微生物
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葡萄球菌:
常见的病原性球菌(pathogenic coccus)因均能引起化脓性感染,故又名化脓性球菌(pyogenic coccus)。包括葡萄球菌、链球菌、肠球菌、脑膜炎球菌和淋球菌等。
病原性球菌均有一定的形态、排列方式、染色性和菌落特点,因此它们的形态学检查和培养特性是细菌学鉴定的主要依据。
形态与染色:葡萄球菌为革兰阳性球菌,平均直径1μm,无特殊构造,常排列成堆,似葡萄状,故名葡萄球菌。也可呈单个、成双或不规则排列。
生化反应:葡萄球菌的生化反应强,能分解多种糖类,蛋白质和氨基酸。触酶试验阳性,金黄色葡萄球菌血浆凝固酶和耐热核酸酶试验均阳性,此外,磷酸酶,吡咯烷酮芳基酰胺试验阳性。肠毒素试验:①动物实验②琼脂扩散,ELISA ③基因测定
蛋白抗原。为葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分,称为葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA),从人体分离出的金黄色葡萄球菌几乎都含有SPA,表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌则不具有。SPA具有抗吞噬作用。它与IgG的Fc段能非特异的结合而不影响Fab 段的免疫活性,故可作为检测各种抗原或抗体的实验诊断试剂(协同凝集试验)。
多糖抗原。是一种位于细胞壁上的半抗原,有型的特异性,可分为A、B、C三型多糖抗原。①A型:存在于绝大多数金黄色葡萄球菌菌株中,检测感染者机体中相应的磷壁酸抗体,有助于诊断和预后判断;②B型:来自非致病性葡萄球菌;③C型:可分离自致病菌株和非致病菌株。
抵抗力:葡萄球菌是无芽胞细菌中抵抗力最强的一属细菌。耐干燥:在干燥的脓、痰、血液中可存活数月;耐热:80℃30min才能杀灭;耐高盐:它能在10%~15%的高盐甘露醇琼脂平板中生长。
临床意义:(1)血浆凝固酶(coagulase)是金黄色葡萄球菌所产生的一种主要致病物质,也是区别金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌的主要指标,它能使含抗凝剂的人或兔血浆发生凝固(2)耐热核酸酶(heat-stable nuclease) 所有金黄色葡萄球菌均能稳定地产生这种酶。耐热,100℃15min或60℃2h不被破坏;能较强降解DNA和RNA。目前临床上已把耐热核酸酶作为判断葡萄球菌有无致病力的重要指标之一。(3)葡萄球菌溶素(staphylolysin)多数致病性菌株均能产生,为外毒素,包括α、β、γ、δ,对人致病的主要是α溶素。该溶素能损伤血小板,破坏白细胞的溶酶体,引起血管平滑肌痉挛,导致局部出血坏死,皮肤出现淤点淤斑。(4)肠毒素(enterotoxin)30%~50%金黄色葡萄球菌可产生这种外毒素,耐热,100℃30min不被破坏,尚可对抗胰蛋白酶的消化。该毒素分为A、B、C、D、G与H九个型别。金黄色葡萄球菌引起的毒素型食物中毒以A型多见。(5)毒性休克综合征毒素—1(toxic shock syndrome toxin l,TSST-1),它能引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征。(6)杀白细胞素(PVL)是一种可溶性物质,有抗原性,为外毒素。能使人和家兔的中性粒细胞脱颗粒,进而杀伤白细胞,有抗吞噬的作用。
所致疾病:1.化脓性炎症①局部感染主要由金黄色葡萄球菌引起②全身感染:如败血症、脓毒血症2.毒素性疾病:食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征、假膜性结肠炎3.医院感染:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和表皮葡萄球菌(MRSE)已成为医院感染的主要菌和辣手问题。
检验方法与鉴定:(1)直接涂片镜检(2)分离培养(3)鉴定要点①致病性葡萄球菌在血平板上的菌落一般呈金黄色,革兰阳性球菌,呈葡萄状排列,血浆凝固酶试验和耐热核酸酶试验均呈阳性,发酵甘露醇。②Staphaurex胶乳凝集试验:是一种鉴定金黄色葡萄球菌的快速、简便的商品化直接凝集试验。
链球菌
链球菌属(Streptococus)是化脓性球菌中的另一大类常见细菌,为链状排列的革兰阳性球
菌。营养要求高。
生化反应:分解葡萄糖,产酸不产气。对乳糖、甘露醇的分解随不同菌株而异。一般不分解菊糖,不被胆汁溶解,这两种特性可用来鉴别草绿色链球菌和肺炎链球菌。
抗原构造:(1)多糖抗原(C抗原)是细胞壁的多糖成分,系群的特异性抗原。(2)蛋白质抗原(表面抗原)位于C抗原的外层,有型的特异性。A群链球菌有M、T、R和S 等四种,其中与致病性有关的为M蛋白抗原。(3)核蛋白抗原(P抗原)各种链球菌均相同,无特异性,并与葡萄球菌有交叉。
分类1,甲(a)型溶血性链球菌:菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环,如草绿色链球菌和肺炎链球菌。这类链球菌多为条件致病菌。2,乙(β)型溶血性链球菌:菌落周围呈2-4mm 宽的完全透明溶血环。又称化脓性链球菌。这类链球菌致病力强,常引起人类和动物的多种疾病。3,丙(γ)型链球菌:菌落周围无溶血环,故又称不溶血性链球菌,一般不致病,常存在于乳类和粪便中。
抵抗力:本菌抵抗力不强,加热60℃30min即被杀灭(除D群和某些N群链球菌外),对常用消毒剂敏感,在干燥尘埃中可生存数月。
临床意义:致病物质(1)细胞壁成分①脂磷壁酸②M蛋白③肽聚糖④细胞壁受体(2)侵性酶类①透明质酸酶②链激酶③链道酶④胶原酶(3)外毒素①链球菌溶素②致热外毒素袭鉴定程序与特殊检验:(1)直接涂片染色镜检(2)分离培养常采用羊血平板(3)鉴定要点①杆菌肽敏感试验,阳性者可初步鉴定为A群链球菌②CAMP试验,阳性者可作为B群链球菌③血清学分类鉴定,出现凝集现象者为阳性。④Optochin敏感试验阳性者为肺炎链球菌。草绿色链球菌为阴性⑤胆汁溶菌试验,阳性者为肺炎链球菌。
肠球菌属
培养特点球菌的营养要求较高需氧和兼性厌氧,肠球菌能在高盐(65g/L)、高碱(pH9.6)条件下,在40%胆汁培养基上和10~45℃的环境中生长,并对多种抗生素表现出固有耐药性。
生化反应:触酶试验阴性,分解甘露醇,不分解阿拉伯糖,胆汁七叶苷试验阳性,多数菌株PYR试验阳性,对杆菌肽耐药。
临床意义:肠球菌主要引起医院感染,最常见为尿路感染。肠球菌对大多常用抗菌药物呈固有耐药,对第三代头孢菌素无效。除做常规KB法药敏试验外,还应做MIC测定与联合药敏试验。
鉴定程序与特殊检验:(1)直接涂片2)分离培养(3)鉴定要点①本菌特征,革兰阳性菌,触酶试验阴性,在65g/l Nacl中生长,胆汁七叶苷试验阳性,能在45℃中生长
奈瑟菌属:
包括脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌。脑膜炎奈瑟菌是奈瑟菌属中的一种重要致病菌,因呈双排列,故原称脑膜炎(双)球菌。革兰阴性双球菌,常位于中性粒细胞内外。为专性需氧菌。生化反应:触酶、氧化酶试验阳性,分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气,不分解蔗糖、甘糖醇和乳糖,脲酶、吲哚及硝酸盐还原试验均为阴性。