浅谈人免疫球蛋白M(IgM)的研制

浅谈人免疫球蛋白M（IgM）的研制

杨向有1李月2

（1上海新兴医药股份有限公司上海200135;

2山西康宝生物制品股份有限公司山西长治046011)

【摘要】目的：从人血浆中分离IgM；方法：采用低温乙醇法从人血浆中分离出组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀（含有大多数种类的人免疫球蛋白）；通过改变条件先把人免疫球蛋白中含量最多的IgG分离出去，而后上柱层析分离出分子量最大人免疫球蛋白IgM；配制除菌后制成冻干制剂。采用S/D灭活法和干热灭活法对产品进行病毒灭活。结果：制成纯度大于95％的IgM冻干制剂结论：此方法可以很好的从人血浆中提取出IgM，制备人免疫球蛋白M（IgM）能更充分的利用血浆中的有效成分，具有很好的药用价值和广阔的市场前景。

Abstract Objective:Separate IgM from human plasma;Methods:It was isolated from human plasma component precipitationⅠⅡⅢby low temperature ethanol(With most types of human immunoglobulin) First one by changing the conditions of the most abundant immunoglobulin IgG separated, Then isolated by chromatography on the molecular weight of the largest human immunoglobulin IgM, Made lyophilized after the preparation and sterilization. Use of S / D inactivation and dry heat-inactivated virus inactivation method products;Results: Made more than 95% of the IgM purity of lyophilized Conclusion: This method can well be extracted from human plasma IgM, preparation of human immunoglobulin M (IgM) to the full utilization of the active ingredient in plasma, with good medicinal value and broad market prospects.

【关键词】人免疫球蛋白M（IgM），低温乙醇法，层析，病毒灭活

Key words:Human Immunoglobulin, Low temperature ethanol method,chromatog raphy, inactivation of virus

1. 人免疫球蛋白M（IgM）的简介

1.1人免疫球蛋白M（IgM）

免疫球蛋白由重链和轻链组成，根据重链(Heavy chain，H链)恒定区化学结构的不同，相应的免疫球蛋白被划分为多种类型，分别为免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白E(IgE)$1免疫球蛋白G(IgG)。[1-2]

人免疫球蛋白M (IgM) 存在于人的血清中，占血清免疫球蛋白总量的5~10%，血清浓度约1mg/ml，[3-4]主要由脾脏中浆细胞合成，一个IgM分子由5个单体通过J链连接成五聚体，有较高抗原结合价，也是五类免疫球蛋白（IgA、IgD、IgE 、IgG、IgM）中分子量最大的，其分子量为950k道尔顿，故又称为巨球蛋白。IgM 对防止菌血症起主要作用。[4]

1.2人免疫球蛋白M（IgM）与其他人免疫球蛋白各种性质的比较

表1：人免疫球蛋白M（IgM）与其他人免疫球蛋白各种性质的比较[2]

T able 1: The human immunoglobulin M (IgM) and other human immunoglobulin

Comparison of various properties

性质IgM IgD IgG IgA IgE 分子量（kDa）950 184 150 160 190 重链μδγαε亚类数 2 无 4 2 无

C区结构域数 4 3 3 3 4 辅助成分J 无无J,SP 无主要存在形式五聚体单体单体单体/二聚体单体开始合成时间胚胎后期任何时间生后3个月生后4~6个月较晚血清中Ig百分含量5%~10% 0.3% 75%~85% 10%~15% 0.02% 血清中含量（mg/ml）0.7~1.7 0.03 9.5~12.5 1.5~2.6 0.0003 半衰期（天）10 3 23 6 2.5 抗体效价5~10 2 2 2，4 2

其他作用初次应答早

期防御溶菌、

溶血、血型抗

体、BCR BCR 二次应答抗

感染、抗菌、

抗毒素、抗病

毒

黏膜免疫局

部抗菌、抗病

毒

过敏反应

抗寄生虫

1.3人免疫球蛋白M（IgM）的现状及应用

IgM抗体是迄今为止最大的实际发行量抗体。人免疫球蛋白M（IgM）制剂在临床上主要用于抗细菌感染,尤其是革兰氏阴性菌引起的脓毒血症的预防和治疗。主要通过提高体内针对各种细菌抗原的抗体效价、中和内毒素提高机体对内毒素的中和能力以及调节免疫系统发挥作用。[5]

2.人免疫球蛋白M（IgM）的免疫原理

单体IgM以膜结合型（mIgM）表达于B细胞表面，是B细胞抗原受体(BCR)的主要构成成分；分泌型IgM为五聚体，五聚体IgM含10个Fab段(抗原结合片段)，有很强的抗原结合能力；含5个Fc段(丙种球蛋白f成份)，比IgG更易激活补体。天然血型抗体为IgM，血型不符的输血可发生严重的溶血反应。[2] IgM 的单体间以二硫键连接,并有一J链。IgM在抗体介导的体液免疫反应中比IgG 所起作用更强,具体表现在极强的抗原中和作用、免疫调理作用,尤其其杀菌、溶菌、促吞噬及凝集作用比IgG高500~1000倍。[6]

3.人免疫球蛋白M（IgM）的研制方法

3.1人免疫球蛋白M（IgM）的研制流程图：见图1

3.2分离制作依据

①采用低温乙醇法从人血浆中分离出人免疫球蛋白；

②依据表1中比较，IgM是分子量最大的免疫球蛋白，通过层析提纯，获得较高纯度的IgM制品。

③病毒灭活：S/D灭活采用有机溶剂和表面活性剂进行协同处理,用于灭活血浆制品中的脂包膜病毒而不影响蛋白质的性质；[7]对冻干后的制品进行干热灭活以达到进一步灭活脂包膜和非脂包膜病毒的目的。[8]

3.3操作步骤：

①领取冰冻血浆，在37℃以下合并融化；

②将血浆温度降至0℃，在搅拌的条件下，加-20℃95%的乙醇，使乙醇最终浓度为20%，温度保持在-4.5~-5.0℃，产生的沉淀（组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ）含有大多数种