研究生液相色谱实验报告
实验一、酒花中芦丁的高效液相色谱测定实验报告
实验一、啤酒花中芦丁的高效液相色谱法测定1..实验目的了解与掌握高效液相色谱法（HPLC）分析原理与基本操作方法。
2．实验药品与仪器酒花超临界CO2萃取后的萃余物实验室自制；石油醚、甲醇（色谱纯）、乙醇、乙酸、芦丁标准品均购自北京化学试剂公司，超纯水购自娃哈哈公司；Waters 1525型高效液相色谱仪Waters 2487型UV检测器美国；超声波清洗仪宁波新芝生物科技有限公司提供真空旋转蒸发仪上海申生科技有限公司提供。
3.实验方法3.1.酒花中芦丁的提取步骤准确称取1g酒花样品2份，用50%的乙醇溶液以1：20的料液比，在60℃下分别用超声波提取1h后离心4000转/分，15分钟，取上清液为酒花芦丁提取液，经0.45μm滤膜过滤后，用于HPLC分析。
3.2. HPLC测定芦丁的步骤先用芦丁标准品制作标准曲线，再将样品溶液用微量进样器吸取10μl样品液进样分析,记录色谱峰，测定样品的芦丁峰面积,代入标准曲线的回归方程中计算相应的芦丁含量。
HPLC测定条件：C18柱(4.6mm×250mm)，流动相：甲醇-水-冰乙酸(40∶60∶2，V/V)；流速：1.0ml/min；柱温：室温，进样量：10μl；检测波长：280nm；灵敏度：0.05AUFS。
芦丁标准曲线制备方法：取芦丁标准品适量，用甲醇制成10ppm，20 ppm，40 ppm，60 ppm，80 ppm，100 ppm系列标准品溶液，分别进样，记录峰面积，以芦丁标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制芦丁标准曲线（计算回归方程为：Y=8.20×103X-4.77×103，相关系数为r=0.997981）。
芦丁的定性与定量分析：芦丁的定性分析根据芦丁标准品的保留时间确定，定量分析由芦丁标准品的标准曲线方法计算。
芦丁含量结果表示为mg/g酒花4. 实验结果4.1芦丁标准曲线的制备图1 芦丁标准品色谱峰图2 芦丁标准曲线表1 芦丁标准曲线测定数据芦丁标准品10 20 40 60 80 100浓度（μg/ml）HPLC峰面94310.0 147600.0 308800.0 479500.0 679900.0 803400.0积4.2酒花提取液中芦丁的测定5. 结果与讨论Y=8.20×103X-4.77×103，相关系数为r=0.997981。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告高效液相色谱法，基本原理为影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。
分为液固吸附色谱法，流动相为液体，固定相是固体吸附剂；液分配色谱法，固定相几乎全是化学键合硅胶，又称化学键合相色谱法等。
（二）塔板理论：塔板理论方程式（高斯方程式）：理论塔板式数：理论塔板高度：（三）速率理论： h=a+b/u+cu影响塔板高度的因素：1、涡流扩散 2、纵向扩散 3、传质阻抗二、气相色谱仪：（1）色谱柱：固定相与柱管组成。
填充柱、毛细管柱；分配柱、吸附柱（2）紧固液：低沸点的液体，操作方式下为液态。
甲基硅油、聚乙二醇等选择原则：按相似性、按主要差别、按麦氏差别选择。
（3）载体：化学惰性的多孔性微粒（4）毛细管色谱柱：开管型、填充型（5）检测器：1、浓度型检测器：热导检测器和电子捕捉检测器2、质量型检测器：氢焰离子化检测器中国药典对气相色谱规定：除检测器种类、紧固液品种及特定选定的色谱柱材料严禁任一修改外，其他均可适度发生改变，色谱图于30min内记录完。
第四节高效液相色谱法1、基本原理：影响柱效的主要因素就是涡流蔓延和传质电阻。
分类：1、液固吸附色谱法：流动相为液体，固定相是固体吸附剂。
2、液——液分配色谱法：紧固二者几乎全系列就是化学键再分硅胶，又称化学键再分相色谱法。
按固定相和流动相的极性2又分：正相色谱法和反相色谱法正相色谱法：流动二者极性大于紧固二者极性的色谱法。
用作拆分溶有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用作所含相同官能团物质的拆分。
极性强组分先流入反相色谱法：……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物2、高效率液相色谱仪：1、高压输液泵2、色谱柱3、进样阀4、检测器：紫外稀释检测器、荧光检测器、热法折光检测器、电化学检测中国药典对高效液相色谱法规定：除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意更改外，其余均可适当改变，色谱图于20min内记录完毕。
第五节色谱系统适用性试验和定量分析方法一、系统适用性试验1、色谱柱的理论板数：2、分离度：应大于1.53、重复性3、拖尾声因子：0.95-1.05之间二、定量测定法：1、内标法加较正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量2、外标法测量供试品中某个杂质或主成分含量3、加较正因子的主成分自身对照法不加较正因子的主成分自身对照法。
液相色谱实验报告
液相色谱实验报告姓名：XXX 专业：有机化学学号：312070303004 时间：2012.11.11一、实验目的：1 .了解液相色谱仪的基本构造、工作原理。
2. 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过高效液相色谱（HPLC）对目标化合物进行分析鉴定。
二、实验原理：液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。
当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。
被分离成单个组分后依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
三、液相色谱法的特点：高压——压力可达150～300 kg/cm2。
色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。
高效——塔板数可达5000/米。
在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
高效液相色谱（HPLC）与经典液相色谱相比有以下优点：速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
四、液相色谱仪的组成：液相色谱仪主要包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。
1 输液系统：包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。
贮液装置用于存贮足够量、符合HPLC要求的流动相。
高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。
2 进样系统：将待测的样品引入到色谱柱的装置。
液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。
液相色谱仪实训报告总结
一、引言液相色谱仪（HPLC）作为一种重要的分析仪器，广泛应用于食品、医药、环保、化工等领域。
为了提高我们的实验技能和理论水平，我们进行了液相色谱仪的实训。
本次实训主要学习了液相色谱仪的原理、操作方法以及常见故障的排除。
以下是本次实训的总结。
二、实训目的1. 了解液相色谱仪的基本原理和结构。
2. 掌握液相色谱仪的操作方法，包括样品前处理、色谱柱的选择、流动相的配置、流速的调节等。
3. 学会液相色谱仪的故障排除，提高实验技能。
4. 培养团队协作精神，提高实验报告撰写能力。
三、实训内容1. 液相色谱仪的基本原理液相色谱仪是一种利用液体作为流动相，通过固定相对样品中各组分的分离、检测和定量的分析仪器。
其基本原理是：将待分析样品溶解在流动相中，通过色谱柱，利用固定相对样品中各组分的吸附、解吸作用，使各组分在流动相中按不同的速度移动，从而实现分离。
2. 液相色谱仪的结构液相色谱仪主要由以下几部分组成：（1）样品进样系统：包括样品瓶、进样阀、样品注射器等。
（2）色谱柱：包括固定相和流动相。
（3）检测器：包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
（4）数据处理系统：包括色谱工作站、计算机等。
3. 液相色谱仪的操作方法（1）样品前处理：根据样品的性质和实验要求，对样品进行适当的预处理，如萃取、离心、过滤等。
（2）色谱柱的选择：根据待分析样品的成分和实验要求，选择合适的色谱柱。
（3）流动相的配置：根据实验要求，配置合适的流动相，包括溶剂的选择、比例、pH值等。
（4）流速的调节：根据实验要求，调节合适的流速，以保证样品在色谱柱中的运行时间。
4. 液相色谱仪的故障排除（1）色谱柱堵塞：检查流动相是否合适，是否含有杂质，必要时更换色谱柱。
（2）检测器故障：检查检测器是否连接正确，是否受到污染，必要时清洗或更换检测器。
（3）数据处理系统故障：检查计算机软件是否更新，硬件设备是否正常，必要时联系专业人员维修。
四、实训收获1. 提高了实验技能：通过本次实训，我们掌握了液相色谱仪的操作方法，学会了故障排除，提高了实验技能。
高效液相色谱实验报告
联苯、甲苯、萘和菲以及它们混样的高效液相色谱分析实验目的1.熟练掌握高效液相色谱相关仪器的操作流程。
3.通过谱图分析，掌握运用谱图数据处理目标物质的方法。
一、实验原理色谱分析是运用物质在固定相和流动相两相间的分配系数不同而达到分离，它是一种分离技术，主要目的是对混合物中目标产物进行分离并定量分析的一种技术。
二、实验内容运用高效液相色谱仪测定联苯、甲苯、萘和菲以及四者混合物的色谱，熟练仪器的相关操作流程，能从检测的谱图中定性的指认四者峰的归属，并能定量的描述四者混合物中各自的相对含量。
三、实验步骤1、打开仪器电源开关，让仪器预热一段时间，此时可准备待测样品；2、待仪器运转正常，打开测试软件，先用甲醇清洗柱子（在Load状态下进样，分析时在Inject状态下）；3、进样状态下插入微量注射器，切到装填状态，注入样品，切回到进样状态。
4、点击分析按钮，输入分析的样品名；5、数据分析，通过软件查看积分面积。
五、实验结果液相色谱图0.00.51.01.52.0 2.53.0 3.54.0 4.55.0 5.56.0min0.01.02.03.04.05.06.0mV(x100)Detector A:254nm1.722/156063.034/11168863.383/7097684.037/25429775.046/7069594（2）联苯0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5mV(x100)Detector A:254nm1.7312.5784.1475.2130.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0433.4084.0845.152（4）甲苯0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.00.51.01.52.02.53.03.5mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0565.193（5）菲0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.01.02.03.04.05.06.07.0mV(x100)Detector A:254nm1.7303.4065.075谱图分析：依据各个物种标样的色谱图可以知道他们各自的出峰时间大致为：菲：5.075min ；联苯：4.147 min ；萘：3.408 min ；甲苯：3.032 min ；故此可以判断混样中出峰位置所对应的物种，5.046 min 对应为菲，4.037 min 对应为联苯，3.383 min 对应为萘，3.034 min 对应为甲苯。
高效液相实验报告
一、实验目的1. 熟悉高效液相色谱（HPLC）的基本原理和操作方法。
2. 掌握液相色谱仪的构造及其各部分的功能。
3. 学习并运用高效液相色谱法对样品进行分离和定量分析。
二、实验原理高效液相色谱法是一种利用高压液体作为流动相，通过固定相对样品进行分离和分析的技术。
其原理基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，从而实现分离。
实验中，样品经过高压泵送入色谱柱，在流动相的作用下，不同物质在色谱柱中停留时间不同，从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、流动相过滤器、样品瓶、高压泵、检测器、数据工作站等。
2. 试剂：乙腈、甲醇、水、磷酸、氨水等。
四、实验步骤1. 样品准备：准确称取一定量的待测样品，用适当溶剂溶解，配制成一定浓度的溶液。
2. 流动相配置：根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过滤。
3. 色谱柱准备：将色谱柱安装在色谱仪上，用流动相进行冲洗，去除色谱柱中的杂质。
4. 上样：将配制好的样品溶液注入色谱仪，通过高压泵送入色谱柱。
5. 分离：在流动相的作用下，样品中的各组分在色谱柱中依次流出。
6. 检测：利用检测器对流出物进行检测，记录色谱图。
7. 数据分析：利用数据工作站对色谱图进行分析，计算各组分的含量。
五、实验结果与分析1. 样品分离：实验中，样品中的各组分在色谱柱中得到了有效分离，分离效果良好。
2. 定量分析：根据标准曲线，计算各组分的含量，结果如下：| 组分名称 | 含量（%） || -------- | -------- || 组分1 | 2.5 || 组分2 | 1.8 || 组分3 | 0.9 || 组分4 | 0.5 |3. 误差分析：实验过程中，可能存在以下误差：- 仪器误差：色谱仪、检测器等仪器本身的精度和稳定性对实验结果有一定影响。
- 试剂误差：试剂的纯度和浓度对实验结果有一定影响。
- 操作误差：实验操作不规范、样品处理不当等因素可能导致误差。
水中酚类化合物(液相色谱法)测定实验报告
水中酚类化合物(液相色谱法)测定实验报告1.进行醇和酚主要化学性质的实验操作。
2.熟练进行水浴加热和点滴板使用的操作。
3.能够较慢地设计出来①伯醇、仲醇与叔醇；②一元醇与多元醇；③醇与酚类物质的辨别方案，并展开实验操作方式。
4.具有严肃和实事求是的科学态度，养成爱护公物，节省试剂的良好品德。
【实验用品】金属钠、无水乙醇、酚酞试剂、仲丁醇、叔丁醇、蒸馏水、卢卡斯试剂、1.5mol/l硫酸、0.17mol/l重铬酸钾溶液、g/l naoh溶液、乙醇、醋酸、48g/l cuso4溶液、甘油、蓝色石蕊试纸、0.1mol/l苯酚溶液、饱和碳酸钠溶液、饱和碳酸氢钠溶液、溴水、0.06mol/l三氯化铁溶液、0.03mol/l高锰酸钾溶液、浓硫酸。
试管、烧杯、酒精灯、玻璃棒、点滴板、广为ph试纸、表面皿。
【实验原理】羟基就是醇的官能团、o－h键和c－o键难脱落出现化学反应；同时，α-h和β-h存有一定的开朗性，使醇能够出现水解反应、消解反应等；而邻多元醇除了具备通常醇的化学性质，由于它们分子中相连羟基的相互影响，具备一些特定的性质，例如甘油能够与cu(oh)2促进作用。
酚类化合物分子中所含羟基，o－h键已出现脱落，在水溶液中能电离出来少量氢离子，并使酚溶液表明弱酸性；－oh受到苯环上大π键的影响，使c－oh键表明一定的活性，极易出现水解反应；而苯环也受到－oh的影响，使苯环上的h的活性进一步增强，极易出现替代反应。
【实验指导】（实验内容、步骤、操作事项）一、醇的化学性质1. 醇钠的生成及水解在潮湿试管中，重新加入无水乙醇1ml，并提一小粒艾盖佩的、用滤纸擦拭的金属钠，观测反应释出的气体和试管与否咳嗽。
随着反应的展开，试管内溶液变小仁和。
当钠全然熔化后，加热，试管内溶液逐渐凝固成液态。
然后几滴搅拌直至液态消失，再提一滴酚酞试液，观测并表述出现的变化。
2. 醇的氧化挑4两支试管，分别重新加入5几滴仲丁醇、叔丁醇和蒸馏水，然后各重新加入10几滴1.5mol/l硫酸和0.17mol/l重铬酸钾溶液，振摇，观测并及时记录发生变化快慢的时间。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本实验旨在通过HPLC技术分析某种药物中的有效成分，并探讨其分析方法的可行性和准确性。
实验方法：1. 仪器及试剂准备：本实验采用Agilent 1200系列高效液相色谱仪，色谱柱为C18反相色谱柱。
试剂准备包括纯化水、甲醇、乙腈等有机溶剂，以及待测药物样品。
2. 样品制备：取待测药物样品10mg，加入10ml甲醇中，超声处理10分钟，离心沉淀，取上清液备用。
3. 色谱条件设置：流动相采用甲醇-水（60:40）的混合溶液，流速为1.0ml/min，柱温设定为25℃，检测波长为254nm。
4. 样品注射及分析：将样品注入进样器，设定注射体积为10μL，进行分析。
结果与讨论：通过HPLC分析，我们得到了待测药物中的有效成分的峰图，并计算出了其相对峰面积。
根据标准曲线的结果，可以进一步计算出待测药物中有效成分的浓度。
在本实验中，我们发现HPLC技术对于药物分析具有较高的准确性和灵敏度。
通过优化色谱条件，我们可以获得清晰的峰形和较低的噪音，从而提高分析结果的可靠性。
此外，我们还对样品的稳定性进行了研究。
将样品在不同温度下保存一段时间后，再进行HPLC分析，结果显示样品在低温下保存稳定性较好，而高温和阳光暴晒会导致有效成分的降解。
在实际应用中，HPLC技术可用于药物质量控制、环境监测和食品安全等领域。
例如，通过HPLC分析药物中的杂质含量，可以确保药物的质量符合标准；通过HPLC分析环境中的有害物质，可以及时发现和监测环境污染情况；通过HPLC分析食品中的添加剂和残留物，可以保障食品的安全性。
然而，HPLC技术也存在一些局限性。
首先，分析过程中需要一定的操作技巧和经验，对于初学者来说可能存在一定的困难。
高效液相色谱法测量葡萄糖浓度实验报告
高效液相色谱法测量葡萄糖浓度实验报告一、实验目的本实验旨在利用高效液相色谱法（HPLC）准确测量样品中的葡萄糖浓度，熟悉并掌握高效液相色谱仪的操作流程和数据分析方法，为相关领域的研究和应用提供可靠的检测手段。
二、实验原理高效液相色谱法是一种基于混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异，实现分离和定量分析的技术。
在本实验中，采用反相色谱模式，使用 C18 色谱柱，以适当的流动相（通常为含一定比例有机溶剂的水溶液）携带样品通过色谱柱。
葡萄糖分子在色谱柱中的保留时间取决于其与固定相和流动相的相互作用，通过与已知浓度的葡萄糖标准品的保留时间和峰面积进行对比，可实现对样品中葡萄糖浓度的定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器高效液相色谱仪（配备紫外检测器）色谱柱：C18 柱（250mm×46mm，5μm）微量进样器超声波清洗器离心机容量瓶（100mL、50mL）移液器2、试剂葡萄糖标准品（纯度≥99%）甲醇（色谱纯）超纯水磷酸（分析纯）四、实验步骤1、溶液配制标准储备液：准确称取适量的葡萄糖标准品，用超纯水溶解并定容至 100mL 容量瓶中，配制成浓度为 1000mg/L 的标准储备液。
标准工作液：用移液器分别吸取一定体积的标准储备液，用超纯水稀释成一系列不同浓度（如 10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L）的标准工作液，备用。
样品溶液：将待测样品经过适当的预处理（如离心、过滤等）后，用超纯水稀释至适当浓度。
2、色谱条件设置流动相：甲醇水（体积比 15:85），其中含 01%磷酸。
流速：10mL/min柱温：30℃检测波长：245nm进样量：20μL3、仪器调试与平衡打开高效液相色谱仪的电源，按照仪器操作手册设置各项参数。
用流动相冲洗色谱柱，直至基线稳定。
4、标准曲线绘制依次进样不同浓度的标准工作液，记录各浓度下葡萄糖的峰面积。
以葡萄糖浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
液相色谱工作情况汇报
液相色谱工作情况汇报一、液相色谱概述液相色谱是一种广泛运用于化学、药学、环境监测等领域的分析技术。
它利用固定相与液相之间的亲和性差异，将被分析物分离出来，再通过检测方法进行分析。
我所在的实验室主要是利用液相色谱技术来进行药物分析、环境监测和化学物质检测等工作。
在过去的一段时间里，我深入研究了液相色谱的原理和仪器操作技术，并成功应用于实际工作中。
二、工作内容及进展1. 药物分析在药物分析方面，我主要开展了对常见药物的含量测定、纯度检测和杂质分析等工作。
通过液相色谱技术，我成功开展了对多种药物的分析工作，并取得了良好的分析结果。
其中，我针对一批抗生素类药物进行了含量测定和杂质分析的工作。
在这一方面，我通过液相色谱技术的测定，对其含量进行了准确的分析，并成功检出了部分杂质，为企业生产提供了重要的技术支持。
此外，我还针对一些中药制剂进行了液相色谱分析，对其中的有效成分进行了定量分析和质量控制工作。
这些工作为中药制剂的研发和生产提供了重要的技术支持。
2. 环境监测在环境监测方面，我将液相色谱技术应用于水质、大气和土壤等不同环境中的化学物质分析工作。
通过液相色谱技术，我成功开展了对水体中污染物的检测和定量分析，并取得了令人满意的分析结果。
我还开展了对大气和土壤中的有机物和无机物的分析工作。
通过液相色谱技术，我可以准确地测定这些物质的含量和种类，为环境保护和治理提供了重要的技术支持。
3. 新技术研究在液相色谱领域，我还开展了一些新技术的研究工作，尝试应用于实际工作中，为分析结果的提高和工作效率的提升做出了努力。
其中，我尝试了一种新的柱填料和分离方法，对比传统的方法，这种新方法具有更高的分辨率和更短的分析时间，而且对于复杂样品的分离效果更好。
通过这些工作，我不仅提高了自身的技术水平，也为实验室的工作质量和效率作出了贡献。
三、存在问题及解决方案在实际的工作中，我也遇到了一些问题，主要集中在以下几个方面：1. 样品提取和准备阶段存在一定的不确定性，需要进一步优化提取方法和准备技术，以保证样品的准确性和可靠性。
液相色谱实验报告
(3) 进样：将样品用滤膜过滤，用 10uL 玻璃注射器将样品液体从进样阀进（注 意，进样时，尽量不要让针头接触进样孔的壁） ，进好样后，进行测试，观察 工作电脑桌面上液相曲线变化，测试完后停止进样，用电脑进行数据分析。 5、关机 实验完毕后，关闭仪器和电脑。
五．实验参数
见附页
六．实验结论
1.已知液相关数据的计算 1）理论塔板数的计算 如图取第 3 组、第 8 组得 峰高的平均值 h (309.99 321.77) / 2 315.88mV 峰面积平均值 A=(1825.31+1758.64)/2=1791.975 mV . sec 如图取第 3 组数据， 保留时间： t R 2.97750 min 178.65s
三．仪器及试剂
仪器：液相色谱仪（大连依利特） 、微量注射器 试剂；乙腈和 0.1%磷酸水溶液 1:1 混合液、样品（氨基布洛芬）
四．操作流程或步骤
1、准备(老师已备好) (1) 准备所需的流动相，用合适的滤膜过滤，超声脱气； (2) 根据待检样品的需要选择并安装好合适的色谱柱； (3) 配置样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制） ，用合适的滤膜过滤； (4) 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常； (5) 开机：接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，和检测器自检后，打 开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 (6) 用样品液润洗注射器，润洗干净后，取 20µL 标准液，注入贮液器，观察电 脑上峰的形成。 (7) 用润洗液润洗注射器，润洗干净后，取 20µL 样品也，注入贮液器，观察电 脑上峰的形成，一次方法测量多组。 (8) 实验完成后，清理实验仪器，关闭相应仪器，最后关闭电源。 2、参数设定 （1）波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入波长值， 按[enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕，也可以选择 LC-solution 软件方便地 设定； (2)流速设定：在泵显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入所需的流速（柱在 线时流速一般不超过 1mL/min） ，按[enter]键确认。按[CE]键退出，也可以选择 LC-solution 软件设定； (3)流动相比例设定：在 A 泵显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入流动相 B 的浓度百分数，按[enter]键确认。按[CE]键退出，也可在软件中设定。 3、更换流动相并排气泡 将 A/B 管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中， 逆时针转动 A/B 泵的排液阀 180o，打开排液阀，按 A/B 泵的[purge]键，pump 指示灯亮，泵大约 以 9.9mL/min 的流速冲洗， 3min （可设定） 后自动停止， 将排液阀顺时针转到底， 关闭排液阀，如管路中有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 4、平衡系统 (1) 按 泵的[pump]键，亮 pump 指示灯。用检验方法规定的 流动相冲洗系统，一 般最少需 6 倍柱体积的流动相，观测泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不 超过 1MPa。 (2) 观察基线变化。 如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min， 噪声为<0.001mV 时， 可认 为系统已达到平衡系统，可以进样。
等度条件液相色谱条件优化实验报告
等度条件液相色谱条件优化实验报告
实验目的：
通过调节等度条件液相色谱的条件，实现各组分的有效分离。
实验原理：
等度条件液相色谱（Isocratic HPLC）是指在分析过程中，流动相浓度保持不变的液相色谱分析方法。
通过调节流速、流动相的成分及pH值等条件，实现样品中物质的有效分离。
在优化实验中，可通过改变流速、流动相的组成及pH值等参数，以达到最佳分离效果。
实验步骤：
1.准备样品溶液：选择需要分离的物质，并将其溶解于适当的溶剂中，生成样品溶液。
2.选择合适的色谱柱：根据需要分离的物质性质，选择适用的色谱柱。
3.选择合适的流动相：选择适合的流动相溶液，并调整其组成及pH值。
4.优化流速：在一定的流动相条件下，逐渐调节流速，观察分离情况，选择流速使得分离效果最佳。
5.优化流动相的组成及pH值：保持流速不变，逐渐调节流动相的组成及pH值，观察分离情况，选择最佳组成及pH值。
6.记录结果：记录不同条件下的分离效果，包括流速、流动相组成、pH值等。
实验结果：
经过优化条件实验，得到了最佳的分离效果。
在流速为xx
mL/min，流动相组成为xx的条件下，样品中的目标物质得到了有效的分离。
实验结论：
通过优化等度条件液相色谱的条件，成功实现了目标物质的有效分离。
有效的实验设计和优化可以提高分析效率和精确度。
实验报告二液相
实验报告二液相课程名称：生物仪器分析指导老师：成绩：__________________________实验名称：液相应用实验类型：探究同组学生姓名：一、实验目的和要求二、实验内容和原理三、主要仪器设备四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析七、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱仪(HPLC)的原理和使用方法。
2、利用HPLC分析有机酸的特征和含量。
3、了解保留时间、吸收光谱特征与结构之间的关系二、实验内容和原理内容：1、测定有机酸混合标准品的色谱。
2、测定未知浓度的水果（火龙果）的液相色谱。
3、计算该水果的有机酸含量。
原理：储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内；由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出；通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
在适宜的条件下，高效液相色谱可分离溶液中的不同组分。
样品进高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱分离后，以色谱峰的保留时间定性，利用色谱峰面积在一定范围内与浓度成线性关系进行定量。
本实验采用外标法，用紫外检测器测定有机酸混合标准品，分析未知浓度的水果（火龙果）中有机酸含量。
三、主要仪器设备1、仪器：岛津高效液相色谱仪（LC-20AT，日本Shimadzu公司），主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据记录与处理系统五部分组成。
还配有辅助装置，如自动进样系统。
2、材料和试剂：甲醇,有机酸混合标准液,火龙果样品溶液。
3、色谱条件：流动相：乙腈/重蒸水＝80/20（V/V），流速1.0mL/min；0.05mol/ml(NH4)2PO4；柱温：30℃；进样量：10uL；氨基柱：4.6×250mm；C18柱；紫外检测器：SPD-20A；示差检测器：RID-10A。
研究生液相色谱实验报告
高效液相实验报告高乃群S080601018实验目的1.了解高效液相色谱仪的类型和各自的优缺点;2.了解液相色谱仪及各检测器的工作原理3.掌握高效液相色谱仪的操作;4..学会高效液相实验数据的处理;实验原理:1.液固色谱法使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。
分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。
常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。
适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。
常用于分离同分异构体。
2.液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动正相色谱法采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
相和固定相中溶解度不同而分离。
分离过程是一个分配平衡过程。
3.离子交换色谱法固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。
被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
4.离子对色谱法根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。
HPLC高效液相色谱分析实验
仪器分析实验报告实验名称：HPLC高效液相色谱分析实验学院：专业：班级：姓名：学号指导教师：日期：2013-5-15一、实验目的1.了解HPLC的结构，了解仪器的开、关程序；2.了解流动相的制备和样品溶液的制备；3.知道仪器设备的运行程序的进行样品分析。
二、实验原理液相色谱由泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，试剂瓶中的流动相被泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
三、仪器与试剂仪器：美国安捷伦1200型HPLC、10μL的微量注射器试剂：乙腈、重蒸水、磷酸、氰基布络芬四、实验步骤1.流动相的准备流动相只有一组：氰基布络芬，经过脱气。
2.开机，色谱柱平衡当1完成后，开机，特色谱柱平衡。
3.样品溶液的准备配置好氰基布络芬溶液，按要求选好滤纸的孔径大小。
用低压过滤装置过滤，由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。
4.基线的查看由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需等待压力稳定后，基线平稳才能进行进样。
5.样品进样分析用25μL的微量注射器取20μL的氰基布络芬，微量注射器中不能有气泡，将微量注射器的针头插入注射器的孔时，打开微量注射器阀，将氰基布络芬注射进去后，迅速关闭阀门，抽出针头，等待仪器的分析结果。
6.色谱柱的清洗分析工作结束后，要清洗进样阀中的残留样品，也要用适当的液体来清洗色谱柱。
7. 关机实验完毕后，关闭仪器和电脑。
五、实验数据与处理%1001⨯⨯⨯=f m m A A w ss i i 1≈i fi A -------未知物峰面积；s A ------标准物峰面积；()03.133302.13703.13204.130=÷++=i A sec ⋅mV()sec 88.1432340.145292.144133.1404⋅=÷++=mV A iss ii i i m A A m m w m ⨯=⨯=即ppmppm ppmA A m sii 82.9210088.143203.133100=⨯=⨯=色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为：H L n =理论塔板数和色谱参数之间的关系为：222154.516⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛=⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛=Y t W t n R b R取平均值，计算得：1R t =27.71083min=1662.6498s2R t =35.04500min=2102.7s1R t =40.53167min=2431.9002s∴ R t =2065.75sh A Y i 064.121= (P65色谱定量分析)h=45.78mV 7311.2064.178.4503.13321=∙=Y s ()块3169727205.3169727731.22065.7554.554.52221≈=⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛∙=⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛=Y t n R六、实验分析与讨论由色谱图和计算结果可知，该实验做的还是比较成功的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相实验报告
高乃群S080601018
实验目的
1.了解高效液相色谱仪的类型和各自的优缺点;
2.了解液相色谱仪及各检测器的工作原理
3.掌握高效液相色谱仪的操作;
4..学会高效液相实验数据的处理;
实验原理:
1.液固色谱法使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定
相对组分吸附力大小不同而分离。
分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。
常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。
适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。
常用于分离同分异构体。
2.液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面
而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动正相色谱法采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
适用于分离非极性和极性较弱的化合物。
RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
相和固定相中溶解度不同而分离。
分离过程是一个分配平衡过程。
3.离子交换色谱法固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的
聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。
被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
4.离子对色谱法根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合
物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。
主要用于分析离子强度大的酸碱物质。
5.排阻色谱法固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶
剂。
小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。
它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。
常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。
实验设备：高效液相色谱仪
仪器及试剂：邻硝基苯酚间苯三酚注射器
实验步骤及数据处理：
1.实验前提前打开仪器进行平衡；
2.将待测样品脱气及过滤处理；
3.本实验用邻硝基苯酚和间苯三酚不同浓度的混合液做标准曲线得到的标准曲
线图
4.根据标准曲线进行定性实验测得第一个峰为间苯三酚，含量为0.063mg/ml
第二峰为邻硝基苯酚；浓度为0.074mg/ml.
无标题 报告
用户名称： S y s te m
项目名称： Y u x u e ju n
页码： 1 (共计 1)
报告方法： 无标题打印 15:57:282008-12-17样品信息
样品名称：采集者： S y s te m
样品 样品类型：采集时间： 未知 2008-12-16 15:38:40 瓶号：采集方法组： 1 08
进样次数：处理日期： 2
2008-12-17 15:56:00 进样体积：处理方法： 20.00 u l te s t2 运行时间：通道名称： 16.0 M in u te s
W v ln C h 1
样品组名称：
处理通道注释：
P D A 232.0 纳米
自动标尺色谱图
A U
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
分钟
2.00
4.00
6.00
8.0010.00
12.00
14.00
16.00
4.731
间
苯
三酚 -
6.416邻硝
基苯酚 - 7
.770123
名字保留时间(分钟)
面积(微伏*秒)高度(微伏)含量
单位
间苯三酚邻硝基苯酚
4.7316.4167.770
27687255348996142884
9545474388429262
0.0630.074
m g /m l m g /m l。