 • 对酸、碱有较强的抵抗力 • 对75%乙醇敏感
（二）微生物学检验
1、标本 2、显微镜检查 3、分离培养
1、标本
（1）标本采集
• 痰
–容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶， 或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本
（放线菌属：24h开始)
培养特征：菌落有皱褶、颗粒状
致病性
侵入途径：呼吸道或皮肤创伤 所致疾病：诺卡菌病（nocardiosis） 外源性感染 化脓性感染 肺部：肺炎、肺脓肿、肺空洞 脑部：脑脓肿、脑膜炎 其他：肾、肝、脾、心包等 （慢性肉芽肿，瘘管） 好发于免疫缺陷患者
微生物学检查
1.硫磺样颗粒压片： 2.取痰、脑脊液、脓汁： 涂片：革兰染色及抗酸染色 3.分离培养：沙保弱或普通琼脂培养基 4.生化试验
分枝杆菌属和诺卡菌属
学习要求
• 熟练掌握结构分枝杆菌的生物学特性、微 生物学检验和临床意义。 • 熟悉麻风分ห้องสมุดไป่ตู้杆菌生物学特性、微生物学 检验和临床意义。 • 熟悉诺卡菌属的生物学特性、微生物学检 验。
第一节 分枝杆菌属
• 分枝杆菌属是一类细长、略带弯曲、呈分枝状生 长的杆菌。
• 本菌属的主要特点是细胞壁含有大量的脂类，这 与染色性、抵抗力、致病性有密切相关。 • 因其具有抗酸性，一旦着色后能抵抗盐酸乙醇的 脱色作用，故又称抗酸杆菌。
（三）临床意义
• • • • 致病物质 所致疾病及临床表现 免疫性与超敏反应 结核菌素试验
1、致病物质
• 不产生内毒素、外毒素，无荚膜、无侵袭 性酶 • 主要是机体对菌体成份及代谢产物引起免 疫损伤及超敏反应
• 蛋白质
–是结合菌素的主要成分，和蜡质D结合后能使 机体发生超敏反应。
• 脂质
–索状因子：与索状生长现象有关、抑制白细胞 游走和引起慢性肉芽肿、 –磷脂：与结核结节的形成及干酪样坏死有关 –硫酸脑苷脂：抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体 的结合，使细菌能在吞噬细胞中长期存活。 –蜡质D：迟发型超敏反应
报告方式
分枝杆菌培养阴性
分枝杆菌培养阳性菌落 ** 个 分枝杆菌培养阳性(+) 分枝杆菌培养阳性(++) 分枝杆菌培养阳性(+++)
无菌落生长
菌落占斜面面积小于1/4 菌落占斜面面积1/4 菌落占斜面面积1/2 菌落占斜面面积3/4
分枝杆菌培养阳性(++++)
菌落呈菌苔生长
如培养阴性，应以“培养阴性”报告，不得以：“—”表示
–阴性：未感染过、未接种卡介苗、细胞免疫力功能低下
二、麻风分枝杆菌
• 俗称麻风杆菌，引起麻风，是一种慢性传 染病
（一）生物学特性
• 形态与染色 抗酸杆菌，比结核菌粗短，抗酸着色 圴匀。典型的胞内寄生菌，有麻风杆菌存 在的细胞胞质有泡沫，形成麻风细胞。 • 培养特性 体外人工培养未成功
（二）微生物学检验
• 纯蛋白衍化物(purified protein derivative，
PPD)
结核菌素试验
• 原理：迟发型超敏反应的机制
• 方法
–PPD 5个单位两前臂皮内注射 –48～72h后，红肿硬结≥5mm者为阳性，≥15mm为强阳性， ＜5mm为阴性
• 结果分析：
–阳性：感染过TB或接种卡介苗成功 –强阳性：活动性结核病
• 主要包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌
一、结核分枝杆菌
（一）生物学特性 （二）微生物学检验 （三）临床意义
（一）生物学特性
1、形态与染色
• 典型形态是直或弯曲、两端钝圆、菌体细长，单 个散在或呈分枝状排列，菌体常扭集在一起呈绳 索状、束状或堆积成团。 • 无芽胞，无鞭毛、无荚膜 • 革兰染色阳性，但不易着色。 • 萋-尼氏抗酸染色后呈红色。
1、标本采集
2、标本直接检查
读片及报告方式
未发现麻风分枝杆菌300个视野
+
++ +++ ++++
1-10条菌/100个油镜视野
1-10条菌/10个油视野 1-10条菌/平均每个油视野 10-100条/菌平均每个油视野
麻风分枝杆菌
狮面
第二节
诺卡菌属
1.需氧 2.含分枝菌酸 3.分布：土壤中，多数：非致病菌 4.致病菌： 星形诺卡菌（N. asteroides） 巴西诺卡菌（N. brasiliensis） 豚鼠诺卡菌（N. caviae）
–采集方法：即时痰、晨痰、夜间痰
–痰的性状：合格的痰标本应是患者深呼吸后由 肺部深处咳出的分泌物，如干酪痰、血痰、黏 液痰
• 其它标本
（2）废弃标本和污染物的处理
• 痰盒和废弃标本等污染物
– 高压蒸汽灭菌后才能按《医疗废物管理条例》 丢弃或清洗，严禁不经灭菌随意处理
• 痰检工作面的消毒
– 高压蒸汽灭菌 – 消毒液擦拭 – 紫外线灭菌灯
3、分离培养
• 改良罗氏培养基培养法 • 标本前处理
– 去污染、液化标本
• 接种、培养与观察
– 每份标本同时接种两支
• 结果
– – – – 3天内有菌落——报告非分枝杆菌生长 7天内有菌落，并经抗酸染色确认——非结核分枝杆菌 7天以后有菌落，并经抗酸染色确认——分枝杆菌 8周内仍无菌落——培养阴性
2、所致疾病及临床表现
• 可通过呼吸道、消化道、皮肤黏膜损伤等多种途 径感染
• 全身各器官组织皆可受染，以肺结核最为常见。
• 继发感染亦称复活感染，发痊愈的原发感染可以 复活，成为活动性结核病。继发性感染亦可由外 界新入侵的结核分枝杆菌引起，其特征是慢性肉 芽肿炎症，形成结核结节、干酪化和纤维化。
镜检读片
结果分级报告标准：
抗酸杆菌阴性 (－)： 连续观察300个不同视野， 未发现抗酸杆菌。 报告抗酸杆菌菌数： 1-8条抗酸杆菌/300视野。 抗酸杆菌阳性（1＋）: 3-9条抗酸杆菌/100视野。 抗酸杆菌阳性（2＋）：1-9条抗酸杆菌/10视野。 抗酸杆菌阳性（3＋）：1-9条抗酸杆菌/每视野。 抗酸杆菌阳性（4＋）：≥10条抗酸杆菌/每视野。
3、免疫性与超敏反应
• 结核的免疫属于感染免疫，又称有菌免疫。 即此种免疫力随结核分枝杆菌或其成分在 体内存在而存在。 • 属胞内感染菌，其免疫主要是以 T 细胞为 主的细胞免疫。 • 迟发型超敏反应
4、结核菌素试验
• 是应用结核菌素来测定机体能否引起皮肤
迟发性超敏反应的一种试验。 • 旧结核菌素（old tuberculin，OT)
2、培养特性
• 专性需氧 • 生长缓慢:15-20h 繁殖一代
• 生长适宜温度35-37℃，PH 5.5-7.2，营养要求 较高。 • 在改良罗氏培养基上的菌落：粗糙、凸起、厚， 呈颗粒、结节或菜花样，边缘薄且不规则、乳白 色或淡黄色，无可溶性色素。
结核杆菌菌落
3、生化反应
• • • • 不发酵糖类 触酶（+） 硝酸盐还原试验（+） 耐热触酶、耐热磷酸酶试验阴性，加热 68℃后丧失活性
2、显微镜检
• 抗酸染色镜检
– 涂片 – 染色 – 镜检 – 报告
涂片抗酸染色检查方法-5
Z－N染色步骤
涂 痰 膜 自 然 干 燥
复 红 加 热 初 染 5 分 钟 5% 盐 酸 酒 精 脱 色 1-3 分 钟
流 水 冲 洗
流 水 冲 洗
美 兰 复 染 30 秒
流 水 冲 洗
自 然 干 燥
镜 检
生物学性状
形态：菌体为丝状，称为菌丝或菌线体，也 可以为杆状或球杆状，革兰染色阳性 抗酸染色：阳性 硫磺样颗粒: 渗出液、痰或脓汁中有时可见淡黄、 红色或黑色小颗粒。 呈菊花状，中心G+，边缘G-
营养要求：不高（沙氏或普通琼脂培养基） 气体环境：需氧，有气生菌丝
培养温度：室温或37℃
生长速度：缓慢生长，约1周 色素：星形诺卡菌：黄色或深橙色，无白色菌丝 巴西诺卡菌：有白色菌丝 菌丝断裂： 5天后镜检可见链球状或链杆状
4、抵抗力
• 耐干燥：干燥痰内可存活6-8个月，黏附在 尘埃能保持传染性8-10天 • 对湿热和紫外线敏感 • 对酸、碱有较强的抵抗力 • 对75%乙醇敏感
（二）微生物学检验
1、标本 2、显微镜检查 3、分离培养
1、标本
（1）标本采集
• 痰
–容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶， 或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本
（放线菌属：24h开始)
培养特征：菌落有皱褶、颗粒状
致病性
侵入途径：呼吸道或皮肤创伤 所致疾病：诺卡菌病（nocardiosis） 外源性感染 化脓性感染 肺部：肺炎、肺脓肿、肺空洞 脑部：脑脓肿、脑膜炎 其他：肾、肝、脾、心包等 （慢性肉芽肿，瘘管） 好发于免疫缺陷患者
微生物学检查
1.硫磺样颗粒压片： 2.取痰、脑脊液、脓汁： 涂片：革兰染色及抗酸染色 3.分离培养：沙保弱或普通琼脂培养基 4.生化试验