微生物植酸酶在体外条件下活性的测定_石宝明
植酸酶活性测定方法
蒸水 混合 。
４ ． ４钼 酸铵 溶 液 （Ｏ ｇ ） １Ｏ ／ ：取 四 水 合 钼 酸铵 Ｌ
１％ ， ０ 加双 蒸水 约 ８ ０ Ｌ溶 解 ， ２ ％氨 水 ｌｍＬ ０ｍ 加 ５ Ｏ ，
再用 双 蒸水 定容 至 １０ ０ ， 匀 。本 溶 液室 温 下 ０ ｍＬ 摇
３滴 吐 温一 ０ 用 双 蒸水 定 容 至 １０ ０ ， 匀 。本 ２， ０ ｍＬ 摇
溶液 最好 为现 配现用 。
不简 便 ， 法 稳定 性 不够 ， 方 测定 结 果误 差 相 对 较 大
等缺点 。经笔 者研 究 摸索 ， Ｂ Ｆ公 司的 植酸 酶 对 ＡＳ
４ ＿ 酸 钠溶 液 （． ７ １ ｏ Ｌ ｐ ． ）准 确称 ２植 ０ ０ ６ ｍ ｌ ，Ｈ５ ０ ： ０ ／ ５ 取植酸钠 ０ ０ ｇＳｇ 产品 ）溶于约 ８ ｍ 醋酸缓冲 ． ３ （ｉ ７ ｍａ ． ０ｌ
９０ ０ ｍＬ溶 解 ， 冰 醋 酸 调节 ｐ 至 ５５ ＋ ．５ 再 加 用 Ｈ ． ００ ， ０
生产 厂家 和质量 检测 机构 都要 面临 的工作 。 品植 商 酸 酶质 量 及在 饲 料 中 的添 加量 的定量 分 析 至 今 没 有世界 公认 的测 定方 法 ， 被广 泛认 可 和使用 较 多的 方 法 是 Ｇ ｓ ｒｃｄ ｓ和 Ｂ Ｓ ｉ ｂｏ ａ ｅ ｔ Ａ Ｆ公 司 １９ ９ １年 提 出 的 植酸酶 活性 的测 定方法 ， 但此 方法 在操 作上 仍存 在
３１ 析天 平 （ 确 至 ０Ｏ ０ ｇ ．分 精 ． １） ０
［ 稿 日期］０ ６ ０ — ７ 收 ２０ — ７ １ ［ 者 简 介 ］ 宝玲 （ ７ 一 ， ， 科 ， 要 从 事 饲 料 检 测 作 谭 １ ６ ）女 本 ９ 主
植酸酶酶活测定
四.实验步骤： 实验步骤：
1. 标准曲线的制作
(1)按下表的比例稀释成不同磷浓度溶液 (1)按下表的比例稀释成不同磷浓度溶液
标准符 标准 号 磷液 /ml 蒸馏 水/ml 相当于 无机磷 /ug 显色液 /ml OD660nm
1 2 3 4 5 6
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0
0.9ml（TCA） 0.9ml（植酸 （ ） （ 钠） 3ml √ 3ml √
水浴显色20min 水浴显色
20分钟后， 20分钟后，四只 分钟后 试管中现象
用分光光度 计测OD值 计测 值
实验得到四只试管中的样液的OD值 值 实验得到四只试管中的样液的
A0(参照 = 0 A1= 0.547 参照) 参照 A2= 0.490 A3= 0.523
实验用品： 三.实验用品： 实验用品
• 试剂 乙酸缓冲液、植酸钠溶液、10%三 试剂：乙酸缓冲液、植酸钠溶液、 乙酸缓冲液 三 氯醋酸溶液、 钼酸铵溶液、 氯醋酸溶液、2.5%钼酸铵溶液、10%Vc 钼酸铵溶液 溶液、 硫酸溶液、 溶液、17%硫酸溶液、磷酸二氢钾、显色 硫酸溶液 磷酸二氢钾、 液配制： ） 液配制：（6）︰（水）︰（4）︰（5）=1︰2︰1︰1 ） ） ︰ ︰ ︰ • 仪器：恒温水浴锅、分光光度计、离心机、 仪器：恒温水浴锅、分光光度计、离心机、 烧杯、容量瓶、 烧杯、容量瓶、移液管
摇瓶
3000r/min离心 min 离心15
（2） 酶活测定 ）
反应顺序
1. 加酶液 2. 加植酸钠 加植酸钠/TCA溶液 溶液 3. 加乙酸缓冲液 4. 混合均匀 5. 37℃水解 ℃
样品
0.3ml 0.9ml（植酸钠） （植酸钠） 0.9ml √
植酸酶活性测定方法
Ｗ×３０
式中： Ｐ— ——由样品吸收度根据二次曲线方程求得的反应
总磷量， μｍｏｌ
Ｗ— ——样品重量， ｇ
Ｆ— — — 样 品 总 稀 释 倍 数
３０— ——反应时间， ｓ
６ 结果
·４４·
６．１ 方法的重复性 抽取了 ３ 个批次的样品， 每个样品进行 ３ 次不 同日期的测定， 结果见表 ２。
表 ２ 植酸酶产品中植酸酶含量的测定结果
·４３·
广东饲料 第 １５ 卷第 ５ 期 ２００６ 年 １０ 月
检测分析
５ 操作方法 ５．１ 磷标准溶液及样品溶液配制 ５．１．１ 磷标准溶液： 称取基准磷酸二氢钾适量 于 １０５℃干 燥 ２ｈ， 置 干 燥 器 中 冷 却 至 室 温 后 ， 精 确 称取 ０．３４１５ｇ 于具塞锥形瓶中， 加入约 １００ｍＬ 醋酸 缓冲液并称量， 准确至 ０．０００１ｇ， 得 ２５．００５５μｍｏｌ／ｇ 磷标准液。用移液器准确移取磷标准液 ０．１ｇ、０．２ｇ、 ０．３ｇ、０．５ｇ、０．８ｇ、１ｇ， 置于 １０ｍＬ 刻度试管中， 加醋酸缓 冲液至 ５ｇ（ 精确至 ０．０００１ｇ） ， 配制成系列浓度的磷 标 准 液 ： ０．５００１μｍｏｌ／ｇ、１．０００２μｍｏｌ／ｇ、１．５００３μｍｏｌ／ｇ、 ２．５００６μｍｏｌ／ｇ、４．００１０μｍｏｌ／ｇ、５．００１１μｍｏｌ／ｇ。备用。 ５．１．２ 样品溶液： 称取 １ｇ 植酸酶样品于具塞三 角 瓶 中 ， 加 醋 酸 缓 冲 液 至 １００ｇ 并 称 量 （ 准 确 至 ０．０００１ｇ） ， 搅拌 ３０ｍｉｎ 后取上清液于 ４ ０００ｒ／ｍｉｎ 离 心 １０ｍｉｎ（ 或用玻璃滤纸过滤） ， 称取上清液 ０．１ｇ， 加 醋酸缓冲液稀释至 １００ｇ， 使得到酶活为 ０．０５ＦＴＵ／ｇ 左右的样品溶液， 所有称量均需精确至 ０．０００１ｇ。 ５．２ 酶活反应及测定 称 取 磷 标 准 溶 液 、样 品 溶 液 、空 白 醋 酸 缓 冲 液 各 １ｇ（ 精 确 至 ０．０００１ｇ） 于 试 管 （ １８ｍｍ×１８０ｍｍ） 中 ， 按表 １ 进行反应。样品反应操作间隔时间为 ３０ｓ。
植酸酶活力的测定方法及应注意问题
植酸酶活力的测定方法及应注意问题
郭会灿;李会然
【期刊名称】《科技信息》
【年(卷),期】2009(000)036
【摘要】酶活力大小是衡量酶制剂质量的主要指标,选择具有高度专一性和灵敏度的酶活测定方法是酶制剂质量的保障.
【总页数】1页(P11)
【作者】郭会灿;李会然
【作者单位】石家庄职业技术学院化学工程系;石药集团维生药业
【正文语种】中文
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1.小麦粉过氧化苯甲酰测定方法应注意问题探析
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植酸酶活力的测定方法及应注意问题(精)
科技信息植酸酶是催化植酸及植酸盐水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称 [1]。
植酸酶是一种胞外酶 [2], 广泛存在于自然界中, 植物、动物、微生物均可产生植酸酶。
植酸酶的活性因来源不同而有差异。
植酸酶能将肌醇六磷酸 (植酸分解成为肌醇和磷酸。
植酸酶可以专一性地水解植酸中的磷酯键, 使磷酸游离出来, 植酸酶将植酸分子上的磷酸基团逐个切下, 形成中间产物肌醇五磷酸、肌醇四磷酸、肌醇三磷酸、肌醇二磷酸、肌醇一磷酸、终产物为肌醇和磷酸 [3]。
植酸酶的作用机理见图 1。
图 1植酸酶的作用机理1. 植酸酶酶活力测定的意义酶活力也称酶活性, 是指酶催化一定化学反应的能力, 用在一定条件下, 酶所催化某一反应的速率表示。
酶活性是研究酶的特性, 分离纯化以及酶制剂生产和应用时的一项不可缺少的指标。
酶活力单位是以酶活力为根据而定义的。
国际生化协会酶委员会规定, 1min 内将1μmol 的底物转化为产物的酶量定为 1个单位,称为标准单位, 同时规定了酶作用的条件。
因标准单位在实际应用时不够方便, 故在生产上往往根据不同的酶, 制定各自不同的酶活力单位。
在测定酶活力时, 对反应温度、 pH 、底物浓度、作用时间都有统一规定, 以便同类产品互相比较。
但是酶活力单位并不能直接反映酶的绝对数量, 只不过是一种相对比较的依据 [4]。
植酸酶活性的定义为:在最适宜条件下, 每分钟从一定浓度的植酸钠溶液中释放1μmol 的无机磷所需要的酶量为一个酶活力单位。
确定植酸酶的酶活, 可以提高实验的标准性和效率。
2. 植酸酶活力测定的原理及方法酶活力测定的原理都是利用酶水解植酸钠形成无机磷,然后测定无机磷的释放量。
植酸酶活性的测定方法较多 , 但至今尚没有被世界普遍公认的植酸酶的定量分析方法。
方法包括:钒 -钼酸铵法、硫酸亚铁 -钼蓝法、 Vc-钼蓝法、丙酮 -磷钼酸铵法、微板法和微量比色法等 [5]。
可根据实验需要选择不同的方法。
2.1钒 -钼酸铵法该方法是利用植酸酶可以水解植酸磷释放出无机磷的原理。
植酸酶活性测定方法的研究进展
植酸酶活性测定方法的研究进展陈琛【摘要】本文综述了植酸酶的分析测定方法,包括传统的分光光度法及近年来新发展起来的近红外光谱法、琼脂平板法、酶联免疫吸附法、生物传感器法、反相高效液相色谱法等.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2010(000)020【总页数】4页(P16-18,22)【关键词】植酸酶;测定方法;活性【作者】陈琛【作者单位】陕西理工学院【正文语种】中文【中图分类】S816.17植酸酶广泛存在于动物、植物和微生物中，能将植酸分解为肌醇和无机磷的一类磷酸单脂水解酶。
文章介绍了植酸酶活性的测定方法，除了以前的传统方法外，近10多年植酸酶活性检测出现了许多新的方法，如近红外光谱法、琼脂平板法、酶联免疫吸附法、生物传感器法、高效液相色谱法等，这些新方法为植酸酶活性测定开辟了新的检测途径。
1 植酸酶活性测定方法的发展及意义1.1 植酸酶活性测定方法的发展植酸酶发现至今已经有100余年，植酸酶的研究已经取得了丰硕的成果。
回顾植酸酶活性的测定方法：1925年Fiske-SubbaRow 法，即钼黄法，因由Fiske和SubbaRow两人发现，所以早期钼黄法也叫Fiske-SubbaRow法；1943年Holman等发现了硫酸亚铁-钼蓝法，曾在国外许多国家发展为植酸酶测定的标准方法，至今还在许多研究中采用（Fu等，2008；Huang 等，2008）；1981 年 Heinonen 和 Lahti建立了丙酮-磷钼酸铵法。
植酸酶活性的测定方法除了这些传统的方法外，近10多年来随着科学技术和检测手段的提高，植酸酶活性分析检测及标准化方面出现了许多新的方法，并颁布了新的标准，如近红外光谱法（NIR）、琼脂平板法、酶联免疫吸附法（ELISA）、生物传感器法、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）等。
1.2 植酸酶活性测定意义植酸酶没有特定光吸收波和鉴定试剂，所以植酸酶的分析和活性测定比较困难（Lasztity等，1990）。
植酸酶活性的测定——钼蓝法(精)
植酸酶活性的测定——钼蓝法1 原理针对预混料复杂的物料体系，用不同的缓冲液对其进行抽提，最大限度的减少饲料中无机磷，微量元素，多维及其他成分对植酸酶测定的影响，用钼蓝法对抽提液中植酸酶活性进行定量。
植酸酶在一定温度和pH条件下，水解底物植酸钠生成正磷酸和肌醇衍生物，在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色的（Mo2O3•MoO3）复合物，在波长700nm下比色测定。
酶活力单位定义：在37℃、pH5.0条件下，每分钟从5.0mM植酸钠溶液中释放出1微摩尔的无机磷定义为1个酶活力单位（U）2 试剂本规定中所用试剂，在没有注明其它要求时，均指分析纯试剂；所用溶剂和水无注明时，均指蒸馏水。
清洗实验用容器不要用含磷清洗剂。
2.1 乙酸缓冲液A（0.25mol/L）：称取14.355g无水乙酸钠，加入0.5gTriton X-100和0.5g牛血清白蛋白，900ml水溶解，冰乙酸调pH值至5.00±0.01，水定容至1000ml。
2.2乙酸缓冲液B（0.25mol/L）：称取14.355g无水乙酸钠，加入1.0g吐温-20和30gEDTA，900ml水溶解，冰乙酸调pH值至5.00±0.01，水定容至1000ml。
2.3 植酸钠溶液（6.25mmol/L）：称取577.4mg肌醇六磷酸钠，加入574.2mg无水乙酸钠，90ml水溶解，冰乙酸调pH值至5.00±0.01，水定容至100ml，现用现配（实际反应液中的最终浓度为5.0mmol/L）。
2.4 终止液：5%三氯乙酸（5%TCA）。
2.5 1.5％钼酸铵（试剂A）：7.5g钼酸铵溶于400ml水中，慢慢加入22ml浓硫酸，水定容到500ml，冰箱储存，有效期1个月。
2.6 2.7％硫酸亚铁（试剂B）：冰箱储存，有效期1个月。
2.7 显色剂：移取4份试剂A（2.5），1份试剂B（2.6）混合后使用，现用现配。
2.8 磷酸二氢钾：称量前于烘箱中烘至恒重，用乙酸缓冲液（2.2）配制50mmol/L标准液，再用50mmol/L 配制成4.0mmol/L磷酸二氢钾，溶剂为乙酸缓冲液（2.2），冰箱储存。
植酸酶酶活测定方法的研究
图,
钼蓝法标磷测定曲线
项目 &)/ 8 , &** 8 / 7",’
表+
以发酵液为酶液， 以灭活酶液作 对照菌种酶活测定方差分析
平方和 0 @@ 1 ’( ’" ’( ""’ 6 ’( "&’ 6 均方 0 A@ 1 ’( ’, ’( ’,* & B ’( 7&+ 7
项目 自由度 0 =? 1 菌种间误差 " 实验间误差 ," 总变异 ,&
表" 以发酵液为酶液以灭活酶液作对照菌种酶活测定结果
重复 , ’( ’’+ ’( ,’& ’( "+6 重复 " ’( ,"6 ’( "&) ’( ’’’ 吸光度 重复 + ’( ’’7 ’( ’,+ ’( ,)" 重复 & ’( +/& ’( "*+ ’( ’&6 重复 7 ’( ’,7 ’( &"7 ’( ’,/
表, 培养液无机磷含量与培养时间的关系
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的透析袋中用 ’( "4E5 F9:G 8 盐酸 （H#6( ’） 缓冲液透 析， 透析不同时间发酵液中无机磷含量见表 &。
表& 发酵液透析不同时间的结果
项目 透析 ’( 7- 透析 ,- 透析 "- 透析 +酶液中无机磷含量 0 !2 3 45 1 +( / ’ ’ ’ 体积 0 原液 I 1 ,’& ,,/ ,"+ ,")
国标绝对法测定植酸酶产品活性的关键控制点
国标绝对法测定植酸酶产品活性的关键控制点畜禽饲料中添加使用微生物发酵生产的植酸酶可提高植物性饲料中植酸及其盐的利用率, 减少日粮中磷酸氢钙等磷源的添加量, 降低饲料成本, 目前已经被广泛使用。
为了确保实际生产中植酸酶使用效果, 如何准确测定植酸酶产品的酶活性是养殖场、饲料企业和酶制剂生产、经销商所共同关注的问题。
目前, 国内植酸酶产品酶活性测定大多采用国家标准 GB/T 18643—2002《饲料用植酸酶活性的测定分光光度法》。
该方法标准中, 包括两种方法: 绝对法和相对法。
该测定方法的分析步骤不是很复杂, 所涉及的仪器设备饲料企业的实验室也都有配备, 但要获得准确和重复性好的分析结果也不容易, 需要加强对检测原理和步骤的理解。
该方法是基于样品在植酸钠浓度为 5.0 mmol/l、温度37 ℃、pH 值 5.50 条件下, 每分种从植酸钠中释放 1 μmol 无机磷,即为 1 个植酸酶活性(以 U 表示)的定义基础上测定的。
鉴于绝对法应用比较普遍, 现将我们在开展植酸酶产品活性测定过程中一些经验体会总结如下, 供同行们参考。
1 溶液配制植酸酶活性测定直接所用到的溶液主要有 3 种,即乙酸缓冲溶液、植酸钠底物溶液和显色终止液。
1.1 乙酸缓冲溶液国标方法中, 绝对法测定植酸酶产品酶活性所使用的乙酸缓冲溶液浓度为:c(CH3COONa·H2O)=0.25 mol/l。
缓冲溶液是确保整个酶反应体系的 pH 值在规定范围内的关键因素, 必须准确配制。
1.1.1 配制方法称取 34.02 g 三水乙酸钠,0.1 g 吐温 20 于 1 000 ml容量瓶中, 加入 900 ml 水溶解, 用乙酸调节 pH 值至!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!《饲料工业》·2008 年第 29 卷第 14 期检测技术475.50±0.01, 室温下贮存 2 个月有效。
两种测定植酸酶酶活的方法比较及发酵条件研究
两种测定植酸酶酶活的方法比较及发酵条件研究XU Dan-dan;ZHAO Han-dan;WANG Xiu-ran;GUAN Shu-yan【摘要】从富含有机质的环境中采集土样,通过植酸钙平板透明圈法初筛得到产植酸酶菌株,进而用钒-钼酸铵法和丙酮-磷钼酸铵法2种方法测定植酸酶酶活力,并进行比较.结果表明,钒-钼酸铵法为准确、可用的方法,通过正交试验确定了最适产酶发酵条件为pH 5,可溶性淀粉用量1.25 g/100 mL,酵母粉用量1.80 g/100 mL,植酸钙用量1.0 g/100 mL.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2019(058)012【总页数】4页(P134-137)【关键词】植酸酶;酶活;测定;钒-钼酸铵法;丙酮-磷钼酸铵法【作者】XU Dan-dan;ZHAO Han-dan;WANG Xiu-ran;GUAN Shu-yan【作者单位】;;;【正文语种】中文【中图分类】Q93-332植酸（肌醇六磷酸）及植酸盐广泛存在于植物体中，是植物磷的主要贮存形式，占植物中总磷的60%～80%［1］。
但植酸磷难以被单胃动物吸收利用，随粪便排出体外会造成水体和土壤的严重磷污染［2］。
同时，植酸及其盐还是一种抗营养因子，能与多种金属离子螯合并能与蛋白质等形成难溶的复合物，影响动物对矿质元素和蛋白质的吸收利用［3，4］。
植酸酶能将植酸及其盐类降解为肌醇和磷酸（或磷酸盐），作为饲料添加剂可以提高植酸磷的利用率，提高植物性饲料的营养价值，减少畜禽粪便中磷的排放，减轻环境污染［5－7］。
传统的产植酸酶菌株的筛选方法为透明圈法，该方法利用微生物在植酸酶筛选培养基上降解植酸钙，在菌落周围生成透明圈来初步判断微生物是否产植酸酶，但有些产酸菌株也能降解植酸钙产生透明圈，故平板透明圈法缺乏特异性和绝对性，必须再对产透明圈的菌株进行液体发酵培养，测定发酵液的植酸酶活性，才能判断出该菌株是否能够产植酸酶。
植酸在食品加工中的应用
植酸在食品加工中的应用
袁俊杰;臧剑士;等
【期刊名称】《中国食品添加剂》
【年(卷),期】1999(000)002
【总页数】7页(P52-58)
【作者】袁俊杰;臧剑士;等
【作者单位】青岛市轻工研究所，青岛266042;青岛市轻工研究所，青岛266042【正文语种】中文
【中图分类】TS202.3
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植酸酶的研究进展与应用
植酸酶的研究进展与应用
李旋亮;吴长德;李建涛
【期刊名称】《饲料博览》
【年(卷),期】2009(000)008
【摘要】植酸酶是一种环保型的饲料添加剂,可以使单胃动物更有效利用饲料中的磷,降低粪便中磷的排放,减少对环境的污染,促进养殖业的健康发展.文章综述了植酸酶的来源及分类、生物学作用、影响其活性的因素、在畜牧生产中的应用及其发展前景.
【总页数】3页(P21-23)
【作者】李旋亮;吴长德;李建涛
【作者单位】沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳,110161;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳,110161;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳,110161
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【中图分类】Q814.4;TQ126.3+1
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微生物植酸酶在体外条件下活性的测定
东北农业大学动物营养研究所 石宝明 单安山
由于添加无机磷导致粪便中磷的排出量增
多,污染水源和土壤,同时磷酸氢钙还易导致氟中
毒和其他重金属中毒,因此在饲料中添加植酸酶
代替直接添加无机磷日益受到重视。
植酸酶的应
用效果,关键在于其在消化道中的活性。
自然界
有许多不同的植酸酶来源,通过遗传工程技术,利
用微生物(黑曲霉—A spe rgillus nige r)发酵工程技
术生产饲用植酸酶,已成功地应用于猪和家禽中。
本试验是应用这种微生物植酸酶,以玉米、豆饼、
麦麸为植酸磷载体,模拟畜禽胃肠消化道环境,在
体外条件下测定微生物植酸酶的活性。
1 材料与方法
1.1 试验材料 微生物植酸酶,由德国BASF公司提供。
1.2 试验设计
1.2.1 时间与微生物植酸酶的活性 准确称取玉米、豆饼、麦麸各4g,固定温度为40℃,加入pH为5.5的乙酸溶液10mL和0.1g植酸酶,振荡混匀,在催化时间分别为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11h后,加入4mol/L盐酸3mL中止反应,然后置烘干箱中烘干,烘干后用TC A法测植酸磷含量,计算出植酸磷降解率。
1.2.2 温度与微生物植酸酶的活性 准确称取玉米、豆饼、麦麸各4g,加入pH5.5的乙酸溶液10mL和0.1g植酸酶,振荡混匀,在催化温度分别为25、30、35、40、45、50、55、60、65、70℃下,反应4h后加入4mol/L盐酸3mL中止反应,然后置烘干箱中烘干,烘干后用TC A法测植酸磷含量,计算出植酸磷降解率。
1.2.3 pH与微生物植酸酶的活性 准确称取玉米、豆饼、麦麸各4g,固定温度40℃,加入0.1g 植酸酶,振荡混匀,然后分别加入pH为2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的乙酸溶
液10mL,反应4h后加入4mol/L盐酸3mL中止反应,然后置干燥箱中烘干,烘干后用TCA法测植酸磷含量,计算出植酸磷降解率。
1.3 计算方法 植酸磷降解率(%)=(催化前载体中植酸磷含量-不同催化条件下植酸磷含量)/催化前载体中植酸磷含量×100。
2 试验结果
2.1 时间与微生物植酸酶的活性 微生物植酸酶在不同催化时间下,对饲料中植酸磷的降解率见图1。
图1 不同催化时间对微生物植酸酶活性的影响
从图1可以看出,微生物植酸酶对植酸磷的降解率随着催化时间的增加而增加,在4h后为80%,在5～6h后基本完全降解。
2.2 温度与微生物植酸酶的活性 微生物植酸酶在不同温度下,对饲料中植酸磷的降解率见图2。
图2 不同温度对微生物植酸酶活性的影响
从图2中可以看出,微生物植酸酶的活性,随着温度(25～70℃范围内)的增加而增强。
在pH
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2000年第15期 中国饲料DOI:10.15906/ 11-2975/s.2000.15.012
维生素B 6分光光度测定方法的改进
新疆农业大学 杨开伦 雒秋江 李玉梅 潘竟丽
维生素B 6(VB 6)包括吡哆醇、吡哆醛和吡哆
胺,被动物吸收进入机体后,经过磷酸化作用分别转化为磷酸吡哆醇、磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺,而且这3种形式之间也可相互转化。
它们在动物体内主要参与蛋白质、脂肪和碳水化合物的代谢,尤其作为转氨基反应的一种辅酶,参与体内的多种氨基酸代谢,同时它对动物体的免疫功能也起一定的作用。
VB 6的缺乏,会影响动物机体对营养成分的吸收,引起动物神经系统调节紊乱、皮炎、贫血等症状,是动物和人体的必需营养物质。
有关VB 6的定量测定方法有微生物法、HPLC 法和比色测定法。
微生物法费时又不能准确定量;HPLC 法虽然能准确定量,但需要昂贵的仪器设备;比色测定法测定VB 6时,虽然显色很快(约1min ),但稳定性很差,定量范围较窄(3～8μg /mL ),且所需样品体积和试剂量较大,操作繁琐。
为此,我们进行了不同反应介质下显色速度及产物稳定性的研究,在此基础上提出了一种测定VB 6的改进方法。
其基本原理是VB 6与2,6二氯醌氯亚胺反应生成蓝色靛酚,在650nm 处有最大光吸收值,VB 6浓
度在一定范围内符合朗伯-比尔定律。
1 材料与方法
1.1 试剂1.1.1 显色剂 称取40mg 2,6二氯醌氯亚胺(上海试剂总厂第三分厂),用异丙醇溶解定容到100mL ,摇匀,贮于棕色瓶中放置冰箱保存(可在一个月内连续使用,如果变成粉红色不可再用)。
测定时取25mL 于100mL 的容量瓶中,用异丙醇定容,配成浓度为0.01%的工作溶液(当天配制当天使用)。
1.1.2 氢氧化铵—氯化氨缓冲液(3.2%) 称取16g 氯化氨溶于70mL 蒸馏水中,加浓氨水16mL ,再用蒸馏水定容至100mL 。
临用前用水稀释成浓度为3.2%的溶液。
1.1.3 标准VB 6贮备液(100μg /mL ) 准确称取盐酸吡哆辛(上海化学试剂公司分装厂,标示含量99%)标准品25mg (预先在硅胶真空干燥器中干燥4h ),用0.1mol /L 盐酸溶解并定容至250mL ,为5.5、时间4h 的条件下,温度在50～60℃时,饲料中植酸磷的降解率接近100%,在40℃下降解率为80%。
2.3 pH 与微生物植酸酶的活性 微生物植酸酶在不同pH 下,对饲料中植酸磷的降解率见图3。
图3 不同pH 对微生物植酸酶活性的影响 从图3可以看出,微生物植酸酶有一个很宽的pH 范围,pH 值为2.5与5.5时活性最强,即有2个最适pH 值2.5和5.5。
在pH 为7.0时,微生
物植酸酶的活性很低。
3 分析和讨论
本试验通过模拟畜禽胃肠道环境,在体外条件下,以玉米、豆饼、麦麸为植酸磷的载体,考察了时间、温度和pH 对微生物植酸酶活性的影响。
试验结果表明,微生物植酸酶在40℃、pH 为5.5条件下,4h 以上对玉米、豆饼、麦麸中植酸磷的降解率为60%～100%。
在温度为40℃、pH 为2.5、时间4h 的降解率为60%。
在健康状态下,猪和家禽消化道温度为40℃左右、pH 为2～7,其中胃中pH 为1.5～2.5,小肠pH 为5.5左右,饲料通过消化道时间为3～12h 。
由此可以看出,以玉
米豆粕型为基础日粮的鸡、猪等单胃动物,饲料中的植酸磷,在消化道内容易被微生物植酸酶降解。
(参考文献略)
[通讯地址:哈尔滨市香坊区,邮编:150030]
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