转基因植物及其产品的检测方法

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转基因植物的检测鉴定方法、遗传转化技术及新技术

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PCR检测
• PCR是在体外快速特异地扩增目的基因DNA片段的有效方法。能在几小时内使pg水平的起始物达到ng水平,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色后很容易观察,不通过杂交分析就可以鉴定出基因组中的一些顺序。
• 但由于PCR扩增十分灵敏，有时会出现假阳性扩增，因而对外源基因是否整合需要进行扩增产物的Southern杂交。
＊已获得专利许可
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Site-specific recombinasemediated transgene excision
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Transgene
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Transgene
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外源基因去除（Gene-deletor)
• “外源基因去除”技术的要点之一是在目标植物中加入了受DNA调空片段启动子控制的特殊基因，该基因在启动子的作用下，可根据科学家的意愿，在需要的时间和部位将外源基因和自身从转基因植物中切掉，从而使转基因作物的花粉、种子、果实不再含有外来基因，或将外来基因从人们所需食用的部分（如植物的茎、叶、块茎）彻底清除掉，达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的，从根本上解决了长期困扰人们的转基因植物基因扩散问题和转基因食品的安全性问题。
ATP
dsRNA
siRNA
蛋白复合物
RISC
靶正义链
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mRNA
3、无选择标记转化
• 可消除选择标记基因对转基因作物安全性方面的影响
• 可消除选择标记基因对重复多基因转化叠加所带来的困难
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marker-free转基因植株
• 共转化法＊(基因枪与农杆菌转化) • 转座元法 • 重组酶法＊ • MAT(Multi-auto transformation)法＊ • 替代法＊

转基因植物的生产和检测方法

转基因植物的生产和检测方法转基因植物是繁殖用于人类消费的农作物，其基因被修改以抵御虫害和提高产量。

转基因的技术对世界的食品安全、环境保护和农业产量增加产生了重要的影响。

但是，随着转基因产品的不断推广和应用，对于检测其是否安全和透明的要求也越来越高。

本文将介绍转基因植物的生产和检测方法。

一、转基因植物的生产方法转基因植物的生产方法主要分为两种，一种是基因枪法，另一种是农杆菌介导的转基因法。

基因枪法是通过射入改造后的DNA 直接向植物细胞内导入外来基因，从而实现转基因植物的创建。

而农杆菌介导的转基因法则是通过把拥有外来基因的细菌注入植物细胞内，再将细菌注入特定的细胞壁，使得外来基因稳定地嵌入植物的基因组中。

当然，在此基础上，科学家还使用了一些远离传统种植法的技术，例如如基因编辑工具CRISPR-Cas9。

基于如此多样化的转基因生产方法，科学家们已经可以创造出各种不同类型的转基因植物。

二、转基因植物的检测方法转基因植物的检测方法主要包括了两类：一是用于提取DNA的样品，二是用于检测的样品。

在前人研究的基础上，当前有两种常见检测方法：PCR和ELISA。

PCR(聚合酶链反应)是目前主流的转基因检测技术，它能够根据材料提取的DNA进行基因片段扩增，从而检测模板所对应的基因是否存在。

PCR技术以灵敏度、特异性高、复查和修复能力强著称，不过，PCR技术存在可能会观察到错误反应的问题。

另外一个常见的检测技术是酶联免疫吸附法(ELISA)，它特别适用于筛查含水量较低的复合样品。

ELISA是一种抗体检测技术，它基于抗体结合了基因，在测试物接口中发生颜色反应，显示基因存在或不存在。

这种方法也常用于通过检测植物组织中蛋白质水平的方法来检测转基因。

总之，用于转基因检测的技术越来越精准和可靠，从而让我们可以安心地使用和消费转基因植物农作物。

同时，也可以使用这些技术来帮助农民更好地掌握农田信息，从而进一步提高农产品的营养价值和商品价值。

NYT-1103.2-2006-仅供参考

NYT 1103中华人民共和国农业行业标准NY/T1103.2－2006转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定Safety assessment of genetically modified plant and derived products Part 2: assay of anti-nutrients pancreatic typsin inhibiter2006-07-10公布2006-10-01实施中华人民共和国农业部公布前言本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国农业转基因生物安全治理标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国疾病预防操纵中心营养与食品安全所、农业部科技进展中心、中国农业大学、天津市卫生防病中心。

本标准首次公布。

转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定1 范畴本标准规定了转基因植物及其产品中胰蛋白酶抑制剂的测定方法。

本标准适用于转基因大豆及其产品、转基因谷物及其产品中胰蛋白酶抑制剂的测定。

其他的转基因植物，如花生、马铃薯等也可用该方法进行测定。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

2.1转基因植物genetically modified plant指利用基因工程技术改变基因组构成，用于农业生产或者农产品加工的植物。

2.2转基因植物产品products derived from genetically modified plant 指转基因植物的直截了当加工产品和含有转基因植物的产品。

3 原理胰蛋白酶可作用于苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺（BAPA），开释出黄色的对硝基苯胺，该物质在410 nm下有最大吸取值。

转基因植物及其产品中的胰蛋白酶抑制剂可抑制这一反应，使吸光度值下降，其下降程度与胰蛋白酶抑制剂活性成正比。

用分光光度计在410 nm处测定吸光度值的变化，可对胰蛋白酶抑制剂活性进行定量分析。

4 试验材料转基因植物及其产品、受体植物及其产品。

主要转基因植物及其产品的PCR检测方法研究的开题报告

主要转基因植物及其产品的PCR检测方法研究的开题报告一、背景与意义随着生物技术的不断发展，转基因技术已经在农业生产中广泛应用。

而随之而来的问题是，转基因食品对人体健康及环境造成的影响是什么，消费者对转基因食品的安全性和可信度持怀疑态度。

因此，建立快速、准确、灵敏、稳定的转基因检测方法是保障食品安全、维护消费者权益的必要手段。

PCR技术作为一种传统和广泛应用的转基因检测方法，在转基因检测领域中占据重要地位。

本文旨在探讨主要转基因植物及其产品的PCR检测方法研究。

二、国内外研究现状目前，转基因检测方法主要分为两类：基于DNA检测的方法和基于蛋白质检测的方法。

其中，基于DNA检测的方法又可分为PCR、电泳、荧光定量PCR、实时荧光PCR、引物免疫层析、微纳装置等多种方法。

目前国内外主要的转基因检测技术为PCR方法，包括对加入商业化大量出产的转基因植株和转基因细胞系进行PCR检测，对转基因种子、转基因食品和转基因兽药进行PCR检测。

PCR方法不仅具有检测速度快、检测结果准确、检验灵敏度高等优点，而且操作简便、成本低廉。

三、研究内容和方法本文将就主要转基因植物及其产品的PCR检测方法进行研究，以具体的研究方法为目标，包括以下几方面内容：1. 转基因检测样品的采集和处理方法；2. PCR反应原理及扩增条件的优化；3. 转基因检测引物的设计与优化；4. PCR产物的检测方法及数据分析；5. 转基因检测方法的验证与评价。

四、预期成果本研究将建立一套可行的转基因检测方法，对主要转基因植物及其产品进行准确、快速、高效的检测；优化PCR反应条件，提高PCR扩增的灵敏度和特异性；开发适合转基因检测的引物，提高测试效率和精度；验证和评价PCR检测方法的可靠性和稳定性，为转基因检测技术的标准化提供参考。

转基因食品的检测方法材料

转基因食品的检测方法自1983年世界第一例转基因作物问世以来，目前全球转基因农作物种植面积已达到5 000万hm2以上，大量的转基因农产品被直接或间接的制成人类的食品，呈迅猛发展的趋势。

但是转基因作物作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。

许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。

我国于2001年5月23日颁布《农业转基因生物安全管理条例》，2002年3月20日开始实行的《农业转基因生物标识管理办法》规定，国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度。

世界各国均对转基因食品及其加工产品出具是否为转基因产品的认定报告。

因此转基因产品的检测就显得尤为重要。

转基因食品的检测主要从两个方面人手，一是核酸水平，即检测遗传物质中是否含有插入的外源基因；二是蛋白质水平，即通过插入外源基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测，或者是检测插入外源基因对载体基因表达的影响，主要检测外源基因对插入位点附近基因影响及对其代谢产物的影响，由于该类型检测成本高，所需时间长，且被认为重要性较低，目前该类检测实际工作中较少涉及。

本文分别对核酸和蛋白质两种水平上的检测方法进行综述。

1核酸水平主要检测报告基因、启动子和终止子，是当前转基因产品检测的重要手段。

椰菜花叶病毒(CaMV)35s启动子、胭脂碱合酶NOS终止子等10多种基因和基因片段广泛存在于转基因植物中，这就为检测转基因食品提供了便利。

核酸水平的检测可以分为定性和定量两种。

1．1定性检测1．1．1聚合酶链式反应(PCR)1996年德国伯恩斯坦大学的Meyer Rolf等论证了PCR检测转基因食品的可能性。

利用该方法在鉴定转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean(RRS)和转基因抗虫玉米系列标准品Btl76 Maxi maizer的实验中，可以检测到仅为0．5％转基因成分。

Matsuoka等通过对7种转基因玉米转入的外源基因的序列分析，设计了14对检测该7种转基因玉米启动子、终止子和结构基因的引物，分别对转基因玉米、非转基因玉米、转基因大豆、非转基因大豆进行了PCR扩增检测，同时为检测所设计引物的特异性，还对其他作物如水稻、大麦、小麦等进行了PCR扩增，检验结果表明该方法能够快速有效地检测转基因玉米品种。

转基因作物安全评价的检测技术

期影响的安全评价中的应用。关键词：转基因作物；安全评价；组学技术
中图分类号：Ｑ８１９文献标志码：Ａ
转基因作物商业化种植始于１９９６年，截至２０１３年，其种植面积已增长了１００倍，全球３Ｏ多个国家数百万农民种植了转基因作物Ｊ，许多重要的农作物如玉米、土豆、水稻、小麦、大豆、烟草、番茄、棉花等都
转基因作物安全评价的检测技术
易小平，谭燕华，彭存智，谢翔，贺萍萍
（中国热带农业科学院热带生物技术研究所／农业部转基因植物及植物用微生物环境安全监督检测中心，海南海口，５７１１０１）
全评价，而转基因作物的检测技术是安全性评价的关键。基于ＤＮＡ和蛋白质的不同的检测方法已用于
转基因作物及其产品的检测。近年来新的检验检测方法不断涌现，各种新的检测技术也被应用到转基
因检测中，如特定ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增检测技术、外源蛋白检测技术等。转基因作物的安全性评价包括两个方面，即对环境影响的安全评价和对人类与动物影响的安全评价。目前，国际通用的转基因作物的安全性评价的指导性原则是实质等同性原则（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ）。根据实质等同性原则，与转基因作物相对应的非转基因作物由于有长期的食用历史，因而被认为是安全的。已商业化的转基因作物进行安全性

实验3：农作物转基因成分检测

实验三农作物转基因成份的检测---- PCR方法检测Bt玉米的外源基因实验目的：掌握CTAB法从转基因植物叶片提取DNA的原理和方法；掌握PCR扩增DNA的技术及原理，学习PCR的操作及PCR扩增仪的使用。

实验内容:1、采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行琼脂糖凝胶电泳检测。

2、PCR检测转基因植物外源基因(启动子序列)，扩增结果通过琼脂糖凝胶电泳检测。

实验仪器设备、试剂等用品仪器设备用品：恒温水浴锅，离心机，FastPrep细胞破碎仪，移液枪，离心管，吸头，电泳仪，电泳槽，PCR扩增仪试剂：CTAB，氯仿，异戊醇，无水乙醇，异丙醇，β-巯基乙醇，PCR试剂盒，引物(primer)第一部分植物基因组DNA的提取原理：CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法：先将新鲜的叶片在液氮中研磨，破碎其细胞，然后加入CTAB分离缓冲液，将DNA溶解出来，再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。

核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中,前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。

在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。

分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。

用两倍体积95％乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。

如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。

反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA 制品。

在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH值4.0—11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。

转基因植物的检测策略和检测技术

维普资讯
艋扬镰靠第３卷第１２０）３期（０７
诧鸯
ＰＡＲＬＮＴＰＯＴＥＴＯＮＶｏ．３Ｎｏ１（０７ＣＩ１３．２０）
张莹，张永军，吴孔明，赵奎军彭于发郭予元，，
制ＧＭＯ的进口。我国于２０ｓ０１年５月２３日颁布农业转基因生物安全管理条例，０２年３月２２００日开始实行的《农业转基因生物标识管理办法》规定，国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度，凡是在中国境内销售的大豆、玉米及其制品若属转基因生物，必须进行标识。由于食品标识以及食品制造商、销售商、消费者等多方面需要，转基因食品与常规食品将区别开，迫切需要一套可行的检测方法以满足社会需
ｂｌｇｏｅＧｓｎｓｒｕａｔｒｅｎｆＭＯｄｉｉｈｔａｔｍｎｆｃ￣ｕ
Ｔｒｔｔｃｎｍｉｂｎｆｓｉｉｎ．ａｙｆｒｔｍｐｏｅｔｅｒｅｒｈｏｏｐｏｅｏｏｃｅｅｔ，ｔｓ￣．ｒｅｔｉｒｅａｃｎｃｅｉｓｓｏｈＯｍｖｈｓ
ＣＶｓｅｃｏ．Ｓｒｔｅｅｅｗａｒｔ￣ｉＧＡｌｔｔｎｏｆ，ｒｏｍｊｌＯｄｅｉａｈｒａｔｏｍｅｘｎＭ０ｅｔｎｉｌｉｏｈＤＡｄｐｔｎｄｔｔｎｄｔｉ，ｃｄｇｂｔＮａｒｅｅｉ．ｃｅｏｎｕｏｎｏｉｅｃｏ
多个，由转基因作物产品加工的转基因食品和食品成分达４０余种。全球转基因产品占该作物种植面积００的比例从大到小依次为：大豆、棉花、玉米、油菜。然而，因作物在带来巨大效益的同时也潜在许多问转基

SNT 1194-2003 植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法

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简述转基因动植物的检测鉴定方法

简述转基因动植物的检测鉴定方法
一、转基因检测鉴定方法
1、理化检测法
（1）流式细胞术：利用流式细胞术技术，检测转基因植物DNA 核酸的含量，即采用荧光染料标记的 DNA 膜，以流速技术，测定和对比转基因动植物与其他植物的 DNA 含量。

（2）蛋白质印迹：利用蛋白质印迹法，它可以对植物蛋白质分子进行快速和准确的检测，包括转基因植物中特异性抗性蛋白。

2、分子生物学技术
（1）PCR 技术：通过荧光定量 PCR 技术，可实现对单个核酸分子的高灵敏度检测，其是转基因植物检测的常用技术。

（2） Southern 胺基酸印迹：利用 Southern 胺基酸印迹法，检测基因的等位基因进行检测和分析，如同位素标记 PCR，可以有效鉴定和分析转基因植物种群中不同基因的表达量及突变情况。

3、其他技术
（1）生物分子识别：通过生物分子识别，可以有效地检测出转基因植物特有的 DNA 序列，从而对转基因植物进行鉴定。

（2）生物免疫技术：利用生物免疫技术，可以以免疫试剂盒的形式，对转基因植物进行快速检测，从而达到鉴定的目的。

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转基因植物及其产品成分检测环介导等温扩增方法制定指南

转基因植物及其产品成分检测环介导等温扩增方法制定指南下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!一、引言近年来，随着转基因技术的飞速发展，转基因植物及其产品在农业生产中得到了广泛应用。

【检验】植物及其产品转基因成份检测抽样及制样方法编制说明

【关键字】检验中华人民共和国出入境检验检疫行业标准植物及其产品转基因成份检测抽样和制样方法修订编制说明任务来源和工作情况根据国家认证认可监督管理委员会标准制（修）订计划（编号2010B207），由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、国家质检总局动植物检疫实验所、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局共同负责中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1194－2003《植物及其产品转基因成份检测抽样和制样方法》的修订工作。

修订该标准是国家转基因重大专项课题《转基因生物抽样和精准检测技术》(课题编号2008ZX08012-001)的研究内容之一。

本标准修订工作组引用和参照了抽样检验国家标准系列中的部分标准、数据的统计处理和解释国家标准系列中的部分标准，系统研究了国内外相关标准和文献，针对性地研究了转基因产品检测的特点，总结SN/T1194－2003标准实施7年来的经验，按GB/T 1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的要求完成了修订工作。

修订本标准的目的和意义近年来，转基因植物培育取得突破，推出了一批新品种，在改善农作物品质、提高产量方面发挥了巨大作用。

然而，人们对转基因产品的安全性存在着很多的争论。

欧盟和一些国家相继出台了转基因产品管理法规，我国也实施《农业转基因生物安全管理条例》等管理办法。

转基因产品的检测是这些旨在保护生物和生态安全、维护消费者权益、促进贸易和经济健康发展的法规和政策的基本依据，其标准化将为制订、实施和改进这些法规和政策提供有力保证。

抽样和制样工作是检测工作的重要部分和基本前提，它的质量决定了检测结果的准确度。

如果不能得到具有代表性的样品，无论进行多么细致和精密的检测，其结果都无法表征总体的性质。

制订合理和可行的抽样和制样标准以获取具有代表性的样品，对规范转基因产品检测工作，保证检测质量和提高检测结果的可信度具有重要意义。

转基因产品的发展历史较短，许多问题都有待解决，抽样和样品制备方法也是该领域的重要问题。

转基因植物的分子检测与鉴定方法及进展

转基因植物的分子检测与鉴定方法及进展随着分子生物学和植物基因工程的不断发展，越来越多的育种工作者开始利用转基因技术获得常规育种技术难以得到的新种质和新品种。

植物转基因技术最大的好处在于可以打破自然界物种间原有的生殖隔离，促进基因在不同物种间的交流，极大地丰富变异类型，增大遗传多样性，为植物新品种的培育提供丰富的育种资源。

通过对基因功能的研究，筛选m目的基因，还可实现植物性状的定向改良。

因此该技术自1983年首次获得转基因植物以来，便深受育种工作者青睐，得到了蓬勃地发展。

至今已有30多科约200多种植物转基因成功；国际上相继有30多个国家批准3 000多例转基因植物进入田间试验，并且在美国、加拿大、中国等20多个国家成功进行了商品化生产…。

到2006年止，全球转基因作物的商业种植面积达1．02亿hm2，比2005年增长13％，是1996年的62倍。

转基因作物品种在农业生产中日益显现出巨大潜力。

植物转基因操作中，除利用抗生素抗性和除草剂抗性等选择基因排除非转化细胞而留存转化细胞，以及利用Gus和CFP等报告基因显示转基因成功外，更重要的是从分子水平鉴别出阳性转化体，明确目的基因在转基因植株中的拷贝数和转录与表达情况。

本文就常用的转基因植株检测与鉴定方法作一概述，并对近期发展起来的新方法做简要介绍。

1 外源基因整合与否及其整合拷贝数的鉴定1．1 PCR(p01 ymera se chain reaction)检测1．1．1 常规PCRPCR技术对目的片段的快速扩增实际上是一种在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下利用DNA聚合酶的酶促反应，通过3个温度依赖性步骤(即变性、退火和延伸)完成的反复循环。

经PCR扩增所得目的片段的特异性取决于引物与模板DNA间结合的特异性。

根据外源基因序列设计出一对引物，通过PCR反应便可特异性地扩增出转化植株基因组内外源基因的片段，而非转化植株不被扩增，从而筛选出可能被转化的植株。

转基因玉米的鉴别方法

转基因玉米的鉴别方法转基因玉米的鉴别可以采用许多复杂的技术，如分子标记分析，流式细胞术，实时定量PCR（qPCR）分析，蛋白分析，原位杂交等。

不过，可能也需要结合抗性检测或外部鉴别等方法。

其中常用的鉴定方法包括：（1）PCR 技术：它是利用脱氧核糖核酸（DNA）特异序列引物以及Taq 酶在反转录-聚合酶链反应（PCR）对转基因玉米的标志基因位点进行检测的一种技术，可以在体外快速、准确的鉴定不同的转基因玉米类型。

（2）分子权重（w）分析：它是利用核酸序列的分子量（mw）或分子量值来鉴定转基因玉米的一种技术，通过比较转基因玉米基因组DNA的分子量值与对照群体完全不同的DNA分子量值之间的差异，从而可以发现转基因玉米特有的特征。

（3）DNA 指纹：它是一种利用一系列剪接酶来生成特定基因组DNA片段的技术，可以用来鉴别转基因玉米的品种和基因组结构的变化。

（4）十二碳溴代酰胺（DCC）方法：它是一种利用基因片段中的三磷酸核苷（ATP）酶活性来鉴定转基因玉米特征的技术，可以利用电泳和有机溶剂中和镜翻转作为反应条件来鉴定基因片段的ATP 活性构成和构成比例，从而进行结果判断。

二、临床应用检测转基因玉米被广泛应用于药用植物、食物营养研究中，以及转基因产品的供应链及食品中的安全性研究中。

1. 检测转基因玉米的安全性研究：主要用于分析转基因玉米中毒性和敏感性的机制、治疗疾病进程及临床应用前的安全性评价等。

2. 转基因产品的供应链管理及检测：通过检测转基因玉米以及它在从种子到品牌食品所处的每个环节可以发掘出转基因物质在食品中是否合法。

3. 营养食品研发：通过系统地建立序列和功能数据库以及筛选和鉴别转基因玉米中的营养物质和抗耐性基因，找到一种能健康滋养身体的有效营养物质，用于营养食品的研发。

转基因作物安全评价及检测技术

转基因作物安全评价及检测技术自从1983年首例抗病毒转基因作物(GMC)问世以来，转基因作物的开发就成为了科学界研究的热点。

1986年，转基因作物首次被批准在田间试验，1993年底，美国的第一批延迟成熟期番茄获得上市批准。

其后，转基因作物的发展更为迅速。

截止1997年10月，全世界转基因作物的田间试验已达25000多例，开发了具有抗除草剂、抗虫、抗病毒、延长成熟期等不同性状的转基因油菜、玉米、棉花、水稻、番茄、南瓜等新品种。

近年来，各国在原有的转基因作物研究基础上取得了大量成果，除了上述的抗虫、抗除草剂以及抗病毒作物外，还出现了氮、磷肥高效利用，耐旱、耐盐碱、耐铝毒等转基因作物，蒸煮和食味品质明显改善的水稻及富含昏胡萝卜素的…金米”稻等。

2007年，张启发院士提出开展“绿色超级稻”培育的构想。

重点围绕水稻抗病虫、抗旱、营养高效利用、优质、高产等五大重要性状进行改良，使水稻生产实现“少打农药、少施化肥、节水抗旱、优质高产”。

基于转基因作物优良的特性，越来越多的国家批准转基因作物的商业化种植。

据国际农业生物技术应用服务组织f ISAAA）统计，2009年全球共有25个国家种植转基因作物，种植面积达到1.34亿hm2。

是1996年的80倍，全球市场价值达到105亿美元。

目前商业化种植的主要转基因作物是大豆、玉米、棉花和油菜等，其中转基因大豆和玉米的种植面积占全球转基因作物种植面积的80%以上。

我国目前主要种植的是转基因棉花、杨树、番茄和甜椒等，种植面积从2002年的200万hm 2增加到2009年的370万hm2，年均增长15%。

2009年我国抗虫转基因棉花种植面积约占总种植面积的90%，转基因棉花的广泛种植有效的降低了棉花种植成本，给我国带来了巨大的经济效益。

2009年12月，我国又为转植酸酶基因玉米和两个转基因抗虫水稻品系“华恢1号”和“Bt汕优63”颁发了生物安全证书，使转基因玉米和水稻的商业化进程向前迈进了一大步。

转基因植物成分检测方法及标准概述

24 食品安全导刊 2020年7月1　引言随着分子生物学、转基因技术的发展与应用，转基因作物的种植和转基因食品的生产规模日益增长。

转基因作物具有高营养、抗病虫、抗除草剂等优势，转基因作物在带来巨大利益的同时也存在许多争议，例如转基因食品的食用安全性，对生态环境的影响，对人类健康的潜在危害等，这些都受到了人们越来越多的关注[1]。

因此，许多国家针对转基因食品出台了相应的管理办法，对转基因产品实行强制性标识。

转基因成分的检测为转基因食品的科学监管提供了重要的技术保障，因此加强对转基因植物及其成分的检测尤为重要。

2　转基因植物成分检测技术研究进展目前，国内外常用的转基因产品及其成分的检测方法主要有两大类：一类是核酸水平的检测，如定性PCR 技术、实时荧光定量PCR 技术、数字PCR 技术、等温扩增技术、基因芯片技术以及二代测序技术等[2]；另一类是蛋白水平的检测，如酶联免疫分析技术（ELISA 法）、SDS 聚丙烯凝胶电泳分析技术等。

由于转基因食品中的蛋白质很不稳定，影响了检测的灵敏度，核酸水平的检测具有很好的特异性和灵敏度，因此核酸成分检测技术逐渐发展为转基因产品及其成分检测的常用方法[3，4]。

3　转基因植物成分检测方法标准目前，对于转基因植物成分检测，国内已发布的现行有效的标准有：国家标准2项，农业部标准及公告91项，行业标准4项及地方标准3项。

其中以PCR 检测方法为主，还有试纸条法、微流滴数字PCR 法等，详细方法标准编号见表1。

目前颁布的这些标准中基本涵盖了常见的转基因植物外源性成分，对于可能遇到的转基因植物外源基因均可检测，各检测实验室可以根据这些方法标准的适用范围，自主选择适合检测方法。

4　讨论与建议目前，转基因植物成分的PCR 检测方法主要是对外源核酸进行检测，检测方法以普通PCR 和实时荧光PCR 检测方法为主。

实时荧光PCR 检测技转基因植物成分检测方法及标准概述□ 刘岑杰　杨　滴　大连市检验检测认证技术服务中心摘　要：本文详细介绍了转基因植物成分的检测方法，查阅资料，对国内转基因植物成分的检测方法进行了分析归类，对目前为止现行有效的检测方法进行分类总结。

转基因食品成分检测技术研究进展

转基因食品成分检测技术研究进展转基因食品成分检测技术是一种用于确定食品中是否存在转基因成分的分析方法。

转基因食品是指通过现代生物技术手段将外源基因导入食品作物中，使其具有新的特性或优势的食品产品。

转基因食品在食品安全和公众健康方面引起了广泛关注，因此开发准确、快速、可靠的转基因食品成分检测技术非常重要。

目前，转基因食品成分检测技术的研究进展主要包括以下几个方面。

1.PCR法：聚合酶链反应(PCR)法是最常用的转基因食品检测方法之一、它可以特异性地扩增转基因植物中的特定DNA序列，并通过电泳分离和检测扩增产物来确定食品中是否存在转基因成分。

2.即时PCR法：即时PCR法是PCR技术的一种改进，可以在PCR反应过程中实时监测扩增产物的积累。

这种方法具有高灵敏度、高特异性和快速分析的优势，适用于大规模的转基因食品筛查。

3.数字PCR法：数字PCR法是一种新的转基因食品检测方法，可以实现对样品中转基因成分的绝对定量。

与传统PCR方法相比，数字PCR法具有更高的准确性和灵敏度，能够在低转基因成分水平下检测到微量的转基因成分。

4.荧光定量PCR法：荧光定量PCR法是一种利用荧光染料标记的探针对转基因成分进行定量分析的方法。

与传统PCR法相比，这种方法可以减少误判概率，提高检测灵敏度和可靠性。

5.下一代测序技术：下一代测序技术是目前最先进的基因测序技术之一，可以对DNA样品进行高通量的测序分析。

利用这种技术，可以对转基因食品样品中的整个基因组进行测序，并确定是否存在转基因成分。

总体来说，转基因食品成分检测技术在过去几十年取得了显著的进展。

这些技术不断提高着转基因食品检测的效率和准确性，为监管机构和消费者提供了更可靠的食品安全保障。

然而，由于不断涌现的新的转基因食品和转基因成分，还需要进一步研究和改进转基因食品检测技术，以满足市场需求并确保食品安全。

转基因植物的筛选与检测

曝光显影后的条带
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• 总结：这些技术需要转膜、杂交，操作繁琐，费用高,可对转基因植株随机取样检测。 • Southern 杂交特异性强，确定转基因植株中基因的存在、整合及稳定性，是检测外源基因的最可靠的方法。 • Western杂交灵敏度高，能检测出蛋白质表达量，最具有现实意义。
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谢谢大家！
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• Northern 杂交的主要原理是把变性 RNA 转移和固定在特定的薄膜上 , 用特定的 DNA 探针来检测 RNA。 • 特点：
Northern 杂交与Southern 杂交相比 , 更接近于性状表现 , 更有现实意义 , 被广泛用于转基因植株的检测。但RNA 提取条件严格 , 在材料内含量少 , 不适于大批量样品的检测。
转基因植物的筛选与检测
转基因植物的筛选与检测
• 问题 • 1.进行转基因操作了，如何选出来已成功导入基因的细胞？ • 2. 转化体里的外源基因是否成功的表达了呢？
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一、筛选的方法与原理
• 通过特定基因在转化体内的表达，利用特定的试剂，选择出来转化细胞。
• 注： 1.特定基因又称“抗性基因” 2.表达方式：蛋白质的合成、酶的失活等
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• Southern 印迹杂交是利用标记的探针（probe）与膜上靶DNA片段进行杂交的技术，检测靶DNA片段中是否存在与探针同源的序列。 • 特点：
可清除操作过程中的污染 (如 DNA 分离及植物 DNA 分离过程中的交叉污染) ，以及转化愈伤胞间质粒残留所引起的假阳性信号，准确度高。 Southern 杂交程序复杂，成本高，且对实验技术条件要求较高。
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Southern杂交
• • • • • • • 1.提取DNA 2.电泳 3.变性转移 DNA 印迹 4.转膜 5.固定DNA 6.探针的标记 7.杂交与检测（NBT/BCIP显色）

转基因植物的检测与鉴定

第七章转基因植物的检测与鉴定主要内容一、PCR检测二、报告基因的表达检测三、Southern杂交鉴定四、Northern杂交鉴定五、外源基因表达蛋白的检测六、其它方法根据国内外几十年的研究，目前认为转基因植物的证据应有以下几点：①要有严格的对照（包括阳性及阴性对照）；②转化当代要提供外源基因整合和表达的分子生物学证据（PCR检测、Southern杂交，Northern 杂交，Western杂交）与表型数据（酶活性分析或其它）；③提供外源基因控制的表型性状证据（如抗虫、抗病等）；④根据该植物的繁殖方式（有性繁殖还是无性繁殖）提供遗传证据。

有性繁殖作物需有目的基因控制的表型性状传递给后代的证据，无性繁殖作物有繁殖一代稳定遗传的证据。

一、PCR检测1.概述2.基本原理3.特点4.步骤一、PCR检测1. 概述PCR是聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）的简称。

它模拟DNA聚合酶在生物体内的催化作用，根据检测的目的片段及一定的原则设计引物，与模板DNA经过变性、退火、延伸三步骤的数个循环，对特异DNA序列进行扩增，可以在一只小小的离心管中几小时内使目的DNA 片段扩增数百万倍。

一、PCR检测1. 概述PCR检测所需的模板量仅为10ng以内，而且粗提的DNA就可以得到良好的扩增效果，因而这一技术的出现为外源基因整合的检测提供了便利条件，尤其是在转化材料少又需及早检测的时候。

但由于PCR扩增十分灵敏，有时会出现假阳性扩增，因此检测的只是初步结果。

穆利斯(Kary Mullis 1944～)美国化学家Nobel prizewinners in chemistry 1994一、PCR检测2.基本原理•DNA模板变性双链DNA是通过94℃左右的高温使其发生变性，形成单链DNA。

•模板与引物退火将合成的两个寡核苷酸引物分别与待扩增DNA 两端的序列互补。

通过控制退火条件，引物就能准确地与扩增区域的两端配对。