骨髓巨核细胞计数规程
巨核系功能的评价
巨核系功能的评价
巨核系是人体内的一个重要器官，它参与了许多重要的生理过程，如造血、免疫和血小板的生产等。
因此，评价巨核系的功能对于检测和治疗相关疾病具有重要意义。
对于巨核系功能的评价，可以从以下几个方面进行：
1. 血小板计数：血小板是巨核系的主要产物之一，检测血小板
计数可以反映出巨核系的生产能力。
正常成年人的血小板计数在
150-400×10^9/L之间。
2. 骨髓活检：骨髓活检可以直接观察巨核系的形态和数量，评
价其功能。
特别是在血小板计数偏低或其他造血系统疾病存在时，骨髓活检是一种重要的检查手段。
3. 血小板功能检测：血小板的功能可以通过测定其聚集能力、
凝集时间和释放反应等来评价。
这对于了解血小板活性和巨核系的生产效率都具有重要意义。
4. 造血干细胞检测：巨核系还可以产生造血干细胞，这些干细
胞可以分化为多种血细胞。
因此，评价造血干细胞的数量和质量，也可以反映出巨核系的功能。
总之，巨核系是人体内一个非常重要的器官，评价其功能对于检测和治疗相关疾病具有重要意义。
可以通过血小板计数、骨髓活检、血小板功能检测和造血干细胞检测等手段来评价巨核系的功能。
- 1 -。
骨髓检查(实验诊断学 2)
【骨髓细胞学检测】→骨髓是人类出生后的主要造血器官。
→骨髓检查包括：骨髓细胞形态学检查、组织化学检查、病理学检查、细胞遗传学检查、免疫学检查、造血细胞培养等。
→适应证：造血系统疾病：贫血anemia、白血病leukemia非造血系统疾病：感染性疾病（疟疾、黑热病/内脏利什曼病等）恶性肿瘤骨转移代谢性疾病（戈谢病、尼曼匹克病）排除诊断：不明原因的发热、肝脾肿大、淋巴结肿大。
Ps.戈谢病（GD）即葡糖脑苷脂病，是一种家族性糖脂代谢疾病，为染色体隐性遗传，是溶酶体沉积病中最常见的一种。
葡糖脑苷脂是一种可溶性的糖脂类物质，是细胞的组成成分之一，在人体内广泛存在。
由于葡糖脑苷脂酶的缺乏而引起葡糖脑苷脂在肝、脾、骨骼和中枢神经系统的单核-巨噬细胞内蓄积而发病，产生相应的临床表现。
骨髓象可查见戈谢细胞。
Ps.尼曼-匹克病（Niemann-Pick disease,NPD）又称鞘磷脂沉积病，属先天性糖脂代谢性疾病，为常染色体隐性遗传。
本病为神经鞘磷脂酶缺乏致神经鞘磷脂代谢障碍,导致神经鞘磷脂蓄积在单核-巨噬细胞系统内，出现肝、脾肿大，中枢神经系统退行性变。
骨髓象可查见尼曼匹克细胞。
→禁忌证：血友病（出血性疾病）原因不明而有明显出血倾向的病人（慎用）晚期妊娠孕妇（慎用）→骨髓穿刺bone marrow puncture部位：髂前上棘、髂后上棘、胸骨量：少于0.2ml，否则被血浆稀释。
要求：立即涂片，同时取外周血涂片，送检。
→检查步骤：低倍镜检查→油镜检查→血涂片检查→填写报告单一、低倍镜检查：1、确定取材、涂片、染色是否满意：取材--评价良好的骨髓涂片上可见骨髓小粒，镜下可见骨髓特有的细胞。
涂片--镜下见细胞分散排列，不重叠。
染色--镜下见细胞核、细胞质颜色分明，颗粒清楚，涂片无沉渣。
2、判断骨髓增生程度：proliferative degree of bone marrow有核细胞与成熟红细胞比例，反应骨髓造血功3、观察巨核细胞：巨核细胞多分布于涂片的边缘和尾端，在低倍镜下计数全片巨核细胞数目，然后在油镜下（100*）确定其发育阶段。
骨髓象检查的步骤与方法
明显活跃 1:5~12 1:10 >10 43.78~230.77 114.51 增生贫血
增生活跃 1.16~32 1:20 1~110 21.53~63.67 35.34 正常骨髓
增生减低 1:35~70 1:50 0.5~1 7.41~19.61 10.53 慢性再障
极度减低 1:300 1:200 <0.5
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二.油镜检查 在观察整张骨髓涂片后，选择骨髓涂片
厚薄、有核细胞分布均匀、着色良好 的骨髓涂膜处，并注意尽量在体尾交 界处作油浸镜检查。采用迂回方式， 以免出现重复计数的现象。
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1.有核细胞分类计数
在油浸镜下连续分数200个或500个有核细胞，按 细胞的不同系列和不同的发育阶段分别计数。
▪ （2）然后计算出各个细胞占有核细胞总数 的百分数。再累计粒系和红系总数，计算 粒红比例（G:E）。
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4.注意有无异常细胞
如恶性组织细胞病的异常组织细胞、转移癌 细胞、Gaucher细胞、Niemann-Pick细 胞等。注意观察有无散在或成堆分布的体积 较大、形态特殊的异常细胞出现，尤其应注 意涂片尾部、边缘及骨髓小粒周围。
发现可疑异常细胞，应在油浸镜下观察加以 确认。
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造血细胞检验要点和介绍
胞体
10～18微米， 圆形较规则
10～18微米， 圆形规则
胞浆 天蓝色，透明
天蓝色，透明，有核 周淡染区
核型 圆形或椭圆形
圆形或椭圆形
染色质
细致的砂粒状，平坦 ，如薄纱
核膜 不清楚
核仁 2～5个，较小，清晰
颗粒状，稍粗
核膜浓厚，界限不清 1～2个，小而明显
原始单核细胞
15～20微米， 圆形或不规则形， 有伪足样突起
胞核
不规则，可呈肾形、 马蹄形、S形或分叶形 ，有明显的扭曲、折 叠
椭圆或一侧开始扁平， 可出现凹陷
染色质 粗网状，疏松
聚集成索块
三、骨髓中类似细胞的鉴别
三、骨髓中类似细胞的鉴别
三、骨髓中类似细胞的鉴别
三、骨髓中类似细胞的鉴别
(四)中幼红细胞、浆细胞、淋巴细胞鉴别
中幼红细胞
浆细胞
淋巴细胞
胞体 圆形
一、概述
２.禁忌证
严重出血的血友病患者，禁忌作骨髓穿刺； 晚期孕妇慎做； 小儿及不合作者不宜作胸骨穿刺。
一、概述
二、标本采集
（一）骨髓取材的部位
首选髂骨，其次是胸骨、棘突 。由于胸骨穿 刺有一定的危险性，故首选髂前或髂后上棘。
2岁以下小儿主张用胫骨粗隆穿刺。 必要时应多部位取材，以便全面了解骨髓的 造血情况。
椭圆形
圆形
胞浆
嗜多色性，不透 明，无颗粒
蓝色，不透明有泡沫感， 有时可见红色镶边，边缘 不规则，近核处有淡染区 ，常有空泡，可见颗粒
天蓝色，透明， 有核周淡染区， 可见颗粒
胞核 圆形，居中
圆形或椭圆形，常偏位
圆形，常偏一侧 ，有切迹
染色质
粗密成块，如打 碎的墨砚，中间 有明显空隙，无 色泽
骨髓细胞学检测的标准操作程序(SOP)
[3] 观察涂片边缘、尾部、骨髓小粒周围，有无体积较大或成堆分布的异常细胞，但也须在油镜下观察得以证实。
5.油镜检查：[1] 选择满意的片膜段，观察200-500个细胞，按细胞的种类、发育阶段分别计数，并计算它们各自的百分率。
[2] 各阶段血细胞的形态学特征。
（略）[3] 观察各系统的增生程度和各阶段细胞质量和数量的变化，观察的要点：1] 粒细胞系统：观察胞体的大小、胞核的形态以及胞浆是否有空泡和变性、中毒性颗粒、Auer小体、吞噬物等。
2] 红细胞系统：观察幼红细胞有无巨幼样变，胞核有无固缩、碎裂、胞浆内有无嗜碱性点彩、H0well-Jolly小体、Cabot环等，并应同时观察成熟红细胞大小、形态、染色、结构等有无异常。
3] 巨核系统：除作分类计数外，应注意巨核细胞和血小板的数量、大小、形态、及聚集性、颗粒变化等。
4] 单核细胞、淋巴细胞、浆细胞、网状细胞、内皮细胞、组织嗜碱细胞、吞噬细胞的数量和形态变化。
5] 是否出现其它异常细胞和血液寄生虫等。
6.结果计算：[1] 计算各系统各阶段细胞分别占有核细胞的百分率。
[2] 计算粒红比例，将各阶段粒细胞百分率的总和与各阶段有核红细胞百分率的总和作比较，计算粒红比值（G/E）。
7.血象分析：分析骨髓象必须分析血象，因为两者可以互相对照，以增加诊断的正确性。
8.细胞化学染色：用以协助鉴别诊断，常用的染色方法：过氧化物酶染色、过碘酸-雪夫反应（糖原染色）、碱性磷酸酶染色、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色、醋酸AS-D萘酚酯酶染色和氟化钠抑制试验、酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色、铁染色。
9.填写检验报告单[1] 取材、涂片、染色等情况：采用“良好”、“尚可”、“不佳”三级评价标准。
1] 取材良好的指标：骨髓液和涂片上均有骨髓小粒和脂肪滴。
有造血的幼稚细胞的巨核细胞，有骨髓特有的细胞，粒细胞的杆状核与分叶核的比值大于血片中的比值。
2] 涂片良好的指标：片膜厚薄适当、均匀，有头、体、尾三部分；尾部成弧形，上下缘整齐；面积约1.5cmX3cm；镜下见各类有核细胞分布均匀，成熟红细胞互不重叠，也不分散，也不皱缩。
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相关疾病：
慢性粒细胞性白血病、急性白血病、反应 性组织细胞增多症、移植后淋巴增殖性疾 病、甲氨蝶呤相关的淋巴增殖性疾病、原 发免疫性疾病相关的淋巴增殖性疾病、大 颗粒淋巴细胞白血病、淋巴瘤细胞白血病、 成人T细胞白血病、急性杂合性白血病、 慢性淋巴细胞白血病、白血病视网膜病变、 骨髓纤维化、再生障碍性贫
医学检验·各论 骨髓巨核细胞数和分
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简介：
骨髓巨核细胞数和分类是骨髓细胞学 检查的一个项目，骨髓细胞学检查对诊断 造血系统疾病最有价值，同时对诊断其他 非造血系统疾病，对不明原因发热、恶病 质、原因不明的肝脾肿大有鉴别诊断意义。
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相关检查：
骨髓浆细胞系统、骨髓其他细胞、骨髓粒 细胞与有核红细胞比值（M/E）、血清溶 菌酶（LYSO）、血浆铜蓝蛋白（CP）、过 氧化酶染色。
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相关症状： 骨髓巨核细胞成熟障碍、核分裂象增多、 骨髓抑制、骨髓象改变、全血细胞减少、 骨髓象左移现象。
临床意义：
(1)增多：慢性粒细胞白血病、真性 红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨 髓纤维化症、脾功能亢进、急性大出血等。 (2)减少：急慢性再生障碍性贫血、各种 急性白血病、血小板减少性紫癜、阵发性 睡眠性血红蛋白尿症等。
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正常值：
1.总数： 7～35/ (1.5×3cm)2。 2. 分类： 原始型：0 (0%)。 早幼型：0～ 0.05 (0～5%)。 中幼型：0.10～0.27 (10%～27%)。 晚幼型：0.44～0.60 (44%～60%)。 裸核： 0.08～0.30 (8%～ 30%)。 变性： 0.02(2%)。
16.骨髓涂片检查
骨髓涂片检查骨髓血液细胞学检查主要用于观察骨髓中血液细胞数量、质量、分化、成熟等的变化借以了解造血功能，从而对疾病的诊断、治疗、疗效观察及预后测定有所帮助，因此研究血细胞的各种生理及病理变化始终在血液学中有着其独特的重要地位。
骨髓血液细胞学检查的内容可分为二大部分，即对血细胞数量和对血细胞质量的检查，前者检测项目通常有1．骨髓有核细胞计数2．骨髓细胞增生程度分级3．骨髓有核细胞分类计算4．骨髓粒红比例计算5．骨髓巨核细胞计数后者包括骨髓涂片细胞形态学检查和细胞化学染色及其它病理细胞、血液寄牛虫检查等。
正常范围：1．骨髓细胞增生程度分级和有核细胞计数在涂片取材满意的情况下，观察有核细胞的多少能反映出骨髓造血的增生程度和间接了解骨髓中有核细胞的数量，目前国内较多的是将骨髓增生程度分为5个等级，见表2—1：表2—1 骨髓增生程度分级2．骨髓有核细胞分类计数和骨髓粒红比例骨髓有核细胞分类计数的数量应视骨髓增生程度而定，通常为计数2 00～5 00个左右，特殊需要可再行增减。
涂片先在低倍镜下观察取材，选择细胞分布均匀，染色满意的部位计数。
由于骨髓抽取的部位不同，各区域人群种族的关系，出生年龄的大小等因素，骨髓有核细胞分类计数的比值和粒红细胞比例后存有一定的差异。
见表2—2。
表2—2 骨髓有核细胞分类计数的比值和粒红细胞比例3．巨核细胞计数，此计数因骨髓穿刺时被血液稀释的程度较难估计，另涂片时取材多少、髓膜厚薄等不一，将直接影响到巨核细胞的计数。
巨核细胞的正常参数者若以全片计数，通常为7～35个／(1.5×3～3.5)cm，但也有见全片高达133个。
4．正常骨髓涂片中各个系统的血液细胞按一定的比例组合在一起，细胞形态均无明显异常，巨核细胞和成蔟血小板均可见到，并能见到少量正常非造血性细胞，成熟红细胞大小均匀，染色正常，无其它异常细胞和血液寄生虫。
临床评价：骨髓细胞学检查是对各种血液系统疾病诊断或辅助诊断所必不可少的项目之一。
骨髓象检查的步骤与方法
1.96~7.41
4.85 急性再障
骨髓增生程度分级(高倍镜）
3.观察巨核细胞
低倍镜下计数全部骨髓片膜的巨核细胞总 数。然后选择涂片厚薄均匀、染色良好的 区域在低倍镜下找到巨核细胞，移至视野 中央，转换成油镜判断巨核细胞的分化程 度，至少分类25个，同时注意巨核细胞 及血小板的形态有无异常。
骨髓象检查的步骤与方法
一.低倍镜检查 1.观察骨髓涂片、染色和取材是否满意 2.判定有核细胞增生程度
骨髓增生程度分级
有核细胞：成熟红细胞
范围 平均
有核细 胞占全 部细胞ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ百分率
有核细胞/1000个成熟红细胞
范围 平均
常见原因
极度活跃 1:0.5~2.0 1:1 >50 238.96~521.07 351.96 白血病
4.注意有无异常细胞
如恶性组织细胞病的异常组织细胞、转移癌 细胞、Gaucher细胞、Niemann-Pick细 胞等。注意观察有无散在或成堆分布的体积 较大、形态特殊的异常细胞出现，尤其应注 意涂片尾部、边缘及骨髓小粒周围。
发现可疑异常细胞，应在油浸镜下观察加以 确认。
二.油镜检查 在观察整张骨髓涂片后，选择骨髓涂片
厚薄、有核细胞分布均匀、着色良好 的骨髓涂膜处，并注意尽量在体尾交 界处作油浸镜检查。采用迂回方式， 以免出现重复计数的现象。
1.有核细胞分类计数
在油浸镜下连续分数200个或500个有核细胞，按 细胞的不同系列和不同的发育阶段分别计数。
分类计数时，巨核细胞、分裂象、退化细胞不计入。
2、观察细胞形态
明显活跃 1:5~12 1:10 >10 43.78~230.77 114.51 增生贫血
实验三骨髓检验报告
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2、注意涂片的制备、染色、观察部位不同对细胞 的影响。
3、遇到过渡类型的细胞采取就低不就高的原则 4、对于介于两个系统之间的细胞难以判断时，可
采用大数划归法。 5、注意结合病人资料。
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干抽：指由于非技术错误或选择部位不当而多次抽 不出骨髓液或仅抽出少量血液的现象。 引起干抽的主要原因：
实验三 正常骨髓象检查报告
一、目的 1.掌握：骨髓片检查步骤、观察内容及报告单
填写 2.掌握：骨髓有核细胞增生程度的判断 3.掌握：大致正材 显微镜、正常骨髓象骨髓片
三、操作步骤 1.在低倍镜下观察 主要观察骨髓片质量、增生程度、巨核细胞计
数、有无异常细胞、选择适宜观察部位。
干净的部位；计数要有一定的顺序，以免出现重复 计数的现象，可从左到右，从上到下，呈“S”形走 势；计数细胞包括除巨核细胞、破碎细胞、分裂象 以外的其它有核细胞及异常细胞，至少200个。
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3．结果计算 （1）计算各阶段细胞百分比、各系细胞百分比及
粒红比值（填写在表格中） （2）血片分类后，计算各系细胞、各阶段细胞百
（1）骨髓纤维化 （2）骨髓极度增生 （3）骨髓增生减低 （4）肿瘤骨髓浸润
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骨髓取材失败（骨髓稀释）：抽吸骨髓液时混进血 液称之。
判断标准： （1）骨髓增生假性减低 （2）成熟阶段细胞比值偏高 （3）杆/叶接近外周 （4）巨核细胞数量与外周血小板数量不符
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增生程度分级标准
分级
有核细胞 成熟红细胞
增生极度活跃 1：1
增生明显活跃 1：10
增生活跃
细胞培养中细胞计数标准操作规程
细胞培养中细胞计数标准操作规程一、目的：建立用于细胞培养过程的计数操作规范，以确保标准细胞在传代扩增前达到所需数量。
二、范围：细胞传代扩增前三、仪器：超净工作台、倒置显微镜四、试剂及耗材DMEM高糖完全培养基（DMEM基础培养基+10%胎牛血清+1%双抗，用于贴壁细胞培养）、1640完全培养基（1640基础培养基+10%胎牛血清+1%双抗，用于悬浮细胞培养）、0.25%胰酶、PBS缓冲液、75%乙醇、血细胞计数板、15mL离心管、1.5mL离心管、离心机、移液枪、吹风机等。
五、操作规程1.超净台紫外照射灭菌半小时，DMEM高糖完全培养基、1640完全培养基、PBS 溶液在37℃水浴锅中预热，0.25%胰酶平衡至室温。
2.从培养箱中取出培养至细胞丰度达80%以上的贴壁细胞的培养皿（10 cm2），用75%的乙醇喷洒后拿进超净台，用滴管移去培养皿中的培养液，用2mL的PBS 溶液清洗细胞一遍，弃去，以洗掉残存的培养液。
3.用移液枪吸取2 mL 0.25%胰酶至培养皿中，轻轻摇晃使胰酶覆盖整个平皿，在显微镜下消化3-5 min，观察培养皿中的细胞直至细胞变圆，从培养皿脱落。
4.向培养皿中加入2 mL的DMEM高糖完全培养基，终止胰酶消化，用吸管吹打细胞至细胞成单分散状态。
将细胞悬液转移至15 mL离心管中，900 rpm离心3 min，小心弃去全部上清液。
（若为悬浮细胞，上述步骤可省略。
用吸管轻轻吹打培养液后全部转移入15mL离心管中，900 rpm离心4 min弃去上清即可。
）5.加入2mL PBS溶液将细胞沉淀吹打均匀。
6.取100µL细胞悬液至1.5mL离心管中，若为悬浮细胞，加入900µLPBS溶液稀释10倍；若为贴壁细胞，加入400µLPBS溶液稀释5倍。
7.将计数板及盖片用酒精浸泡洗净，用吹风机吹干，并将盖片盖在计数板上。
8.吸取10µL稀释后的细胞悬液滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
骨髓检查标准操作程序
SOP_09-2 骨髓检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血液骨髓检验。
三、操作人员：检验科授权工作人员。
四、操作步骤：血细胞形态学检查主要用于观察骨髓与血液中细胞数量和质量的变化，借以了解其造血功能。
对疾病的诊断、疗效的观察、预后等研究都具有重大价值。
血细胞化学染色是在观察形态的基础上进一步了解细胞化学成分，对血细胞各种生化成分及代谢产物作定性、定位和定量的观察，临床上亦常用以协助诊断、鉴别诊断血液病和其他疾病。
1 骨髓象检查：1.1 骨髓细胞形态检查步骤：(1) 骨髓取材：①骨髓穿刺部位：一般取胸骨、棘突、髂骨前嵴或后嵴等部位。
两岁以内小儿主张用胫骨穿刺。
穿刺部位不同，取材可能有明显差异。
以胸骨穿刺最好，棘突次之，髂骨最差。
故必要时应多部位取材，以便能全面地了解骨髓情况。
②吸骨髓液：一般不超过O.2ml，否则易于稀释。
③骨髓取材满意的几项指标：抽吸骨髓时，患者有特殊酸痛感，骨髓液中应含有骨髓小粒。
显微镜下观察涂片，可发现骨髓特有细胞。
(2) 涂片检查：①涂片制备：要求涂片均匀，有头、体、尾三部分，血膜面积约1.5cm×3cm，厚度以透过血膜可看清字迹为限。
选择骨髓小粒部分制作涂片，骨髓液量不宜过多。
因骨髓的凝固较快，涂片过程要快。
骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。
②涂片检查：一般体积大的细胞分布于涂片的上下边缘及尾部，计数时应该从体尾交界处开始迂回向尾部移动。
(3) 染色：选用瑞氏(Wright)和姬姆萨(Giemsa)混合染色。
具体方法：髓片两端用蜡笔划线，必要时在血膜边缘较厚处用铅笔写明患者姓名及日期或编号。
加染液3～5滴于涂片上，静置1min(天热时间缩短)，然后加5～10滴磷酸盐缓冲液，使两液混匀，约10～15min，用水冲洗髓片，冲洗时平放玻片，缓缓用流水冲洗(勿先倒去染料)，待干镜检。
骨髓象分析
二、血象检查当血液系统发生疾病时，血象、骨髓象中血细胞会发生质或量的改变，检验骨髓象同时必须检验血象，对确定诊断和鉴别诊断是十分必要的。
㈠血片检查步骤及内容1、染色（瑞姬氏、时间、避免偏酸或偏碱）2、计数100个白细胞①粒系②红系③淋巴④浆细胞（异常时出现）⑤单核细胞⑥巨核细胞⑦其他：有无寄生虫及其他异常细胞，如疟原虫、恶组、淋巴瘤3、计算结果4、描述结果１㈡血片检查的重要性1．不同疾病时，骨髓象相似而血象有区别。
2．不同疾病时，骨髓象有区别而血象相似。
（传淋）3．同一患者骨髓象变化不显著，血象有异常。
（传单）4．同一患者骨髓象异常，血象无变化。
（MM）5．血中细胞来源于骨髓，白血病细胞分化程度晚。
２三、骨髓象检查㈠临床应用1．适应症①血细胞减少或增多。
②各种急慢性白血病。
③各种类型的贫血。
④不明原因的长期发热，肝、脾、淋巴结肿大。
⑤不明原因的骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜、出血。
⑥恶性血液病化疗的疗效观察⑦细胞培养2．禁忌症：血友病、晚期妊娠3．主要作用：辅助诊断和疗效的观察㈡骨髓穿刺1．穿刺部位①髂后上棘：第五腰椎向上3cm处。
②髂前上棘：顶端后约1-2cm处。
３③胸骨：胸骨中线，相当第二肋间水平的胸骨体上端。
④小于3岁的小儿选择胫骨内侧2．穿刺步骤①选择部位，②消毒、戴消毒手套、将孔布盖于消毒的局部、孔布口对准穿刺部，③注射麻醉药，④左手固定穿刺部位，右手持穿刺针与骨面垂直旋转刺入，深度为达骨膜后再刺入1cm左右，⑤拔出针芯，接10ml注射器，轻轻负压抽取，抽取骨髓液不超过0.2ml，立即涂片，⑥必要时再取骨髓液0.5-2ml，作有核细胞计数，⑦拔出穿刺针，压迫伤口敷以消毒纱布。
注意事项：⑪穿刺术必须严格无菌操作，严防骨髓感染。
初诊病人在治疗前做骨髓穿刺，死亡病例应在死亡后半小时内进行。
⑫抽吸骨髓液动作要缓慢，首次吸取0.2ml４只限作涂片用。
如需作其他检查时，再吸取1-2ml。
⑬由于取材部位的不同，其检验结果也不同。
正常骨髓象报告
实验九、正常骨髓象教学目的：①初步掌握骨髓检查方法、增生程度的判断及正常骨髓象的特征。
②分类200个骨髓有核细胞，分类血片100个白细胞，低倍镜辨认巨核细胞。
③按照格式书写正常骨髓象报告。
教学重点：骨髓检查操作步骤、骨髓报告单填写。
教学内容：【骨髓检查基本方法及内容】1. 操作步骤（1）低倍镜观察：①巡视全片：了解标本取材、涂片、染色情况，尽可能选择好的涂片和部位观察②判断有核细胞增生情况：骨髓有核细胞增生程度分级及标准增生明显活跃 1：10 50～100 各种白血病，增生性贫血增生活跃 1：20 20～50 正常人、某些贫血增生减低 1：50 5～10 造血功能低下增生极度减低 1：200 ＜5 再生障碍性贫血增生程度判断注意点：选择细胞分布均匀处作为判断部位。
骨髓凝固时，片头凝集成团的有核细胞，而片体却少，要全面估计。
对增生减低的标本，应观察全部送检标本。
临床上将增生明显活跃又分为二级，以±表示；亦可把介于两者之间的向上提一级。
增生程度的判断是粗略的估计，受取材、涂片、骨髓有无凝固的影响，所以要多部位、多张片子结合。
③计数全片巨核细胞数：从片头依次数到片尾，不漏视野。
一般病人只需粗略估计巨核细胞数量，用易见、增多、难见、未见表示。
出血性疾病要对全片巨核细胞计数和分类计数，分类25～50个巨核细胞，求出各类细胞的百分比④观察涂片边缘、尾部，注意有无体积大和成堆的异常细胞，并用油镜鉴定。
低倍镜找目标油镜鉴定（2）油镜检查①骨髓有核细胞分类计数：随机、迂回、依次计数200～500个细胞（巨核细胞、分裂象、破碎细胞除外）。
增生活跃以下的计数100～200个细胞。
巨核细胞分类计数与低倍镜配合。
②观察各细胞系列的形态，了解形态是否正常。
如大小是否均匀，形态有无异常。
③注意有无异常细胞和血液寄生虫。
（3）结果计算①计算各系统各阶段细胞占有核细胞的百分比。
②计算粒系统总比值、红系统总比值，并计算粒红比值。
骨髓巨核细胞计数规程
骨髓巨核细胞计数规程1. 实验原理用瑞氏染色法，对制备好的骨髓片进行染色，低倍镜下（必要时转油镜确认）以1.5cm×3cm为单位面积，计数巨核细胞数，并加以分类。
2. 标本采集：2.1 骨髓穿刺部分：一般取胸骨、棘突、髂骨前、嵴或后嵴等部分，两岁以内小儿主张用胫骨穿刺。
穿刺部分不同，取材可能有明显的差异，必要时可做多部位取材，以便能得到更准确的分析数据。
2.2 骨髓采集量：一般不超过0.2ml，否则易于稀释。
2.3 骨髓取材满意的几项指标：2.3.1 抽取骨髓时，患者有特殊酸痛感。
2.3.2 骨髓涂片应有骨髓小粒。
2.3.3 显微镜下可见骨髓特有细胞成分，如巨核细胞、浆细胞、网状细胞、组织嗜碱细胞、幼稚红细胞、幼稚粒细胞等。
3. 标本储存：取材后应立即推制成骨髓薄片，并尽快送检。
4. 标本运输：保持干燥，室温运输。
5. 标本拒收的标准：重度血稀，无骨髓特有细胞成份标本。
6. 实验材料：瑞氏血细胞染色液7. 实验仪器：7.1 仪器名称：OLYMPUS 显微镜7.2 仪器厂家：北京普利生公司骨髓细胞分析软件系统7.3 仪器型号：OLYMPUS CH308. 操作步骤：8.1 骨髓片瑞氏染色：将制好的干燥骨髓涂片平置于染色架上，滴加瑞氏染色液A液3-5滴使其迅速盖满骨髓膜，然后加瑞氏染色B液3-5滴，轻轻摇动玻片或用洗耳球吹气使A、B染液充分混匀，染色1-2分钟（气温低或涂片较厚时可适当延长染色时间），用自来水冲去染液，待干。
8.2 巨核细胞计数：将瑞氏染色干燥后的骨髓片，用低倍镜计数巨核细胞，并按原始巨核细胞、幼稚巨核细胞、颗粒型巨核细胞、产板型巨核细胞、裸核型巨核细胞分类记录，计数面积以1.5cm×3cm为一单位面积。
9. 质量控制：每30份样本，抽两份样本进行室内工作人员比对分析，要求差异在10％以内。
10. 临床意义：10.1 参考值：巨核细胞参考值7-35个∕1.5cm×3cm面积。
巨核细胞
生理功能
巨核细胞虽然在骨髓的造血细胞中为数最少，仅占骨髓有核细胞总数的0.05%，但其产生的血小板却对机体 的止血功能极为重要。每个巨核细胞均可产生1000-6000个血小板。
（2）幼稚巨核细胞：胞体明显增大，直径30～50μm，外形常不规则。胞核不规则，有重叠或扭转，核染色 质呈粗颗粒状或小块状，排列紧密，核仁可有可无，胞质量增多，染蓝色或浅蓝色，近核处呈淡蓝色或浅粉红色， 出现少量天青胺蓝颗粒。
（3）巨核细胞：
①颗粒型巨核细胞:胞体甚大，直径40～70μm，有时可达100μm，其形态不规则。胞核较大，形态不规则， 核染色质较粗糙，排列紧密呈团块状，无核仁，胞质极丰富，染粉红色，夹杂有蓝色，质内含有大量细小的紫红 色颗粒，常聚集成簇，但无血小板形成。
巨核细胞
骨髓中的从造血干细胞分化而来的细胞
01 分类
03胞（Megakaryocyte）是骨髓中的一种从造血干细胞分化而来的细胞，是正常骨髓中的一种能生成血 小板的成熟细胞，前身为颗粒巨核细胞。该细胞体积巨大，成熟的巨核细胞边缘部分破裂脱落后形成血小板。平 均每个巨核细胞能生成2000个(200～7700个）血小板。
生成血小板的巨核细胞也是从骨髓中的造血干细胞分化发展来的。造血干细胞首先分化生成巨核系祖细胞， 也称巨核系集落形成单位（colony forming unit-megakaryocyte,CFU-Meg）。祖细胞阶段的细胞核内的染色 体一般是2-3倍体。当祖细胞是2倍体或4倍体时，细胞具有增殖能力，因此这是巨核细胞系增加细胞数量的阶段。 当巨核系祖细胞进一步分化为8-32倍体的巨核细胞时，胞质开始分化，内膜系统逐渐完备。最后有一种膜性物质 把巨核细胞的胞质分隔成许多小区。当每个小区被完全隔开时即成为血小板，一个个血小板通过静脉窦窦壁内皮 间的空隙从巨核细胞脱落，进入血流。
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骨秽巨核细胞计数规程
1.实验原理
用瑞氏染色法，对制备好的骨髓片进行染色，低倍镜下（必
要时转油镜确认）以1.5cmX 3cm为单位面积，计数巨核细胞数，并加以分类。
2・标本釆集：
2.1骨髓穿刺部分：一般取胸骨、棘突、骼骨前、悄或后悄等部分，两岁以内小儿主张用胫骨穿刺。
穿刺部分不同，取材可能有明显的差异，必要时可做多部位取材，以便能得到更准确的分析数据。
2.2骨髓采集量：一般不超过0.2ml,否则易于稀释。
2.3骨髓取材满意的几项指标：
2.3.1抽取骨髓时，患者有特殊酸痛感。
2.3.2骨髓涂片应有骨髓小粒。
2.3.3显微镜下可见骨髓特有细胞成分，如巨核细胞、浆细胞、网状细胞、组织嗜碱细胞、幼稚红细胞、幼稚粒细胞等。
3.标本储存：取材后应立即推制成骨髓薄片，并尽快送检。
4.标本运输：保持干燥，室温运输。
5.标本拒收的标准：重度血稀，无骨髓特有细胞成份标本。
6.实验材料：瑞氏血细胞染色液
7.实验仪器：
7.1仪器名称：OLYMPUS显微镜
7.2仪器厂家：北京普利生公司骨髓细胞分析软件系统
7.3 仪器型号：OLYMPUS CH30
&操作步骤：
8.1骨髓片瑞氏染色：将制好的干燥骨髓涂片平置于染色架上，滴加瑞氏染色液A液3・5滴使其迅速盖满骨髓膜，然后加瑞氏染色B液3-5滴，轻轻摇动玻片或用洗耳球吹气使A、B染液充分混匀，染色1-2分钟（气温低或涂片较厚时可适当延长染色时间），用自来水冲去染液，待干。
8.2巨核细胞计数：将瑞氏染色干燥后的骨髓片，用低倍镜计数巨核细胞，并按原始巨核细胞、幼稚巨核细胞、颗粒型巨核细胞、产板型巨核细胞、裸核型巨核细胞分类记录，计数面积以1.5cmX 3cm为一单位面积。
9.质量控制：每30份样本，抽两份样本进行室内工作人员比对分析，要求差异在10%以内。
10 •临床意义：
10.1参考值:巨核细胞参考值7・35个/1.5cmX3cm面积。
分类：原始巨核细胞0,幼稚巨核细胞0・0.05,颗粒型巨核细胞0.10-0.27,产板型巨核细胞0.44-0.60,裸核型巨核细胞0.08-0.30o
10.2原始巨核细胞增多见于巨核细胞白血病（M7）,幼稚型巨
核细胞比例增多见于特发性血小板减少性紫癫的急性型，颗
粒型巨核细胞增多比例增多见于特发性血小板减少性紫癫的
慢性型。
巨核细胞减少见于巨核细胞系统再生障碍及某些白血病。
11.变异的潜在来源
11.1取材不当，骨髓成份被血液稀释。
11.2涂片过厚或过薄，影响巨核细胞计数。
11.3低倍镜下漏数小巨核细胞。
12.操作注意事项：
12.1骨髓取材禁忌症：血友病、严重凝血因子缺之症。
12.1取材量不能过多，一般不超过0.2ml,以防血稀。
12.3取材后，必须立即涂片，因骨髓液中纤维蛋白原含量高, 会很快凝固，影响涂片。
12.4推好的髓片应在空气中摇动，使其尽快干燥，以免细胞变形。
12.5根据髓膜厚薄，细胞量多少及室内温度等把握好染色时间，使染色效果满意。
12.6镜检时循序检查切勿漏检，必要时用油镜确认。
13.参考文献。