DPPH自由基SOP

主要目的：

——为了测定样品清除DPPH自由基的能力。

主要原理：

——自由基清除剂与DPPH单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用酶标仪进行快速的定量分析。

实验室签章

一、试剂

——1 ,1-二苯基-1-苦味肼基自由基（DPPH）——甲醇（分析纯）

二、仪器设备

——96孔酶标板

——UV-Vis可见多功能酶标仪

——移液枪

——200 µL量程枪头

三、实验方法

◆前期准备

配置2 g/L 的DPPH甲醇标准溶液。

◆DPPH自由基清除能力

参照Brand-Williams (1995)[1]报道的方法，将其稍加改动后应用在96孔酶标板中[2]。在酶标板的每孔中，依次加入不同体积（10、20、30、40、50、60、70、80、90和100 µL）的样品溶液和200 μL的DPPH标准溶液（2 g/L），最后用甲醇溶液补齐至总体积300 µL。

室温反应30 min后，于515 nm下用UV-Vis可见多功能酶标仪测定其吸光度（EL 340, Bio-Tek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA）。番茄样品消除自由基的能力表示为EC50（清除1 µg DDPH至50 %所需的样品用量（µg干重））。

EC50越小，表示抗氧化活性越高。平行测定三次，取平均值计算。

清除DPPH自由基能力用如下公式计算：

清除率%=（1-

Ac Aj

Ai

）×100%

其中：Ai为样品溶液加DPPH试剂混合液的吸光度，Aj为样品溶液加甲醇的吸光度，Ac为DPPH溶液加样品溶剂的吸光度。

[1] Brand-Williams W, Cuvelier M E. Berset C. Use of a free radical method to evaluate

antioxidant activity [J]. LWT - Food Science and Technology, 1995, 28(1): 25-30.

[2] Verma A R, Vijayakumar M, Rao C V. Mathela C S. In vitro and in vivo antioxidant properties

and DNA damage protective activity of green fruit of Ficus glomerata [J]. Food and Chemical Toxicology, 2010, 48(2): 704-709.