脂质体制备方法

微脂体(又称脂质体)及其制备方法一二

微脂体(又称脂质体)

微脂体起源于1960 年代中期，Bangham博士等人首先提出，在磷酸脂薄膜上加入含盐分的水溶液后，再加以摇晃，会使脂质形成具有通透性的小球；1968年，Sessa 和Weissmann 等人正式将此小球状的物体命名为微脂体（liposome）并做出明确的定义: 指出微脂体是由一到数层脂质双层膜(lipid bilayer) 所组成的微小的囊泡，有自行密合（self-closing）的特性。微脂体由脂双层膜包裹水溶液形成，由于构造的特性，可同时作为厌水性（hydrophobic）及亲水性（hydrop hilic）药品的载体，厌水性药品可以嵌入脂双层中，而亲水性药品则可包覆在微脂体内的水溶液层中。如同细胞膜，微脂体的脂质膜为脂双层构造，由同时具有亲水性端及厌水性端的脂质所构成，脂双层由厌水性端相对向内而亲水性端面向水溶液构成，组成中的两性物质以磷酸脂质最为常见。微脂体的形成是两性物质在水溶液中，依照热力学原理，趋向最稳定的排列方式而自动形成。微脂体的性质深受组成脂质影响，脂质在水溶液的电性，决定微脂体是中性或带有负电荷、正电荷。此外，磷酸脂碳链部分的长短，不饱和键数目，会决定微脂体的临界温度(transition temperature, Tc)，影响膜的紧密度。一般来说，碳链长度越长临界温度越高，双键数越多则临界温度越低，常见的DPPC(dipalmitoylphosphatidylcho line)与DSPC(distearoylphosphatidylcholine)的临界温度分别是42℃与56℃，而Eg g PC(egg phosphatidylcholine)与POPC(palmitoyl oleoyl phosphatidylcholine)的Tc 则低于0℃。临界温度影响微脂体包裹及结合药物的紧密度，当外界温度高于T c时，对膜有通透性的药物，较容易通过膜；此外，当外界温度处于临界温度时，微脂体脂质双层膜中的脂质，会因为流动性不一致而使微脂体表面产生裂缝，造

成内部药物的释出。在磷脂质内加入胆固醇，会对微脂体性质产生下列影响：增加微脂体在血液中的安定性，较不易发生破裂；减少水溶性分子对微脂体脂膜的通透性；增加微脂体的安定性，使其在血液循环中存在的时间较长。

微脂体可依脂双层的层数或是粒子大小，加以命名或分类：

(1) Multilamellar vesicle（MLV）是具有多层脂双层之微脂体，粒子大小介于100-1000 nm，特色是粒子内具多层脂质膜，一般而言，干燥后的脂质薄膜，直接水合后，即形成MLV，体积通常较为庞大，脂质含量较高。MLV 的脂双层数，一般在五层以上；小于五层的MLV 又称为oligo-lamellar liposomes 或pau cilamellar vesicle。

(2) Large Unilamellar Vesicle ( LUV) 则是单层脂双层所构成的微脂体，一般指1000 nm 等级(250-2500 nm 或更大)的微脂体，动物细胞便是一种LUV。(3) Intermediate-sized Unilamellar Vesicle (IUV) 也是单层脂双层所构成的微脂体，一般指100 nm 等级(25-250 nm)的微脂体。不过，目前一般文献已经很少使用IUV，而是将它并入SUV 中。

(4) Small Unilamellar Vesicle (SUV）是单层脂双层所构成的小微脂体，早期的分类指特定磷酸脂所能够成的最小微脂体(一般以超音波震荡制成)。如egg PC 以生理食盐水(normal saline) 水合的SUV 是15 nm；DPPC 则是25 nm。制备微脂体最传统的方法是薄膜摇振法。如今已经发展出非常多种制备微脂体的方法，包括：

1.) 薄膜摇振法（Thin film method; Hand-shaking method）：又称做Bangham’s method，将脂质以有机溶剂如氯仿（chloroform）、甲醇（methanol）及乙醇（e thanol）等溶解，均匀混合后，利用旋转真空干燥机(rotary evaporator) 使圆底瓶

内的溶剂挥发之后，即可在瓶壁上形成均匀的脂质膜，在临界温度以上的温度条件下，将欲包覆物质的水溶液和脂质膜混合，用手左右摇动，将瓶壁上的脂质膜振下来，脂质在水溶液中即会自动形成MLV。

2.) 冷冻-再解冻(freez-thaw)、均质(homogenization)及超音波震荡法（sonication method）：利用微脂体破裂后会再自行密合的特性，以机械性的力量均质或超音波震荡的方式，或者多次冷冻、再解冻的方式，造成微脂体的破裂及重组再密合，最后可形成大小较均匀的单层微脂体。

3.) 反相蒸发法（Reverse phase evaporation method）：以有机溶剂溶解高浓度的脂质，快速混入对于脂质量而言体积极少的药品水溶液，将两者混合均匀后再以旋转真空干燥机使有机溶剂挥发，形成包覆率较高的微脂体。这种方法适合用来包覆较为稀少或是较珍贵的药品及蛋白质。

4.) 有机溶剂注射法(solvent injection)和清洁剂透析法(detergent dialysis)：利用有机溶剂和清洁剂溶解脂质，与准备包覆的水溶液混合形成微脂体后，以透析法除去有机溶剂和清洁剂。

5.) 滤膜挤出法（Extrusion ）：可将上述方法制成的微脂体，改变成所需粒径大小的单层微脂体。MLV或LUV置于挤压器(extruder)中，加热到临界温度以上的温度，以氮气或氩气加压，即能将粒径较大的微脂体挤成接近滤膜孔径大小的微脂体。重复挤压数次后，即可制造出所需粒径大小且粒径分布范围相当窄的微脂体。利用这种方法制成的微脂体可将粒径大小控制到一百奈米以下。

微脂粒在体内之举止，依其本身的型态、粒径、脂质组成、表面电荷及服用者的生理状况、投药部位等而有很大差异。微脂粒于静脉注射后，在血液中至少与两类血浆蛋白发生作用，1）所谓调理素（opsonins)可附着于微脂粒表面，促使