转基因植物及其产品的检测方法
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转基因植物 及其产品的检测方法
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1
转基因植物（GMO）
• 自1983年首例转基因植物问世以来，其商业化种植面积和经济效益迅速扩大。 ✓ 提高农产品产量、品质 ✓ 提高植物对生物和非生物胁迫的抗性
• 转基因植物及其食品的生物安全性 ✓ 对环境的影响及生态效应 ✓ 食品的安全性
• 转基因植物及产品的检测
定性及定量
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转基因植物检测依据
启动子、目的基因、终止子；选择标记基因 • 启动子：CaMV 35s和土壤农杆菌的nos启动子 • 终止子：土壤农杆菌的nos终止子 • 目的基因：近百种 • 选择标记基因：
✓ 抗生素抗性基因：新霉素磷酸转移酶基因npt-Ⅱ/潮霉素磷酸转移酶hpt ✓ 除草剂抗性基因：bar基因和als基因
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源自文库
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转基因植物检测依据
报告基因：
通过报告基因在转化植株中的瞬时表达和稳定表达可以确定外源基因是否能在 转化细胞中表达。
cat：氯霉素乙酰转移酶基因
CAT活性通过硅胶G薄层层细及DTNB分光光度法测定
gus：β-葡萄糖苷酸酶基因
GUS可催化底物X-Gluc水解产生蓝色沉淀反应和4-MUG 水解发荧光（λ=455nm）
gfp：绿色荧光蛋白基因
在395nm光激发下可产生绿色荧光。
luc：萤光素酶基因 ant：花青素基因
在转化植物组织上生成红色的花青素斑点。
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转基因植物检测依据
表现性定性分析
表性分析可通过测定某一特定的性状存在与否，来判断 是否为转基因植物。目前，能测定的性状是对除草剂是 否有抗性。用于GMO种子检测。
组织化学染色：检测gus基因表达产物的方法 萤光测定法：
– gus基因 – 萤光素酶 – gfp基因
NanoLuc™ 萤光素酶
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转基因植物检测 ---外源基因表达产物的检测
免疫学检测法： – ELISA： – 试剂条检测： – Western blot：
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5
转基因植物检测---外源基因检测
PCR检测：
– 常规PCR – 多重PCR – 巢式PCR – 实时荧光定量PCR – PCR-ELISA – PCR-genescan
核酸杂交检测
– 印记杂交 – 斑点杂交 – 细胞原位杂交
基因芯片技术
– GMO芯片试剂盒
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转基因植物检测 ---外源基因表达产物的检测
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转基因植物（GMO）
• 自1983年首例转基因植物问世以来，其商业化种植面积和经济效益迅速扩大。 ✓ 提高农产品产量、品质 ✓ 提高植物对生物和非生物胁迫的抗性
• 转基因植物及其食品的生物安全性 ✓ 对环境的影响及生态效应 ✓ 食品的安全性
• 转基因植物及产品的检测
定性及定量
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转基因植物检测依据
启动子、目的基因、终止子；选择标记基因 • 启动子：CaMV 35s和土壤农杆菌的nos启动子 • 终止子：土壤农杆菌的nos终止子 • 目的基因：近百种 • 选择标记基因：
✓ 抗生素抗性基因：新霉素磷酸转移酶基因npt-Ⅱ/潮霉素磷酸转移酶hpt ✓ 除草剂抗性基因：bar基因和als基因
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源自文库
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转基因植物检测依据
报告基因：
通过报告基因在转化植株中的瞬时表达和稳定表达可以确定外源基因是否能在 转化细胞中表达。
cat：氯霉素乙酰转移酶基因
CAT活性通过硅胶G薄层层细及DTNB分光光度法测定
gus：β-葡萄糖苷酸酶基因
GUS可催化底物X-Gluc水解产生蓝色沉淀反应和4-MUG 水解发荧光（λ=455nm）
gfp：绿色荧光蛋白基因
在395nm光激发下可产生绿色荧光。
luc：萤光素酶基因 ant：花青素基因
在转化植物组织上生成红色的花青素斑点。
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转基因植物检测依据
表现性定性分析
表性分析可通过测定某一特定的性状存在与否，来判断 是否为转基因植物。目前，能测定的性状是对除草剂是 否有抗性。用于GMO种子检测。
组织化学染色：检测gus基因表达产物的方法 萤光测定法：
– gus基因 – 萤光素酶 – gfp基因
NanoLuc™ 萤光素酶
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转基因植物检测 ---外源基因表达产物的检测
免疫学检测法： – ELISA： – 试剂条检测： – Western blot：
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转基因植物检测---外源基因检测
PCR检测：
– 常规PCR – 多重PCR – 巢式PCR – 实时荧光定量PCR – PCR-ELISA – PCR-genescan
核酸杂交检测
– 印记杂交 – 斑点杂交 – 细胞原位杂交
基因芯片技术
– GMO芯片试剂盒
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转基因植物检测 ---外源基因表达产物的检测