产酶条件优化方案

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提高发酵产酶量的措施

提高发酵产酶量的措施一、优化培养条件1.1温度：在一定的温度范围内，大部分酶的活性随着温度的升高而增强。

因此，可以通过调整培养温度来提高发酵产酶量。

1.2 pH值：酶的活性受pH值影响较大，只有在适宜的pH值条件下，酶的活性才能得到充分发挥。

因此，可以通过调节培养液的pH值来提高发酵产酶量。

1.3溶氧浓度：对于好氧菌，发酵过程中的溶氧浓度对产酶量有显著影响。

可以通过调整搅拌速度和通气量来控制溶氧浓度，从而提高发酵产酶量。

二、基因工程2.1构建高产酶的基因工程菌：通过基因工程技术将目的基因导入到菌种中，构建高产酶的基因工程菌，从而提高发酵产酶量。

2.2基因表达调控：通过基因表达调控手段，如诱导表达、补料表达等，来提高目的基因的表达水平，从而增加发酵产酶量。

三、添加诱导物添加适当的诱导物可以促进酶的合成，从而提高发酵产酶量。

诱导物可以是天然的，也可以是人工合成的。

选择合适的诱导物并根据实验条件优化其浓度是提高发酵产酶量的有效手段。

四、细胞固定化通过固定化技术将菌体固定在载体上，可以提高菌体的生长速度和存活率，同时延长菌体的寿命并提高产酶量。

选择合适的固定化载体和工艺参数是实现这一目标的关键。

五、补糖与补料5.1补糖：通过适时补充葡萄糖等营养物质，可以促进菌体的生长和代谢，从而提高发酵产酶量。

同时，控制补糖速率和浓度可以有效避免对菌体生长和产酶的抑制作用。

5.2补料：适当的补料可以延长发酵周期，提高产物浓度。

选择合适的补料种类和添加时机是关键。

六、降低产物抑制6.1控制产物浓度：产物浓度过高可能会对菌体的生长和产酶产生抑制作用。

因此，在发酵过程中应控制产物浓度在适宜范围内，避免其对发酵过程的影响。

6.2添加抗抑物：某些物质如丙酮酸、硫酸铵等可以减轻或消除产物对菌体生长和产酶的抑制作用。

在发酵过程中适时添加这些物质可以提高发酵产酶量。

七、提高搅拌速率提高搅拌速率可以增加溶氧浓度，促进菌体生长和代谢。

但同时也会增加能源消耗和剪切力对菌体的损伤。

稻草秆腐解菌产酶条件优化及菌种鉴定

ｓｔｒａｗ —ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．ＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｎｚｙｍｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎＦ２３ｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ
稻草秆腐解菌产酶条件优化及菌种鉴定
魏赛金，王世强，胡殿明，倪国荣，涂国全，潘晓华ｈ
（１．江西农业大学作物生理生态与遗传育种教育部重点实验室／江西省作物生理生态与遗传育种重点实验室，江西
南昌３３００４５；２．江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌３３００４５）
江西农业大学学报
２０１３，３５（５）：１０４２—１０４７
ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ｊｘａｕ．ｅｄｕ．ｃａ
Ｅ —ｍａｉｌ：ｎｄｘｂ７７７５＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｈｕｒａｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＪｉａｎｇｘｉｅｎｓｉｓ
２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｉｒｎｇ，ＪＡＵ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０４５０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔａｒｔｉｎｇｆｒｏｍｐｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆｔｈｅｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｓｔｒａｗｓｔａｌｋｓ，ｔｈｅｉｍｐａｃｔｓｏｆａｖａｉｌａｂｅｃａｒｂｏｎ

腈水解酶重组茵发酵产酶条件的优化及应用

２１，ｏ２Ｎ．０２ＶＩ９ｏ３亿与生物互程．
Ｃｈｍｉｔｙ＆Ｂｉｅｎｉｅｉｇｅｓｒｏｇｎｅｒｎ
ｄｉ１．９９ｊｉｓ．６２４５２１．３０６ｏ：０３６／．ｓｎ１７ —５２．０２０．０
腈水解酶重组茵发酵产酶条件的优化及应用
解酶基因的工程菌Ｅ．ｏｉＬ１Ｄ３／Ｅ８（）ｃｌＢ２（Ｅ）ｐＴ２ｂ＋一
Ｒ一一）扁桃酸的生产方法主要有化学法和生物（一
法，中生物法中的腈水解酶催化法由于底物价廉、其反应条件温和、环境污染小、化率高、物光学纯度高，转产
Ｘｅ［ ¨ 通过大规模的筛选和育种，得一株ｕ等１］获高活性的立体选择性腈水解酶菌株Ａ．ａｃｌｆｅａｉｓ
ＺＵＴ１，利用该腈水解酶进行了生物催化外消旋ＪＢ０并扁桃腈生产Ｒ一一）扁桃酸的研究。用ＰＲ方法扩增（一Ｃ出Ａ．ａｃｌＪｆｅａｉＺＵＴＢ０腈水解酶基因，将其插入ｓ１并
到重视。
到表达载体ｐＴ８（中，ＰＧ诱导后，水解酶Ｅ２ｂ＋）ＩＴ腈
在大肠杆菌胞内进行了活性表达，有较高的活具
性川。，
作者在此优化了含有Ａ．ａｃｌｓＪｆｅａｉＺＵＴＢＯ腈水Ｉ

产蛋白酶菌的筛选及产酶条件优化

大庆师范学院本科生毕业论文蛋白酶产生菌培养条件的条件优化院(部)、专业生命科学学院生物技术研究方向微生物学学生姓名朱琳学号200901122598指导教师姓名张亦婷2013年06月01日摘要采用大庆师范学院生命科学学院花园附近土壤、农田土壤及体育场附近土壤作为样品，并从中筛选分离并得到产蛋白酶能力较高的菌株，经过初步鉴定该菌株属芽孢杆菌。

通过对其产酶条件进行优化，结果显示该菌产酶最佳碳源为质量浓度15g/L的乳糖，最佳氮源为质量浓度20g/L的尿素，最适初始pH值为6.5，最适发酵温度为35℃。

关键词：菌种筛选；鉴定；蛋白酶；条件优化AbstractThe sewage treatment plant soil near east institute, soil and soil samples near farms .Using milk hydrolysis circle screening model separating screening in high ability get protease whr1 strains. Preliminary appraisal of the fungus belong to bacillus. After the optimization of the condition, the capability of whr1 was improved, the optimal condition is: carbon source is sucrose 15g/L; nitrogen source is Yeast extract 20g/L, the pH is 6.5; fermentation temperature is 35℃.Key words：Screening；Identified；Protease；Conditions optimization目录摘要 (1)Abstract (2)1 引言 ...........................................................................................................................................................2 材料与方法 (3)2.2.2 实验材料 (3)2.2.1 菌株筛选 (3)3.1 菌株筛选 (6)3.1.1 菌株的分离筛选 (6)2.3 条件优化 (7)2.3.1 不同碳源对产酶的影响 (7)2.3.3不同氮源对产酶的影响 (8)2.3.4 培养基不同初始pH值对产酶的影响 (9)2.3.5 不同温度对产酶的影响 (10)4 结论 (10)11 引言蛋白酶是催化蛋白质中肽键水解的酶，是一类广泛应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面的重要工业用酶，也是目前世界上产销量最大的商业酶，其市场占有率约占整个商品酶销售量的60％，微生物蛋白酶从微生物中提取，不受资源、环境和空间的限制，具有动物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比拟的优越性。

一株碱性α-淀粉酶产生菌的筛选及产酶条件优化

食品与药品
ＦｏｎｕｏｄａｄＤｒｇ
２１年第ｌ卷第０期００２５
１７６
一
株碱性淀粉酶产生菌的筛选及产酶条件优化一
宋燕，李津
（山东博士伦福瑞达制药有限公司，山东济南２００）５１１
摘要：目的获取工业生产上有潜在应用价值的碱性淀粉酶产生菌。方法土壤中筛选出５产淀粉酶的菌株；经正交株试验确定培养基的最优组成；通过摇瓶发酵初步确定了发酵条件。结果产淀粉酶活性最高的为来源于草地土壤的菌株
Ａｆｒｃｌｖｔｄｆｒ８ｈｉｈｋｒａ０ ℃ ｗｉ０ｒｎｔｅａｌｓ— ｒｄｃｎｃｉｉｆ１一ｅｃｅ１ｔｕｔａｅｓａｅｔｅｉｏｎ４ｔ１／，ｈｍｙａｅｐｏｕｉｇａｔｔｏ￥Ｉ６ｒａｈｄ２Ｕ／ｈ８ｍｉｖｙ１４
ＳＯＮＧＹａＬＩｉｎ，ｎＪ
（ｈｎｏｇａｓｈＬｍｄｈｒｃｕｉｌｏＬｄＪｎｎ５１１Ｃｉ）Ｓａｄｎｕｃ＆，，２ａＡｓａｔＯｂｅｔｅｏｏｔｉｌａｉｅａｌｓ—ｒｄｃｇｓａｓｉａｅｐｔｔｌａｕｓｎｔｅｉｄｓｙｂｔｃ：ｊｃｉＴｂａｎａｌｍｙａｅｐｏｕｉｔｉｃｈｖｏｅｉｌｅｕｔ．ｒｖｋｎｎｒｎｗｈｈｎａｖｉｈｎｒ
／．，它在发酵８ｈ／６时产酶能力最强；优化后的培养基为玉米粉３％，蛋白胨０８％，磷酸氢二钠０６％，硫酸铵０．．．２％，氯化铵０１．５％，ｐ．。于４Ｈ９００℃，１０ｒｎ８ｍｉ条件下培养，菌株／６／／．酶活性可达到２１４ＵｍＬ１／。结论筛选出５株产淀粉酶的菌株，其中菌株／６株耐碱性Ⅱ淀粉酶产生菌。／一是１一关键词：碱性淀粉酶；菌株筛选；正交试验；优化

产酶条件优化实验

产酶条件优化实验
产酶条件优化实验是一种常用的方法，用于确定最佳的培养条件以提高酶的产量。

以下是一些常见的优化实验方法：
1. 培养基成分优化：通过调整培养基中的碳源、氮源、无机盐等成分的浓度和比例，来寻找最适合酶产量的组合。

2. 培养条件调控：包括温度、pH值、培养时间、初始菌液浓度等的调节，以找到适合酶活性和细胞生长的最佳条件。

3. 添加辅助物质：有些辅助物质如酶诱导剂、共诱导剂等可以促进酶的合成和分泌，通过添加适当的浓度来增加酶的产量。

4. 营养补充：通过添加适量的酵母提取物、维生素、微量元素等来增加细胞代谢活性，从而提高酶的产量。

5. 发酵工艺优化：对发酵参数如搅拌速度、通气量、发酵方式等进行调整，以提高产酶效果。

需要根据具体的产酶菌株和酶的类型进行实验设计和优化，建议在科学研究机构或者相关实验室进行操作以确保安全和可靠性。

产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化

生物工程
霞品研究与开发
ＦｏｄＲｅｅｒｈＡｎｖｐｎｔｏｓａｃｄＤｅｄｏｍｅ
２１０１年６月
第３卷期１２第６１９
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
李鑫玲 ’孙晓菲 ’孟楠 ’ 卜，，，美玲 ’刘进。
（．１河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳４１０；．岛啤酒（７０３２青太原）有限公司，山西太原００３）３０２
４结语
Ｃｏｅｅ［．ｕｒｉｎＲｓａｃ，０，６５６５０ｒａｔｎｓＪＮｔｔｅｅｒｈ０６２：５ — ６１ｉｏ２【】ＪｎａＭ．ｏｄ＇－ｕｉ＇ｅｎｒｏｏｅｕｕｅＣｓｏ３ａｎｔＲｌａＧｔｒｚａｄＭａａＤｌｒｓＬｑｅｄａｔ．ｎｅｒｉｒ
摘要：土壤样本中分离出一株具有较高活力的产脂肪酶菌株，步确定为假单胞菌属。对该脂肪酶产酶条件进从初
行优化，佳碳源为糊精、最氮源为硫酸铵，适发酵温度为３，最０℃ 最适起始ｐ为７。Ｈ．０
关键词：脂肪酶；假单胞菌属；产酶条件
６・Ｏ
芎。０墓４。０
赡３０．
速搅拌均匀，高压灭菌倒板前再用磁力搅拌器混匀；种
子培养基（：萄糖２，Ｎ２．，Ｐ４．，％）葡．（Ｈ）００ＫＨＯ０１０ｓ５橄榄油１，Ｓ７．，白胨２５ｐ．；酵．ＭｇＯ・Ｈ００５蛋００．，Ｈ７发Ｏ培养基（：白胨２，％）蛋．蔗糖０，０．橄榄油１，Ｎ４￣４５．（Ｈ）Ｏ０Ｓ

赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化

赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化1. 引言1.1 背景介绍赊店老酒大曲是一种传统酿酒工艺中使用的主要发酵剂，其在酿造过程中起到很重要的作用。

在大曲中，存在着各种微生物，包括霉菌。

随着酿酒技术的不断发展，对大曲中微生物的特性和效果的研究也越来越重要。

随着现代酿酒工艺的快速发展，人们对赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选和产酶条件优化的研究也越来越深入。

目前，针对这一问题的研究还比较有限，需要更多的实验和数据支持。

本研究旨在通过对赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选和产酶条件优化的实验研究，深入了解其特性和作用机制，为酿酒工艺的改进提供科学依据和参考。

希望通过本研究的开展，能够为酿酒行业的发展和改进提供一定的帮助和指导。

1.2 研究目的研究目的旨在探究赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选方法及产酶条件优化的实验研究。

通过对这些耐高温霉菌的筛选，可以深入了解其在酿造过程中的作用机制，为提高酒品质和生产效率提供科学依据。

优化产酶条件不仅可以提高酶活力，还可以减少生产成本，提高生产效率，对酒类生产行业具有积极的推动作用。

通过本研究可以为耐高温霉菌的利用和产酶条件的优化提供新的思路和方法，为酒类酿造工艺的改进和提升提供有力支持，对推动酒类产业的发展具有重要意义。

1.3 意义在食品工业中，霉菌是一种常见的微生物，对食品质量和安全产生重要影响。

赊店老酒大曲中的耐高温霉菌特别具有研究和应用的潜力。

通过对耐高温霉菌的筛选和相关产酶条件的优化研究，不仅可以深入了解赊店老酒大曲中微生物的多样性和功能，也有助于提高大曲的发酵效率和酒质量。

对耐高温霉菌的研究还能为探索其他食品中的耐高温菌种提供参考，拓展微生物资源的利用范围，推动食品工业的技术进步。

本研究具有重要的理论和应用意义，有助于促进食品工业的发展和提升产品质量。

2. 正文2.1 赊店老酒大曲的特点赊店老酒大曲是一种优质的传统酿造发酵剂，在中国酿酒业中拥有悠久的历史。

其主要特点包括以下几个方面：1. 发酵活性高：赊店老酒大曲中的微生物群落丰富，包括酵母菌、霉菌等多种微生物，在发酵过程中能够高效地将淀粉、蛋白质等底物转化为乙醇、香气等有机化合物，提高酒精发酵效率。

提高酶活的方法

提高酶活的方法
一、酶的结构优化
1.酶的改造：通过遗传工程手段对酶的基因进行改造，引入突变体或
构建新的酶，以增加酶的催化活性和稳定性。

2.酶的化学改性：通过化学方法引入化学修饰剂，如PEG、获得修饰
基团、金属离子等，改变酶的空间构型，提高酶的催化效率和稳定性。

3.酶的固定化：将酶固定在固相载体上，形成固定化酶，可以提高酶
的稳定性和重复使用性。

二、酶的参数优化
1.温度优化：通过优化反应温度，找到适合酶活性的最佳工作温度，
提高酶的活性。

2.pH值优化：通过控制反应体系的pH值，找到适合酶催化的最佳pH 值，提高酶的活性。

3.底物浓度优化：通过调整底物浓度，使酶催化反应在酶的饱和浓度
下进行，提高酶的活性。

4.酶的浓度优化：通过调整酶的浓度，使酶与底物的摩尔比达到最佳
比例，提高酶的活性。

三、酶的环境优化
1.协同作用：将多个酶的作用进行协同，使其在反应体系中相互促进，提高整体的反应效率。

2.辅酶或辅因子添加：给予酶所需的辅酶或辅因子，如辅酶NADH、
辅因子腺苷酸二磷酸（ATP）等，增加酶的催化活性。

3.培养条件优化：通过优化微生物培养条件，如培养基成分、培养温度、培养时间等，提高酶产量和活性。

4.抑制剂或激活剂的添加：通过给予酶所需的抑制剂或激活剂，调节
酶的活性，增加催化活性。

总的来说，提高酶活的方法包括酶的结构优化、酶的参数优化和酶的
环境优化。

通过改造酶的结构、优化酶的参数和环境，可以提高酶的活性、稳定性和催化效率，从而促进酶的应用和产业发展。

产酶条件优化

“产酶条件优化”资料合集目录一、耐低温降解纤维素菌株筛选、鉴定及产酶条件优化二、脂肪酶高产菌株筛选、产酶条件优化及脂肪酶大量纯化研究三、一株纤维素酶真菌的筛选鉴定及产酶条件优化四、纤维素酶产生菌的筛选、发酵产酶条件优化及酶学特性研究五、一株产纤维素酶的暹罗芽孢杆菌筛选及产酶条件优化六、烟草秸秆废弃物中纤维素降解菌的筛选、鉴定及产酶条件优化七、耐低温降解纤维素菌株筛选、鉴定及产酶条件优化八、产环糊精葡萄糖基转移酶的菌株分离、产酶条件优化与酶学特性研究九、脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化耐低温降解纤维素菌株筛选、鉴定及产酶条件优化随着环境问题日益严重，生物可降解材料的研究和应用变得日益重要。

其中，纤维素作为地球上最丰富的可再生资源之一，其降解和利用是当前研究的热点。

然而，纤维素的降解需要特定的微生物菌株，尤其在低温环境下，筛选和鉴定具有耐低温特性的纤维素降解菌株是当前的重要任务。

在本次研究中，我们从不同环境中收集了多种微生物，通过在低温条件下筛选，我们成功获得了一株具有良好耐低温性能的纤维素降解菌株。

该菌株可以在低温条件下有效降解纤维素，并且表现出较高的酶活性。

为了进一步了解该菌株的特性，我们采用了多种分子生物学和生理学方法对其进行了鉴定。

结果表明，该菌株属于一个名为Xylanimonas 的属，这是一个在纤维素降解方面具有良好前景的菌种。

接下来，我们对该菌株的产酶条件进行了优化。

通过单因素实验和正交实验，我们发现该菌株的最佳产酶条件为：温度20℃，pH值为6.5，在含有1%纤维素的液体培养基中培养。

在此条件下，该菌株的酶活性达到了最大值。

总的来说，我们的研究提供了一种具有耐低温特性的纤维素降解菌株，并对该菌株的产酶条件进行了优化。

这为纤维素的生物降解和利用提供了新的可能性，有助于推动生物可降解材料的发展和环保事业的发展。

脂肪酶高产菌株筛选、产酶条件优化及脂肪酶大量纯化研究一、引言脂肪酶（Lipases）是一类在生物体内起着重要作用的酶，它们能够水解脂肪，生成脂肪酸和甘油。

沪酿3.042米曲霉产中性蛋白酶条件的优化

１３单因素发酵试验．
在影响米曲霉产酶的诸多条件中，取了不同原料配比、粕的颗粒度、养温度、选豆培曲料的初始润水
量、曲料的初始ｐ值、Ｈ添加草木灰和添加磷酸盐（以磷酸根计）因素对米曲霉产酶的影响做单因素试等
研究了其逼近最大响应区域，用响应面法（Ｓ）产酶条件进行了优化，得出菌株产蛋白酶的数学模采ＲＭ对并
型；过对二次多项回归方程求解，最适产酶条件：养温度为２通得培２℃ ，初始ｐ为７０料水比为１。．．Ｈ．。０８优
３０２．４的基础上进行研究．春华等研究了碳源、源对在孙］氮李．４
不同碳氮源及ｐ温度下的进行最佳产酶的条件研究．研究利用响应面分析法［对沪酿３０２的产酶Ｈ，本ｓ．４
养，之后在２６℃下发酵６测中性蛋白酶酶活吲．６ｈ后
１４产酶条件优化．
在单因素试验的结果上，进行Ｐａｋｔ— ｕｍａｌｃｅｔｒｎ试验，Ｂ确定爬坡路径，终用Ｓ．最ＡＳ８２软件进行响应
面条件优化．４０℃下每分钟水解酪蛋白产生１ｇ酪氨酸，义为一个蛋白酶活力单位．定中性蛋白酶活力测定：ｏｉＦｌｎ法．］
摘要：择了８种影响因子利用ＰａｋｔＢｒｎ设计法，影响沪酿３０２米曲霉产蛋白酶的主要影响因子选ｌｅ－ｕｍａｃｔ对．４

产酶条件优化方案

滤纸条降解试验吸取纤维素降解菌种子液1ml接种到装有50ml赫奇逊培养液旳250ml三角瓶中，瓶中放置1cm×6cm旳新华Ⅰ号滤纸条，同步设置不加菌液旳滤纸条作为对照，每个处理3个反复。

置于30℃恒温摇床，200r/min振荡培养5d，观测各瓶中滤纸条溃烂状况。

赫奇逊培养液：KH2PO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.3g CaCl2 0.1g NaCl 0.1gFeCl3 0.01g NaNO3 2.5g pH7.2～7.3 蒸馏水1000ml纤维素酶活旳测定CMC酶活测定取培养好旳发酵液于4000r/min旳条件下离心15分钟，上清液即为粗酶液。

分别加入相对应菌株旳粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入0.8%旳羧甲基纤维素钠溶液1.5mL，震荡摇匀，将所有试管置于50℃旳水浴锅中保温50min，保温完毕后取出试管，加入2mL DNS 显色剂，震荡摇匀，将各试管置于沸水浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充足反应，5min后取出试管用流水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖原则曲线1号管作为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处旳OD值，计算出平均值后，参照葡萄糖原则曲线查出还原糖旳量。

FPA酶活测定取培养好旳发酵液于4000r/min旳条件下离心15分钟，上清液即为粗酶液。

分别加入相对应菌株旳粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入滤纸(1cm ×6cm) 一条，震荡摇匀，将所有试管置于50℃旳水浴锅中保温50min，保温完毕后取出试管，加入2mL DNS显色剂，震荡摇匀，将各试管置于沸水浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充足反应，5min 后取出试管用流水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖原则曲线1号管作为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处旳OD值，计算出平均值后，参照葡萄糖原则曲线查出还原糖旳量。

纤维素酶产生菌的筛选-鉴定和产酶条件优化

纤维素酶产生菌的筛选\鉴定和产酶条件优化摘要:采用稀释平板法分离马铃薯瓢虫肠道菌,利用刚果红平板法对产纤维素酶菌株进行初筛,选取透明圈较大的菌株进行摇瓶发酵复筛,根据菌株形态､生理生化特征对菌株进行初步鉴定,通过正交法优化产酶条件｡结果表明,经初筛和复筛得到1株酶活相对较高的菌株B-12,经初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)｡1.25%麦芽浸粉为碳源､1.5%KNO3为氮源､0.2%的NaCl､0.1%的CMC-Na､接种量6%､培养时间44 h为B-12产酶的适宜条件｡优化后发酵液中的内切葡聚糖酶活(CMCA)为111.710 U/mL,较培养44 h后的酶活提高了8.78%;滤纸酶活(FPA)为35.017 U/mL,提高了387.23%;β-葡萄糖苷酶酶活(BGL)为116.799 U/mL,提高了700.38%｡关键词:马铃薯瓢虫;肠道菌;纤维素酶;优化Screening,Identification and Cultural Condition Optimization of Cellulase-producing Strains from the Intestine of Henosepilachna vigintioctomaculata Abstract: The bacteria from the intestine of Henosepilachna vigintioctomaculata were isolated through the pour plate method. They were preliminarily screened using Congo red medium plate method, and then screened according to their cellulase activities by flask shaking fermentation method. The strain was identified based on morphological and physiological characters. In addition, the culture substrates and fermentation conditions were optimized by orthogonal experiment method. A high cellulase-producing strain B-12 was screened from the intestine of H. vigintioctomaculata and it was identified as Bacillus sp.. The best culture conditions were as follows: substrate were 1.25% malt meal, 1.5% KNO3, 0.2% NaCl, and 0.1% CMC-Na, inoculation quantity was 6%, culture time was 44 h. In this condition, the enzyme activity of CMCase, filter paper enzyme (FPA), and β-glucosidase (BGL) were 111.710, 35.017, and 116.799 U/mL respectively, which were 8.78%, 387.23% and 700.38% higher than those of the initial strain respectively.Key words: Henosepilachna vigintioctomaculata; intestinal bacteria; cellulase; optimization地球上的生物资源主要来自光合生物,其中90%以上为木质纤维素类物质,它们代表了生态系统中营养金字塔最庞大的基层[1]｡天然的木质纤维素材料含有纤维素､半纤维素和木质素等｡其中纤维素是地球上最丰富的多糖物质,这类物质是植物细胞壁的主要成分,也是地球上最廉价的可再生资源｡另外,人类活动产生的废弃物中也含有大量的纤维素[2]｡目前,人们对纤维素的降解和利用主要通过纤维素酶的分解来实现｡纤维素酶在再生能源利用方面具有广阔的应用前景,可应用于农业､酿造工业､发酵工业､食品工业以及其他领域[3-9]｡因此研究纤维素酶有着十分重要的意义｡昆虫肠道菌是指能定植于昆虫肠道的微生物,包括土著的昆虫肠道菌和能定植于昆虫肠道环境的微生物[10]｡研究表明一些昆虫肠道菌能帮助昆虫消化食物[10]｡对喜食含纤维素食物的昆虫,我们推测其消化纤维素可能与其肠道菌分泌纤维素酶有关｡马铃薯瓢虫主要为害茄科植物,喜食茄科植物叶片,它消化叶片中的纤维素可能与其肠道菌有关｡本试验从马铃薯瓢虫肠道中分离筛选产纤维素酶菌株并对其产酶条件进行优化,旨在为发现新的纤维素酶高产菌株奠定基础｡1材料与方法1.1材料1.1.1菌株采自浙江省金华市婺城区高村附近马铃薯田地的马铃薯瓢虫肠道中的菌株｡1.1.2培养基①菌种保藏培养基:牛肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏0.30%,蛋白胨1.00%,NaCl 0.50%,琼脂 1.50%~2.00%,pH值7.4~7.6)｡②初筛培养基:米糠2.00%,NaCl 0.10%,K2HPO4 0.50%,MgSO4·7H2O 0.02%,(NH4)2SO4 0.06%,琼脂1.50%~2.00%,pH值7.0~7.2｡③刚果红纤维素鉴定培养基:羧甲基纤维素钠(CMC-Na)0.30%,NaCl 0.50%,牛肉浸膏0.15%,蛋白胨0.50%,琼脂1.50%~2.00%,pH值7.0~7.2｡④种子培养液:酵母膏 1.00%,蛋白胨 1.00%,NaCl0.50%,CMC-Na 0.50%,pH值7.0~7.2｡⑤液体产酶发酵培养液:配方同种子培养液｡⑥鉴定用培养基:糖发酵试验培养基､葡萄糖蛋白胨水培养基､蛋白胨水解培养基､Simons氏柠檬酸盐培养基､明胶水解试验培养基等｡1.1.3主要试剂葡萄糖､pH值4.6的醋酸缓冲液､DNS､2% CMC-Na底物溶液､0.05%水杨苷的醋酸缓冲液､蛋白胨､牛肉膏等｡1.1.4主要仪器立式电热压力蒸汽灭菌锅,上海中安医疗器械厂生产;LRH-250生化培养箱,上海一恒科技有限公司生产;D-78532台式冷冻离心机,德国Hettich 公司生产;UV-7504紫外可见分光光度计,上海欣茂仪器有限公司生产;SW-CJ-1B 型单人单面净化工作台,苏州净化设备有限公司生产;电子天平,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司生产;HH-4数显恒温水浴锅,山东鄞城科源仪器设备厂生产;远红外快速恒温干燥箱,上海跃进医疗器械厂生产｡1.2方法1.2.1纤维素酶产生菌的分离､纯化和初筛马铃薯瓢虫饥饿24 h后,无菌条件下在75%酒精中表面消毒2 min,去离子水漂洗3次,采用稀释平板法分离肠道菌｡待菌长出后用无菌牙签挑选单菌落于刚果红纤维素鉴定培养基上影印2~3皿,37℃下培养2~3 d｡取其中1皿采用刚果红染色法鉴定其产酶能力[11]｡对产生透明圈的菌株进行测量并记录D/d值(D为透明圈直径,d为菌落直径,下同),挑选D/d值大于1的菌株作为初筛菌种,通过连续划线法,分离纯化｡得到的初筛菌株转接到保藏斜面,4℃条件下保藏备用｡1.2.2纤维素酶产生菌的复筛将初筛到的菌株活化后接种于30/250 mL(250 mL 三角瓶装30 mL培养液,下同)种子培养基中,37℃､180 r/min摇床培养过夜｡以2%接种量转接于30/250 mL产酶培养基中,37℃､180r/min培养2~3 d,10 000 r/min冷冻离心10 min,取上清液测定酶活,筛选产纤维素酶最高的菌株｡1.2.3酶活力测定测定方法参照文献[12-16]修正得到｡1)标准曲线绘制｡反应的总体系为3.5 mL,1 mg/mL葡萄糖溶液和去离子水共2 mL,DNS试剂1.5 mL｡取10支试管编号分别为1~10｡分别吸取0､0.2､0.4､0.6､0.8､1.0､1.2､1.4､1.6､1.8 mL葡萄糖溶液至1~10号试管中;然后分别吸取2.0､1.8､1.6､1.4､1.2､1.0､0.8､0.6､0.4､0.2 mL去离子水至相应的1~10号试管中｡向1~10号试管中分别加入1.5 mL DNS试剂｡将上述试管一同沸水浴5 min,冷却后稀释至10 mL,在540 nm下用分光光度计测吸光值,绘制葡萄糖标准曲线｡2)内切葡聚糖酶活力(CMCase activity,CMCA)测定｡取4支干净试管,编号(分别为1~4)后加入1.5 mL底物溶液,并向1号试管中加入1.5 mL DNS溶液以钝化其中的纤维素酶,作为空白对照,比色调零｡4支试管置于50℃水浴中预热5 min,再加入0.5 mL酶液(液体发酵液的离心上清液),50℃水浴30 min后立即向2､3､4号试管加入1.5 mL DNS溶液以终止酶反应｡充分摇匀后沸水浴5 min,取出冷却后,加入去离子水定容至10 mL,充分混匀｡以1号试管为空白对照,540 nm测吸光值,2､3､4号3支试管数值取平均值｡3)滤纸酶活力(FPA)测定｡方法同上,将底物溶液换成1 mL缓冲液和50 mg滤纸,加入的酶液量为1 mL,反应时间为1 h｡4)β-葡萄糖苷酶活力(BGL)的测定｡方法同上,将底物溶液换成1.5 mL含0.05%水杨苷的醋酸缓冲液,反应时间为1 h｡5)酶活定义｡在上述条件下,1 mL粗酶液所产生的1 μg葡萄糖定义为一个酶活力单位(U)｡以上的测定中均已扣除了粗酶液中所含有的还原糖量｡1.2.4产纤维素酶菌株的鉴定①菌株的形态特征:菌株平板培养2~3 d,观察菌落形态特征,菌体形态经染色(革兰氏染色､鞭毛染色､芽孢染色等)后,于显微镜的100倍油镜下观察并照像｡②菌株的生理生化特性:生理生化试验包括糖发酵试验､V. P试验､甲基红试验､吲哚试验､柠檬酸盐利用试验､淀粉水解试验､明胶水解试验等｡1.2.5产酶条件的优化对复筛得到的菌株进行产酶条件的优化试验｡1)摇瓶生长曲线的测定｡在基础培养基的基础上,对复筛得到的菌株测定其在摇瓶培养中的生长曲线和产酶曲线,考察菌体生长状况与菌株产酶能力在时间上的相关性｡2)接种量的确定｡将培养12 h的种子液分别以1%､2%､3%､4%､5%､6%､7%､8%､9%､10%､11%､12%､13%､14%､15%､16%的接种量转接入30/250 mL产酶培养基中,置于37℃,180 r/min摇床培养,测定酶活,考察不同接种量对菌株产酶的影响｡3)培养基成分的优化｡①碳源种类对菌株产酶的影响:分别以1%的CMC-Na､葡萄糖､蔗糖､乳糖､酵母膏､牛肉膏､酵母粉､麦芽浸粉､秸秆汁､米糠作为碳源,摇瓶培养后测定酶活,考察碳源种类对菌株产酶的影响｡②氮源种类对菌株产酶的影响:分别以1%的(NH4)2SO4､NH4NO3､KNO3､蛋白胨､尿素､酵母膏､酪蛋白胨作为氮源,以1%葡萄糖作为碳源,摇瓶培养后测定酶活,考察氮源种类对菌株产酶的影响｡③NaCl浓度水平对菌株产酶的影响:在原始液体产酶培养基的基础上分别加入0.1%､0.2%､0.3%､0.4%､0.5%､0.6%､0.7%､0.8%､0.9%､1.0%的NaCl,摇瓶培养后测定酶活,考察NaCl浓度水平对菌株产酶的影响｡④底物(CMC-Na)浓度水平对菌株产酶的影响:在原始液体产酶培养基的基础上分别加入0.1%､0.2%､0.3%､0.4%､0.5%､0.6%､0.7%､0.8%､0.9%､1.0%的CMC-Na,摇瓶培养后测定酶活,考察底物浓度水平对菌株产酶的影响｡⑤根据上述试验得到的最适培养基组成,选取L9(34)型正交表设计正交试验,试验因素和水平见表1,以上清液酶活大小为指标,选择最优培养基组成｡2结果与分析2.1纤维素酶产生菌的初筛采用刚果红染色法从瓢虫肠道中分离纯化得到16株透明圈较大的细菌,细菌编号及其D/d值分别为:B-1,6.167;B-35,5.667;B-11,5.000;B-19,4.750;B-9,4.000;B-26,3.750;B-37,3.000;B -27,1.833;B-53,3.000;B-47,2.714;B-36,2.667;B-42,2.571;B-32,2.500;B-46,2.429;B-1 2,2.083;B-10,1.420｡2.2纤维素酶产生菌的复筛对初筛得到的16株菌株进行摇瓶复筛,以CMCA为指标,筛选出B-12､B-10､B-53､B-11等4株产纤维素酶活力较高的菌株,CMCA(3次测定的平均值)分别为76.85､68.85､53.94､71.27 U/mL｡菌株B-12的CMCA最高,该菌株用以后续的试验｡2.3DNS法葡萄糖标准曲线葡萄糖标准曲线如图1所示,得到方程y=0.916 9x-0.110 4,r2=0.991 4｡2.4菌株B-12的初步鉴定2.4.1形态特征菌株B-12在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上菌落较大､圆形､边缘整齐､不透明､乳白色､微隆起､湿润､生长较快｡显微镜观察细胞呈杆状,两头稍平;周生鞭毛,革兰氏染色呈阳性;芽孢椭圆形或柱状,中生或偏端生,芽孢囊不膨大｡2.4.2生理生化特征V.P反应为阴性,吲哚反应､甲基红反应为阳性｡该菌株可利用葡萄糖产酸,能水解淀粉,分解明胶,不能利用柠檬酸盐｡结合形态特征和生理生化特征,参考《伯杰细菌鉴定手册》第八版,将菌株B-12鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)｡2.5产酶条件的优化2.5.1摇瓶生长曲线的确定在原始培养基基础上从发酵开始至72 h,连续取样,在600 nm下测定生物量,离心后取上清液测定酶活,得到与时间相关的该菌株的生长曲线以及产酶曲线(图2､图3)｡由图2､图3可知,在3 h左右菌株进入对数生长期,16 h左右菌株生长开始进入稳定期,44 h以后开始进入衰亡期｡CMCA､FPA､BGL开始时增长较为缓慢,CMCA､BGL在44 h时达到最大值,FPA在47 h时达到最大,综合考虑将最佳培养时间定为44 h｡总体趋势表明菌株B-12的产酶能力与菌体生长状况有耦连相关性｡在44 h时CMCA为102.694 U/mL,FPA为7.187 U/mL,BGL为14.593 U/mL｡2.5.2不同接种量对菌株酶活力的影响不同接种量对菌株酶活力的影响结果见图4｡综合考虑,在接种量为6%时3个酶活指标均较高,CMCA为73.901 U/mL,FPA 为8.232 U/mL,BGL为7.140 U/mL｡因此最佳接种量选择6%｡2.5.3不同碳源对菌株B-12酶活力的影响碳源对微生物生长代谢的作用主要是提供细胞碳架､细胞生命活动所需的能量以及合成产物的碳架｡根据微生物所能产生的酶系不同,不同的微生物可利用的碳源不同｡在产酶培养基的基础上改变不同的碳源检测菌株B-12的产酶情况｡由图5可知,不同种类的碳源对菌株产纤维素酶影响不同,其中麦芽浸粉作为碳源时3个酶活指标均较高,CMCA为74.592 U/mL,FPA为6.778 U/mL,BGL为7.667 U/mL｡因此确定麦芽浸粉作为菌株B-12的产酶培养基的适宜碳源｡2.5.4不同氮源对菌株酶活力的影响氮源是合成菌体蛋白质､核酸及其他含氮化合物的重要组成成分｡不同种类的氮源对菌株的产酶影响结果见图6｡当KNO3作为氮源时,3个酶活指标均较高,CMCA为230.080 U/mL,FPA为101.636 U/mL,BGL 为93.009 U/mL｡因此确定该菌株的产酶培养基的适宜氮源为KNO3(图6)｡2.5.5NaCl浓度对菌株酶活力的影响试验设置了0.1%､0.2%､0.3%､0.4%､0.5%､0.6%､0.7%､0.8%､0.9%､1.0%等10个NaCl浓度梯度,在不同NaCl浓度下测定纤维素酶的3个酶活指标｡由图7可知,当NaCl浓度为0.2%时,CMCA活性最高,为75.137 U/mL,FPA和BGL活性相对较高,分别为5.533 U/mL和7.485 U/mL｡因此,NaCl浓度为0.2%时菌株B-12的酶活较大｡2.5.6底物(CMC-Na)含量对菌株酶活力的影响试验测定CMC-Na不同添加量(0.1%､0.2%､0.3%､0.4%､0.5%､0.6%､0.7%､0.8%､0.9%､1.0%)时菌株B-12的产酶水平｡由图8可知,当CMC-Na浓度达到0.2%时,CMCA活性最高,为90.043 U/mL,FPA和BGL活性相对较高,分别为7.287 U/mL和7.213 U/mL;表明菌株B-12适宜底物(CMC-Na)浓度为0.2%｡2.5.7最适培养基组成确定选取L9(34)型正交表设计正交试验,以上清液酶活大小为指标,选择最优培养基组成｡对正交试验结果进行极差分析(表2)可以发现对于CMCA酶活而言,主要因素的影响顺序为:麦芽浸粉>NaCl>KNO3>CMC-Na,最佳组合为:1.25%麦芽浸粉､1.0% KNO3､0.1% NaCl､0.2% CMC-Na｡对于FPA酶活,主要因素的影响顺序为:CMC-Na>NaCl>KNO3>麦芽浸粉,最佳组合为:1.25%麦芽浸粉､1.5% KNO3､0.2% NaCl､0.1% CMC-Na｡对于BGL酶活,主要因素的影响顺序为:KNO3>CMC-Na>麦芽浸粉>NaCl,最佳组合为:1.25%麦芽浸粉､1.5% KNO3､0.2% NaCl､0.1% CMC-Na｡综合考虑,最终确定最佳培养基配方为:1.25%麦芽浸粉,1.5%KNO3,0.2%NaCl,0.1% CMC-Na｡此时,CMCA､FPA和BGL分别为111.710 U/mL､35.017 U/mL和116.799 U/mL,较菌株培养44 h时的酶活分别提高了8.78%､387.23%和700.38%｡3讨论利用刚果红平板法初筛得到的透明圈比值大的菌株,其酶活并不一定高｡试验中我们发现菌株B-1的透明圈比值高达 6.167,而菌株B-12的透明圈比值仅为2.083,但从摇瓶发酵复筛结果看,菌株B-12的酶活要高于B-1的｡因此,在筛选纤维素酶高产菌株时,摇瓶发酵复筛是必要的｡我们首次从马铃薯瓢虫肠道中分离得到多株产纤维素酶肠道菌并筛选到1株酶活性较高的菌株B-12,产酶条件经优化后,其CMCA为111.710 U/mL,FPA为35.017 U/mL,BGL为116.799 U/mL｡而采用同样的酶活测试方法,林祥木等[17]从土壤中分离得到的最好的菌株其CMCA为36 U/mL,FPA为31 U/mL,BGL不足41 U/mL｡昆虫是地球生物圈中已知种类最多的一群生物[18,19],昆虫种类､数量及分布范围的多样性意味着昆虫肠道菌的多样性[20]｡研究表明昆虫肠道菌是微生物新种的潜在资源[21,22]｡因此,昆虫肠道菌可能是新高产纤维素酶的广泛来源,而从昆虫肠道菌分离产纤维素酶菌还鲜有报道,亟待研究开发｡参考文献:[1] TOMME P, WARREN R A J, GILKES N R. 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酶催化体系优化方案

酶催化体系优化方案引言酶催化是一种常见且有效的生物催化反应方法，能够提高反应速率、选择性和稳定性。

然而，酶催化体系的优化是一个复杂而繁琐的过程，需要考虑多个因素。

本文将介绍酶催化体系优化的一些常见方法和策略，以帮助研究人员充分发挥酶催化的潜力。

1. 酶的选择和筛选要优化酶催化体系，第一步是选择适当的酶。

这包括从不同来源中筛选出具有高活性和稳定性的酶。

一些常见的酶筛选方法包括：•高通量筛选：通过利用自动化设备进行大规模酶筛选，从中选择出具有优异催化活性的酶。

•代谢工程：通过改造代谢途径，构建高产酶的微生物表达系统，实现高效产酶。

•蛋白工程：通过对酶的基因进行改造，引入突变体，提高酶的催化效率和稳定性。

2. 酶的固定化酶的固定化是酶催化体系优化的关键步骤之一。

通过将酶固定在载体上，可以提高酶的稳定性、催化效率和循环使用率。

一些常见的酶固定化方法包括：•吸附法：将酶通过物理吸附方式固定在多孔载体上，如凝胶、树脂等。

•交联法：利用交联剂将酶与载体交联在一起，增强酶的稳定性和循环使用性。

•包埋法：将酶包埋在聚合物基质中，保护酶免受环境影响。

3. 反应条件优化酶催化体系的反应条件对催化效率有着重要影响。

通过控制反应温度、pH值和底物浓度等因素，可以改善反应速率和产物选择性。

一些常用的反应条件优化方法包括：•温度优化：通过调节反应温度，选择合适的催化温度，提高酶的催化效率。

•pH值优化：酶的催化活性对pH值敏感，通过调节反应体系的pH 值，可以实现最佳催化效果。

•底物浓度优化：适当调节底物浓度，可以提高反应速率和产物选择性。

4. 辅因子的添加辅因子在酶催化体系中发挥着重要的作用。

通过添加适量的辅因子，可以增强酶的催化活性和稳定性。

常见的辅因子包括辅酶、金属离子和辅助酶等。

不同酶催化体系需要添加不同的辅因子，因此需要根据具体情况进行优化选择。

5. 反应工程的优化反应工程的优化是整个酶催化过程的最终环节。

通过合理设计反应体系、选择适当的反应器和反应条件，可以实现酶催化反应的高效进行。

赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化

赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化赊店老酒大曲是一种传统的酿造酒的发酵剂，在酿造过程中扮演着至关重要的角色。

在生产中经常会遇到高温条件下霉菌生长的问题，这不仅会影响酒的质量，还可能带来食品安全隐患。

针对赊店老酒大曲中的耐高温霉菌进行筛选与产酶条件优化研究，对于解决这一问题具有重要意义。

一、赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选在赊店老酒大曲的发酵过程中，由于高温条件下霉菌的生长势必会影响发酵的进行，所以筛选出耐高温的霉菌株对于酒的质量提升具有十分重要的意义。

在筛选工作中，可以从已有的大曲中分离出不同的霉菌株，然后通过对不同温度条件下的生长情况进行观察，筛选出耐高温的霉菌株。

也可通过对不同环境条件下的生长情况进行对比，筛选出在高温条件下依然能够正常生长的霉菌株。

这样，就能够为后续的产酶条件优化研究奠定基础。

二、耐高温霉菌的产酶条件优化经过耐高温霉菌的筛选之后，接下来就是对这些耐高温霉菌株的产酶条件进行优化研究。

可以通过对不同培养基成分的优化，促进耐高温霉菌株的产酶活性。

可以调整培养基中的碳源、氮源、磷源等成分的比例，使得产酶菌株能够在高温条件下高效产酶。

也可以通过对培养条件的优化，比如调整培养温度、培养时间、培养pH等条件，提高耐高温霉菌的产酶活性。

通过这些优化研究，可以提高耐高温霉菌在酿造过程中的应用效果，从而有效提升赊店老酒的质量和口感。

三、总结针对赊店老酒大曲中耐高温霉菌的筛选与产酶条件优化研究，可以为酒的生产提供重要的技术支撑。

通过对耐高温霉菌株的筛选工作，可以获得耐高温的霉菌株，为酿造过程提供可靠的酶制剂来源；而通过对耐高温霉菌的产酶条件进行优化研究，可以提高酶的产酶活性，从而为酿造提供更为有效的发酵剂。

这些工作的开展将有助于提升赊店老酒的品质，满足消费者日益增长的需求，具有重要的经济和社会意义。

希望未来能有更多的研究者投入到相关领域的研究工作中，为推动赊店老酒酿造技术的创新和进步做出更多贡献。

绿色木霉液体发酵生产纤维素酶条件的优化

在畜牧业方面，纤维素酶已经起
例治疗试验，治愈率达９８．９％，研究者们一致认为纤维素酶制剂具疗效高、
别（乞永立，２０００）。二是标准上的原
提高５％～１０％的日增重和３％一７％的饲料效率（ＴＴＴｅｅｒｉ，１９９７）。在肉鸡方面，秦江帆等也进行了相关研究。王怀凡等在蛋鸡日粮中添加０．１％纤维素酶，结果使产蛋率提高１０．８％，蛋重提高１．７％，料蛋比下降１４．６％。裴相元等
类碳水化合物，同时也是地球上数
量最多的再生资源。目前，自然界中
是技术上的原因。由于纤维素酶是
种微生物制剂，它对温度、湿度、
的纤维素只有一小部分得到了利用，绝大多数纤维素不仅被白白浪费，并且还会对环境造成污染。利用纤维素酶将纤维素转化为人类急需的能源、食物和化工原料，对于人类社会解决
２０００）。目前，纤维素酶生产中存在的
于多年的研究，陈侠甫等认为，纤维素酶对马急慢性消化不良、便秘、牛前胃迟缓、瘤胃膨胀、瘤胃积食等疾
病具有明显疗效。经过十个兽医院３７９
维素酶的酶活进行优化，以期对纤维素酶的生产技术有一定的帮助。
绿色木霉液体发酵生产纤维素酶条件的优化
鹤壁职业技术学院
摘
张
帆
要：目的：研究表明，纤维素酶对于纤维素的分解可应用于环保、畜牧、食品加工等多个领域，对于改善Ａ．４１＇１的生活有重大意义。

提高酶产量的措施

提高酶产量的措施
酶是一种能够加速生化反应的生物催化剂，广泛应用于食品、农业、医药、化工等领域。

提高酶产量是提高酶工业经济效益的关键之一。

以下是提高酶产量的一些措施：
1. 优化培养基配方：酶生产菌株对培养基组分的需求不同，需要根据菌株的生长特性来调整培养基配方，确保养分的充足和平衡。

2. 优化发酵条件：发酵条件包括温度、pH值、氧气供应、搅拌速度等，合理调整这些条件可以提高酶的生产效率和产量。

3. 培养高产菌株：通过筛选、基因工程等手段培养高产菌株，可以有效提高酶的产量。

4. 提高酶的稳定性：通过改变酶的结构或化学修饰等手段，提高酶的稳定性和抗脱活能力，延长酶的使用寿命，从而提高酶的利用效率和产量。

5. 加强生产管理：生产管理包括生产计划、工艺流程、设备维护等方面，加强生产管理可以提高生产效率和产品质量，也有利于提高酶的产量。

综上所述，提高酶产量需要多方面的措施共同作用，同时也需要在实际生产中不断进行优化和改进。

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纳豆菌液态产酶条件的优化

ｅｉｔｄｄｔ０．０Ｉ／ｘｓａａ８０５ＵｍＬ，ｔｅａｔｉｆｔｋｎｓｓｏｖｏｓｙｅｈｎｅ．ｅｈｃｖｔｏｔｉａｅｗａｂｉｕｌｎａｃｄｉｙＮａｏ
（．１鄂东职业技术学院，湖北黄州４８０２辽宁科技大学化学工程学院，宁鞍山１４４）３００；．辽１０４
摘
要实验采用单因素试验优化纳豆菌液体发酵条件。通过蛋白凝块溶解时间法测定纳豆
激酶活力，筛选出最佳培养条件。液态发酵选用甘油、糖以及木糖与葡萄糖的混合糖代替基乳
关键词纳豆；豆激酶；纳纳豆菌；发酵
中图分类号Ｔ２３４Ｓ１．文献标识码Ａ文章编号１０－０８２０）６Ｄ１４０３８７（０９Ｏ一－４０
ＯｐｉａｏｉｉｎｆｒＢａｉｌｕｂｉｓｎａｔｅｍｅｔｔｏｎｌｑｕｄｔｍｌｃｎｄｔｏｏｃｌｓｔｌｔｆｒｎａｉｎｉｉｉｕｓｉｏ
础培养基中的麦芽糖；用酵母膏、干酪素、胰蛋白胨和黄豆汁代替基础培养基中的麸皮进行发酵产酶试验，筛选出最佳碳氮源，并在此基础上变换不同的碳、氮源浓度，筛选出最佳的碳、氮比。试验结果表明：态发酵最佳条件为，油１％，母膏２，液甘０酵％明胶０５，ａ１．％，．％ＮＣ
黄
冈
师
范
学
院

提高酶产量的措施

提高酶产量的措施
酶是一种重要的生物催化剂，可以在多种工业生产过程中发挥重要作用。

然而，酶的产量往往受到各种因素的限制，因此需要采取一些措施来提高酶的产量。

首先，酶的产量受到菌株的影响。

因此，选择高产酶的菌株是提高酶产量的重要措施之一。

常用的方法包括自然筛选、群体筛选和基因工程筛选等。

其次，调节培养条件也可以提高酶的产量。

例如，合适的温度、pH值、营养成分和培养时间等都可以对酶产量产生重要影响。

因此，针对不同的酶种和菌株，需要对培养条件进行优化，以提高酶的产量。

此外，通过基因工程技术改造酶的基因，也可以提高酶的产量。

例如，通过调节酶的启动子、提高酶的表达量等方法，可以显著增加酶的产量。

综上所述，提高酶产量的措施包括选择高产酶的菌株、调节培养条件和通过基因工程技术改造酶的基因等方法。

这些措施可以显著提高酶的产量，促进酶在工业生产中的应用。

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滤纸条降解试验
吸取纤维素降解菌种子液1ml接种到装有50ml赫奇逊培养液的250ml三角瓶中，瓶中放置1c m×6cm的新华Ⅰ号滤纸条，同时设置不加菌液的滤纸条作为对照，每个处理3个重复。

置于30℃恒温摇床，200r/min振荡培养5d，观察各瓶中滤纸条溃烂情况。

赫奇逊培养液：KH2PO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.3g CaCl2 0.1g NaCl 0.1g FeCl3 0.01g NaNO3 2.5g pH7.2～7.3 蒸馏水1000ml
纤维素酶活的测定
1CMC酶活测定
取培养好的发酵液于4000r/min的条件下离心15分钟，上清液即为粗酶液。

分别加入相对应菌株的粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入0.8%的羧甲基纤维素钠溶液 1.5mL，震荡摇匀，将所有试管置于50℃的水浴锅中保温50min，保温完成后取出试管，加入2mL DNS显色剂，震荡摇匀，将各试管置于沸水浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充分反应，5min后取出试管用流水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖标准曲线1号管作为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处的OD值，计算出平均值后，参照葡萄糖标准曲线查出还原糖的量。

2FPA酶活测定
取培养好的发酵液于4000r/min的条件下离心15分钟，上清液即为粗酶液。

分别加入相对应菌株的粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入滤纸(1cm ×6cm) 一条，震荡摇匀，将所有试管置于50℃的水浴锅中保温50min，保温完成后取出试管，加入2mL DNS显色剂，震荡摇匀，将各试管置于沸水浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充分反应，5min后取出试管用流水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖标准曲线1号管作为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处的OD值，计算出平均值后，参照葡萄糖标准曲线查出还原糖的量。

3Avicel cellulase (Avicelase)
500 uL of enzyme mixed with 1mL of Avicel (1%, w/v) for determining the Avicelase activity. 详细见给你的那篇文献
通过以上两种方法，测得复筛得到的酶活高的菌株每8 h的粗酶酶活产酶曲线，测到72h。

确定酶活达到最大的最适时间。

产酶条件优化
研究不用培养温度、pH 值、碳源、氮源、接种量、装液量对菌株产酶的影响，并在各因子最适条件下培养菌株，检测其产酶酶活。

(培养的时间均为酶活达到最大的最适时间)
培养时间：生长曲线和产酶曲线
1 培养温度对产酶的影响。

将复筛得到的酶活高的菌株分别接种于5个100 mL的羧甲基纤维素培养基中（用250mL的三角瓶承装），并分别在25、30、35、40、45℃下培养，培养一定时间后，测定其CMC酶活，从而确定菌株产酶的最适温度。

2 培养起始pH 对产酶的影响。

将复筛得到的酶活高的菌株分别接种于5 个100 mL 羧甲基纤维素培养基中，并将其起始pH 值分别调至 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。

培养一定时间后，测定其CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适pH 值。

3 不同碳源对产酶的影响。

分别以CMC-Na、微晶纤维素、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、可溶性淀粉、麦麸、乳糖为碳源代替基础培养基中的碳源，添加量均为10g/L ，培养纤维素降解菌。

培养一定时间后，测定其CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适碳源。

然后添加不同浓度(20g/L、30g/L、40 g/L、50 g/L、60 g/L、70 g/L、80 g/L)的最适碳源代替基础培养基中的碳源，培养纤维素降解菌。

培养一定时间后，测定其CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适碳源的最适浓度。

4 不同氮源对产酶的影响。

分别以胰蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、NH4 NO3、(NH4)2SO4、NH4Cl、KNO3、NaNO3、尿素、大豆为氮源代替基础培养基中的氮源，添加量均为2g/L，培养菌株。

培养一定时间后，测定其CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适氮源。

然后添加不同浓度(1 g/L、3g/L、5g/L、7g/L、9g/L、12g/L)的最适氮源代替基础培养基中的氮源，培养纤维素降解菌。

培养一定时间后，测定其CMC酶活，从而确定菌株产酶的最适氮源的最适浓度。

5 不同接种量对产酶的影响。

将复筛得到的酶活高的菌株分别以不同的接种量(1%、2﹪、4﹪、6﹪、8﹪、10﹪)接种于5个100 mL的羧甲基纤维素培养基中，培养一定时间后，测定其CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适接种量。

6不同装液量对产酶的影响。

25mL/250mL、50mL/250mL、80mL/250mL、100mL/250mL、150mL/250mL 在最适条件下培养菌株
根据以上结果，配制以最适碳源，氮源的培养基，最适起始pH值并在最适
温度的条件下培养最适时间，测其酶活，做3个平行试验，取平均值。

注：培养基配方
羧甲基纤维素培养基：羧甲基纤维素钠10g、蛋白胨10 g、Yeast extract（酵母浸粉）10 g、NaCl 5 g、K2HPO4 1 g、MgSO4·7H2O 0. 2 g、CaCl2 0.3 g，FeSO4·7H2O 5 mg，M nSO4 1.6 m g，ZnCl2 1.7 m g，CoCl2 2 mg，pH 调至7. 2。

基础培养基：NaCl 5 g、K2HPO4 1 g、MgSO4·7H2O 0.2 g、CaCl20.3 g，FeSO4·7H2O 5 mg，M nSO4 1.6 mg，ZnCl2 1.7 mg，CoCl2 2 mg，pH 调至7.2。

酶（CMCase）特性研究（见英文文献）
酶的特性研究
1）pH值
2）温度
3）不同pH值对酶稳定性影响
4）不同温度（热稳定性）对酶稳定性影响
5）金属离子酶活性的影响
1 酶催化反应的最适条件
1.1温度对酶活力的影响
将CMCase测定中的水浴温度分别设为30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃，分别测定测CMCase和FPase，以最高酶活值为100%，得到并比较这两种酶处在不同温度的酶促反应中的相对酶活力，从而确定其最适酶促反应温度。

1.2 pH对酶活力的影响
分别配制pH 值为 3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0 的柠檬酸缓冲液用于稀释粗酶液，然后用不同pH值的柠檬酸缓冲液分别配制浓度为1%的CMC-Na溶液，分别测定CMCase和FPase，以最高酶活值为100%，获得并比较两种酶在不同pH酶促反应中的相对酶活力，最后确定最适酶促反应pH 值。

2 酶的稳定性研究
2.1 酶的热稳定性研究
将稀释后的粗酶液分别置于30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃的水浴中恒温处理lh后，在最适酶促反应条件下测定不同温度处理后的CMCase和FPase剩余酶活力，以未做特殊处理的粗酶液作对照，评价两种酶的热稳定性。

2.2 酶的pH稳定性研究
配制pH 值为 3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0 的柠檬酸缓冲液，分别加入粗酶液，在4℃下放置2h后，在最适酶促反应条件下测定剩余酶活力，以未用缓冲液处理的粗酶液的酶活力为对照，评价两种酶的pH 稳定性。

3 金属离子对酶活力的影响
用最适pH值的缓冲溶液配制终浓度为l0-3mol/L的Fe2+、Mg2+、Pb2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+、Co2+、Na+、Mn2+和K+的离子溶液，并对粗酶液进行稀释，在最适酶促反应条件下测定CMCase与FPase，把不加任何金属离子的具有相同的稀释倍数的粗酶液作为对照组，研究金属离子对CMCase与FPase的影响。