生物工程下游技术练习题及答案样本

练习题及答案

填空题

1.超声波破碎细胞的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及细胞类型等因素有关。

3在生物工程下游技术领域, 色谱和电泳是当前所知最好的两种分离蛋白的方法。

5无论是什么类型的液相或气相色谱,其色谱装置均应包括: 流动相供给、进样、色谱柱、检测器等四大部分。

7径向色谱填料主要有: 离子交换树脂和亲和色谱填料两种。

9请列举任意四种破碎细胞的方法:

高压匀浆法, 高速珠磨法, 超声破碎, 酶溶法。

11请列举二种测量蛋白质含量的方法: 双缩脲法 , 考马斯蓝法。

13无机HPLC填料最常见的是以多孔大硅胶为基本材料的填料; 含14硼的Na2O-B2O3-SiO2系玻璃经过热处理引起相分离, 生成可溶于酸的相及不溶于酸的高硅相。将酸可溶相浸析出来后剩下的另一相就制成了可控孔径玻璃, 可控孔径玻璃的主要化学成份就是SiO2。 (每空1分)

17羟基磷灰石在原理上一般被认为是一种无机基质高效色谱。

19．指出蛋白质复性的三种方法: 稀释法, 透析法, 液色色谱法等

21．膜的孔径一般为微米级, 依据其孔径的不同( 或称为截留分子量) , 可将膜分为微滤膜、超滤膜、纳滤膜和反渗透膜

23．色谱的峰宽能够用半峰宽、峰底宽、标准偏差表示。

26．Shepadex G25是一种凝胶排阻色谱, 主要用于脱盐。

32．当前径向色谱柱使用的填料主要有离子交换树脂和亲和色谱两种;

34．细胞破碎法包括: 机械力和非机械力破碎方法; 机械方式又包括: 液体剪切力和固体剪切力方法, 液体剪切力包括: 高压匀浆法和超声破碎法; 固体剪切力包括: 高速珠磨法和压榨法。

26．高压匀浆法的破碎率决定于: 匀浆阀的结构, 操作压力, 破碎次数。

2当前用于固液分离的膜过滤法主要有以下三种: 微孔过滤(微滤)、超滤、反渗透。

4在生物物质分离中, 能够依据一次进样量多少, 将色谱分为: 分析色谱、半制备色谱( 中等规模制备色谱) 、制备色谱和工业生产规模色谱 4大类。6在色谱过程中, 有两种将目标产品从色谱柱上洗脱下来的方法: 一种是维持流动相热力学参数不变的等梯度洗脱法, 另一种叫梯度洗脱法。

8评价HPLC色谱填料性能的主要表征指标包括:

保留值, 选择性, 柱效率, 填充柱的总空隙度和穿透性, 分离度。

10在HPLC领域内经常能够遇到的吸附等温线能够有以下5种( 形状) :凸形、凹形、 S形、 H形、阶梯形

12常见的无机色谱填料主要包括: 多孔硅胶、可控孔径玻璃、氧化铝、氧化钛、羟基磷灰石以及碳和石墨等基质。

15不同分子量的蛋白质在电场中的迁移速度与其所带的净电荷数成正比, 与它本身的半径及溶液的黏度成反比。

18．指出三种交联葡聚糖的微载体: Cytodex1微载体; Cytodex 2微载体; Cytodex 3微载体

20．固液分离的主要方式包括: 离心法, 微孔膜过滤法, 双水相萃取, 泡沫分离法。

22 色谱的保留值能够用保留时间也能够用保留体积来表示。

24．指出下列情况下色谱系统对容质的柱效和分配系统差的关系:

①柱效较高, △K (分配系数)较大,完全分离;

②△K 不是很大, 柱效较高, 峰较窄, 基本上完全分离;

③柱效较低, , △K 较大,但分离的不好;

④△K 小, 柱效低, 分离效果更差。

25．线性色谱的吸附等温线是直线, 非线性色谱的吸附等温线的形状常见的有: 凸形、凹形、 S形、 H形、阶梯形。从吸附等温线的形状能够预见色谱曲线的形状, 一般凸形的吸附等温线代表色谱图是拖尾的, 凹形吸附等温线代表的色谱图是吐舌头形状、 S形的色谱图是波浪形的。

27．Shephadex G100是一种凝胶排阻色谱, 主要用于蛋白质的纯化。28．DEAE-Shaphdex A25是一种离子交换层析介质。

29．CM-纤维素是一种弱阳离子交换介质。

30．离子交换层析一般是经过梯度一般采用两种方法达到分离蛋白质的目的。一种是增加洗脱液的离子强度, 一种是改变洗脱液的pH值。

31．QAE-葡聚糖是强碱阴离子交换剂, SP—是强酸阳离子交换剂。

33．蛋白质含量和纯度测定方法。含量测定:克氏定氮法, TCA比浊度法、双缩脲法、福林-酚法和紫外线法, 考马斯兰法( Bradford法) 。

纯度衡量:电泳法, 层析法, 质谱法等。一般应采用二种以上方法, 而且同一原理的方法不应该采用二次。

35．高压匀浆法的主要困难包括: 温控和堵塞问题

34．蛋白质的分子量测定: 超离心法、光散射方法、凝胶过滤法、 SDS-PAG、电泳法。

判断对错题

1.微波加热法破碎细胞特别适合于对热不稳定的的产物的提取。×

2.利用液相色谱方法对包含体蛋白质进行复性比稀释复性法优越.∨

3.浓差极化是一个可逆的过程。∨

4.层析系统中,有效柱长>最短柱长是使最难分离的一对溶质将达到完全的基线分离的必要条件. ∨

5.层析过程中,有效柱长是随层析条件的变化而变化的. ∨

6.分析色谱是线性色谱; ∨

7.只要样品进样量足够大, 色谱过程就是一种非线性色谱。∨

8.生化用离子交换树脂的电荷密度越大, 其分离效果越好。×

9.样品中蛋白质的纯度为99%, 说明该样品中目标蛋白质的含量为样品总量的99%。×

10.所有的蛋白质电泳都是利用不同蛋白质带的电荷的差异而达到分离不同蛋白质目的的。×

11.葡聚糖凝胶排阻色谱中, 上样量越大, 分辨率越高。×

12.凝胶排阻色谱的层析柱越长越好。×

13.HPLC填料的颗粒分散范围越窄越好。∨

14.非线性色谱的样品的保留值是可变的。∨

15.为了减小样品在洗脱过程的轴向扩散, 可采取增大进样浓度减少进样量的方式。∨

16.作为动物细胞培养的优良微载体应该是刚性的。×

17.高速珠磨法比高压匀浆法破碎细胞的效果好。×

18.色谱过程中试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础。∨