酪氨酸酶活性抑制实验方案报告
酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品的研制
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作 者简介 ： 自强 （ ９ ５一） 男 ， 建惠 安人 ， 王 １６ ， 福 工程 师 ， 长期 从事 香料 、 香精 、 化妆 品 的研制工 作 。
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摘 要 ：研 究探 讨 了皮 肤 黑 色素 的 成 因 和 皮 肤 美 白机 理 。 通 过 测 定 常 用 的 ６种 生 物 美 白剂 对 酪 氨 酸 酶 活 性 的抑 制 率 ，初 步 建 立 美 白剂 效 果 的评 价 体 系 ， 实验 还 表 明 自制 中草 药 萃 取 物 美 白 效 果 明 显 ，抑 制 率 可 达 ９ ％ 。 同时 ， 开 发 了 ３种 美 白、 祛 斑 、 防 晒 等 功 能 的 化 妆 品 ， 市场 潜 力 ５
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此 ，近 些 年 皮 肤 美 白类 化 妆 品 市 场 的 开 发 日趋 重 视 ，无 论 是 日常 家 庭 用 还 是 专 业 美 容 店 用 ，美
白化 妆 品 已 成 为 护 肤 类 化 妆 品 的 主 流 品 种 之 一 ，尽 管 其 价 格 不 菲 ，但 所 占 的 市 场 份 额 越 来 越
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皮 肤 黑 色 素 细 胞 组 织 将 黑 色 素 转 移 到 表 皮 基 底 层 细 胞 中 ，随 着 细 胞 的 新 陈 代 谢 而 被 带 到 角
吲哚类似物的合成及酪氨酸酶抑制作用的研究的开题报告
吲哚类似物的合成及酪氨酸酶抑制作用的研究的开题报告
一、研究背景
吲哚类似物具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等作用。
其中，酪氨酸酶抑制作用是吲哚类似物中的一种重要生物活性。
酪氨酸酶是一种能够水解蛋白质中酪氨酸的酶，参与了身体内多种生理过程，包括牙齿和骨骼的形成和修复、体内荷尔蒙和神经递质的代谢等。
因此，寻找和研究具有酪氨酸酶抑制作用的吲哚类似物对于药物开发具有重要的意义。
二、研究目的
本研究旨在合成一系列新型的吲哚类似物，并对其进行酪氨酸酶抑制活性的测试，以期找到具有潜在药物活性的化合物。
三、研究内容和方法
1、合成一系列新型的吲哚类似物。
采用环缩合反应或多组分反应合成具有吲哚结构的化合物。
2、进行物化性质的表征。
采用核磁共振（NMR）、红外光谱（IR）等方法对化合物的结构进行表征。
3、测试化合物的酪氨酸酶抑制活性。
采用体外实验方法测试化合物对酪氨酸酶的抑制活性。
四、预期收获和意义
本研究有望合成一系列新型的吲哚类似物，并对其进行酪氨酸酶抑制活性的测试，从中筛选出具有潜在药物活性的化合物。
这将为开发新型的酪氨酸酶抑制剂及相关药物提供重要的理论和实验依据。
《基于酪氨酸酶抑制活性的槐耳次级代谢产物研究》
《基于酪氨酸酶抑制活性的槐耳次级代谢产物研究》一、引言酪氨酸酶是一种在生物体内具有重要作用的酶类，涉及到色素合成、自由基生成等多种生理生化过程。
在许多医学和生物学领域，酪氨酸酶的活性调控对于疾病的治疗和预防具有重要意义。
近年来，随着对天然产物的深入研究，越来越多的学者开始关注植物次级代谢产物在调控酪氨酸酶活性方面的作用。
槐耳作为一种传统中药材，其丰富的次级代谢产物为研究其抑制酪氨酸酶活性的作用提供了良好的基础。
本文旨在研究槐耳次级代谢产物的酪氨酸酶抑制活性，以期为相关疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。
二、研究方法本研究采用现代生物化学技术，对槐耳的次级代谢产物进行提取、分离和纯化，然后通过体外实验测定其对酪氨酸酶活性的影响。
具体步骤如下：1. 样品准备：选取优质的槐耳药材，采用合适的提取方法，得到槐耳的次级代谢产物提取液。
2. 分离纯化：通过现代分离技术，将提取液中的次级代谢产物进行分离和纯化，得到纯度较高的单一化合物。
3. 酶活性测定：采用适当的酶活性测定方法，测定单一化合物对酪氨酸酶活性的影响。
4. 数据处理：对实验数据进行统计分析，绘制图表，分析槐耳次级代谢产物的酪氨酸酶抑制活性。
三、实验结果通过上述实验方法，我们得到了以下实验结果：1. 槐耳次级代谢产物的提取和分离纯化：成功从槐耳中提取出次级代谢产物，并经过现代分离技术得到纯度较高的单一化合物。
2. 酪氨酸酶活性测定：实验结果显示，槐耳的次级代谢产物对酪氨酸酶活性具有显著的抑制作用。
其中，某些单一化合物的抑制效果尤为显著。
3. 数据分析：通过统计分析实验数据，我们发现槐耳次级代谢产物的酪氨酸酶抑制活性与其化学结构之间存在一定的关系。
不同化学结构的化合物在抑制酪氨酸酶活性方面表现出不同的效果。
四、讨论本研究表明，槐耳的次级代谢产物具有显著的酪氨酸酶抑制活性。
这一发现为开发新型酪氨酸酶抑制剂提供了新的思路和方法。
我们认为，槐耳次级代谢产物的酪氨酸酶抑制活性可能与其化学结构有关。
种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究
6种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究摘要! 目的! 研究&种中药对酪氨酸酶活性的抑制作用1 方法! 分别用50%乙醇水溶液回流提取中药白芷、白附子、当归、云苓、白蒺藜、银杏叶- 然后浓缩提取液至膏状1用水将$ #45膏状稀释为$45 6 47 - 测定各自对酪氨酸酶活性的抑制率1结果! &种中药白芷3 白附子3 当归3 云苓、白蒺藜、银杏叶都对酪氨酸酶活性的抑制率分别为35%、55%、60%、22%、55%、40%。
结论：白附子对酪氨酸酶活性抑制作用最强关键词! 黄褐斑；中药；祛斑；美白；酪氨酸酶据统计- 约有,70%的被调查者认为美容的最大障碍之一是面部雀斑、黄褐斑、老年斑的形成，它们属于常见色素沉着的皮肤病，影响容貌，给患者造成严重的心理压力，有报道美白祛斑类化妆品的市场份额始终处于增长趋势。
1994年日本的美白类化妆品销售额约为1980年的二十倍。
中国与日本属同一肤色人种- 巨大的市场潜力不容忽视1近年来- 对从传统药物和天然资源中寻找新药物- 已越来越受到许多发达国家和发展中国家的医药科研工作者的重视，我国是中药的发源地- 中药3 天然药物资源丰富- 而且几千年的临床实践-给开发和利用祛斑的天然植物提供宽广的空间1 本文在研究黄褐斑的形成机理和中药治疗黄褐斑的基础上，对6种常用中药进行了抑制酪氨酸酶活性的试验- 发现白附子、白蒺藜的提取液有较强的抑制酪氨酸酶活性的作用。
黄褐斑形成的机理及病因由于黄褐斑患者皮损部位黑色素细胞活性增强- 黑素和黑素小体均增加- 进而表现出色斑- 影响美容病理状态下- 真皮内巨噬细胞可吞噬滴落入真皮的黑色素体- 或沉着于真皮上层- 或在细胞内降解- 一部分经淋巴转移< / = 1色素的产生与排泄失去平衡- 并过剩地聚集在表皮细胞内的部分- 就形成色素沉着< & = 1黑色素的排泄有两条途径! 一是从肾内排泄- 另一是经皮肤排出- 即黑色素被转移到角质蛋白中- 随表皮生长移行到角质层，最后随角质层周期换新而脱落，病的原因有以下几个方面：1.1妊娠或口服避孕药由于妊娠或口服避孕药导致激素的改变! 血中雌激素" 孕激素或促黑色素细胞激素# $%&6水平增高使黑色素细胞活性增加1.2某些疾病某些慢性疾病! 特别是女性生殖器疾病和月经失调" 痛经"附件炎" 不孕症等以及肝脏病" 慢性酒精中毒" 甲状腺疾病" 结核" 内脏肿瘤患者中也常发生本病! 可能与卵巢" 垂体" 甲状腺等内分泌有关(有研究表明! 妇女中黄褐斑患者的甲状腺疾病患病率比正常人高! 故认为黄褐斑不是单一疾病! 可能是自身免疫病的一部分.1.3 遗传因素不同的资料表明有30%-70%的患者有家族史! 且男性的比例比女性高。
酪氨酸酶活性抑制实验方案报告
酪氨酸酶活性抑制实验方案报告1．1 材料：酪氨酸酶（或用马铃薯制备）、L-酪氨酸、熊果苷、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠恒温仪、紫外分光光度计、离心机。
1.2 试剂配制1)磷酸钠缓冲液(1/15 mol／L，pH=6．8)精确称取1.000 g磷酸二氢钠，1.186 g磷酸氢二钠，加入少量去离子水溶解后，定容至500 mL，4℃冰箱保存备用。
2)L-酪氨酸溶液(7.5 mmol/L)精确称取L_酪氨酸0.272 g，先加入数滴浓盐酸，加去离子水约50 mL，微热完全溶解后，用氢氧化钠溶液调pH至7左右，加去离子水定容至200mL。
3)受试液精确称取受试样品0.1g，分别溶于20 mL去离子水，得到5 mg/mL的待测液，再对倍稀释到2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL。
4)阳性对照(+CK)精确称取0.1 g熊果苷粉末，溶于20mL的去离子水中，得到5 mg/mL的阳性对照母液，再对倍稀释到2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125mg/mL。
5) 酪氨酸酶液的制备以新鲜完好的马铃薯制取酪氨酸酶液。
具体操作为：将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。
去皮，切成约1.0 cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。
称重，按1：1( W:V )的比例加入4℃ 预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000 r/min离心10 min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2 h内用完。
1.3 检测方法总反应体系为5mL。
具体设计见表l。
在此体系中，受试液，包括阳性对照熊果苷的终浓度(mg/mL)梯度为0.03l25、0.062 5、0.125，0.25、0.5。
实验时，向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、不同浓度梯度的受试液(包括阳性对照)、酶液，于30℃水浴10 min。
然后加入底物L-酪氨酸，立即开始计时。
测定反应20 min时475 nm波长下的吸光值。
糖基化三氮唑香草酸衍生物的合成及酪氨酸酶抑制活性研究_景临林_范小飞_贾正平
4c
152. 3 ～ 50. 11 5. 12 11. 05 153. 1 （ 50. 39） （ 5. 02） （ 11. 02）
82 382［M + 1］
143. 5 ～ 50. 56 4. 91 10. 89 4d 145. 2 （ 50. 39） （ 5. 02） （ 11. 02） 85 382［M + 1］
第 36 卷第 1 期
景临林等： 糖基化三氮唑香草酸衍生物的合成及酪氨酸酶抑制活性研究
9
化学试剂，2014，36（ 1） ，9 ～ 12； 92
糖基化三氮唑香草酸衍生物的合成及酪氨酸酶抑制活性研究
景临林1 ，范小飞1，2 ，贾正平* 1
（ 1． 兰州军区兰州总医院 药剂科，甘肃 兰州 730050； 2． 兰州大学 药学院，甘肃 兰州 730000）
酪氨酸酶（ EC 1. 14. 18. 1 ） 是一种在动植物 体内及微生物中广泛存在的含铜离子的氧化还原 酶，具有单酚酶和双酚酶的双重特性，是生物体内 黑色素合成 及 色 斑 产 生 的 关 键 酶［1］。 酪 氨 酸 酶 的过度表达会造成黑色素堆积，从而导致多种疾 病的发生，如老年斑、雀斑、黄褐斑以及恶性黑色 瘤等。酪氨酸酶抑制剂可以抑制黑色素生成，用 来预防和治疗色素沉着和黑色素瘤，还可用作防 止蔬菜水果褐变的保鲜剂和杀虫剂。因此，其在 医药、化妆品、食品工业和农业等领域都有着广阔 的应用前景［2］。
摘要： 以叠氮糖、炔丙基溴和香草醛为原料，通过醚化、“Click chemistry”、氧化、水解 4 步反应得到一系列标题化合物，产 物结构经1 HNMＲ、IＲ、EI-MS 和元素分析确认。通过对目标化合物进行酪氨酸酶抑制活性筛选，结果表明，所得目标化合 物均具有较强的酪氨酸酶抑制活性，其中 3-甲氧基-4-（ （ 1-（ （ 2Ｒ，3Ｒ，4S，5S，6Ｒ） -3，4，5-三羟基-6-（ 羟基甲基） 四氢-2H-吡 喃-2-基） -1H-1，2，3-三唑-4-基） 甲氧基） 苯甲酸活性最佳，IC50 为 0. 12 ± 0. 04 mmol / L。 关键词： 香草酸衍生物； 点击化学； 糖基化三唑； 酪氨酸酶抑制剂 中图分类号： O629． 9 文献标识码： A 文章编号： 0258-3283（ 2014） 01-0009-04
效应物对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用及其抑制机理的研究的开题报告
效应物对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用及其抑制机理的研究的开题报告一、选题背景及意义蘑菇酪氨酸酶是一种重要的催化剂，广泛存在于大量生物中。
它能够催化酪氨酸和其它芳香族氨基酸的氧化反应，生成对应的酮酸和氨基酸。
酪氨酸酶在生物学、化学以及食品工业中有着广泛的应用，例如可以用于酸奶的发酵、生物传感器的制造等。
因此，对于蘑菇酪氨酸酶的研究，不仅有着科学意义，而且有着实际应用价值。
然而，在某些情况下，酪氨酸酶的催化活性会受到抑制，这不仅会影响生物体内相关代谢过程的正常进行，也会降低它在应用中的效率。
因此，开展对蘑菇酪氨酸酶效应物对其抑制作用以及抑制机理的研究，对于深入了解酪氨酸酶催化的机理和普适性，提高其应用和价值，具有重要意义。
二、研究内容和方法本研究拟选取几种具有不同效应的物质，对于蘑菇酪氨酸酶的活性进行测定，分析效应物是否对酶的催化反应有抑制作用，并探究其抑制机理。
具体实验范围包括：1.选择2-苄基-3-甲基-4-氧代吲哚（BOI）作为活性度测定剂，确定酪氨酸酶活性的条件和催化反应特征。
2.发现具有不同结构的小分子化合物对于酪氨酸酶活性的影响情况，对每一种效应物测量其对酶的抑制能力，并比较不同效应物之间的差异和共性。
3.利用荧光光谱、差示扫描量热法等手段，探究效应物与酶之间的作用机理，如化学键的结合、电化学反应等等。
三、预期结果和意义通过对蘑菇酪氨酸酶效应物的抑制机理研究，可以深入掌握其催化反应的机理和规律，从而更好地利用这种酶开展应用的研究。
同时，这项研究将为寻找其它小分子抑制剂提供更有力的理论支持，有望为蘑菇酪氨酸酶的开发和利用提供新的思路和方法。
最终，本研究预期可以为生物科学、化学和食品加工等领域的技术进步和产品研发提供有力的支持。
中药酪氨酸酶抑制剂的研究的开题报告
中药酪氨酸酶抑制剂的研究的开题报告一、研究背景和意义随着生活水平的提高，人们的健康意识不断增强，越来越多的人开始关注中药的保健作用。
中药作为中华文化的重要组成部分之一，具有数千年的历史和文化底蕴，近年来已成为国际药物研究的热点之一。
酪氨酸酶（tyrosinase）是一个重要的酶类，在生物体中广泛存在并发挥着极其关键的作用。
它不仅参与到黑色素生物合成的过程中，同时还参与到物质代谢、免疫调节等多种生物学活动中。
然而，酪氨酸酶过度表达或活性增强可能导致色素沉着性皮肤病、癌症和自身免疫性疾病等不良反应，而过度抑制或缺乏酪氨酸酶则会导致失去色素的疾病，如白癜风和衰老等。
因此，寻找和开发酪氨酸酶抑制剂，对于预防和治疗上述疾病具有重要的意义。
中药是天然生物多样性的重要来源，其中许多成分具有良好的保健作用，如：美白、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
目前已发现许多中药能够通过抑制酪氨酸酶来实现其美白功能，如白芷、枸杞、甘草等。
因此，研究中药酪氨酸酶抑制剂在理论和应用上具有重要的意义。
二、研究内容和目的本研究将选取常见的中药材，如白芷、枸杞、甘草等作为研究对象，分离提取其中的有效成分，并通过酪氨酸酶活性测定来筛选中药酪氨酸酶抑制剂，探索中药抑制酪氨酸酶的作用机制，寻找最有效的中药成分，为中药的美白功能提供有力的支持。
同时，通过将中药的抑制作用与化学合成的酪氨酸酶抑制剂进行对比，探讨中药的优势和劣势，为中药与化学药物的合理搭配提供理论依据。
三、研究方法1、中药提取：将选取的中药材粉末，采用乙醇水提取法和超声波提取法进行提取，筛选出有效成分。
2、酪氨酸酶活性测定：通过紫外-可见光谱法、酶动力学法等方法，比较中药材和合成药物对酪氨酸酶的抑制作用，并探讨作用机制。
3、成分分析：采用质谱分析、核磁共振分析等技术手段，对中药提取物中的有效成分进行分析。
四、预期成果1、筛选出潜在的中药酪氨酸酶抑制剂，并探讨其作用机制。
2、明确中药与合成药物在酪氨酸酶抑制方面的优势和劣势。
酪氨酸抑制性测定实验方案
熟地黄提取液对酪氨酸酶的抑制作用研究一、仪器和药品：仪器：分光光度计、微量移液器（1ml）、电子天平、容量瓶（10ml、50ml、250ml）、回流装置一套、沸石、抽滤装置、旋转蒸发仪、水浴恒温箱、烧杯和量筒若干。
药品：熟地黄粉末（约50g）、体积分数50%的乙醇（200ml）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、L-酪氨酸、酪氨酸酶、去离子水若干。
二、实验方案：A、熟地黄有效成分的提取：1、干燥熟地黄粉末10.0 g + 体积分数50%的乙醇100mL，室温浸泡24 h。
2、烧瓶+沸石+上述浸泡液，回流提取3 h，冷却后抽滤取滤液。
残渣再次加50%乙醇100mL 回流提取3 h，冷却抽滤取滤液，合并两次滤液。
（回流温度约80℃。
）3、将滤液置于旋转蒸发仪上60-65℃浓缩回收溶剂，得膏状提取物。
4、称取适量膏状提取物+去离子水配置成1 mg/mL 溶液备用。
B、磷酸缓冲溶液（PBS）的配制：1、称取磷酸氢二钠13.3984 g，加去离子水溶解，转移至250mL 容量瓶中定容得a液；另称取磷酸二氢钠6.9011 g，加去离子水溶解，转移至250mL容量瓶中定容得b液。
2、分别移取a、b两溶液各50mL至250mL容量瓶中，加去离子水定容，即得pH=6.8的磷酸缓冲溶液。
C、L-酪氨酸溶液和酪氨酸酶溶液的配制：1、称取L-酪氨酸25.6 g，用PBS缓冲液定容于50mL容量瓶中，即得L-酪氨酸溶液。
2、称取酪氨酸酶0.3502 g，用PBS缓冲液定容于10mL容量瓶中，即得酪氨酸酶溶液。
（冰水浴中操作、保存。
）D、酪氨酸酶活力的测定：（分光光度法测A475）用微量移液器分别按表一剂量准确移取a、b、c、d四组样液，置于37℃水浴中恒温10 min后，各加入0.40mL酪氨酸酶溶液，混匀，37℃温育反应10 min，迅速移入比色皿中，测得在475nm处的吸光度A a、A b、A c、A d ，然后按下面的公式计算熟地提取液对酪氨酸酶的抑制率：抑制率=[1-（A d-A c）/（A b-A a）]×100%其中：a：既无底物也无提取物的待测液；b：有底物但无提取物的待测液；c：无底物但有提取物的待测液；d：既有底物也有提取物的待测液。
酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用_杜孝元
Ｔｙｒｏ ｓｉｎ ａ ｓｅ ｉｎ ｈ ｉｂ ｉｔｉｏ ｎ ｔｅ ｓｔ ａ ｎ ｄ ｉｔｓ ａ ｐ ｐ ｌｉｃ ａ ｔｉｏ ｎ ｉｎ ｅ ｆｆｉｃ ａ ｃ ｙ ｅ ｖａ ｌｕ ａ ｔｉｏ ｎ ｏ ｆ ｗｈ ｉｔｅ ｎ ｉｎ ｇ ｃ ｏ ｓｍ ｅ ｔｉｃ ｓ
ＤＵ Ｘｉａｏ － ｙｕ ａｎ ， ＬＩＵ Ｗｅｉ， Ｓ ＨＩ Ｆｅｉ， ＺＨＡＮＧ Ｐｉｎ ｇ （Ｄｅｐ ａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇ ｙ， Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓ ｐ ｉｔａｌ ｏｆ Ａｉｒ Ｆｏｒｃｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００３６， Ｃｈｉｎａ）
７４２
中国美容医学 ２００５ 年 １２ 月第 １４ 卷第 ６ 期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｄｅｃ．２００５．Ｖｏｌ．１４．Ｎｏ．６
表 ３ 已知活性物成分的样品检测结果
活性物成分
浓度（ ％）
合成熊果苷（ ＡＲＢＵＴＩＮ）
３．０
天然熊果苷
２．０
曲酸双棕榈酸脂（ ＫＡＤ－Ｄ１５）
内（ 或接近）。
１．４ 功效评价表示方法
２．１．３ 曲酸标准对照：选用曲酸作为标准品对照，将浓度由
１．４．１ 抑制率计算方法：样品对酪氨酸酶活性的抑制强度以 ２０ｇ／Ｌ 倍量稀释至 １．２５ｇ／Ｌ，结果见表 ２。
抑制率表示。参照李莉［３］介绍的较简便方法，以阳性对照结果
结果显示量效关系呈负相关，ｒ＝－０．９７－０．９９，接近高度相关。
１ 材料和方法 １．１ 材料：酪氨酸酶（ Ｓｉｇｍａ 公司生产，货号 ９００２－１０－２）；Ｌ
多巴（ Ｓｉｇｍａ 公司生产，货号 ５９－９２－７）；曲酸（ Ｓｉｇｍａ 公司生 产，货号 ５０１－３０－４）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠（ 北京化工厂 生产，ＡＲ）。试验样品是由广州丹芭碧化妆品有限公司研究 和发展实验室提供，部分样品是市售的各种牌号的祛斑类产 品。恒温仪（ 美国 Ｆｉｓｈｅｒ 公司生产，型号 Ｂａｔｈ１３５）；紫外分光 光度计（ 日本岛律，ＵＶ－２２０１，上海第三分析仪器厂，型号 ７５２）；离心机（ 上海安亭科学仪器厂生产，ＬＸＪ－ＩＩＢ）。 １．２ 检测方法 １．２．１ 样品处理：取定量（ Ｗ）样品溶于定量（ Ｖ）去离子水 或三蒸水中（ 酪氨酸酶是铜蛋白，溶液中不应含有铜离子）， 经搅拌、混匀、沉淀等处理后吸取澄清部分待检。水剂和水溶 性凝胶剂可直接溶解；乳化剂要在溶解前先鉴别乳状液相 型，如为 Ｗ／Ｏ 型，则采取转型稀释法使成为 Ｏ／Ｗ 型。 １．２．２ 实验操作：在玻璃试管中进行生化反应，各管加入所 需缓冲液（ ｐＨ６．８，０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ＰＢ）、样品液、曲酸溶液和酶 溶液。于 ３０℃水浴中反应 １０ｍｉｎ，依次加入多巴溶液，再于 ３０℃水浴中反应 １０ｍｉｎ，测 ４７５ｎｍ ＯＤ 值。实验体系设计见 表 １。
酪氨酸酶抑制及激活作用动力学的分析
以底物浓度（mol/L）倒 数1/[S]对酶催化活性 OD/min值的倒数1/V作图， 根据三条线的交点判断抑制剂 的类型。
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三、实验报告
采用四人一组，每两人选择两个化合物进行测 1 试。因为每个实验由10个点构成，可以去掉几
测试酶催化活性。可以通过稀 释的方式改变样品的浓度。
以没有加入样品的酶催化活 性OD/min值为100%，用激 活百分数(指被激活而增加活 力的百分数)表示不同浓度样 品对酶的激活活性，作图求出 最大激活活性时样品的浓度。
2020/12/14
实验安排
6，激活剂动力学的测试 适当选择2个不同的样品浓
2020/12/14
在动植物体内，酪氨酸酶 对酪氨酸和其它酚类化合 物的代谢以及黑色素的合 成起重要的催化作用。酪 氨酸酶可以催化两类不同 的反应：单酚羟基化形成 邻二酚和邻苯二酚氧化成 邻醌，这两类反应都必须 有氧分子的直接参与。
2020/12/14
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❖ 酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的关键酶，它不仅决定黑素 合成的速率,还是黑素细胞分化成熟的特征性标志，因此 它给人体皮肤美白带来困难。酪氨酸酶的活性与黑素合成 量相关，控制其活力即可控制黑素生成量。因此，研究酪 氨酸酶的抑制，对防止水果、蔬菜的褐变，化妆品中的皮 肤增白，以及因酪氨酸酶催化产生黑色素引起的疾病（黄 褐斑、黑色素瘤等色素沉着性皮肤病等），具有非常重要 的治疗意义。
实验仪器和条件
北京普析通用UV-1901 紫 外可mol/LpH 6.8磷酸盐缓冲液。 底物：25mol/L 邻苯二 酚 化合物溶液的配制： 1-萘酚和二羟基二苯甲酮 用乙醇配成50mol/L。 2-萘酚和六羟基二苯甲酮 用乙醇配成10mol/L。 硫酸亚铁和硫酸铜用蒸馏 水配成50mol/L。
酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用
酪氨酸酶活性抑制实验及其在祛斑美白化妆品功效评价中的应用杜孝元;刘玮;史飞;张萍【期刊名称】《中国美容医学》【年(卷),期】2005(14)6【摘要】目的:建立评价祛斑美白化妆品功效的体外实验方法.方法:根据酪氨酸酶催化底物发生反应的原理,研究建立和优化了一种酪氨酸酶活性抑制实验系统,并采用不同浓度的曲酸溶液作为标准对照.结果:应用本方法进行测试,分别得出3.0%的熊果苷、4.0%的曲酸双棕榈酸脂、0.5%的氢醌对酪氨酸酶活性的抑制率分别为58.21%、92.92%、126.01%.对未知成分的数种化妆品样品也进行了同样测试,抑制率在3.1 5%～47.69%.结论:本研究为祛斑美白化妆品的功效评价提供了一种体外实验方法.【总页数】3页(P740-742)【作者】杜孝元;刘玮;史飞;张萍【作者单位】解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036;解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036;解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036;解放军空军总医院皮肤科,北京市,100036【正文语种】中文【中图分类】R977.3【相关文献】1.外感受抑制实验在紧张型头痛中枢调控机制研究中的应用 [J], 梁瑞华;张素平2.口服神经氨酸酶抑制剂奥司他韦在人实验性流行性感冒中的应用随机对照预防试验和治疗试验 [J], Frederick G. Hayden, MD;John J. Treanor MD ;R. Scott Fritz, PhD3.应用酶催化动力学——吸光光度法评价美白化妆品功效实验中几个问题的解决方法 [J], 杜孝元;赵广;蔡瑞康;刘玮4.甲醛挥发抑制剂在解剖实验教学中的应用 [J], 郭连军;田秀兰5.性视频刺激加5型磷酸二酯酶抑制剂激发阴茎勃起实验在勃起功能障碍诊治中的应用 [J], 朱选文;郭君平;张峰彬;钟达川;方家杰;李方印因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酪氨酸酶催化活性
综合实验辅导教材酪氨酸酸酶的提取及催化活性的研究一、实验目的认识生物体中酶的存在和催化作用，了解从土豆中提取酶的方法和研究酶活性的一般方法，学会用现代分析手段研究催化反应，特别是生物化学体系中催化过程的基本思路和方法。
二、实验原理许多复杂的有机物合成与分解反应需要在高温、高强酸碱或减压等苛刻条件下才能进行，而在生物体内，即使在十分温和的条件下，如常温、常压和近中性溶液中，许多复杂的化学反应却能顺利进行，其根本原因就是由于生物酶的存在。
生物酶是一种生物催化剂，按照它的组成，可分为两类，一类是简单蛋白质，其活性取决于它的结构，如脲酶、淀粉酶等；第二类的结合蛋白质酶，它需要加入某些非蛋白质组分（称为辅助因子）后，才能表现出酶的活性。
酶蛋白质与辅助因子结合形成的复合物称为全酶。
例如酪氨酸酶是以铜离子为辅助因子的全酶。
通常反被酶作用的物质称为该酶的底物，一种酶催化特定的一个或一类底物的反应，具有很高的选择性和灵敏度，因而引起广大分析工作者的重视和兴趣。
酶已作为一种分析试剂得到应用。
特别是有生化、医学方面有很高的应用价值。
例如生命物质和流体中的特殊有机成分，用其他方法测定有困难，用酶法分析却有其独到之处。
本实验从土豆中提取酪氨酸酶，并测定其催化活性。
当土豆、苹果、香焦等的受损面接触空气后会产生深棕色的现象是人们都见过的，这是这类物质含有酪氨酸和酪氨酸酶，酶存在于物质内部，当暴露在空气中后，在氧气的参与下，会发生一系列反应。
以下是主要的反应过程。
由于多巴转变成多巴红的反应速率较快，再转到下一步产物速率则慢得多，故可选择多巴转变为多巴红的反应速率的测定来判断催化反应的活性。
因多巴红具有特殊的颜色，故可用分光光度法测定，在不同的时刻测定某特定波长下的吸光度，用吸光度对时间作图，从所得的直线斜率求酶的活性。
酶的活性计算方法：一般定义在优化的条件下（包括pH 值、离子强度、温度等），25℃时在1min 内转化1μmol 底物所需要催化剂的量为活性单位。
酶活性抑制实验报告
实验名称：酶活性抑制实验实验目的：通过本实验，探究不同抑制剂对酶活性的影响，并分析其作用机制。
实验原理：酶活性受多种因素的影响，其中抑制剂是一种能够降低酶活性的物质。
根据抑制剂与酶的结合方式，可分为不可逆抑制和可逆抑制。
不可逆抑制剂与酶形成共价键，使酶失活；可逆抑制剂与酶形成非共价键，可逆地降低酶活性。
实验材料：1. 酶制剂（如过氧化氢酶、淀粉酶等）2. 底物（如H2O2、淀粉等）3. 抑制剂（如碘化物、氟化物等）4. pH缓冲液5. 温度控制装置6. 光度计7. 移液器8. 试管实验方法：1. 酶活性测定：取一定量的酶制剂，加入底物，在特定条件下（如pH、温度）反应，通过测定反应产物或底物的浓度变化来计算酶活性。
2. 抑制剂对酶活性的影响：向酶反应体系中加入不同浓度的抑制剂，重复上述步骤，观察抑制剂对酶活性的影响。
3. 抑制剂作用机制分析：通过比较不可逆抑制剂和可逆抑制剂对酶活性的影响，分析抑制剂的作用机制。
实验步骤：1. 酶活性测定：- 取一定量的酶制剂，加入底物，在特定条件下反应。
- 使用光度计测定反应体系中产物或底物的浓度变化。
- 计算酶活性。
2. 抑制剂对酶活性的影响：- 向酶反应体系中加入不同浓度的抑制剂。
- 重复上述步骤，观察抑制剂对酶活性的影响。
- 记录不同抑制剂浓度下的酶活性变化。
3. 抑制剂作用机制分析：- 比较不可逆抑制剂和可逆抑制剂对酶活性的影响。
- 分析抑制剂的作用机制。
实验结果：1. 酶活性测定：在特定条件下，酶活性与底物浓度呈正比关系。
2. 抑制剂对酶活性的影响：加入抑制剂后，酶活性降低。
不可逆抑制剂对酶活性的影响较大，而可逆抑制剂对酶活性的影响较小。
3. 抑制剂作用机制分析：不可逆抑制剂与酶形成共价键，使酶失活；可逆抑制剂与酶形成非共价键，可逆地降低酶活性。
实验结论：1. 抑制剂可以降低酶活性。
2. 不可逆抑制剂和可逆抑制剂对酶活性的影响不同。
3. 抑制剂的作用机制与其与酶的结合方式有关。
番石榴叶有机溶剂提取物清除过氧自由基能力及抑制酪氨酸酶活力研究
番石榴叶有机溶剂提取物清除过氧自由基能力及抑制酪氨酸酶活力研究番石榴叶是一种具有丰富药用价值的植物，在传统中医药中被广泛应用。
近年来，研究表明番石榴叶提取物具有抗氧化、抗炎、抑菌、降血糖、抗癌等多种生物活性。
本研究旨在探讨番石榴叶有机溶剂提取物对过氧自由基的清除能力以及对酪氨酸酶活力的抑制作用。
实验材料与方法：1. 实验材料：新鲜番石榴叶样品，有机溶剂（如乙醇、乙酸乙酯等）。
2. 提取方法：将番石榴叶样品切碎并晒干，然后采用有机溶剂进行提取，得到番石榴叶有机溶剂提取物。
3. 清除过氧自由基能力测定：采用标准方法，利用过氧化氢体系或DPPH自由基体系测定番石榴叶提取物的清除过氧自由基能力。
4. 酪氨酸酶活力测定：采用体外实验方法，将酪氨酸酶与不同浓度的番石榴叶提取物共培养，测定其酶活力变化。
实验结果与讨论：通过对番石榴叶有机溶剂提取物的清除过氧自由基能力进行测定，发现其具有显著的清除能力，且清除效果随着提取物浓度的增加而增强。
这表明番石榴叶提取物可以有效清除体内产生的过氧自由基，具有一定的抗氧化活性，有助于预防氧化损伤相关疾病的发生。
进一步研究发现，番石榴叶提取物对酪氨酸酶活力具有一定的抑制作用，且抑制效果与提取物浓度呈正相关。
酪氨酸酶是一种重要的氧化酶，在生物体内起着重要的生理调节作用，其活性的改变可能导致多种疾病的发生。
番石榴叶提取物对酪氨酸酶的抑制作用有望在治疗相关疾病中发挥作用。
总结：本研究表明，番石榴叶有机溶剂提取物具有显著的抗氧化活性，并且对酪氨酸酶活力具有一定的抑制作用。
这为番石榴叶在抗氧化、疾病治疗等方面的应用提供了科学依据，具有一定的药用开发和利用价值。
由于实验内容和方法的局限性，还需要进一步开展更多实验，以更全面、深入地了解番石榴叶有机溶剂提取物的药用活性及机制，为其在临床应用中发挥更大的作用提供科学支持。
白藜芦醇对酪氨酸酶活性抑制作用的实验研究
罗利琼
（ 广东药学院 生命科学与生物制药学院，广 东 广州 ５ １ ０ ０ ０ ６ ）
摘
要 ：目的 ：以邻 苯 二酚 为底 物 ，研 究 白藜芦 醇在 不 同温度 与 浓度 下对酪 氨酸 酶 的抑制作
用。方 法 ：用冰 丙酮提取 新 鲜 雪梨 中的酪 氨 酸 酶 ， 一２ Ｏ ｃ Ｉ ＝ 以下保 存 。 将 ９ ５ ％ 白藜 芦 醇 用 ６ ０ ％ 乙
ｃ ｏ ｌ ｄ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ 一２ ０ ℃． Ａ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｒａ ｔ ｉ ｔ ｏ ｎ ｗ ａ ｓ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ９ ５ ％ ｒ ｅ ｓ ｖ ｅ ｒ ａ ｔ ｒ ｏ ｌ
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酪氨酸酶抑制率测定方法
1. 4念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制1. 4. 1念珠藻甲醇提取物对酪氨酸酶活力的影响提取物对酪氨酸酶的抑制参照Masuda和Kubo的方法[ 6, 7] , 并略作修改。
待测样品用DMSO 进行浓度梯度稀释, 浓度分别为1、05、025、0125 mg / mL; 换算成反应体系中的终浓度分别为333、1665、8325、4 3 g /mL。
反应在96孔细胞板上进行, 每组8孔, 分别是: A. 不含样品, 但含酪氨酸酶的阴性对照, 3孔重复; B. 不含样品及酪氨酸酶的空白对照, 1孔; C. 包含样品及酪氨酸酶, 3孔重复,D. 含样品但不含酪氨酸酶的空白对照, 1 孔。
A 孔中加入190 L pH 68、0 1 mo l/L 磷酸缓冲液,10 L 1380 U /mL酪氨酸酶; B 孔中加入200 L 相同的磷酸缓冲液; C 孔中加入180 L磷酸缓冲液,10 L 1380 U /mL酪氨酸酶, 10 L样品; D 孔中加入190 L磷酸缓冲液, 10 L样品。
然后将细胞板在30条件下放置5 m in, 再在每孔中加入100 L2 5 mmo l/L L-酪氨酸( 见表1 )。
在30反应10m in后, 立即置于Tecan Sunrise 酶标仪中测量在475 nm下的吸光值。
提取物对酪氨酸酶活性的抑制按公式计算:抑制率=( A - B ) - ( C- D)*100%A – B参照文献方法〔3〕在数支干燥的试管中各加入1.oml0.03%左旋多巴溶液，再加上维生素E一日环糊精溶液，(加入量按表所列体积) 最后的磷酸钠缓冲液加至5.Oml，25℃恒温10 min后，加入0.4ml酶提取液，立即计时并迅速置于恒温槽内，待反应1min，用BaCRmanDV一70型分光原度计在475nm处测定吸收度，以缓冲液为参比，然后根据多巴色素的消光系数“=3700求出Vi，把无维生素E一日环糊精溶液存在时速度定为100%，求出不同浓度维生素E一日环糊精存在时酶的相对活性以及对酶的抑制率抑制率二V。
抑制黑色素形成检测平台-抑制酪氨酸酶tyrosinase活性
抑制黑色素形成檢測平台-活性2抑制酪氨酸酶(tyrosinase)BLK:空白組; KJ:麴酸; 其他為測試樣品代號抗皺活性檢測平台技術-抑制基質金屬蛋白酶活性膠原蛋白(collagens)是皮膚真皮層細胞外基質主要的成份，而基質金屬蛋白酶(MMPs)是一組降解細胞外基質的主要酶(包括MMP-1、MMP-2 及MMP-9)。
隨著年齡的增加，真皮層細胞外基質的基質金屬蛋白酶活性也隨著增加，因而導致真皮層的超微結構逐漸喪失其完整性，破壞了真皮層的彈力架構，結果使真皮變薄，皮膚彈性逐漸消失，皮膚鬆弛，因而出現皺紋的老化現象。
因此，適度的抑制MMPs的功能，可以達到抗皺延緩老化的效果。
抑制基質金屬蛋白酶活性試驗結果實例Marker:分子量標準品S: MMP-2和-9標準品M+:培養基添加TNF-αM:培養基其它為不同的受測樣品●當條帶的亮度愈小，MMP的活性愈低。
這表示受測樣品有抑制MMP酵素活性的效果，具有減少皮膚皺紋的潛力。
提升皮膚彈性篩選平台技術-快速篩選增加皮膚彈性化妝品原料技術皺紋產生的主要原因是皮膚內部的纖維斷裂或鬆弛，主導真皮彈力的彈力線狀纖維 (Elastin) 就是其中之一。
隨著年齡的增長，彈力分解酵素(Elastase) (會分解彈力線狀纖維)的數量和活性大大增加，導致過多彈力線狀纖維被分解而大為減低肌膚彈性，產生皺紋。
因此抑制彈力分解酵素的活性可以減少皺紋產生。
試驗方法是以經過BODIPY FL dye修飾的Elastin為受質，當與 Elastase反應後，受質斷裂同時釋放出特殊波長之螢光斷裂碎片，最後再由微量盤螢光光譜儀偵測釋放出螢光強度變化，當Elastase的活性被抑制時，螢光則會變弱。
提升皮膚彈性—Positive control (PC)：0.04 mM (N-Methoxysuccinyl -Ala-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone)。
桑叶抑制酪氨酸酶活性成分的研究的开题报告
桑叶抑制酪氨酸酶活性成分的研究的开题报告一、研究背景酪氨酸酶是一种在蛋白质降解中起重要作用的酶，在病理生理过程中也扮演着重要的角色。
近年来，越来越多的研究表明，酪氨酸酶与许多不同的疾病有关，包括癌症、神经退行性疾病、代谢性疾病等。
因此，探讨酪氨酸酶的调控机制及其抑制剂的开发具有重要的意义。
桑叶是中医宝库中的一种宝贵中药材，多种化学成分具有不同的药理活性。
其中含有多种对人体有益的生物活性物质，如黄酮类成分、多糖类成分、氨基酸等。
在传统药用方剂中，桑叶可以用于清热凉血、滋阴润肺等方面，具有广泛的应用价值。
在此背景下，我们将对桑叶提取物中抑制酪氨酸酶活性的成分进行研究，寻找新的抑制酪氨酸酶的天然药物。
二、研究目的本研究的主要目的是从桑叶提取物中筛选出抑制酪氨酸酶活性的生物活性成分，并探讨其酶活性抑制机制，为开发新的抑制酪氨酸酶的天然药物提供理论依据。
三、研究方法1.实验材料采集新鲜桑叶，进行干燥、研磨制备桑叶粉；以桑叶粉为原料，采用水提醇沉法提取桑叶提取物。
2.确定酪氨酸酶活性检测方法采用L-酪氨酸为底物，使用蛋白酶K为酪氨酸酶，测定其酶活性，建立可靠、稳定的酶活性检测方法。
3.桑叶提取物筛选酪氨酸酶抑制活性成分将不同浓度的桑叶提取物加入到酪氨酸酶反应体系中，测定其对酶活性的影响，并通过HPLC等技术手段进一步纯化和鉴定抑制酶活性的成分。
4.研究抑制酶活性的机制通过测定桑叶提取物的不同性质，如抗氧化能力、蛋白质含量、总黄酮含量等，探讨其可能的抑制酶活性的机制。
四、研究意义本研究的开展将为探讨天然药物抑制酪氨酸酶活性的机制提供新的理论依据，同时为寻找新的治疗癌症、神经退行性疾病、代谢性疾病等疾病的药物提供新的方向。
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酪氨酸酶活性抑制实验方案报告
1．1 材料：
酪氨酸酶（或用马铃薯制备）、L-酪氨酸、熊果苷、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠
恒温仪、紫外分光光度计、离心机。
1.2 试剂配制
1)磷酸钠缓冲液(1/15 mol／L，pH=6．8)
精确称取1.000 g磷酸二氢钠，1.186 g磷酸氢二钠，加入少量去离子水溶解后，定容至500 mL，4℃冰箱保存备用。
2)L-酪氨酸溶液(7.5 mmol/L)
精确称取L_酪氨酸0.272 g，先加入数滴浓盐酸，加去离子水约50 mL，微热完全溶解后，用氢氧化钠溶液调pH至7左右，加去离子水定容至200mL。
3)受试液
精确称取受试样品0.1g，分别溶于20 mL去离子水，得到5 mg/mL的待测液，再对倍稀释到2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL。
4)阳性对照(+CK)
精确称取0.1 g熊果苷粉末，溶于20mL的去离子水中，得到5 mg/mL的阳性对照母液，再对倍稀释到2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125
mg/mL。
5) 酪氨酸酶液的制备
以新鲜完好的马铃薯制取酪氨酸酶液。
具体操作为：将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。
去皮，切成约1.0 cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。
称重，按1：
1( W:V )的比例加入4℃ 预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000 r/min离心10 min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2 h内用完。
1.3 检测方法
总反应体系为5mL。
具体设计见表l。
在此体系中，受试液，包括阳性对照熊果苷的终浓度(mg/mL)梯度为
0.03l25、0.062 5、0.125，0.25、0.5。
实验时，向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、不同浓度梯度的受试液(包括阳性对照)、酶液，于30℃水浴10 min。
然后加入底物L-酪氨酸，立即开始计时。
测定反应20 min时475 nm波长下的吸光值。
测定时，以相应的阴性对照为参比，用下列公式计算受试液(包括阳性对照)对酪氨酸酶的抑制率，并依据浓度一酶抑制率曲线估计半数抑制浓度(IC50)的近似值。
抑制率=[(A-B)/A]×l00％
其中，“A”为标准对照的吸光值，“B”为受试液(或阳性对照)的吸光值。
每个实验做3个平行。
抑制率高表明其对酪氨酸酶活性的抑制强度高。
表1 5mL试验体系设计
注：用分光光度计测量吸光值时，“受试液”、“标准对照”、“阳性对照”分别以“阴性对照1”、“阴性对照2”、“阴性对照3”调零。