生物素-亲和素PPT资料24页
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➢利用BA 技术将染料浓聚于靶细胞表面， 使其更利于观察， 提高了检测灵敏度。
➢Xia Y1 等在生物素化黑皮质素与黑色素瘤 细胞结合后， 加入碱性磷酸酶-亲和素进行 染色检测， 证实了黑皮质素的结合受体位 于黑色素瘤细胞表面。
➢PereiraMM 等将ABC (生物素-亲和素-过 氧化物酶) 染色法用于钩端螺旋体的组织细 胞损害进行定位检查， 结果简单易测，此 法经常用于免疫组织化学检测中。
1. BA-酶免疫技术
➢原理
亲和素可预包被在酶标板孔内，然后再 将生物素化抗体Ab(或抗原Ag)包被于孔 wk.baidu.com。通过BA将免疫复合物与酶连接起来， 能有效地放大EIA法，使其灵敏性增强。
➢优点
✓生物素对抗体和酶的标记率高，又不影响其 他活性。
✓生物素亲和素的结合极为稳定，不会在孵育 和各种洗涤过程中脱落。
✓每个亲和素分子能结合4个生物素，能耦合 更多的联结生物素的酶分子，提高EIA的敏感 性。
✓双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测 相思子毒素
✓用亲和素-生物素ELISA检测GPV抗体 ✓生物素亲和素放大酶联免疫吸附法测定
双酚A
2. BA-分子生物学技术
将引物生物素化，经过PCR反应后,用(链霉)亲和素 固定扩增产物，进行下一步的显色或荧光等检测。
生物素－亲和素系统（BAS）用于检测的基本方法有三类：
I. 标记亲和素连接生物素化大分子反应体系， 称BA法，或标记亲和素－生物素法 （LBA）。
II. 以亲和素两端分别连接生物素化大分子反 应体系和标记生物素，称为BAB法，或桥 联亲和素－生物素法（BRBA）。
III.将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素－ 生物素－过氧化物酶复合物，再与生物素 化的抗抗体接触时，将抗原－抗体反应体 系与ABC标记体系连成一体，称为ABC法， 其中A－Ab为亲和素化抗体，B-Ab为生 物素化抗体。
涂敷稳定性、回收成本等最好的荧光粉 )标记的亲和
素,通过BA技术的多级放大作用,使得Ag-Ab复合物中
的螯合物Eu3+信号更强,提高了检测灵敏度。
8. BA-预定位技术
➢这项研究近年来发展迅速, 现已从动物实验阶段
进入临床应用研究。
➢Yao Z. 等利用植物血凝素能与肿瘤细胞表面的
糖蛋白和糖脂上的糖分子结合, 亲和素末端的N 乙酰葡萄糖胺和甘露糖残基能与植物血凝素结合 的特性, 用放射性同位素标记的生物素进行肿瘤定 位。
和素捕获
被捕获的目标序列再次进
行碱性磷酸酶标记的探针杂交反应
用化学发光微孔法检测
3. BA-电化学免疫技术
➢原理
将酶1标记的抗体结合在碳电极表 面组成传感器，与液体中待检抗原 和生物素化抗体及酶2标记的亲和 素免疫反应后，碳电极表面形成酶 1和酶2免疫通道，结果电信号被 放大。
优点 灵敏 快速 可定量
Thank you!
亲和素（ Avidin ）－抗生物素蛋白、抗生物素
是从鸡蛋清中提取的一种糖蛋白， 它由四个相同的氨基酸亚基组成， 亚基之间通过二硫键连接，亲和素 的每一个亚基含有一个与生物素结 合的位点，并与生物素或其衍生物 形成高度稳定的复合物。
➢基本原理
生物素与抗体共价交联的方法简单，条件 温和，且一般不影响抗体的活性。生物素 与亲和素能快速结合，而且反应不受外界 干扰，具有高度特异性和稳定性，两者的 亲和常数比抗原－抗体反应高10－100万倍， 结合快，呈不可逆反应，而且在pH，温度、 有机溶剂或变性剂较大的变化范围内均能 稳定存在。
➢应用
临床诊断 生物医学 生物化学 环境监测
4. BA-免疫印迹技术
✓该技术将BA技术与免疫印迹技术相结合,进一
步提高检测灵敏度。
✓免疫印迹技术是在蛋白凝胶电泳和固相免疫
测定基础上发展起来的一种新的免疫学技术。是 凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异性、 敏感性、稳定性及可重复性的有机结合。
5. BA -组织化学技术
6. BA-分离提纯技术
待分离物生物素化，结合于亲和素包被的固相载体上， 洗脱后，达到分离提纯的目的。
۞ Morag G.等使用硝基-(链霉)亲和素吸附于分离柱 上,分离提纯兔抗血清中的免疫球蛋白、抗-转移因 子等,每一例均可在解离生物素化探针后,恢复分离 柱的生物学特性。
۞在制备特异性破骨细胞cDNA库时,加入 生物素化的mRNA,然后通过固相亲和素提取。 用斑点印迹法分析,发现在此提取物中, 高度聚集了特异性破骨细胞cDNA。
生物素化的 引物扩增目 的基因
微孔板内链霉 亲和素捕获 PCR扩增产物
用地高辛标记 的寡核苷酸探 针进行杂交
酶标抗体进 行显色反应
在分子生物学技术中较常用的技术还有：将核酸 探针结合上生物素，通过酶或其它示踪物标记的亲和 素进行显色等。
扩增rRNA的目标序列
与生物素化
探针进行杂交
通过微孔板内的链霉亲
生物素（Biotin）－辅酶R、维生素H
是生物体内广泛分布的一种羧化酶 的辅酶，分子中有两个环状结构：
➢Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素
结合的主要部位。
➢Ⅱ环为噻唑环，上有一戊酸侧
链，其末端羧基是结合抗体和其他 生物大分子（如：酶、蛋白质、抗 体、DNA ）的唯一结构。
利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活 性生物素，以适合与各种生物大分子结合的需 要。主要有用于标记蛋白质氨基的生物素N－ 羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）和生物素对硝基 酚酯(pBNP),其中以BNHS最为常用。近年来， 应用长臂生物素（BCNHS）标记生物大分子， 可以减少位阻效应，增加检测的灵敏度和特异 性。用于标记蛋白质醛基、巯基和糖基的衍生 物有生物素酰肼（BHZ）及肼化生物素 （BCHZ）。
7. BA-时间分辨荧光免疫技术（BA-TRFIA）
➢应用BA-TR-FIA检测肿瘤细胞和血清中的肌酸转移
BB(CK-BB) , 发现CK-BB是乳腺癌的一个敏感指标,前列
腺癌病人血中的CK-BB也明显提高,因此认为该方法是
研究CK-BB与各种恶性肿瘤关系的敏感特异的方法。
➢该法中使用生物素化Ab和Eu3+(Eu3+是发光效率、
➢Xia Y1 等在生物素化黑皮质素与黑色素瘤 细胞结合后， 加入碱性磷酸酶-亲和素进行 染色检测， 证实了黑皮质素的结合受体位 于黑色素瘤细胞表面。
➢PereiraMM 等将ABC (生物素-亲和素-过 氧化物酶) 染色法用于钩端螺旋体的组织细 胞损害进行定位检查， 结果简单易测，此 法经常用于免疫组织化学检测中。
1. BA-酶免疫技术
➢原理
亲和素可预包被在酶标板孔内，然后再 将生物素化抗体Ab(或抗原Ag)包被于孔 wk.baidu.com。通过BA将免疫复合物与酶连接起来， 能有效地放大EIA法，使其灵敏性增强。
➢优点
✓生物素对抗体和酶的标记率高，又不影响其 他活性。
✓生物素亲和素的结合极为稳定，不会在孵育 和各种洗涤过程中脱落。
✓每个亲和素分子能结合4个生物素，能耦合 更多的联结生物素的酶分子，提高EIA的敏感 性。
✓双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测 相思子毒素
✓用亲和素-生物素ELISA检测GPV抗体 ✓生物素亲和素放大酶联免疫吸附法测定
双酚A
2. BA-分子生物学技术
将引物生物素化，经过PCR反应后,用(链霉)亲和素 固定扩增产物，进行下一步的显色或荧光等检测。
生物素－亲和素系统（BAS）用于检测的基本方法有三类：
I. 标记亲和素连接生物素化大分子反应体系， 称BA法，或标记亲和素－生物素法 （LBA）。
II. 以亲和素两端分别连接生物素化大分子反 应体系和标记生物素，称为BAB法，或桥 联亲和素－生物素法（BRBA）。
III.将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素－ 生物素－过氧化物酶复合物，再与生物素 化的抗抗体接触时，将抗原－抗体反应体 系与ABC标记体系连成一体，称为ABC法， 其中A－Ab为亲和素化抗体，B-Ab为生 物素化抗体。
涂敷稳定性、回收成本等最好的荧光粉 )标记的亲和
素,通过BA技术的多级放大作用,使得Ag-Ab复合物中
的螯合物Eu3+信号更强,提高了检测灵敏度。
8. BA-预定位技术
➢这项研究近年来发展迅速, 现已从动物实验阶段
进入临床应用研究。
➢Yao Z. 等利用植物血凝素能与肿瘤细胞表面的
糖蛋白和糖脂上的糖分子结合, 亲和素末端的N 乙酰葡萄糖胺和甘露糖残基能与植物血凝素结合 的特性, 用放射性同位素标记的生物素进行肿瘤定 位。
和素捕获
被捕获的目标序列再次进
行碱性磷酸酶标记的探针杂交反应
用化学发光微孔法检测
3. BA-电化学免疫技术
➢原理
将酶1标记的抗体结合在碳电极表 面组成传感器，与液体中待检抗原 和生物素化抗体及酶2标记的亲和 素免疫反应后，碳电极表面形成酶 1和酶2免疫通道，结果电信号被 放大。
优点 灵敏 快速 可定量
Thank you!
亲和素（ Avidin ）－抗生物素蛋白、抗生物素
是从鸡蛋清中提取的一种糖蛋白， 它由四个相同的氨基酸亚基组成， 亚基之间通过二硫键连接，亲和素 的每一个亚基含有一个与生物素结 合的位点，并与生物素或其衍生物 形成高度稳定的复合物。
➢基本原理
生物素与抗体共价交联的方法简单，条件 温和，且一般不影响抗体的活性。生物素 与亲和素能快速结合，而且反应不受外界 干扰，具有高度特异性和稳定性，两者的 亲和常数比抗原－抗体反应高10－100万倍， 结合快，呈不可逆反应，而且在pH，温度、 有机溶剂或变性剂较大的变化范围内均能 稳定存在。
➢应用
临床诊断 生物医学 生物化学 环境监测
4. BA-免疫印迹技术
✓该技术将BA技术与免疫印迹技术相结合,进一
步提高检测灵敏度。
✓免疫印迹技术是在蛋白凝胶电泳和固相免疫
测定基础上发展起来的一种新的免疫学技术。是 凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异性、 敏感性、稳定性及可重复性的有机结合。
5. BA -组织化学技术
6. BA-分离提纯技术
待分离物生物素化，结合于亲和素包被的固相载体上， 洗脱后，达到分离提纯的目的。
۞ Morag G.等使用硝基-(链霉)亲和素吸附于分离柱 上,分离提纯兔抗血清中的免疫球蛋白、抗-转移因 子等,每一例均可在解离生物素化探针后,恢复分离 柱的生物学特性。
۞在制备特异性破骨细胞cDNA库时,加入 生物素化的mRNA,然后通过固相亲和素提取。 用斑点印迹法分析,发现在此提取物中, 高度聚集了特异性破骨细胞cDNA。
生物素化的 引物扩增目 的基因
微孔板内链霉 亲和素捕获 PCR扩增产物
用地高辛标记 的寡核苷酸探 针进行杂交
酶标抗体进 行显色反应
在分子生物学技术中较常用的技术还有：将核酸 探针结合上生物素，通过酶或其它示踪物标记的亲和 素进行显色等。
扩增rRNA的目标序列
与生物素化
探针进行杂交
通过微孔板内的链霉亲
生物素（Biotin）－辅酶R、维生素H
是生物体内广泛分布的一种羧化酶 的辅酶，分子中有两个环状结构：
➢Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素
结合的主要部位。
➢Ⅱ环为噻唑环，上有一戊酸侧
链，其末端羧基是结合抗体和其他 生物大分子（如：酶、蛋白质、抗 体、DNA ）的唯一结构。
利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活 性生物素，以适合与各种生物大分子结合的需 要。主要有用于标记蛋白质氨基的生物素N－ 羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）和生物素对硝基 酚酯(pBNP),其中以BNHS最为常用。近年来， 应用长臂生物素（BCNHS）标记生物大分子， 可以减少位阻效应，增加检测的灵敏度和特异 性。用于标记蛋白质醛基、巯基和糖基的衍生 物有生物素酰肼（BHZ）及肼化生物素 （BCHZ）。
7. BA-时间分辨荧光免疫技术（BA-TRFIA）
➢应用BA-TR-FIA检测肿瘤细胞和血清中的肌酸转移
BB(CK-BB) , 发现CK-BB是乳腺癌的一个敏感指标,前列
腺癌病人血中的CK-BB也明显提高,因此认为该方法是
研究CK-BB与各种恶性肿瘤关系的敏感特异的方法。
➢该法中使用生物素化Ab和Eu3+(Eu3+是发光效率、