特种实验动物
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
45
3、代谢疾病转基因动物模型 （1）高歇氏病转基因动物模型 （2）家族性神经多发性淀粉样变 （FAP）转基因小鼠 （二）基因治疗的动物模型： 将外源生长激素基因导入“侏儒 症”小鼠——个头增大3倍，恢复生育 能力。
46
左侧为转移了大鼠生长激素基因的小鼠 1982年，Richard Palmiter 和 Ralph Brinster 领导 的一个小组将一个能够被锌调控的DNA元件与大鼠的生长激 素基因连在一起，并将其注射到了受精了的小鼠胚胎中， 从而培育出了世界上第一批转基因小鼠。这些转基因小鼠 长期取食含有足量锌的食物后，就会长得非常大。转基因 小鼠的出现掀起了遗传学研究的新的浪潮。
第八章 特种实验动物
杜小燕（Ph.D） email： duduyan@ccmu.edu.cn
1
第一节 免疫缺陷动物
一、概念 1962年，苏格兰医师Issacson等发现无胸 腺裸小鼠。 1969 年， Rygaard 首次成功将人类 恶性肿瘤移植于裸小鼠体内。 免疫缺陷动物(immunodeficient animal)是 指由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或 多种免疫系统组成成分缺陷的动物。
9
第二节 转 基 因 动 物
10
1982年，Richard Palmiter 和 Ralph Brinster 领导的研究 小组将大鼠的生长激素基因，显微注射到小鼠胚胎中，从而培 育出了世界上第一批转基因小鼠。
•Gordon（1980）等采用原核显微注 射法获得了第一例转基因小鼠。 •Palmiter（1982）等采用显微注射法 将带有小鼠mMt启动子的大鼠生长激 素基因注入小鼠的受精卵中，获得 “超级小鼠”，引起巨大轰动。
30
中国科学院上海实验动物中心
31
转基因荧光兔
转基因荧光鱼
32
（Chan AWS, et al. Science 2001; 291:309-312）绿色荧光蛋白（GFP）基因 猴的组织被证明含有绿色荧光蛋白质的转基因表达，“安迪” 于２０００年１ 33 ０月２日诞生
“安迪”与其妈妈
34
35
8
五、严重联合免疫缺陷小鼠 SCID 小 鼠 （ severe combined immunodeficient mice）在1983年由 美国学者 Bosma首先发现于 C.B-17近 交系小鼠，是位于第 16 号染色体的称 之为 scid 的单个隐性突变基因所导致。 SCID 小鼠在高度洁净的 SPF 条件下存 活1年左右.
49
基因敲除动物的建立 在体外先构建一个打靶载体，这个载体上含有一 段与欲敲除的基因具有高度同源性外源基因，在 外源基因中插入一带有启动子的选择标记基因， 把这个含有修饰后外源基因的载体利用转染的方 法导入ES 细胞中，这样导入细胞中的外源基因就 有机会与染色体上的靶基因发生同源重组，把修 饰的外源基因置换到ES细胞中，通过筛选标记基 因而检出发生同源重组的ES 细胞并在体外扩增， 将此ES细胞注入供体囊胚，再将带有此ES细胞的 囊胚胎移植到假孕鼠的子宫内，发育成一个嵌合 体，经过进一步杂交传代的方法，使外源基因纯 合，即建立成基因敲除动物。
14
7、我国1980年代开始转基因动物 研究，成功研制出转基因牛、小 鼠、猪、羊、兔、金鱼。
15
二、转基因动物的概念
通过基因工程对DNA进行体外操作，添 加或删除一个特殊的DNA序列，然后导入早期 的胚胎细胞，所产生遗传结构得以修饰的动物， 其改变的性状可以遗传给后代。这些“New Animal”统称为转基因动物。
47
基因敲除动物
一、概述 是指对一个结构已知但功能未知的基因， 从分子水平上设计实验，将该基因去除 （knock out），或用其它顺序相近基因 取代，然后从整体观察实验动物，推测 相应基因的功能。
48
1987年，Martin Evans，Oliver Smithies 和 Mario Capecch 领导的几个研究小组对胚胎干细胞中特定目 标基因进行失活，培育出了第一只基因敲除小鼠。这 三位科学家因为这项工作在2001获得了Lasker奖。接 下来，科学家们用同样的技术又培育出了几千只基因 敲除小鼠。
6
三、性连锁免疫缺陷小鼠
(X-linked immune deficiency mouse XID) 起源于CBA/N品系。B细胞功能缺陷，基因 符号xid，位于X性染色体上。纯合子雌鼠 （xid/xid）和杂合子雄鼠（xid/Y）对非胸 腺依赖性Ⅱ型抗原没有体液免疫反应，是研 究B淋巴细胞的发生、功能与异质性理想动 物。
12
一、转基因动物的研究历史
1、1960年代，将外源基因导入鸡的卵 巢和睾丸，得到性状改变的鸡，估 计是转基因鸡。 2、1974年，美国珍尼斯首次用显微注 射法获得体细胞有SV40病毒DNA的小 鼠。 3、1980年，戈登完善了显微注射技术。
13
4、1982年，帕尔米特将大鼠生长激素基因 结构区融合在SM（金属巯蛋白基因（MT） 启动子）中，注射到小鼠受精卵雄性原 核内，获得体型似大鼠的转基因小鼠。 5、1985年，英国拉尔夫布林斯特研制出能 生成人类生长激素的转基因猪。 6、1989年，意大利拉维特拉纳运用精子载 体法转移外源性DNA，获得PSV2—CAT转 基因小鼠。
7
四、Beige小鼠 为NK细胞活性缺陷的突变系小鼠，bg 是隐性突变基因，位于第13号染色体上。 纯合的小鼠（bg/bg），表型特征与人的齐 -希二氏综合征（Chediak-Higashi syndrome）相似。由于溶酶体功能缺陷， bg对各种病原因子较敏感。在SPF环境中 才能较好地生存。采用纯合子繁殖。
体外表无毛，无胸腺。不能使T细胞正常分 化，细胞免疫力低下。B细胞功能基本正常， 成年裸小鼠（6~8周龄）较普通鼠有较高水平 的NK细胞 活性，但幼鼠（3~4周龄）的NK细 胞活性低下，裸小鼠粒细胞数比普通小鼠低。
4
应用： （一）在微生物学方面 感染麻风杆菌裸小鼠的病理组织学特征与人的结 节性麻风非常相似。 （二）在免疫学方面 有人用BALB/c品系的裸小鼠制备单克隆抗体。 （三）在寄生虫学方面 胸腔内接种卡氏肺囊虫，能成功复制出卡氏肺囊 虫疾病模型。 （四）在遗传学方面 裸小鼠因遗传背景的不同，所表现的细胞免疫反应 和实验室检查指标也不同。
25
四、转基因动物的进展
美国佛罗里达州立大学戴碧· 法多 尔领导的研究小组培育出一种具 有超凡嗅觉能力的转基因实验鼠。
广空458医院转基因工程研究 室的传肝炎小鼠
27
美国密苏里大学通过克隆技术培育了4只 含有水母荧光转基因猪
28
日本转基因猪
英国转基因猪
29
黄禹锡教授正在为刚刚出 生的转基因克隆猪打针
例如:C57BL/6J-TgN（CD8Ge）23Jwg 是来源于美国杰克逊研究所（J）的C57BL/6品系小 鼠被转入人的CD8基因组（Ge）；转基因在 JonW.Gordon(Jwg)实验室完成，获取于一系列显 微注射后得到的序号为23的小鼠。 根据转基因动物命名的原则，如果转基因动物的遗 传背景是由不同的近交系或远交群之间混合而成时， 则该转基因符号应不使用动物品系或种群的名称。 转基因符号可以缩写，即去掉插入片断标示部份， 例如TgN（GPDHIm）1Bir 可缩写为TgN 1 Bir 。 一般在文章中第一次出现时使用全称，以后再出现 时可使用缩写名称。
50
第三节 克隆动物
一、克隆动物的概念 cloning animal —— 动物通过体细胞进行的无性生殖（也 称无性繁殖）以及由无性生殖形成的基因 型几乎完全相同的后代个体组成的群体。 世界卫生组织在关于克隆的非正式声 明中定义为： 遗传上同一的机体或细胞系（株）的 无性生殖。
2
二、 免疫缺陷动物的分类
从单一的T淋巴细胞免疫缺陷到几种 免疫细胞联合缺陷动物；从自发突变的 先天性免疫缺陷到后天获得性免疫缺陷。
3
三 常用免疫缺陷动物的生物学特征
一、裸小鼠 指先天性无胸腺无毛的裸体小鼠(Nude mice)。导致这种异常状态的裸基因(nu)是一个 位于11号染色体上隐性突变基因。纯合裸基因 （nu/nu）小鼠具有典型缺陷特征：
16
（二）转基因动物命名 转基因的命名遵循以下原则： 符号：一个转基因符号由以下三部分组成，均以罗 马字体表示： TgX （YYYYYY）# # # # # Zzz， 其中各部分符号表示含意为： TgX = 方式（mode） （ YYYYYY） = 插入片段标示（ insert designation ） # # # # # = 实验室指定序号 （laboratoryassigned number）及 Zzz = 实验室注册代号(laboratory code)
三、制备转基因动物的方法
卵 Zygote
受精卵 2-细胞胚 Fertilized zgote 2-cell stage
4-细胞胚 4-cell stage
桑葚胚 Morula
早期囊胚 Blastocyte
精子载体导入法
显微注射法
逆转录病毒法
胚胎干细胞法
显微注射产生转基因小鼠
×
超数排卵母鼠 鼠 受精卵 外源基因已 注入受精卵 雄性原核 向假孕母鼠人 工植入受精卵 假孕母鼠 PCR/Southern-blot RT-PCR/Western-blot/ Immunohistochemistry 公
39
图中上侧为转基因鱼
40
台湾 北京华大
41
42
中国农业大学、西北农业科技大学等单位成功地培育出体细胞克隆牛
43
我国首批转基因克隆牛的再 克隆体在梁山降生，共出生 五头，存活三头，分别取名 为福欢娃、福迎娃和福圣娃
44
六、转基因疾病动物模型与基因治疗 动物模型
（一）转基因疾病动物模型： 1、病毒性疾病模型： （1）小儿麻痹病毒受体转基因小鼠 （2）乙型肝炎病毒携带者模型 （3）乙型肝炎表面抗原转基因动物 模型 2、肿瘤转基因动物模型
23
（三）胚胎干细胞法 （1）获取胚胎干细胞（ES细胞）； （2）将外源基因导入ES细胞； （3）获取囊胚期胚胎； （4）将含有外源基因的ES细胞注入 囊胚期胚胎的腔内； （5）将其移植到假孕动物子宫。
24
（四）电脉冲法 利用外界高电压短脉冲使细 胞膜产生可逆性穿孔，外源性 DNA通过此孔可进入细胞。 （五）精子载体导入法 以精子作为外源性DNA的载 体，通过受精作用将外源性DNA 导入受精卵。
5
二、裸大鼠
裸大鼠(Nude rat)，在1953年由英国 Rowett首先发现，基因符号为rnu。纯合子裸 大鼠（rnu/rnu）具有与裸小鼠基本相似的特征， 能接受人类正常组织和肿瘤的异种移植，体型 大可为常规血液学和血清生物化学分析实验提 供足够的血样，也可为各种研究提供足够的瘤 组织。易于进行外科手术，为各部位保瘤移植 和肿瘤供血研究提供了方便。
37
3、遗传病研究： 导入遗传疾病外源基因，制作遗 传疾病转基因动物模型；导入正常基 因，弥补基因缺陷所致遗传疾病。 4、免疫学研究： 用转基因HBsAG小鼠模型研究免疫 耐受性的问题。
38
（三）改良和培育动物新品种： 使用重组DNA的转基因技术，培育 出生长快、产肉、产毛、产奶更多而耗 料极少的转基因家畜。 （四）研制和生产生物活性物质： 将具有医学价值的生物活性物质 （如组织型纤溶蛋白元激活因子，tPA） 导入家畜或家禽的受精卵，从转基因 动物的体液如乳汁、血液、尿液、腹 水中收获基因产物。
五、转基因动物的应用： （一）生命现象的基础理论研究： 1、发育生物学研究： 通过了解基因的表达、关闭和调 控，了解调控顺序。 2、遗传学研究 观察导入的突变基因的表达，了 解基因结构与功能的关系，还可用于 基因组印迹分析、遗传缺陷的矫正等.
36
（二）医学研究： 1、心血管疾病研究： 将转脂蛋白和转纤维蛋白溶酶 原等作为外源DNA转入动物体内， 建立心血管疾病转基因动物模型。 2、肿瘤学研究： 肿瘤基因—— 肿瘤转基因动物模型。
×
结扎输精管的公鼠 母 鼠
怀孕母鼠
可能带有外源基因片段的小鼠
显微操作步骤
取卵
安乐死
注 射
移 植
麻醉 拉针器 锻针器
体视镜
体视镜 释放卵
显微注射
把卵吹入 输卵管
酶处理
（持卵针）
（穿刺针）
体视显微镜
倒置显微镜
显微操作系统
22
Leabharlann Baidu
（二）反转录病毒感染法 将外源基因DNA插入逆转录病 毒载体；通过辅助细胞包装成病毒 颗粒，感染胚胎；再将感染的桑 椹期胚胎导入子宫。
3、代谢疾病转基因动物模型 （1）高歇氏病转基因动物模型 （2）家族性神经多发性淀粉样变 （FAP）转基因小鼠 （二）基因治疗的动物模型： 将外源生长激素基因导入“侏儒 症”小鼠——个头增大3倍，恢复生育 能力。
46
左侧为转移了大鼠生长激素基因的小鼠 1982年，Richard Palmiter 和 Ralph Brinster 领导 的一个小组将一个能够被锌调控的DNA元件与大鼠的生长激 素基因连在一起，并将其注射到了受精了的小鼠胚胎中， 从而培育出了世界上第一批转基因小鼠。这些转基因小鼠 长期取食含有足量锌的食物后，就会长得非常大。转基因 小鼠的出现掀起了遗传学研究的新的浪潮。
第八章 特种实验动物
杜小燕（Ph.D） email： duduyan@ccmu.edu.cn
1
第一节 免疫缺陷动物
一、概念 1962年，苏格兰医师Issacson等发现无胸 腺裸小鼠。 1969 年， Rygaard 首次成功将人类 恶性肿瘤移植于裸小鼠体内。 免疫缺陷动物(immunodeficient animal)是 指由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或 多种免疫系统组成成分缺陷的动物。
9
第二节 转 基 因 动 物
10
1982年，Richard Palmiter 和 Ralph Brinster 领导的研究 小组将大鼠的生长激素基因，显微注射到小鼠胚胎中，从而培 育出了世界上第一批转基因小鼠。
•Gordon（1980）等采用原核显微注 射法获得了第一例转基因小鼠。 •Palmiter（1982）等采用显微注射法 将带有小鼠mMt启动子的大鼠生长激 素基因注入小鼠的受精卵中，获得 “超级小鼠”，引起巨大轰动。
30
中国科学院上海实验动物中心
31
转基因荧光兔
转基因荧光鱼
32
（Chan AWS, et al. Science 2001; 291:309-312）绿色荧光蛋白（GFP）基因 猴的组织被证明含有绿色荧光蛋白质的转基因表达，“安迪” 于２０００年１ 33 ０月２日诞生
“安迪”与其妈妈
34
35
8
五、严重联合免疫缺陷小鼠 SCID 小 鼠 （ severe combined immunodeficient mice）在1983年由 美国学者 Bosma首先发现于 C.B-17近 交系小鼠，是位于第 16 号染色体的称 之为 scid 的单个隐性突变基因所导致。 SCID 小鼠在高度洁净的 SPF 条件下存 活1年左右.
49
基因敲除动物的建立 在体外先构建一个打靶载体，这个载体上含有一 段与欲敲除的基因具有高度同源性外源基因，在 外源基因中插入一带有启动子的选择标记基因， 把这个含有修饰后外源基因的载体利用转染的方 法导入ES 细胞中，这样导入细胞中的外源基因就 有机会与染色体上的靶基因发生同源重组，把修 饰的外源基因置换到ES细胞中，通过筛选标记基 因而检出发生同源重组的ES 细胞并在体外扩增， 将此ES细胞注入供体囊胚，再将带有此ES细胞的 囊胚胎移植到假孕鼠的子宫内，发育成一个嵌合 体，经过进一步杂交传代的方法，使外源基因纯 合，即建立成基因敲除动物。
14
7、我国1980年代开始转基因动物 研究，成功研制出转基因牛、小 鼠、猪、羊、兔、金鱼。
15
二、转基因动物的概念
通过基因工程对DNA进行体外操作，添 加或删除一个特殊的DNA序列，然后导入早期 的胚胎细胞，所产生遗传结构得以修饰的动物， 其改变的性状可以遗传给后代。这些“New Animal”统称为转基因动物。
47
基因敲除动物
一、概述 是指对一个结构已知但功能未知的基因， 从分子水平上设计实验，将该基因去除 （knock out），或用其它顺序相近基因 取代，然后从整体观察实验动物，推测 相应基因的功能。
48
1987年，Martin Evans，Oliver Smithies 和 Mario Capecch 领导的几个研究小组对胚胎干细胞中特定目 标基因进行失活，培育出了第一只基因敲除小鼠。这 三位科学家因为这项工作在2001获得了Lasker奖。接 下来，科学家们用同样的技术又培育出了几千只基因 敲除小鼠。
6
三、性连锁免疫缺陷小鼠
(X-linked immune deficiency mouse XID) 起源于CBA/N品系。B细胞功能缺陷，基因 符号xid，位于X性染色体上。纯合子雌鼠 （xid/xid）和杂合子雄鼠（xid/Y）对非胸 腺依赖性Ⅱ型抗原没有体液免疫反应，是研 究B淋巴细胞的发生、功能与异质性理想动 物。
12
一、转基因动物的研究历史
1、1960年代，将外源基因导入鸡的卵 巢和睾丸，得到性状改变的鸡，估 计是转基因鸡。 2、1974年，美国珍尼斯首次用显微注 射法获得体细胞有SV40病毒DNA的小 鼠。 3、1980年，戈登完善了显微注射技术。
13
4、1982年，帕尔米特将大鼠生长激素基因 结构区融合在SM（金属巯蛋白基因（MT） 启动子）中，注射到小鼠受精卵雄性原 核内，获得体型似大鼠的转基因小鼠。 5、1985年，英国拉尔夫布林斯特研制出能 生成人类生长激素的转基因猪。 6、1989年，意大利拉维特拉纳运用精子载 体法转移外源性DNA，获得PSV2—CAT转 基因小鼠。
7
四、Beige小鼠 为NK细胞活性缺陷的突变系小鼠，bg 是隐性突变基因，位于第13号染色体上。 纯合的小鼠（bg/bg），表型特征与人的齐 -希二氏综合征（Chediak-Higashi syndrome）相似。由于溶酶体功能缺陷， bg对各种病原因子较敏感。在SPF环境中 才能较好地生存。采用纯合子繁殖。
体外表无毛，无胸腺。不能使T细胞正常分 化，细胞免疫力低下。B细胞功能基本正常， 成年裸小鼠（6~8周龄）较普通鼠有较高水平 的NK细胞 活性，但幼鼠（3~4周龄）的NK细 胞活性低下，裸小鼠粒细胞数比普通小鼠低。
4
应用： （一）在微生物学方面 感染麻风杆菌裸小鼠的病理组织学特征与人的结 节性麻风非常相似。 （二）在免疫学方面 有人用BALB/c品系的裸小鼠制备单克隆抗体。 （三）在寄生虫学方面 胸腔内接种卡氏肺囊虫，能成功复制出卡氏肺囊 虫疾病模型。 （四）在遗传学方面 裸小鼠因遗传背景的不同，所表现的细胞免疫反应 和实验室检查指标也不同。
25
四、转基因动物的进展
美国佛罗里达州立大学戴碧· 法多 尔领导的研究小组培育出一种具 有超凡嗅觉能力的转基因实验鼠。
广空458医院转基因工程研究 室的传肝炎小鼠
27
美国密苏里大学通过克隆技术培育了4只 含有水母荧光转基因猪
28
日本转基因猪
英国转基因猪
29
黄禹锡教授正在为刚刚出 生的转基因克隆猪打针
例如:C57BL/6J-TgN（CD8Ge）23Jwg 是来源于美国杰克逊研究所（J）的C57BL/6品系小 鼠被转入人的CD8基因组（Ge）；转基因在 JonW.Gordon(Jwg)实验室完成，获取于一系列显 微注射后得到的序号为23的小鼠。 根据转基因动物命名的原则，如果转基因动物的遗 传背景是由不同的近交系或远交群之间混合而成时， 则该转基因符号应不使用动物品系或种群的名称。 转基因符号可以缩写，即去掉插入片断标示部份， 例如TgN（GPDHIm）1Bir 可缩写为TgN 1 Bir 。 一般在文章中第一次出现时使用全称，以后再出现 时可使用缩写名称。
50
第三节 克隆动物
一、克隆动物的概念 cloning animal —— 动物通过体细胞进行的无性生殖（也 称无性繁殖）以及由无性生殖形成的基因 型几乎完全相同的后代个体组成的群体。 世界卫生组织在关于克隆的非正式声 明中定义为： 遗传上同一的机体或细胞系（株）的 无性生殖。
2
二、 免疫缺陷动物的分类
从单一的T淋巴细胞免疫缺陷到几种 免疫细胞联合缺陷动物；从自发突变的 先天性免疫缺陷到后天获得性免疫缺陷。
3
三 常用免疫缺陷动物的生物学特征
一、裸小鼠 指先天性无胸腺无毛的裸体小鼠(Nude mice)。导致这种异常状态的裸基因(nu)是一个 位于11号染色体上隐性突变基因。纯合裸基因 （nu/nu）小鼠具有典型缺陷特征：
16
（二）转基因动物命名 转基因的命名遵循以下原则： 符号：一个转基因符号由以下三部分组成，均以罗 马字体表示： TgX （YYYYYY）# # # # # Zzz， 其中各部分符号表示含意为： TgX = 方式（mode） （ YYYYYY） = 插入片段标示（ insert designation ） # # # # # = 实验室指定序号 （laboratoryassigned number）及 Zzz = 实验室注册代号(laboratory code)
三、制备转基因动物的方法
卵 Zygote
受精卵 2-细胞胚 Fertilized zgote 2-cell stage
4-细胞胚 4-cell stage
桑葚胚 Morula
早期囊胚 Blastocyte
精子载体导入法
显微注射法
逆转录病毒法
胚胎干细胞法
显微注射产生转基因小鼠
×
超数排卵母鼠 鼠 受精卵 外源基因已 注入受精卵 雄性原核 向假孕母鼠人 工植入受精卵 假孕母鼠 PCR/Southern-blot RT-PCR/Western-blot/ Immunohistochemistry 公
39
图中上侧为转基因鱼
40
台湾 北京华大
41
42
中国农业大学、西北农业科技大学等单位成功地培育出体细胞克隆牛
43
我国首批转基因克隆牛的再 克隆体在梁山降生，共出生 五头，存活三头，分别取名 为福欢娃、福迎娃和福圣娃
44
六、转基因疾病动物模型与基因治疗 动物模型
（一）转基因疾病动物模型： 1、病毒性疾病模型： （1）小儿麻痹病毒受体转基因小鼠 （2）乙型肝炎病毒携带者模型 （3）乙型肝炎表面抗原转基因动物 模型 2、肿瘤转基因动物模型
23
（三）胚胎干细胞法 （1）获取胚胎干细胞（ES细胞）； （2）将外源基因导入ES细胞； （3）获取囊胚期胚胎； （4）将含有外源基因的ES细胞注入 囊胚期胚胎的腔内； （5）将其移植到假孕动物子宫。
24
（四）电脉冲法 利用外界高电压短脉冲使细 胞膜产生可逆性穿孔，外源性 DNA通过此孔可进入细胞。 （五）精子载体导入法 以精子作为外源性DNA的载 体，通过受精作用将外源性DNA 导入受精卵。
5
二、裸大鼠
裸大鼠(Nude rat)，在1953年由英国 Rowett首先发现，基因符号为rnu。纯合子裸 大鼠（rnu/rnu）具有与裸小鼠基本相似的特征， 能接受人类正常组织和肿瘤的异种移植，体型 大可为常规血液学和血清生物化学分析实验提 供足够的血样，也可为各种研究提供足够的瘤 组织。易于进行外科手术，为各部位保瘤移植 和肿瘤供血研究提供了方便。
37
3、遗传病研究： 导入遗传疾病外源基因，制作遗 传疾病转基因动物模型；导入正常基 因，弥补基因缺陷所致遗传疾病。 4、免疫学研究： 用转基因HBsAG小鼠模型研究免疫 耐受性的问题。
38
（三）改良和培育动物新品种： 使用重组DNA的转基因技术，培育 出生长快、产肉、产毛、产奶更多而耗 料极少的转基因家畜。 （四）研制和生产生物活性物质： 将具有医学价值的生物活性物质 （如组织型纤溶蛋白元激活因子，tPA） 导入家畜或家禽的受精卵，从转基因 动物的体液如乳汁、血液、尿液、腹 水中收获基因产物。
五、转基因动物的应用： （一）生命现象的基础理论研究： 1、发育生物学研究： 通过了解基因的表达、关闭和调 控，了解调控顺序。 2、遗传学研究 观察导入的突变基因的表达，了 解基因结构与功能的关系，还可用于 基因组印迹分析、遗传缺陷的矫正等.
36
（二）医学研究： 1、心血管疾病研究： 将转脂蛋白和转纤维蛋白溶酶 原等作为外源DNA转入动物体内， 建立心血管疾病转基因动物模型。 2、肿瘤学研究： 肿瘤基因—— 肿瘤转基因动物模型。
×
结扎输精管的公鼠 母 鼠
怀孕母鼠
可能带有外源基因片段的小鼠
显微操作步骤
取卵
安乐死
注 射
移 植
麻醉 拉针器 锻针器
体视镜
体视镜 释放卵
显微注射
把卵吹入 输卵管
酶处理
（持卵针）
（穿刺针）
体视显微镜
倒置显微镜
显微操作系统
22
Leabharlann Baidu
（二）反转录病毒感染法 将外源基因DNA插入逆转录病 毒载体；通过辅助细胞包装成病毒 颗粒，感染胚胎；再将感染的桑 椹期胚胎导入子宫。