_一测多评_法中药质量评价模式方法学研究

假设某样品中含有 i个组分
W i Ai
= fi
( i = 1, 2,
…,
k, …, m )
①
式中
A
为组分峰面积
i
;
W
为组分浓度 。
i
选取其中一组分 k为内标 ,建立组分 k与其他组分 m 之
·1925·
第 31卷第 23期 中 国 中 药 杂 志
Vol131, Issue 23
表ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ2 校正因子
进样体积 /μL 1 5 10 15 20
M ean RSD / %
fsaponin PJ1 / mutongsaponin B 11912 11918 11921 11923 11760 11887 3176
fsaponin PJ1 /m utongsaponin C 01811 01863 01871 01890 01900 01867 3199
那么能否通过中药有效成分间存在的内在函数关系和 比例关系 , 仅测定 1个成分 (对照品可以得到者 ) , 来实现 多个成分 (对照品没有或 难 以 供 应 ) 的 同 步 监 控 , 这 是 “一测多评 ”的基本设计思想 。作者以木通药材为例 , 采用 一测多评模式对其中 3种皂苷类成分进行同步测定 , 对一 测多评方法的技术适用性和应用可行性进行了探索和评价 。 1 仪器与试药
W aters2695 - 2996高效液相系统 , Empower工作站 (W a2 ters公司 ) ; Agilent 1100 高效液相系统 ,白木通皂苷 B (mu2 tongsaponin B ) ,皂苷 PJ1 ( saponin PJ1 )和白木通皂苷 C (mu2 tongsaponin C)对照品由本实验室分离纯化并鉴定结构 (图 1) , HPLC (面积归一化法 )纯度 > 98%。白木通药材采自四
王智民 3 , 高慧敏 , 付雪涛 , 王维皓
(中国中医科学院 中药研究所 , 北京 100700)
[摘要 ] 目的 :建立适合于中药特点的利用 1个对照品同步测定多成分的分析方法 ,并建立其方法学的考察 模式 。方法 :以木通为研究对象 ,以药材中典型成分皂苷 PJ1 ( saponin PJ1 )为指标 ,建立该成分与其他成分白木通皂 苷 B和白木通皂苷 C (mutongsaponin B和 C) 间的相对校正因子 ,测定 saponin PJ1的含量 ,用校正因子计算 mutong2 saponin B和 C的含量 ;同时采用外标法实测药材中 3种成分的绝对含量 ;采用夹角余弦法对一测多评法的计算值 与外标法实测值进行比较 ,评价一测多评法的准确性和科学性 。结果 :建立了一测多评法方法学的考察模式 ;方法 准确性评价结果表明一测多评法的计算值与外标法实测值之间没有显著性差异 ,实验所得的校正因子可信 。结 论 :一测多评的研究思路在木通药材中得到验证 ,有望成为适合中药特点的多指标质量评价新模式 。
试验考察了 W aters 2695 - 2996, Agilent 1100 两种高效 液相色谱系统和 Agilent C18 ( 416 mm ×250 mm , 5 μm ) , Phe2 nomenex Luna C18 ( 416 mm ×250 mm , 5μm ) , A lltima C18 ( 416 mm ×250 mm , 5μm ) 3种色谱柱 ,结果见表 4。 2. 3. 2 实验室考察 采用建立的一测多评试验方法在经两
2. 2. 6 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶液 20 μL , 连续进样 6 次 ,记录峰面积 , mutongsaponin B , saponin PJ1和 mutongsaponin C 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 117% , 118% 和 210 % 。 2. 2. 7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于 1, 2, 3 d进 样分析 ,记录峰面积 , mutongsaponin B , saponin PJ1和 mutong2 saponin C的 RSD 分别为 117% , 117%和 0165% ,表明处理后 的样品溶液室温放置 3 d稳定 。 2. 2. 8 重复性试验 称取白木通 (四川峨嵋山麻柳村 )药材 粉末 (60目 )约 110 g共 6份 ,精密称定 ,按供试品溶液处理 方法制备样品 ,测定 , mutongsaponin B , saponin PJ1和 mutong2 saponin C的平均 含 量 为 0115% , 0165%和 0118% , RSD 为 117% , 115%和 113%。 2. 2. 9 加样回收率 精密称取适量已知含量的白木通药材 粉末 (60目 ) 6份 , 分别加入一定量的对照品 , 按供试品 溶液处理方法制备样品 , 测定 , 计算加样回收率 , mutong2 saponin B , saponin PJ1和 mutongsaponin C 的 平 均 回 收率 为 9917% , 9714% , 9914% , RSD为 214% , 216%和 219%。 212110 样品测定 分别精密吸取供试品 、混合标准品及 单一标准品 ( saponin PJ1 ) 溶液各 5, 10, 10 μL 注入高效 液相色谱仪 , 测定 。分别采用一测多评法和外标一点法计 算木通药材中 mutongsaponin B , saponin PJ1和 mutongsaponin C 的含量 (表 3) 。 2. 3 一测多评方法耐用性和系统适应性评价 2. 3. 1 色谱柱及高效液相色谱仪考察 取 2. 2. 2项下混合 对照品溶液 ,进样 1, 5, 10, 15, 20 μL ,测定 ,按 2. 2. 5 项下计 算 saponin PJ1对 mutongsaponin B 和 mutongsaponin C的校正 因子 。
[收稿日期 ] 2006209208 [通讯作者 ] 3 王智民 , Tel: ( 010 ) 84014128, E2mail: zhmw123 @ 263. net
川 ,经本所生药室何希荣主管技师鉴定为白木通 A kebia trifo2 lia ta ( Thunb. ) Koidz. var. austra lis (D iels) Rehd的干燥藤 茎 ,其他样品由本所生药室郝近大研究员鉴定提供 。甲醇为 色谱纯 ,水为高纯水 ,其余试剂均为分析纯 。
2006年 12月
Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica
December, 2006
间的相对校正因子 [ 426 ] 。
fkm
= fk fm
W =
k
Wm
×Am ×A k
②
由此可导出定量计算公式 :
W m
W =
k
fkm
×Am ×A k
③
第 31卷第 23期 中 国 中 药 杂 志
·1926·
分别在 0115～3104, 0140～8106, 0120～410μg线性良好 。 2. 2. 5 校正因子计算 以 Saponin PJ1为内标 ,按 2. 1项下公 式 ②,分别计算 saponin PJ1对 mutongsaponin B 和 mutongsapo2 nin C的校正因子 ,见表 2。
第 31卷第 23期 中 国 中 药 杂 志
Vol131, Issue 23
2006年 12月
Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica
December, 2006
·学术探讨 ·
“一测多评 ”法中药质量评价模式方法学研究
图 1 对照品白木通皂苷 B ,皂苷 PJ1和白木通皂苷 C 2 方法与结果 2. 1 方法原理
在一定的范围内 (线性范围内 )成分的量 (质量或浓度 ) 与检测器响应成正比 ,即 : W = fA [123 ] 。在多指标质量评价时 , 以药材中某一典型组分 (有对照品供应者 )为内标 ,建立该组 分与其他组分之间的相对校正因子 ,通过校正因子计算其他 组分的含量 。这种测定一个成分 ,实现对多个成分定量的方 法命名为一测多评法 。
1. mutongsaponin B; 2. saponin PJ1 ; 3. mutongsaponin C
2. 2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取 mutongsaponin B , saponin PJ1和 mutongsaponin C 对照品 1152, 4103, 210 mg 置于 10 mL 的 量 瓶 中 , 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 得 01152, 01403和 0120 mg·mL - 1的混合对照品溶液 。精密称取 sap2 onin PJ1对照品 4106 mg置于 10 mL的量瓶中 ,甲醇溶解并稀 释至刻度得 01406 mg·mL - 1的单一对照品溶液 。 2. 2. 3 供试品溶液的制备 取药材粉末 (过 60目筛 )约 110 g,精密称定 ,置具塞三角瓶中 ,精密加入 70%的甲醇 50 mL , 精密称定 ,超声提取 30 m in,补足重量 ,摇匀 ,滤过 。精密量 取续滤液 30 mL ,减压蒸干溶剂 ,残渣以 10 mL 水分次洗涤 , 洗涤液并入分液漏斗中 ,以水饱和醋酸乙酯萃取 3次 ,每次 10 mL ,弃去醋酸乙酯液 ,水层用水饱和正丁醇萃取 5 次 ,每 次 10 mL ,合并萃取液 ,置蒸发皿中蒸干 ,残渣以 70%甲醇溶 解 、洗涤并定容于 510 mL 量瓶中 ,过 0145 μm 微孔滤膜 ,即 得。 2. 2. 4 线性范围 精密吸取上述混合对照品溶液 1, 5, 10, 15, 20μL进样分析 ,以进样量对峰面积积分值进行回归处 理 ,得 mutongsaponin B , saponin PJ1 , mutongsaponin C回归方程 分别为 : Y = 548 105C - 3 778 ( r = 0. 999 7) , Y = 285 281C 2 822 ( r = 0. 999 9) , Y = 252 842C - 513 ( r = 0. 999 8) 。三者
[关键词 ] 一测多评 ; HPLC;木通 ;校正因子 [中图分类号 ] R 284. 1 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 100125302 (2006) 2321925205
中药质量控制和评价是中药现代化的瓶颈 ,中药多成分 的复杂性决定了单一成分或指标评价难以表达中药的质量 , 并由此提出多成分质量控制的模式 ; 多指标的质量评价模 式 ,必需有足够量的化学对照品 ,由于中药化学对照品分离 难度大或单体不稳定难以供应或供应价格高等因素 ,致使对 照品的供应和使用力不从心 。鉴于目前单成分质量控制尚 缺乏对照品供应 ,更不用说多指标成分的质量控制模式 ,该 模式也仅限于科研 ,难以应用到实际质量监督和评价中 。故 有人提出增加指纹图谱进行质量控制的模式 ,但指纹图谱的 模糊性特点决定了其在实际生产 、监督中应用的难度和“难 以说清楚 ”的局面 。
梯度洗脱程序见表 1, 流速 110 mL ·m in - 1 , 柱温 30 ℃,
检测波长 210 nm。上 述 色 谱 条 件 下 , 各 组 分 分 离 度 良 好
(图 2) 。
表 1 流动相梯度洗脱程序
t /m in 0
40
A /% 35 15
B /% 5
25
C/% 60 60
图 2 对照品及药材的 HPLC图 A. 对照品 ; B. 样品 ;
式中 Ak为内标物峰面积 , W k为内标物浓度 。Am 为其他
组分 m 峰面积 ; Wm为其他组分 m 浓度 。
2. 2 一测多评方法学 [7 ]考察
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱 A lltima C18 ( 416 mm ×250 mm , 5μm ) , 流动相甲醇 (A ) 2乙腈 (B ) 2011%磷酸水 ( C) ,