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分光光度法测定治疗骨质疏松症的药物

伊尔哈姆和法耶克

国家药物管制和研究组织（NODCAR）.2003年7月24日.6.阿布哈齐姆ST，埃及，开罗，金字塔，邮政信箱29号专栏.2003年8月30日。

分光光度法用于治疗骨质疏松症的新药物：利塞膦酸钠（I），阿仑膦酸钠（II）和依替膦酸二钠（III）的开发，此方法简单，准确，灵敏。第一种方法是基于测量的吸光度的差异（△A）的上升，利塞膦酸钠在0.01mol/L的盐酸溶液和0.1mol/L的氢氧化钠中反应，在波长262 nm处测得，，平均恢复系数为99.75±1.22、摩尔吸光系数（ε）为1.891×103。浓度范围在15-150μg/ml内服从Beer定律。第二种方法是阿仑膦酸钠浓度为0.05mol/L，在甲醇介质中与茚三酮试剂（II）的伯氨基碳酸氢钠中和反应。有色产物测量波长为568 nm，线性范围是3.75-45μg/ml、平均回收率为99.77±0.73和ε= 9.425×103。第三种方法是基于在氧化过程中提到的三个药物与硝酸铈（Ⅳ）在0.5 mol/L的硫酸中在室温和后续计量过量的未反应的铈（Ⅳ）在波长320 nm处的干燥。三种药物平均回收率为99.79±1.16、99.73 ±1.38、99.86±1.13摩尔吸光系数ε14.427 ×103、13.813×103和14.000×103。药物I，II，III在浓度范围为2-24μg/m内服从比尔定律。分别所提出的三种方法成功地应用散装粉末药物和药物制剂的测定。结果发现，获得了的结果在所报道的方法在统计学上吻合。此外，该方法进行了验证根据药典规定，通过运用标准品添加技术也进行了评估。

关键词利塞膦酸钠阿仑膦酸钠依替膦酸钠吸光度差异（△A）茚三酮试剂

铈（IV）硫酸

利塞膦酸钠（I）为三氢钠（1- 羟基-2-（3-吡啶基）亚乙基）二膦酸，阿仑膦酸钠（II），和三氢钠（4 - 氨基-1 - 羟）二膦酸酯（III）的三水合物，依替膦酸二钠为磷酸二氢二钠（1- 羟基亚乙基）二膦酸盐，它们的结构如图.1所示。它们都属于双膦酸盐组，用于佩吉特氏病骨和骨质疏松症的治疗，减少骨质流失。

已经报道了一些方法用于（I）的研究，（I）是一个非官方的药物，。对于（II）中，已有色谱光度法,3-5）,电感耦合6-12），毛细管电13）和plasma14）的研究报道。

对于（Ⅲ），USP描述了一个单调乏味的滴定法测定15）试剂配制需要一个星期甚至更多时间，分光光度法已开发了TODATE，一些离子色谱法8,16,17）已经出版。

本文表明一种直接和简单分光光度法用于差异吸光度（△A）法[1]的测定。方法[2]是使用茚三酮试剂。方法[3]是根据测定（Ⅰ），（Ⅱ）和（Ⅲ）的氧化铈（IV）的硫酸盐，磷酸盐在室温下（25±5℃）。三种方法的优点是准确，简单，成本低。

实验

仪器岛津1601紫外/可见分光光度计1厘米的比赛细胞。

材料与试剂材料与试剂中利塞膦酸钠由埃及Avents有限公司惠赠，纯度为100.03％18），连同Actonel的片，贴上标签，含有35mg的利塞膦酸钠。阿仑膦酸钠从NODCAR收到，纯度为99.71％18）和福善美被打成片剂（全球埃及那匹有限公司）含有10毫克的ALEN dronic 酸,当量为13.05mg阿仑膦酸钠。依替膦酸钠的DISO介质从NODCAR获得，其纯度为99.83％15）：Hydrochloricacid为0.01mg/L的水溶液。氢氧化钠为0.01mg/L水溶液。茚三酮在0.2％的甲醇中的，2到4℃下保存，碳酸氢钠盐为0.05mg/L水溶液。0.1％的硫酸高铈浓度为

0.5mg/L在深茶色的彩色容器的保存。

标准实验方案

方法[1]（△A）：利塞膦酸钠标准溶液（0.6mg/ml）的制备在蒸馏水中。

方法[2]使用茚三酮：阿仑膦酸钠标准溶液，（0.15mg/ml）在蒸馏水中制备。

方法[3]使用硝酸铈（IV）硫酸：利塞膦酸钠，阿伦dronate钠和依替膦酸二钠标准溶液（80μg/ml），在蒸馏水中制备。

在一个星期内可用于所有标准的方案解决，并储存在4℃下

样品准备四片药或10片，准确称重，并磨成粉，和依替膦酸二钠III合成的混合物。60mg 的I粉状粒，方法[1]，15mg的II，方法[2]和60mg的药物的III，方法[3]。将I，II，III转移到100ml目录的烧瓶中，然后用50ml的蒸馏水溶解，摇动10分钟，过滤。制备最终浓度为0.6mg/ml的方法[1]和0.15mg/ml的方法[2]和80毫mg/ml方法[3]的溶液。

方法[1]△A标准溶液相当于0.15-1.5mg（I）被转移到不同的等分两个系列的10ml体积的烧瓶中。完成与0.01mol/L的盐酸和0.01mol/L的氢氧化钠的反应。以氢氧化钠为空白，在262 nm处测定。

方法[2]使用茚三酮试剂标准储备溶液相当于37.5—450μg（Ⅱ）的不同的等分试样转移到10ml的烧瓶中。0.5ml的碳酸氢钠的溶液中加入2.5ml的水合茚三酮，该混合物在水浴中加热，在90±5℃下20加热分钟。将烧瓶冷却的室温，用蒸馏水稀释至刻度。参比试剂为空白，在568 nm处测定吸光度。

方法[3]使用铈（IV）硫酸被转移到10ml容量瓶中的一系列不同的等分试样，相当于三个引药（I，II，III）20-240mg的标准原液。1.5ml铈硫磷酸盐溶液，静置一小时，在环境温度下（25±5℃）。对每个实验中，测定体积与0.5mol/L硫酸和空白溶液的吸光度（1.5ml硫酸铈与0.5mol/L硫酸）完成。吸光度的差异成比例,假定所提到的三个药物使用的硫酸高铈量相同。

结果与讨论

第二阿仑膦酸钠，依替膦酸二钠III。如图.1所示。没有生色团和没有吸收整个紫外/可见波段的频谱，两种药物可以由普通的直接分光光度法测定。

方法[1]利塞膦酸钠，拥有可观的生色团（图1），吡啶基负责如苯胺在酸性介质中的质子化，而在碱性介质中没有观测到变化。它表现出高于在含水的碱在含水酸中，在262 nm处的紫外吸收。对DA的方法取决于测量利塞膦酸钠溶液中0.01mol/L的HY-drochloric酸，以0.01mol/L氢氧化钠作为空白，如图2所示，在图中作为一个测试药物的等摩尔部分的吸光度的差异。吸光度的差异△A药物的I.Different莫耳浓度（0.01-0.1mol/L）的盐酸和氢氧化钠的浓度成比例进行了研究，没有观察到吸光度的差异，所以0.01mol/L的解决方案，达到环境的安全的要求。A（1％，1cm）上升利塞膦酸钠在262 nm处进行了计算，并发现在波长152nm在含水酸中和91nm在含水的碱中，可用于直接估计。

方法[2]使用茚三酮阿仑膦包含一个主脂族氨基，这是众所周知的反应，与茚三酮试剂。这种试剂用于测定伯胺和氨基19，20）第二药物反应，与茚三酮在碳酸氢钠的存在下通过氧化