土壤中微生物的分离
实验五 土壤中微生物的分离计数
（四）悬液稀释
无菌操作采用－4，－5，－6 稀释液涂布牛肉膏蛋白 胨平板;每个稀释度2个重复。每人用剩下的1个平板做 划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分离。
10-1 10克 土样
90毫升 无菌水
10-2
10-3
10-4
10-5
(五)平板涂布
Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod.
一、实验目的：
学习微生物稀释平板计数及划线分离技术 二、实验原理: 采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑 制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微
生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法
在固体培养基上形成单个菌落。
依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌
落从而推算样品中含有多少细菌的活菌数目。
简单易行，但易 造成机械损伤
（六）培养：
将平板用报纸包好（每个平板方向一致），
写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱 培养(温度37℃) 。
（七）细菌计数结果
稀释度 平板 10-5 1 2 10-6 度平 均菌落数
土壤中含 细菌数量
四、平皿划线 分离法
特点：快速、方便。 分区划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品）
五、试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周
2.拔下试管塞
4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环
5.接种、划线
六、思考题
(1) 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关 键?为什么?
(2)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而
实验二：土壤中微生物分离与纯化
了解并掌握微生物的生理生化特征， 如营养需求、代谢途径、酶活性等。
微生物纯化
在分离的基础上，进一步通过反复划 线培养或平板克隆培养，获得纯培养 的微生物。
熟悉微生物分离与纯化的实验操作流程
土壤样本采集
选择具有代表性的土壤样本， 采集时要避免污染，并记录采
样点的环境信息。
微生物的纯化
对分离得到的菌落进行纯化， 通过反复划线或平板克隆培养 ，获得纯培养的微生物。
菌落形态观察
观察纯化后的菌落形态，记录菌落 特征。
微生物的保存与鉴定
菌种保存
将纯化的菌株进行冷冻干燥或甘油保 藏，以备后续实验使用。
微生物鉴定
采用形态学、生理生化实验或分子生 物学方法对分离得到的菌株进行鉴定 。
04
CATALOGUE
实验结果与分析
微生物分离与纯化的结果观察
微生物分离
通过划线分离法，成功将土壤中的微生物分离到了培养基上，观察到菌落形态 各养基
根据目标微生物的特性， 选择适合的培养基。
培养
将土壤稀释液涂布或滴加 在培养基上，放入恒温培 养箱中培养。
观察与记录
观察微生物的生长情况， 记录菌落形态、颜色、大 小等特征。
微生物的纯化
挑选单菌落
从培养基上挑选单菌落，采用划 线法或稀释涂布法进行纯化。
纯化培养
将纯化的菌株进行多次划线培养或 传代培养，确保获得纯培养物。
01
微生物纯化的原理是利用微生物的单一特性进行分离，使同一种微生物在培养 基上形成单一菌落。
02
常用的微生物纯化方法包括划线分离法、稀释涂布平板法、显微操作法等。这 些方法可以根据不同微生物的特性选择使用，以获得纯培养。
03
实验十二---土壤中微生物的分离纯化-PPT
三、实验器材
1、土壤样品（自带） 2、培养基：淀粉琼脂培养基（高氏Ⅰ号培养基），牛 肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基。 3、溶液和试剂：10％酚，链霉素，盛9ml无菌水的试 管，盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶。 4、仪器和其他用品：无菌玻璃涂棒，无菌吸管，无菌 培养皿等。
四、操作步骤
五、实验报告
１、将培养后菌落计数结果填入表格（实验教材P34表II-5） ２、你所做的涂布平板法是否较好地得到了单菌落？如果不 是，请分析其原因。 ３、在３种不同的平板上你分离得到那些类群的微生物？简 述它们的菌落形态特征。
六、思考题
1、如何确定平板上单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。 2、如果要分离得到极端嗜盐细菌，在什么地方取样，分离培养基有何 特点？说明理由。 3、怎样判断稀释涂布平板计数数据是否可靠？需要掌握哪几个关键？ 4、为什么高氏Ⅰ号培养基和马丁氏琼脂培养基中要分别加入酚和链霉 素？如果用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基分离一种对青霉素具有抗性的细 菌，你认为应如何做？ 5、某单位希望检测一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2种可行 的检测方法。
2、稀释土样
制备土壤稀释液称取土样10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠 的三角烧瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将菌分散。用 一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液注入盛有9ml无菌水的试管中， 吹吸三次，使充分混匀。然后再用一支1ml无菌吸管从此试管中吸取 1ml注入另一盛有9ml无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、103、10-4、10-5、10-6各种稀释度的土壤溶液。
由于土壤具备了各种微生物生长发育所需要的营养、水分、空气、 酸碱度、渗透压和温度等条件，所以成了微生物生活的良好环境。可以 说，土壤是微生物的“天然培养基”，也是它们的“大本营”因此，土壤是 微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可与从 中分离、纯生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。 因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征 等综合考虑。有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征 （产酸产气情况、染色情况、营养要求、氧气需求、酸碱度、渗透压和温度等） 鉴定方能得到。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过 程称为微生物的分离与纯化。
土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏
——土壤中微生物的分离纯 化、培养观察及保藏
实验流程
土 壤 分样 离品 纯中 化微 生 物 的
细菌 酵母菌 放线菌 霉菌
形态结构观察
生理生化反应
nisin效价测定
生长曲线测定
菌
种
形态观察
保
直接计数
藏
死活细胞鉴定
形态结构观察
土壤中微生物的分离、纯化 和培养
土壤中微生物的分离纯化、培养观察及保藏
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后 者在强碱环境下，被空气中的氧气氧化为二乙酰，二 乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+） 反应。
细菌细胞的生理生化反应
吲哚实验- 1
细菌细胞的生理生化反应
吲哚实验- 2
细菌细胞的生理生化反应
其基本原理是选择适合于微生物生长的培养条件如营养成分酸碱度温度和氧等或加入某种抑制剂在平板上培养微生物当平板上长出单菌落后挑取得到纯种的微生物土壤中微生物的分离纯化培养观察及保藏试剂与器材1材料含大肠杆菌枯草芽孢杆菌乳酸乳球菌黑曲霉根霉青霉和放线菌的土壤样品牛肉膏蛋白胨培养基斜面液体半固体马丁氏培养基查氏培养基等2试剂10酚4水琼脂3器材盛9ml无菌水的试管盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶涂布器无菌吸管接种环酒精灯无菌培养皿显微镜细胞计数板等
细菌的革兰氏染色
试剂与器材
1、材料
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。
2、试剂
结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红等。
3、器材
显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、双层瓶（内 装香柏油及二甲苯）、擦镜纸、生理盐水等。
Procedures of Gram Staining
如何从土壤中分离出微生物
如何从土壤（污水）中分离出微生物把污水加蒸馏水分别稀释10，100，1000倍，然后加入培养基中培养，如果培养出来菌落重合，菌非常多，无法分离，就加大稀释倍数，直至获得清晰可分离的菌落，有时甚至是非常小的菌落，要用倒置显微镜操作。
而培养基则根据要分离的菌的营养类型进行配置，若要获得多种微生物就要配置多种培养基进行如上操作。
对于土壤加水溶解，对溶解液进行如上操作，不溶的部分就不用管了1.取以少许土壤（一地表以下10cm处为宜）与适量无菌水混匀备用2.做浸出液的梯度稀释3 .涂平板4.划线分离5.接平板，接斜面6.检测从土壤中分离微生物环境工程（1）班一、试验目的1..学会土壤微生物的检测方法，了解土壤中微生物的数量和组成。
2初步掌握从土壤中分离细菌的基本技术。
二、实验原理土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件．所以土壤中微生物的数量和种类都很多。
它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。
此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。
因此，查明土壤中微生物的数量和组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。
三、实验器材(—)培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）高氏一号琼脂培养基（培养放线菌）查氏培养基（培养霉菌）(二)灭菌稀释水、灭菌吸管、灭菌培养皿。
(三)土壤样品、天平、称旦纸。
（四）恒温箱、气体流量计四、试验程序1、倒平板将培养基加热融化，待冷至55—60℃时，混合均匀后倒平板；2、制备土壤稀释液准确称取土样10g，加入装有90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡约20min，使土样与水充分混匀，将细胞分散。
用一支无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、等一系列稀释菌液3、涂布将无菌平板编上10-4、10-5、10-6号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-6稀释液各1ml放入编号10-6的3个平板中，同法吸取10-5稀释液各lml放入编号10-5的3个平板中，再吸取10-4稀释液各lml放入编号10-4的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。
分离土壤中微生物的方法
分离土壤中微生物的方法
《分离土壤中微生物的方法》
一、离心分离法
1、离心分离法是一种快速、简便、有效的土壤微生物分离方法，主要用来分离大量的土壤和沉淀物中的微生物。
原理是利用离心力将土壤中的微生物悬浮液中的水分剥离出来，浓缩悬浮液，然后采用制备的高标准分析液（如硫酸铵）搅拌悬浮液，将微生物转移到新的液体中，最终将微生物和悬浮液分离。
2、离心分离的步骤包括：
（1）采集土壤样品
（2）将土壤样品放入备有清水的容器中，并予以搅拌，搅拌时间1-2min。
（3）将搅拌后的样品置于离心机中，用适当速度及时间进行离心分离，离心结束即可得到悬浮液。
（4）将离心后的悬浮液加入制备好的高标准分析液中，并搅拌。
（5）将混合液再次置入离心机中，离心一段时间，即可将高标准分析液和悬浮液分离开来，从而完成土壤中微生物的分离。
二、膜过滤法
1、膜过滤法是一种分离土壤中微生物的有效方法。
原理是将土壤中的微生物悬浮液置于膜滤器上，通过该膜滤器，微生物悬浮液中的水分可以通过滤膜留下，膜滤器上的微生物则由于大小不同而滞留在膜滤器上，最终完成分离。
2、膜过滤分离的步骤包括：
（1）采集土壤样品
（2）将样品放入备有清水的容器中，并搅拌于汤匙，搅拌时间1-2分钟；
（3）将搅拌后的悬浮液置于膜滤器上，以适当的速度滤过，最终完成分离。
（4）完成后，将膜滤器上的微生物收集用来进行后续操作。
王--实验二 土壤中微生物的分离与纯化
王--实验二土壤中微生物的分离与纯化
土壤中是存在大量微生物的，包括细菌、真菌、放线菌等，在生态系统中起着重要作用。
微生物的分离与纯化是微生物学研究的重要方法之一，对于了解土壤微生物多样性、功能和应用具有重要意义。
本实验旨在通过土壤样品进行微生物分离和纯化，了解微生物分离技术和分离纯化菌株的方法。
一、实验方法
1.1 实验设备
实验室常用的分离纯化设备有平板计数器、减压灭菌器、烧杯、移液器、离心机等。
其中，平板计数器是精确测定细菌数量的仪器。
实验材料包括培养基、细菌液、土壤样品等。
1.3 分离纯化细菌的步骤
（1）将土壤样品放入离心管内。
（2）在土壤样品中加入生理盐水，摇晃离心管，使土壤样品和生理盐水充分混合。
（3）将混合物在烧杯内振荡。
（4）利用平板计数器精确测定细菌数量。
（5）从混合物中挑出单个菌落，进行菌株分离和纯化。
（6）将菌落移至培养基上，进行培养、观察和记录。
二、实验结果
通过本实验，我们共采集了5个不同土壤样品，进行菌落计数和菌株分离、纯化、培养等处理。
实验结果显示，不同土壤样品中微生物的数量和种类存在差异。
其中，含有腐殖质较多的土壤样品中微生物数量较多，且种类丰富。
2.2 结果分析
土壤微生物数量和种类的差异主要与土壤样品的营养含量及物理化学性质有关。
白灰土、黄土、红壤等含有较高营养含量和较优地理环境的土壤样品中微生物的数量和种类较多，而贫瘠荒芜的土壤样品中微生物数量和种类较少。
此外，氧分压、pH值、盐分等土壤环境因素的差异也会导致土壤中的微生物数量和种类存在差异。
分离土壤中微生物的方法
分离土壤中微生物的方法土壤中的微生物是土壤生态系统中非常重要的组成部分，对土壤的物质循环、生态功能以及农田生产等都有着重要的影响。
因此，分离土壤中的微生物并进行研究是了解土壤微生物群落结构和功能的重要手段。
下面将介绍一些常用的分离土壤中微生物的方法。
1.稀释涂平法：稀释涂平法是最为常用的一种分离培养微生物的方法。
首先，将土壤样品稀释成一定的浓度；然后，将适量的稀释液均匀地涂布在培养基平板上；最后，将培养基平板的菌落进行分离鉴定。
优点是简单易行，适用于常见的土壤微生物；缺点是只适用于可培养的微生物。
2.筛选技术：筛选技术通过筛选和培养特定类型的微生物，实现对土壤微生物的分离。
常用的筛选技术有选择性培养基筛选、酶基因筛选、菌落形态和色素筛选等。
优点是可以选择性培养其中一类型的微生物；缺点是存在选择性偏倚和培养基有限性。
3.海绵法：海绵法通过悬浮土壤样品，利用海绵吸附和负压吸附的原理，分离土壤中的微生物。
首先，将土壤样品加入海绵中；然后，通过一定的操作将海绵中的微生物分离出来；最后，对分离出的微生物进行鉴定。
优点是可以分离植物根际微生物和陆地微生物；缺点是操作复杂。
4.聚合物链式反应（PCR）和16SrRNA基因测序：PCR和16SrRNA基因测序是一种通过分子生物学手段分离和鉴定微生物的方法。
首先，从土壤中提取微生物的DNA；然后，利用PCR方法扩增16SrRNA基因片段；最后，对扩增产物进行测序并分析。
优点是可以快速分离和鉴定微生物，无需进行培养；缺点是依赖于标准数据库的准确性。
5.激光共聚焦显微镜技术：激光共聚焦显微镜技术可以直接观察土壤中的微生物，并通过分析其形态特征对微生物进行分类和分离。
优点是可以快速直观地观察微生物；缺点是无法进行鉴定和培养。
综上所述，分离土壤中微生物的方法有许多种，分别适用于不同的研究目的和需求。
可以根据具体情况选择适合的方法。
同时，需要注意的是，单一的方法可能无法完全反映土壤微生物多样性，因此最好结合多种方法进行研究，以全面了解土壤中微生物的群落结构和功能。
土壤中微生物的分离
化学分离法是一种通过化学试剂与土壤中的物质发生反应，使微生物与土壤颗粒分离的方法。该方法利用酸、碱、 盐等化学试剂与土壤中的物质发生反应，改变土壤的理化性质，使微生物与土壤颗粒分离，然后收集微生物并进 行培养。
04 土壤中微生物分离的实验 步骤
样品采集
01
02
03
采样点选择
选择具有代表性的土壤样 品，如不同区域、不同土 壤类型的土壤。
在分离过程中，选择合适的培养基和培养条件是关键， 这直接影响到分离的效果和后续的研究结果。
01Leabharlann 03土壤中微生物的分离还可以应用于微生物资源开发， 如发现新的微生物资源、开发微生物农药和生物肥料
等，为农业生产提供新的解决方案。
04
分离得到的微生物可以用于研究土壤微生物的多样性、 群落结构、功能和相互作用等方面，有助于深入了解 土壤生态系统的运行机制。
真菌
真菌是土壤中重要的分解者之一， 能够分解有机物和木质素等难分
解物质。
真菌的菌丝体能够深入到土壤中， 吸收养分并将其传递给植物根系。
真菌在土壤中的数量和种类也会 受到土壤类型、气候、植物等因
素的影响。
藻类
藻类是光合自养生物，在土壤 表面的水膜中生长，可以通过 光合作用产生氧气。
藻类的生长会受到光照、温度、 水分等因素的影响，在适宜的 条件下可以大量繁殖。
研究展望
01
02
03
04
随着分子生物学技术的发展， 未来可以采用高通量测序等 技术对土壤微生物进行更全 面、深入的研究，进一步揭 示土壤微生物的多样性和功
能。
土壤微生物与其他环境因素 之间的相互作用也是未来研 究的重点，如气候变化、土 地利用方式等对土壤微生物
土壤中微生物的分离
实验三土壤中微生物的稀释分离、纯化及无菌操作技术一、教学目标与基本要求：1、掌握倒平板的技术和分离纯化微生物的基本操作技术。
2、设计实验方案，分离目的菌，并通过后续实验做出初步鉴定。
二、实验内容：1．用稀释法从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。
2．用平板划线法分离纯化微生物。
3．学习斜宜接种、穿刺接种、平板接种、液体接种等接种方法。
三、实验步骤（一）微生物分离的方法有很多种，但常用的有两种：1.平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，二获得单个菌落，从而达到分离的目的，具体方法如下： 1)倒制平板：将固体培养基熔化，冷却至50-55℃，然后在酒精灯火焰旁，以右手持培养基，左手拿培养皿，以无菌操作将培养基注入培养皿内，约15ml，轻微转动培养基，使培养基均匀分布，然后静置于水平位置，凝固即成平板，并在皿该边贴上标签。
2.稀释平板分离法稀释手段，使样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平皿内，倒入培养基，摇匀静置凝固后培养，这样被分离的细菌被固定在原处而形成菌落，可作为一种记数方法。
1)制备土壤稀释液：（细菌的分离）以无菌操作，称取样品1g，加入装有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使土样与水充分混合，即成10-2土壤稀释液，然后用无菌移液管吸取9ml无菌水的试管内，制成10-3的稀释液将此移液管在试管内反复吸冲三次，然后取出移液管，并将其通过火焰，再插入原来包移液管的纸套内，以备再用，振荡10-3 的稀释液试管，再从纸套取出原来的移液管插入已混匀的试管内，再吹洗三次，然后吸出1ml10-3的稀释液至另一支装有9ml 无菌水的试管中，制成10-4稀释液。
用同样方法再制成10-5、10-6的稀释液，稀释完毕后，可用原来的移液管，从菌液浓度最小的 10-6的稀释液开始吸取1ml10-6稀释液，加到相应编号10-6的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取1ml10-5、10-4的稀释液加到相应编号为10-5、10-4的无菌培养皿内，整个分离过程见下图。
土壤中微生物的分离与纯化实验报告
土壤中微生物的分离与纯化实验报告下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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以下是一篇关于土壤中微生物分离与纯化实验报告的示例文章，按照清晰的标题和不同级别的小节编写：实验报告：土壤中微生物的分离与纯化。
实验五二土壤中微生物的分离纯化及观察
翻译训练1．学生结合课下注释和工具书自行疏通文义，并画出不解之处。【教学提示】节奏划分与明确文意相辅相成，若能以节奏划分引导学生明确文意最好；若学生理解有限，亦可在解读文意后把握节
奏划分。2．以四人小组为单位，组内互助解疑，并尝试用“直译”与“意译”两种方法译读文章。3．教师选择疑难句或值得翻译的句子，请学生用两种翻译方法进行翻译。翻译示例：若夫日出而林霏开，
倾注法 涂布法
倒平板
a 皿加法 b手持法
细菌
霉菌
放线菌
琴一张，有棋一局，而常置酒一壶。”客曰：“是为五一尔，奈何？”居士曰：“以吾一翁，老于此五物之间，岂不为六一乎？”写作背景：宋仁宗庆历五年(1045年)，参知政事范仲淹等人遭谗离职，欧
阳修上书替他们分辩，被贬到滁州做了两年知州。到任以后，他内心抑郁，但还能发挥“宽简而不扰”的作风，取得了某些政绩。《醉翁亭记》就是在这个时期写就的。目标导学二：朗读文章，通文顺字
实验结果
(P３4 五、１.(２、３)
你所做的涂布平板法和划线法是否较好地得到了单菌 落？如果不是，请分析其原因。
在不同的平板上你分离得到了哪些类群的微生物？简 述它们的菌落特征。
思考题
如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？请写出实 验的主要步骤。(P３4 五.2.(1)) 如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温 蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方 案。
“山行/六七里”为什么不能划分为“山/行六七里”？
明确：“山行”意指“沿着山路走”，“山行”是个状中短语，不能将其割裂。“望之/蔚然而深秀者”为什么不能划分为“望之蔚然/而深秀者”？明确：“蔚然而深秀”是两个并列的词，不宜割裂，“望
之”是总起词语，故应从其后断句。【教学提示】引导学生在反复朗读的过程中划分朗读节奏，在划分节奏的过程中感知文意。对于部分结构复杂的句子，教师可做适当的讲解引导。目标导学三：结合注释，
土壤中微生物的分离
域内进行，操作完成后将接种工具火焰灭菌后 再放回原处。
思考题
1. 涂布好的平板在培养时为何要倒置?
倒平板操作示意图
②制备样品稀释液（以土壤为例）
准确称取土壤样品1g，放人盛有99ml无菌水并 放有小玻璃珠的三角瓶中，振摇约20min，使 微生物细胞分散，即成10-2的土壤样品稀释液； 用无菌吸管吸取10-2稀释液1mL，移入装有 9mL无菌水的试管中，吹吸几次，让菌液混合 均匀，即成10-3稀释液；再换一支无菌吸管吸 取10-3稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试 管中，也吹吸几次，即成10-4稀释液，以此类 推，连续稀释，制成10-5、10-6、10-7、10-8、 10-9等一系列稀释菌液。
2.平板划线分离法
①倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，标明培养基名 称、样品编号和实验日期。
②划线：点燃酒精灯，在火焰旁左手拿无菌平板，右 手拿接种环以无菌操作沾取少许待分离的样品， 在无菌平板表面进行平行划线、连续化线、交叉 划线、扇形划线、方格划线或其他形式的划线， 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少， 并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能 一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
基，PDA培养基。 3. 溶液或试剂：盛9ml无菌水的试管，盛99ml无菌
水并带有玻璃珠的三角烧瓶，95%酒精。 4. 仪器或其他用具：天平，玻璃涂布棒，移夜枪，
无菌枪头，接种环，无菌培养皿，记号笔等。
实验方法
1．稀释涂布平板法
①倒平板
将固体培养基加热溶化，待冷却至55~60℃时， 在酒精灯火焰旁，将培养基迅速倒入已灭菌的培 养皿中约15~20ml，平放于桌面上，待冷却凝固 后即为无菌平板。
土壤中微生物的分离与鉴定实验报告
Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定【实验目的】1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株；2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方法和无菌操作技术。
3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。
4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。
【实验原理】1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。
b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。
微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。
前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。
2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。
3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。
刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。
实验二、土壤中微生物的分离术 (1)
恒温培养:平板倒置于37℃恒 温箱中,培养1-2天后观察细 菌菌落形态。 转接纯化:挑取单个菌落,接种 到新鲜平板上,培养观察,直至
纯化。
平板制作的操作注意：
融化培养基时不要溢出烧瓶或糊底 无菌操作下，打开培养皿的操作 一根１mL移液管多次移液先移低浓度悬浊液，再移高浓度悬浊液。 移液管可以用稀释悬浊液的那根在无菌操作下接着做，也可另取一根无 菌的。 为什么培养皿要倒置培养？
移液管移液后多余的液体处理
试管中悬浊液须持移液管吹洗三次搅匀
三、微生物分离纯10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液于已写 好稀释度的对应平板中央位置，用无菌涂布棒在培养基表面轻轻地涂
布均匀，涂布后室温下静置5-10min。
三、微生物分离纯化的操作方法
实验报告：34页1（1）、1（2）、 2（3）
粒。
3、酒精灯、恒温箱 (培养箱)、超净工作台 等。
三、微生物分离纯化的操作方法
1.倒平板
（1）每组准备9套无菌培养皿，在皿底注明稀释液浓度（10-4、10-5、10-6， 每个浓度标注三个培养皿)、班级、组别。 （2）将实验一锥形瓶中的牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，放在55-60℃ 恒
温水浴锅中备用。
实验二、土壤中微生物的分离
一、实验目的
1.掌握从土壤中分离培养微生物的方法，从而获得
若干种微生物纯培养技能。
2.掌握倒平板的方法和稀释涂布平板法的基本操作 技能。
二、主要实验器材及设备
1、无菌培养皿10套 、无菌吸
管1毫升、盛有90毫升无菌水
的锥形瓶、盛有9毫升无菌水
的试管6支，涂布棒。
2、培养基(已灭菌的)、土壤颗
（3）将锥形瓶中的培养基倒平板，倾入上述已标记的9套培养皿中。
土壤中微生物的分离
微生物学实验报告土壤微生物的分离、培养及鉴定学生学号：学生姓名：专业班级：指导教师：土壤微生物的分离、培养及鉴定摘要：本实验是微生物学综合性实验项目包含了微生物学实验使用的微生物分离和纯化、微生物的选择培养基、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、微生物类群的主要培养特征和形态特征、制片染色技术等。
[1]土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。
根际微生物与植物的关系特别密切，不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响，而不同的根际微生物由于其生理活性和代谢产物的不同，也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。
土壤微生物不仅对土壤的肥力和土壤营养元素的转化起着重要作用，而且对于进入土壤中的农药及其他有机污染物的自净、有毒金属及其化合物在土壤环境中的迁移转化等都起着极为重要的作用。
关键词：土壤微生物，分离鉴定，生理生化，1前言土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。
一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm 的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。
不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。
一般在较干燥、偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多。
本实验从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。
为了分离和确保获得某种微生物的单菌落，首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。
各类菌的稀释度因菌源、采集样品的季节、气温条件而异。
其次，应考虑各类微生物的不同特性，避免样品种各类微生物相互干扰。
细菌或放线菌在中性或微碱性环境较多，但细菌比放线菌生长快，分离放线菌时，一般在制备土壤稀释液时添加10％酚或在分离培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌。
培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。
实验一土壤中微生物的分离纯化
目录
• 引言 • 土壤样品采集与处理 • 微生物分离纯化方法 • 微生物培养条件与培养基选择 • 微生物鉴定与结果分析 • 实验注意事项与误差分析
01
引言
实验目的
分离土壤中的微生物
鉴定微生物
通过特定的培养条件，将土壤中的不 同种类微生物分离开来。
对分离纯化的微生物进行形态学、生 理生化特性等方面的鉴定。
废弃物处理
将实验废弃物分类收集，妥善处理，避免对 环境造成污染。
常见误差来源及减小误差方法
样品采集误差
试剂误差
确保采样工具干净，避免交叉污染；采样 点要具有代表性，避免偶然性误差。
使用优质试剂，确保试剂纯度和浓度准确 ；注意试剂保存条件和使用期限。
操作误差
设备误差
提高操作技能，减少操作失误；保持实验 环境稳定，避免外部因素干扰。
促进目标微生物的分离和纯化。
03
鉴别培养基
在基础培养基中加入某种试剂或化学物质，依据微生物代谢产生的某种
物质与特定试剂反应，产生明显的颜色变化或沉淀，从而鉴别不同种类
的微生物。
培养条件设置（温度、pH等）
温度
不同微生物对温度的需求不同，一般分为低温、中温和高温 微生物。在实验中，需根据目标微生物的生长温度要求，设 置相应的培养温度。
采样工具及容器准备
采样工具
使用无菌的铲子、勺子或土壤钻 等工具进行采样，避免交叉污染 。
容器准备
选择无菌的塑料袋、玻璃瓶或塑 料瓶等容器，确保容器干净、干 燥、密封性好。
采样方法及注意事项
01
02
03
04
去除表面杂质
去除土壤表面的植物残渣、石 块等杂质。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物是土壤中最为丰富的生物群体之一，它们在土壤中扮演着重要的角色，如分解有机物质、固氮、矿物质转化等。
因此，对土壤微生物的研究具有重要的意义。
本文将介绍土壤微生物的分离和纯化实验。
一、实验目的
1.了解土壤微生物的分离和纯化方法；
2.掌握土壤微生物的培养技术；
3.观察土壤微生物的形态特征。
二、实验步骤
1.取一定量的土壤样品，加入适量的生理盐水中，摇匀后过滤；
2.将过滤液分别接种在不同的培养基上，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等；
3.将培养皿放置在恒温培养箱中，控制温度、湿度等条件；
4.观察培养皿中的微生物生长情况，挑选单一菌落进行分离和纯化；
5.将单一菌落接种在新的培养基上，重复以上步骤，直至获得纯种菌株。
三、实验结果
经过培养和观察，我们成功地分离出了多种土壤微生物，如放线菌、链霉菌、芽孢杆菌等。
其中，放线菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的线条；链霉菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的链条；芽孢杆菌的形态特征为菌落呈白色，表面有光滑的质地，形似细长的杆状物质。
四、实验结论
通过本次实验，我们了解了土壤微生物的分离和纯化方法，掌握了土壤微生物的培养技术，观察了土壤微生物的形态特征。
这些都为我们深入研究土壤微生物的生态学、生理学、遗传学等方面提供了基础。
同时，我们也认识到了土壤微生物在土壤生态系统中的重要作用，应该加强对其研究和保护。
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第一节 微生物生长的测定 以数量变化对微生物生长情况进行测定 通常用来测定细菌、 通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况 或样品中所含微生物个体的数量（细菌、孢子、酵母菌） 或样品中所含微生物个体的数量（细菌、孢子、酵母菌） 培养平板计数法
采用培养平板计数法要求操作熟练 准确，否则难以得到正确的结果： 、准确，否则难以得到正确的结果： 样品充分混匀； 样品充分混匀； 每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液； 稀释度的菌液； 同一稀释度三个以上重复,取平均值； 同一稀释度三个以上重复 取平均值； 取平均值 每个平板上的菌落数目合适， 每个平板上的菌落数目合适，便于 准确计数； 准确计数；
一个菌落可能是多个细胞一起形成， 一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用 菌落形成单位（ 菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示，而 ， ）来表示， 不是直接表示为细胞数。 不是直接表示为细胞数。
实验步骤
• 将10g土样装入含 土样装入含100ml无菌水的锥形瓶中振 土样装入含 无菌水的锥形瓶中振 荡10min • 取1ml移入含 移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀， 无菌水的试管中， 移入含 无菌水的试管中 吹吸均匀， 为稀释10倍的样品 为稀释 倍的样品 • 依次进行梯度稀释 • 倒培养基 • 取合适稀释度的样品1ml涂布 取合适稀释度的样品 涂布
实验五 土壤中微生物的分离
实验目的
• 掌握从样品中分离不同种类的微生物， 掌握从样品中分离不同种类的微生物， 并进行活菌计数 • 巩固无菌操作的方法
微生物生长： 微生物生长： 单位时间里微生物数量或生物量（ 单位时间里微生物数量或生物量（Biomass）的增加。 ）的增加。 个体计数 微生物生长的测定： 微生物生长的测定： 群体重量测定 群体生理指标测定 评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响； 评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响； 评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死 作用的效果 评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制 或杀死)作用的效果； 或杀死 作用的效果； 客观地反映微生物生长的规律； 客观地反映微生物生长的规律；
实验安排
• 10-510-610-7稀释度为细菌培养 牛肉膏蛋白 胨培养基 • 10-310-410-5 稀释度为放线菌培养，注意培养 稀释度为放线菌培养， 基在倒入平板前先加入数滴重铬酸钾溶液 高氏一号培养基 • 10-210-310-4稀释度为真菌培养 马丁氏培养 基