实验二 沉淀反应(2015修改)

阳性对照沉淀线融合。
阴性：受检孔与中央孔之间无沉淀线。
带现象（zone
phenomenon）
一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀 反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗 体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉 眼可见的反应现象。 抗体过剩：前带现象；
抗原过剩：后带现象。
作业：
完成实验报告，画出你所观察到的
结 果 观 察
一、环状沉淀反应
试验组
阳性对照组
阴性对照组
一、环状沉淀反应
结果判定：
两液面交界处出现清晰、致密
如线的白轮，是炭疽阳性。
无此现象为炭疽阴性。
二、双向琼脂扩散试验
目的：掌握双向琼脂扩散试验的原理、
操作方法及结果判定方法。
二、双向琼脂扩散试验
原理：
可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼 脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散 相遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相 遇处形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀 带对于组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而 对其它的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代 表一种AgAb系统的沉淀物。
实验二 沉淀反应
一、环状沉淀反应 二、双向琼脂扩散试验
一、环状沉淀反应
目的：以炭疽环状沉淀反应为例，掌握 沉淀反应原理、操作方法及结果 的判定方法。
原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如
果二者相应，则可在抗原、抗体两 液接触界面形成白色的沉淀环。
一、环状沉淀反应
实验材料：
1．被检抗原（沉淀原）的制备： （1）热浸法 取可疑材料约1克，研碎，加入510mL生理盐水混合，转至试管内，煮沸30min，取出 冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。 （2）冷浸法 取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭 菌后，取1cm2或兽毛数克浸于5-10倍的0.5%石炭酸生 理盐水中，4℃浸渍18-24小时，同上法过滤。
二、双向琼脂扩散试验
实验材料：
1、鸡传染性法氏囊病毒标准抗原；
2、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清；
3、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清；
4、平皿（Φ6cm）、打孔器、微量加样器等；
二、双向琼脂扩散试验
5、琼脂凝胶板： 将琼脂糖1.0克、NaCl 8.0克、蒸馏水100ml装 入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取7ml加入平皿 内（勿有气泡）使成约3mm厚的凝胶，待冷却凝固 后按如下图方式打孔。
一、环状沉淀反应
2．炭疽标准抗原 3、炭疽阴性抗原（健康组织浸出液） 4．阳性、阴性炭疽沉淀素血清
5．毛细吸管
沉淀反应管（Φ 0.3-0.4cm ）
一、环状沉淀反应
实 验 步 骤
设 阳 性 、 阴 性 静 用另一支毛细吸管吸取被检 对 置 材料，插入离沉淀管底近1/3 照 5 处，沿管壁缓慢加入到沉淀 － 10 素的上面，边注边提使达到 2/3高度处即可。 min 用毛细吸管吸取炭疽沉淀 素，插入沉淀反应管底部， 缓慢注入到距管底的1/3 处。
沉淀线，并对其进行简要说明。
注意:孔间距为孔的直径大小,打孔完毕要封底）
二、双向琼脂扩散试验
实验步骤：
中间孔加标准抗原， 外周孔加被检血清及阳性 血清（如要测被检血清的 效价，外周孔可倍比稀释 后依次加入）。加样后盖 上皿盖，37℃扩散24小时， 观察结果。
Ag
生理 盐水
?Байду номын сангаасAb
二、双向琼脂扩散试验
结果判断：
阳性：标准对照孔之间有明显的沉淀线时， 受检孔与中央孔之间形成沉淀线并与