实验一普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察

六、思考与讨论
1、显微镜的构造分哪几部分？各部分有什么作用？ 2、用油镜观察时应注意那些问题？在载玻片和镜 头之间加滴什么油？起什么作用？ 3、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有 什么意义？
下次实验项目名称：细菌的简单染色和革兰氏染色
增加照明亮度
油镜的放大倍数可达100× ，放大倍数这样大的镜 头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
等组成
普 通 光 学 显 微 镜 基 本 构 造
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关 键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光 学显微镜配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最 大，对微生物学研究最为重要。与其他物镜相比， 油镜的使用比较特殊，需在载玻片和镜头之间加 滴镜油，这主要又有如下两方面的原因：
增加显微镜的分辨率
显微镜的分辨率或分辨力（resolution or resolving power）是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。从 物理wk.baidu.com角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用 物镜性能的限制，可表示为：
分辨率D＝
2NA
式中：λ=光波波长，NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4～ 0.7 μm），而数值孔径则取决于物镜的镜口角和玻片与镜 头间介质的折射率，可表示为：NA=n·sinθ 。 式中θ为光 线最大入射角的半数。它取决于物镜的直径和焦距，一般来 说在实际应用中最大只能达到120°，而n为介质折射率。由 于香柏油的折射率（1.52）比空气及水的折射率（分别为 1.0和1.33）要高，因此以香柏油作为镜头与玻片之间介质 的油镜所能达到的数值孔径（NA一般在1.2～1.4）要高于低 倍镜、高倍镜等物镜（NA都低于1.0）。若以可见光的平均 波长0.55μm来计算，数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只 能分辨距离不小于0.4μm的物体，而油镜的分辨率却可达到 0.2 μm左右。
3、显微镜用毕后的处理
拔掉电源插头
下降载物台
取干净擦镜纸拭去镜
头上的香柏油
取干净擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上
的残留油迹
取干净擦镜纸擦去残留的二甲苯
将
显微镜的各部位还原，物镜转成“八”字形，擦干净镜体，
罩上防尘罩。
五、实验数据及处理结果
绘出你在油镜下观察到的细菌的三种形态及 其不同细菌细胞的排列方式。
一、目的与要求
• 了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的
使用方法 • 学习并掌握油镜的原理和使用方法 • 了解细菌的三种基本形态
二、显微镜的基本结构及油镜的工 作原理
1、普通光学显微镜的基本结构
普通光学显微镜的构造可分为两部分： 1）机械装置：镜座、镜筒、镜臂、物镜转换器、载物
台、标本移动螺旋、粗调螺旋和细调螺旋等部件组成。 2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、虹彩光圈、光源
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从 玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射， 不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物 像显现不清。所以为了不 使通过的光线有所损失， 在使用油镜时需在油镜和 玻片之间加入与玻璃的折 射率（n =1.55）相仿的 镜油（通常使用香柏油， 其折射率n =1.52）。
眼睛侧向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。找到目的物后， 将它移至视野正中处。
2）高倍镜观察（40×）：旋动转换器换高倍镜观察。 3）油镜观察（100×）：下降载物台，在载玻片上滴一滴香柏
油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸在油中，
刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调即可。
四、操作步骤
二、显微镜的基本结构及油镜的 工作原理
2、油镜的工作原理
1）增加照明亮度 2) 增加数值孔径(NA)，提高显微镜的分辨率
三、实验器材
1、标本片：细菌三形片 2、试剂：香柏油、二甲苯 3、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等
四、操作步骤
1、观察前的准备
放置好显微镜
调节光
夹上标本片
2、显微观察
1）低倍镜观察（10×）：调节粗调螺旋，使物镜与标本靠近，
实验报告格式
一、实验项目名称 二、实验目的 三、实验基本原理 四、主要仪器设备及耗材 五、实验步骤 六、实验数据及处理结果 七、思考讨论题