生物化学蛋白质第一章
01 第一章 蛋白质化学 华中农业大学微生物考研生物化学
第一章 蛋白质化学蛋白质是最重要的生物大分子,同时蛋白质化学在生物化学中也是第一重要的部分。
要学好生物化学就一定要首先学好蛋白质化学。
蛋白质化学这一章内容很多,重点是蛋白质的结构和功能,其难点是掌握蛋白质或氨基酸的两性解离。
为使读者更好地掌握两性解离,本章以氨基酸的两性解离为例进行较详细的解释。
当可解离基团HA 或A-发生解离时:其中Ka 与Kb 分别为酸式解离常与碱式解离常数:Ka=[H +]×[A -]/[HA]Kb=[HA]×[OH -]/([A -]×[H 2O])由于[H 2O]可近似看作为1,而[OH -)×[H +]=10-14;[OH -]=10-14/[H +]Kb=[HA]×[OH-]/[A -]=([HA]/[A -]×(10-14/[H +])=[[HA]/([A -]×[H +])]10-14=10-14 × 1/KaKa ×Kb=10-14为了使用上的方便,我们把X 的负对数用pX 表示,把上式两边取负对数:pKa+pKb=14这样我们就可以清楚地看到对于同一对解离基团的pKa 与pKb 之间的关系。
一般情况下我们都使用pKa ,而pKb 使用则较少。
在处理pH 值与某一可解离基团解离程度之间的关系时,我们就要使用Henderson-Hasselbalch 方程,此方程是怎样来的呢,请看:各成分的摩尔浓度为[HA] [H +][A -]Ka=([H +]×[A -]/[HA]=[H +]×([A -]/[HA])两边取负对数:pKa=pH-Ig ([A -]/[HA])Ph=pKa+1g ([A -]/[HA])=pKa+1g ([碱]/[碱])上式即为Hendreson-Hasselbalch 方程。
在这里,可以接受H +的A -被看作是广义碱,而能释放H +的HA 被看作是广义的酸。
生物化学课件-蛋白质及其分离纯化
• 构成蛋白质的基本氨基酸共20种。 构成蛋白质的基本氨基酸共20 20种 • 共同点:除脯氨酸外,均为α-氨 共同点:除脯氨酸外,均为α 基酸,即同一碳原子上有羧基、 基酸,即同一碳原子上有羧基、氨 基与氢。 基与氢。 • 不同点:侧链R基团不同。 不同点:侧链R基团不同。
3、氨基酸的分类
Ⅰ 蛋白质氨基酸
Hale Waihona Puke 补充: 补充:1.4.5 结构域:多肽链上由相邻的超 结构域:
二级结构单元联系而成的局部性区域 折叠成近乎球状的高级结构。 ,多肽链折叠成近乎球状的高级结构。
1.4 .6 蛋白质的三级结构
定义:建立在二级结构、超二级结构 建立在二级结构、 建立在二级结构 乃至结构域的基础上, 乃至结构域的基础上,一条多肽链 所有氨基酸残基的空间关系( 中所有氨基酸残基的空间关系(构 象)。
1)20种基本氨基酸 ) 种基本氨基酸 按侧链极性分类 按侧链结构分类 按人体能否合成分类 2)稀有氨基酸 )
Ⅱ 非蛋白质氨基酸
按侧链结构分类
脂肪族氨基酸(15种) 脂肪族氨基酸 种 芳香族氨基酸(3种 芳香族氨基酸 种) 杂环氨基酸(2种 杂环氨基酸 种)
芳香族氨基酸(3种 芳香族氨基酸 种)
Ⅱ β-折叠
定义: 两条或多 条几乎完 全伸展的 多肽链侧 向聚集在 一起, 一起,靠 链间氢键 联结的片 层结构
β-折叠的特征要点: 折叠的特征要点:
相邻肽链走向可平行也可反平行 平行也可反平行。 ① 相邻肽链走向可平行也可反平行。 肽链的N 端在同侧为平行式, 肽链的N-端在同侧为平行式,不在同侧 为反平行式。 为反平行式。从能量角度考虑反平行式 更为稳定 稳定性是靠链间氢键维持的, 链间氢键维持的 ② 稳定性是靠链间氢键维持的,氢键是 由相邻肽链主链上的N C=O之间形成 由相邻肽链主链上的N-H和C=O之间形成 的 氨基酸残基的R ③ 氨基酸残基的R侧链交替分布在片层 的上下两侧
生物化学第一章蛋白质化学
组成蛋白质的元素:
主要元素组成: 碳(C) 50% ~ 55% 氧(O) 19% ~ 24% 氢(H) 6% ~ 8% 氮(N) 13% ~ 19% 硫(S) 0% ~ 4%
少量的 磷(P)、铁(Fe)、铜(Cu)、锌(Zn)和碘(I)等
蛋白质元素组成特点:
各种蛋白质含氮量很接近,平均为16%
故可根据以下公式推算出蛋白质的大致含量: 样品中蛋白质的含量〔g〕
脱水作用
脱水作用
--
碱
酸-
-
-
-- -
不稳定的蛋白质颗粒
带负电荷的蛋白质
溶液中蛋白质的聚沉
〔三〕蛋白质的变性、沉淀与凝固
1. 蛋白质的变性〔denaturation〕 在某些理化因素作用下,蛋白质的构
象被破坏,失去其原有的性质和生物活性, 称为蛋白质的变性作用。
变性后的蛋白称为变性蛋白质。
常见的变性因素:
2. 极性中性氨基酸
R-基含有极性基团; 生理pH条件下不解离。 包括7个:
甘氨酸(Trp)、 丝氨酸(Ser)、
半胱氨酸(Cys)、 谷氨酰胺(Gln)、 天冬酰胺(Asn)、 酪氨酸(Tyr) 苏氨酸(Thr)
3. 酸性氨基酸
R-基有COOH(COO-)
带负电荷
4. 碱性氨基酸
R-基有NH2(NH3+)
牛胰核糖核酸酶的变性与复性
尿素或盐酸胍 β-巯基乙醇
透析
有活性
无活性
〔二〕一级构造与功能的关系 1.一级构造相似的蛋白质功能相似 一级构造不同的蛋白质功能不同
胰岛素的一级构造及种属差异
一级构造不同的蛋白质功能不同
ACTH 促肾上腺素皮质激素
MSH 促黑激素
生物化学第一章蛋白质概论
一般动物: 6.25 牛奶: 6.38
植物: 5.7
大米: 5.95
(二) 蛋白质的分子组成
1.蛋白质的水解产物
• 蛋白质的水解过程为:
蛋白质 月示 胨 多肽 二肽 α-氨基酸 分子量:>104 5×103 2×103 500-103 200 100
• α-氨基酸(amino acid)是蛋白质的基本组成 单位
2.根据R基团的化学结构分类
(1)脂肪族氨基酸:Gly,Ala,Val,Leu,IleSer,Thr,
Cys,Met,Asn,Gln,Asp,Glu,Lys,Arg;
(2)芳香族氨基酸:Phe,Tyr,Try; (3)杂环氨基酸:His; (4)杂环亚氨基酸:Pro;
3.根据R基团的极性分类
(1)非极性氨基酸
(二)蛋白质在自然界的分布及重要性
2. 凡是有生命的地方,基本上都有蛋白质在起作用。
蛋白质和核酸是生命的主要物质基础。 蛋白质是生Байду номын сангаас表现千差万别的功能的基本物质。
3.蛋白质在食品加工中的重要性;
蛋白质的加工特性影响食品的营养及感官品质; 某些食品的制造利用蛋白质的特性;
二、蛋白质的分类
•按分子形状分两类: 球状蛋白和纤维状蛋白
(二)蛋白质在自然界的分布及重要性
1.蛋白质是一切生物体的重要组成成分
•从高等动植物到低等微生物 •从最复杂的人类到最简单的病毒 例:蛋白质在生物体中占干重为
人体:45% 横纹肌:80% 心脏:60% 细菌:50~80% 酵母:46.6% 病毒: 60% 小麦:约9% 大豆:约36% 花生:26%
营养和贮存功能----为机体提供养料如醇溶蛋白、卵清蛋 白、酪蛋白
《生物化学》第一章蛋白质化学及答案
生物化学(第2版)第一章蛋白质化学一、选择题1.测得某一蛋白质样品的氮含量为0.40g,此样品约含蛋白质多少?A.2.00g B.2.50g C.6.40g D.3.00g E.6.25g2.下列含有两个羧基的氨基酸是:A.精氨酸B.赖氨酸C.甘氨酸D.色氨酸E.谷氨酸3.维持蛋白质二级结构的主要化学键是:A.盐键B.疏水键C.肽键D.氢键E.二硫键4.关于蛋白质分子三级结构的描述,其中错误的是:A.天然蛋白质分子均有的这种结构B.具有三级结构的多肽链都具有生物学活性C.三级结构的稳定性主要是次级键维系D.亲水基团聚集在三级结构的表面E.决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基5.具有四级结构的蛋白质特征是:A.分子中必定含有辅基B.在两条或两条以上具有三级结构多肽链的基础上,肽链进一步折叠,盘曲形成C.每条多肽链都具有独立的生物学活性D.依赖肽键维系四级结构的稳定性E.由两条或两条以上具在三级结构的多肽链组成6.蛋白质所形成的胶体颗粒,在下列哪种条件下不稳定:A.溶液pH值大于pIB.溶液pH值小于pIC.溶液pH值等于pID.溶液pH值等于7.4E.在水溶液中7.蛋白质变性是由于:A.氨基酸排列顺序的改变B.氨基酸组成的改变C.肽键的断裂D.蛋白质空间构象的破坏E.蛋白质的水解8.变性蛋白质的主要特点是:A.粘度下降B.溶解度增加C.不易被蛋白酶水解D.生物学活性丧失E.容易被盐析出现沉淀9.若用重金属沉淀pI为8的蛋白质时,该溶液的pH值应为:A.8B.>8C.<8D.≤8E.≥810.蛋白质分子组成中不含有下列哪种氨基酸?A.半胱氨酸B.蛋氨酸C.胱氨酸D.丝氨酸E.瓜氨酸二、填空题1.组成蛋白质的主要元素有_________,________,_________,_________。
2.不同蛋白质的含________量颇为相近,平均含量为________%。
3.蛋白质具有两性电离性质,大多数在酸性溶液中带________电荷,在碱性溶液中带_______电荷。
生物化学——第一章蛋白质
丙氨酸 Alanine 缬氨酸 Valine 亮氨酸 Leucine 异亮氨酸 Ileucine 脯氨酸 Proline 甲硫氨酸 Methionine
非极性氨基酸
O H 2N CH C OH
CH CH 3 CH 3
丙氨酸 Alanine 缬氨酸 Valine 亮氨酸 Leucine 异亮氨酸 Ileucine 脯氨酸 Proline 甲硫氨酸 Methionine
谷氨酸(二羧基一氨基) pK1 pK2 pK3
碱性氨基酸:pI = (pK2 + pK3 )/2
赖氨酸(一pK羧1 基二p氨K2基pK)3
• 中性氨基酸pI一般为6.0答案:
• 提问:为什么偏酸性?
• -COOH解离程度略大于-NH2 • 提问:酸性氨基酸的pI(更偏酸、更偏碱)?
• 更酸(3.0 左 右)
非极性氨基酸
O H 2 N CH C OH
CH 2 CH CH 3 CH 3
丙氨酸 Alanine 缬氨酸 Valine 亮氨酸 Leucine 异亮氨酸 Ileucine 脯氨酸 Proline 甲硫氨酸 Methionine
非极性氨基酸
O H 2 N CH C OH
CH CH 3 CH 2 CH 3
丙氨酸 Alanine 缬氨酸 Valine 亮氨酸 Leucine 异亮氨酸 Ileucine 脯氨酸 Proline 甲硫氨酸 Methionine
非极性氨基酸
H N
CO OH
吡咯
丙氨酸 Alanine 缬氨酸 Valine 亮氨酸 Leucine 异亮氨酸 Ileucine 脯氨酸 Proline 甲硫氨酸 Methionine
2、分类
各种氨基酸的区别在于侧链R基的不同。 20种基本氨基酸按R的极性可分为: (1)非极性氨基酸 (2)极性氨基酸 (不带电荷氨基酸、酸性氨基酸和碱性氨基酸)
《生物化学》绪论 第1章 蛋白质化学
定的蛋白质肽键断裂,各自得到一系列大小不同 的肽段。
⑷分离提纯所得的肽,并测定它们的序列。
⑸从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质
中全部氨基酸排列顺序。
一级结构确定的原则
蛋白质一级结构测定的战略原则是将大化小,逐
段分析,先后采用不同方法制成两套肽片断,并 对照两段肽段,找出重叠片断,排出肽的前后位 臵,最后确定蛋白质的完整序列。
α-螺旋结构
每个氨基酸残基的-NH
-与间隔三个氨基酸残 基的=C=0形成氢键。每 个 肽 键 的 =C=0 与 - NH -都参加氢键形成,因 此 保 持 了 α- 螺 旋 的 最 大 稳定性。
绝大多数蛋白质以右手
右手α螺旋
α- 螺 旋 形 式 存 在 。 1978 年发现蛋白质结构中也 有 左 手 α- 螺 旋 结 构 。
第一章 蛋白质化学
第一章 蛋白质化学
蛋白质是由不同的 α-氨基酸按一定
的序列通过酰胺键(蛋白质化学中专 称为肽键)缩合而成的,具有较稳定 的构像并具有一定生物功能的生物大 分子。
1.1 蛋白质的生物学意义
蛋白质是一切生物体的细胞和组织的主要组成成
分,也是生物体形态结构的物质基础,使生命活 动所依赖的物质基础。 蛋白质分子巨大、结构复杂,使得蛋白质的理论 研究及其应用受到限制。近年来在重组DNA技术 基础上发展起来的蛋白质工程为解决这方面的问 题提供了最大的可能性。蛋白质工程可改变蛋白 质的生物活性,改变蛋白质的稳定性,改变受体 蛋白质的特性。通过蛋白质工程可深入地研究蛋 白质的结构与功能的相互关系。
1.2 蛋白质的元素组成
经元素分析,蛋白质一般含碳50%~55%,氢
6%~8% , 氧 20%~23% , 氮 15%~18% , 硫 0%~4%。 有的蛋白质还含有微量的磷、铁、锌、铜、钼、 碘等元素。 氮含量在各种蛋白质中比较接近,平均为16%。 因此,一般可由测定生物样品中的氮,粗略的 计算出蛋白质的含量。(1g的氮≈ 6.25 g的蛋 白质)
生物化学 第一篇 蛋白质的结构与功能
第一篇蛋白质的结构与功能(第一~四章小结)第一章氨基酸氨基酸是一类同时含有氨基和羧基的有机小分子。
组成多肽和蛋白质的氨基酸除Gly外,都属于L型的α- 氨基酸(Pro为亚氨基酸)。
氨基酸不仅可以作为寡肽、多肽和蛋白质的组成单位或生物活性物质的前体,也可以作为神经递质或糖异生的前体,还能氧化分解产生ATP。
目前已发现蛋白质氨基酸有22种,其中20种最为常见,而硒半胱氨酸和吡咯赖氨酸比较罕见。
非蛋白质氨基酸通常以游离的形式存在,作为代谢的中间物和某些物质的前体,具有特殊的生理功能。
22种标准氨基酸可使用三字母或单字母缩写来表示。
某些标准氨基酸在细胞内会经历一些特殊的修饰成为非标准蛋白质氨基酸。
氨基酸有多种不同的分类方法:根据R基团的化学结构和在pH7时的带电状况,可分为脂肪族氨基酸、不带电荷的极性氨基酸、芳香族氨基酸、带正电荷的极性氨基酸和带负电荷的极性氨基酸;根据R基团对水分子的亲和性,可分为亲水氨基酸和疏水氨基酸;根据对动物的营养价值,可分为必需氨基酸和非必需氨基酸。
氨基酸的性质由其结构决定。
其共性有:缩合反应、手性(Gly除外)、两性解离、具有等电点,以及氨基酸氨基和羧基参与的化学反应,包括与亚硝酸的反应、与甲醛的反应、Sanger反应、与异硫氰酸苯酯的反应和与茚三酮的反应等。
与亚硝酸的反应可用于Van Slyke定氮,与甲醛的反应可用于甲醛滴定,Sanger反应和与异硫氰酸苯酯的反应可用来测定N-端氨基酸。
只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质,其余生成蓝紫色物质,利用此反应可对氨基酸进行定性或定量分析。
多数氨基酸的侧链可能发生特殊的反应,可以此鉴定氨基酸。
不同氨基酸在物理、化学性质上的差异可用来分离氨基酸,其中最常见的方法是电泳和层析。
第二章蛋白质的结构肽是氨基酸之间以肽键相连的聚合物,它包括寡肽、多肽和蛋白质。
氨基酸是构成肽的基本单位。
线形肽链都含有N端和C端,书写一条肽链的序列总是从N端到C端。
生物化学第一章 蛋白质——结构与功能的关系
Arg
缩,有催产及排乳功能,并促进遗
Gly NH2
忘; 加压素:使血管平滑肌收缩,增加
牛加压素
血压,减少排尿,故又叫抗利尿素; 并增强记忆
(3)、神经肽
➢·脑啡肽
+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-
➢·Leo脑啡肽
+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO-
➢·有镇痛麻醉作用。
(2). 多肽类激素:
•种类较多,生理功能各异。主要见于 下丘脑及垂体分泌的激素。
Cys Tyr ILe Gln Asn Cys Pro Leu Gly
S S
NH2
牛催产素
Cys Tyr Phe Gln Asn Cys Pro Arg Gly
S S
NH2
牛加压素
催产素和加压素
Cys Tyr ILe S Gln S Asn Cys Pro Leu Gly NH2
第三节 肽
1. 肽的概念
一个氨基酸的羧基和另一个氨基酸的氨基脱水缩合而 成的化合物称为肽。其中的氨基酸单位称氨基酸残基。
肽键:肽分子中,一个氨基酸分子的α-羧基与另一个 氨基酸分子的α-氨基经脱水形成的键(-CO-NH),又 称为酰胺键(肽键)。
H2N
R1 O CC
OH
+
HN
R2 C
COOH
- H2O
4. 肽的物理和化学性质
• 短肽在晶体和水溶液中以偶极离子形式存在,酸碱性 质决定于末端的氨基和羧基以及可解离的侧链基团。
• 许多化学反应与氨基酸相似,与茚三酮发生呈色反应; 能发生双缩脲反应,形成紫红色或蓝紫色反应(氨基酸 不能) Pr特有的反应。
生物化学 复习资料 重点+试题 第一章 蛋白质
第一章蛋白质一、知识要点〔一〕氨基酸的结构蛋白质是重要的生物大分子,其组成单位是氨基酸。
组成蛋白质的氨基酸有20种,均为α-氨基酸。
每个氨基酸的α-碳上连接一个羧基,一个氨基,一个氢原子和一个侧链R基团。
20种氨基酸结构的差异就在于它们的R基团结构的不同。
根据20种氨基酸侧链R基团的极性,可将其分为四大类:非极性R基氨基酸〔8种〕;不带电荷的极性R基氨基酸〔7种〕;带负电荷的R基氨基酸〔2种〕;带正电荷的R基氨基酸〔3种〕。
〔二〕氨基酸的性质氨基酸是两性电解质。
由于氨基酸含有酸性的羧基和碱性的氨基,所以既是酸又是碱,是两性电解质。
有些氨基酸的侧链还含有可解离的基团,其带电状况取决于它们的pK值。
由于不同氨基酸所带的可解离基团不同,所以等电点不同。
除甘氨酸外,其它都有不对称碳原子,所以具有D-型和L-型2种构型,具有旋光性,天然蛋白质中存在的氨基酸都是L-型的。
酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸具有紫外吸收特性,在280nm 处有最大吸收值,大多数蛋白质都具有这些氨基酸,所以蛋白质在280nm处也有特征吸收,这是紫外吸收法定量测定蛋白质的根底。
氨基酸的α-羧基和α-氨基具有化学反响性,另外,许多氨基酸的侧链还含有羟基、氨基、羧基等可解离基团,也具有化学反响性。
较重要的化学反响有:〔1〕茚三酮反响,除脯氨酸外,所有的α-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反响,生成蓝紫色化合物,脯氨酸与茚三酮生成黄色化合物。
〔2〕Sanger反响,α-NH2与2,4-二硝基氟苯作用产生相应的DNB-氨基酸。
〔3〕Edman反响,α-NH2与苯异硫氰酸酯作用产生相应的氨基酸的苯氨基硫甲酰衍生物〔PIT-氨基酸〕。
Sanger反响和Edmen反响均可用于蛋白质多肽链N端氨基酸的测定。
氨基酸通过肽键相互连接而成的化合物称为肽,由2个氨基酸组成的肽称为二肽,由3个氨基酸组成的肽称为三肽,少于10个氨基酸肽称为寡肽,由10个以上氨基酸组成的肽称为多肽。
第一章 蛋白质结构与功能
第三节 蛋白质结构与功能的关系
一、一级结构与功能关系; 二、空间结构与功能关系;
一、一级结构与功能关系
(一)一级结构是空间结构的基础 上世纪60年代,C.Anfinsen对核糖核 酸酶(RNase)空间构象拆分和复原 实验:
细胞色素C的一级结构与物 种进化间的关系-----物种进 化树(phylogenetic tree)
空间结构(高级结 构):二、三、四级 结构
一、一级结构
1、定义: 蛋白质多肽链中的氨基酸种类、数目 和特定排列顺序,还包括肽链数目和二 硫键位置等 2、稳定作用力-肽键
胰岛素的一级结构: 两条肽链,A链和B链
NH3+
51个氨基酸残基
COO-
3 个二硫键
COO-
二、蛋白质的空间结构
二级结构 三级结构 四级结构
DNA 异常 mRNA
Hbs (亚基)N … —Thr — Pro—Val — Glu—Lys—…
两种最重要的生物大分子比较
蛋白质 组成单位 种 类 氨基酸 20种 核酸 核苷酸
A、C 、G 、T (DNA) A、C 、G 、U (RNA)
(二)氨基酸的理化性质
两性电离及等电点 紫外吸收 显色反应(印三酮反应等)
1、两性电离及等电点
两性电离
兼性离子(zwitterion)
等电点 (isoelectric point,pI)
2、紫外吸收
芳香族氨基酸的紫外吸收 芳香族氨基酸在波长约为280nm处有最大光吸收峰 吸收强度比较:色氨酸>酪氨酸>苯丙氨酸 应用:测定生物样品中蛋白质的含量
α-螺旋的要点:
一般为右手螺旋
每圈含3.6个氨基酸残基 氢键 维持结构稳定 侧链位于螺旋外侧
《生物化学与分子生物学》(人卫第八版)-第一章蛋白质的结构与功能归纳总结
第一章蛋白质·蛋白质(protein)就是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(prpide bond)相连形成得高分子含氮化合物。
·具有复杂空间结构得蛋白质不仅就是生物体得重要结构物质之一,而且承担着各种生物学功能,其动态功能包括:化学催化反应、免疫反应、血液凝固、物质代谢调控、基因表达调控与肌收缩等;就其结构功能而言,蛋白质提供结缔组织与骨得基质、形成组织形态等。
·显而易见,普遍存在于生物界得蛋白质就是生物体得重要组成成分与生命活动得基本物质基础,也就是生物体中含量最丰富得生物大分子(biomacromolecule)·蛋白质就是生物体重要组成成分。
分布广:所有器官、组织都含有蛋白质;细胞得各个部分都含有蛋白质含量高:蛋白质就是细胞内最丰富得有机分子,占人体干重得45%,某些组织含量更高,例如:脾、肺及横纹肌等高达80%。
·蛋白质具有重要得生物学功能。
1)作为生物催化剂(酶)2)代谢调节作用3)免疫保护作用4)物质得转运与存储5)运动与支持作用6)参与细胞间信息传递·氧化功能第一节蛋白质得分子组成(The Molecular Structure of Protein)1、组成元素:C(50%-55%)、H(6%-7%)、O(19%-24%)、N(13%-19%)、S(0-4%)。
有些但被指含少量磷、硒或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼,个别还含碘。
2、各蛋白质含氮量接近,平均为16%。
100g样品中蛋白质得含量(g%)=每克样品含氮克数*6、25*100,即每克样品含氮克数除以16%。
凯氏定氮法:在有催化剂得条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转化为无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量得硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中得氮量。
此法就是经典得蛋白质定量方法。
一、氨基酸——组成蛋白质得基本单位存在于自然界得氨基酸有300余种,但组成人体蛋白质得氨基酸仅有20种,且均属L-氨基酸(甘氨酸除外),手性,具有旋光性(甘氨酸除外,甘氨酸R基团为-H)。
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、化学组成(元素组成)(Protein’s element composing) 元素 百分含量 平均(%)
C H O N S P 52 7 23 16 2 0.6
凯氏定氮:粗蛋白质含量=蛋白氮×6.25
微量的磷、铁、铜、碘、锌、钼
2. •
•
蛋白质的结构组成(Protein’s building-block units) 蛋白质(Pr)分子量很大,可水解成简单有机化合物 ——氨基酸(amino acids),Pr含有数以百计的氨 基酸(aa),氨基酸按固定的排列顺序以共价键的形 式连接形成长的不分支的链。 蛋白质是由多肽组成的。 – 蛋白质:分子量>6000时,有完整的生物学功能, 至少40个aa。 – 多肽:分子量<6000时,不完全有生物学功能。
S Phe Tyr Trp Cys
S Met
Stryer (1995) Biochemistry (4e) p.20
氨基酸的通式及碳
R CH COOH NH2
氨基酸存在对映异构体
镜像
Juang RH (2004) BCbasics
化性相同、物性 (旋光度) 不同 立体结构不同 20种氨基酸中,除甘氨酸外,其α-碳原子都是手征性碳原子,
一、氨基酸的结构与分类 二、氨基酸的性质 三、氨基酸的分离分析
• (Structure and classification of amino acids)
•
氨基酸的结构和分类
•
•
氨基酸是蛋白质的结构单元,这一点已由蛋白质 的水解可以得到证明。 所有生物中最常的是20种氨基酸,在生物界中是 通用的。 氨基酸通式为:
5).
保护功能(Protection)
6).
信息传递功能(Information processing)
Simple Anatomy of the Retina
(Composition of proteins)
1
二、蛋白质的组成
50-55 6.9-7.7 21-24 15.0-17.6 0.3-2.3 0.4-0.9
egg white and spider web: examples of globular and fibrous proteins
(二).按组成分类(Classified according to composition)
蛋白质 特性 核蛋白 含有RNA 和DNA nucleoprotein 磷蛋白 磷酸以酯形式结合, phosphoprotei 常在苏丝氨酸侧链上 n 脂蛋白 含有脂类物质,如磷脂, 固醇 lipoprotein 色素蛋白 含有机色素,高等动物 chromoprotein 血红蛋白含铁,低等动 物血蓝蛋白含铜 糖蛋白 含有糖类物质,与粘蛋 glycoprotein 白相似,含糖量<4% 粘蛋白 蛋白质与氨基多糖结 mucoprotein 合 存在 动,植物细 胞 动,植物细 胞及体液 动,植物细 胞 动,植物细 胞及体液 动物细胞 动物细胞 及分泌液 代表性的蛋白 胸腺核组蛋白,鱼核精蛋白 烟草斑纹病毒,酵母核蛋白 酪蛋白,卵黄磷蛋白 凝血致活酶,血-脂蛋白 血红蛋白,肌红蛋白,过氧 化氢酶(肝),细胞色素C 血蓝蛋白,卵蛋白 唾液粘蛋白,卵类粘蛋白
、蛋白质的水解(Hydrolysis of proteins) 蛋白质可以被酸、碱和酶水解,可以产生aa。 根据水解程度分:
3
根据片断的大小,可以分为:
完全水解产物为aa,不完全水解产物不同的片断混合 物,无确定组成成分。
1). •
酸水解
•
•
方法: 6N HCl,煮沸回流20小时左右,或加压于 120°C水解12小时. 优点: 水解彻底,水解的最终产物是L-氨基酸,没有 旋光异构体生成. 缺点: 色氨酸全部破坏,丝,苏,酪氨酸部分破坏.有腐 黑质生成,水解液呈黑色.
二十种氨基酸的结构特点
支链氨基酸:缬氨酸、亮氨酸,异亮氨酸 含羟基的氨基酸:丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸 含硫的氨基酸:半胱氨酸(含巯基)、 甲硫氨酸(含硫甲基) 含苯环的氨基酸:苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸 含胍基的氨基酸:精氨酸 含咪唑基的氨基酸:组氨酸 亚氨基酸:脯氨酸 含酰胺的氨基酸:天冬酰胺、谷氨酰胺 含吲哚基的氨基酸:色氨酸 含ε-氨基的氨基酸:赖氨酸
谷胶蛋白,大麦胶蛋 白,玉米胶蛋白 胶原蛋白,网硬蛋白, 弹性蛋白,角蛋白,丝 心蛋白 胸腺组蛋白,珠蛋白, 肝组蛋白,鲑组蛋白 鲑精蛋白,腓精蛋白, 鲭精蛋白,鲈精蛋白
( ). (Classified according to structure and function)
四 按结构与功能分类
1
动,植物细 血清清蛋白,乳清 胞及体液 蛋白,卵清清蛋白
动,植物细 血清球蛋白,-乳 胞及体液 球蛋白,麻仁球蛋 白,肌凝蛋白,血纤 维蛋白原,溶菌酶, 胰岛素 谷蛋白 不溶于水及盐溶液;可溶 谷物种子 麦谷蛋白,米谷蛋 白 glutelin 于稀酸,稀碱
( ).
三 根据蛋白质的溶解度分类
(Classified according to solubility)
和糖类一样,氨基酸的D- L-构型,并不代表其旋光方向。 氨基酸的名称一般使用它的英文的前三个字母作为缩写附号 表示,有时有单字母表示
( ).
二 氨基酸的分类(Classification of amino acids) 、参加蛋白质组成的氨基酸 (Amino acids found in proteins) 1).有遗传密码的氨基酸 (“Standard” amino acids) 2).无遗传密码,但在蛋白质中发现的 (Amino acids derivatives in proteins) 2、不参加蛋白质组成的氨基酸
生物化学
第三章 蛋白质
Proteins
第一节 蛋白质概论(summary)
一、蛋白质的重要性 二、蛋白质的组成 三、蛋白质的分类
(The importance of proteins)
1
一、蛋白质的重要性
、蛋白质是生物体的重要组成部分(Proteins are
important biomolecules)
、酶 2、调节蛋白 3、转运蛋白 4、贮存蛋白 5、收缩和游动蛋白 6、结构蛋白 7、支架蛋白 8、保护和开发蛋白 9、异常蛋白
四 、 蛋 白 质 分 子 的 构 象 与 结 构 层 次 蛋白质都有自己特有的天然空间结构,称为构象。
第二节 蛋白质的结构单元 ——氨基酸 (Amino acids)
Fireflies emit light catalyzed by luciferase
(荧光素酶) with ATP
2).
运输和储存功能(Transport and storage)
Erythrocytes hemoglobins
(红细胞) contain a large amount of (血红蛋白), the oxygen-transporting protein.
2). • • •
碱水解
2
方法: 6M NaOH或4M Ba(OH) 煮沸6小时. 优点: 色氨酸不被破坏,水解液清亮透明. 缺点: 水解产生的氨基酸发生旋光异构作用,产物 中有L-,D-型两类氨基酸.
3). •
•
•
酶水解 方法:蛋白质可以由蛋白酶水解,不同的蛋白酶 专一性不同。 优点: 条件温和,常温常压(36-60°C) 及pH 2-8时, 氨基酸不受破坏,无旋光异构体产生. 缺点: 各蛋白酶有不同的专一性,用单一的酶作用 水解不彻底.
( ).
三 根据蛋白质的溶解度分类
蛋白质 特性
(Classified according to solubility)
存在
代表性的蛋白
清蛋白 溶于水,盐及酸碱溶液; albumin 50%以上饱和硫酸铵中 析出;遇热凝固 球蛋白 溶于稀盐,酸及碱溶液; glubulin 优球蛋白不溶于水,拟球 蛋白溶于水;50%饱和硫 酸铵中析出;加热凝固
NONPOLAR
『极性或非极性,是蛋白质性质之所系。』
Juang RH (2003) Biochemistry
按氨基酸是否能在人体内合成分:
(1)必需氨基酸:指人体内不能合成的氨基酸,必须从食物 中摄取,有八种:Lys,赖氨酸、Trp,色氨酸、Met甲硫氨酸、 Met 苯丙氨酸、Val 缬氨酸、Leu 亮氨酸、Ile异亮氨酸、Thr 苏氨酸。 (2)非必需氨基酸:指人体内可以合成的氨基酸。有十种。 (3)半必需氨基酸:指人体内可以合成但合成量不能满足人 体需要(特别是婴幼儿时期)的氨基酸,有两种:组氨酸(His) 、精氨酸(Arg)。
( ).
一 基本结构
(Amino acids have common structural features)
氨基
羧基
COO
H
-
+ H3 N
R group
H = Glycine CH3 = Alanine
Juang RH (2004) BCbasics
氨基酸不同,它的R基团就不同
Gly Ala Val Leu Ile
1 (Nonprotein amino acids)
1
、参加Pr组成的氨基酸 1)有遗传密码的aa,共有20种,可根据侧链的极性不 同,将这些氨基酸分成四类(有的是按照R基团的结 构来分)。 非极性R基氨基酸,侧链无极性 不带电荷的极性R基的aa 带正电荷的极性R基aa——碱性aa 带负电荷的极性R基aa ——酸性aa
醇溶蛋白 不溶于水及盐溶液;可溶于稀 谷物种子 prolamine 酸,稀碱及70-90%醇;含有大 量脯,谷氨酸,非极性侧链较 多 硬蛋白 通常溶液中不溶 动物组织,完 成结缔,保护 scleroprotein 功能 组蛋白 碱性蛋白,可溶于水,稀酸,但 动物组织,一 为稀氨沉淀;精,赖氨酸含量 般与酸性物 histone 特多 质结合 精蛋白 碱性蛋白,可溶于水,稀酸,但 成熟的生殖 为稀氨沉淀;精,赖氨酸含量 细胞;多自鱼 protamin 特多.伸展状 精提出,与 DNA结合