无菌检查法

修订为：“ 液体制剂最少检验量及上市抽验 样品的最少检验数量”。——明确液体制剂 最少检验量见表2的第2列，供试品最少检验 数量见表2的第3列。 · 修订了表2下的 注: ——对供试品容器装 量不够接种两种培养基的情况，明确规定最 少检验数量应加倍。
表3
• 将表3原名称：“上市抽验样品（固体制 剂）的最少检验量”
的必检项目，为对所检供试品的质量负责， 对检验质量的负责，应对检出菌有一定的 证明。
● 理由（3） 全国微生物重点实验室的建立和发展，
以及现有微生物检定能力的证明，是药典 增加检出菌检定规定的基础建设和技术支 撑。
相信随着科技的进步、国家对药品安全的 关注，和我们对无菌检查法的深入研究及微 生物检定能力的发展，药典无菌检查法中增 加对检出菌的检定要求是必须的，也是能够 做到的！！
——美国药典中同时收载两种巯乙醇酸 盐流体培养基供选择，其中之一无刃天青 和琼脂。
引入思考：什么情况下应选择用？为甚我 国只收载一种？
理由（4） 可能存在严格厌氧菌——巯乙醇酸盐
流体培养基中所营造的厌氧环境是否足 以满足严格厌氧菌的培养需要。
引入思考：现无菌检查的实验操作、培 养条件是否满足严格厌氧菌的检出。
轮船正招式成商立局，标志着中国新式航运业的诞生。
(2)1900年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是
在列强排挤中艰难求生。
2．航空
(1)起步：1918年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始
研制 。
(2)发展水：上1飞918机年，北洋政府在交通部下设“
”；此后十年间，航空事业获得较快发展。
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·5、增、修订：装有药物的注射器供试
品的检验方法 ——删除 “装上无菌针头（非包装中
所配带的）” 修订为 “取规定量，排出注射器中的内 容物，若需要可吸入稀释液或标签所示的 溶剂溶解，直接过滤，
供试品的无菌检查部分
直接接种法
·删除原直接接种法中ß-内酰胺类或黄
胺类供试品项 。 ——因该两类供试品的无菌检查以采用 薄膜过滤法加中和剂更好。
2、增加对检出菌的检定要求
·理由（1） 无菌检查法前言中：“若供试品符合无
菌检查法的规定,仅表明供试品在该检验条 件下未发现微生物污染。”
——那么，若供试品不符合无菌检 查法的规定，是否就能表明绝对是供试品 污染所致？ 怎么证明、确定是供试品 污染所致？
● 理由（2） 无菌检查是高风险产品关乎用药安全
供试品的无菌检查部分
培养及观察
对于培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长时，删除了：“或 划线接种于斜面培养基上” 的规定。 同时删除了可根据斜面是否有菌生长而判断的规定。
结果判断部分
新增订阳性对照管和阴性对照管的实验结果对于整体实验结果判断的作 用：
—— “ 阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则， 试验无效。”
修订为：“ 固体制剂最少检验量及上市 抽验样品的最少检验数量”————明 确固体制剂最少检验量见表3第2列；供 试品最少检验数量见表3的第3列。 ·修订了表3下的 注: ——对供试品容器 装量不够接种两种培养基的情况，明确 规定最少检验数量应加倍。
对药典无菌检查法的展望
一、无菌检查用培养基的不断改进 1、与国际先进药典无菌检查法所用培养基一致 2、深入开展无菌检查用培养基的研究与开
3．发展 (1)原因： ①甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的 修。筑权 ②修路成为中国人 救的亡强图烈存愿望。 (2)成果：1909年 京建张成铁通路车；民国以后，各条商路修筑 权收归国有。 4．制约因素 政潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入 正轨。
二、水运与航空
1．水运 (1)1872年,
3、每种接种后的培养基分 别置两种温度（适合细菌生长和适合真 菌生长）下培养
使可能接种到某一培养基中去的菌都能 在适宜的温度生长，增加捡出率。
谢谢！
历史ⅱ岳麓版第13课交通与通讯 的变化资料
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[自读教材·填要点]
一、铁路，更多的铁路 1．地位 铁路是 交通建运设输的重点，便于国计民生，成为国民经济 发展的动脉。 2．出现 1881年，中国自建的第一条铁路——唐山 至开胥平各庄铁 路建成通车。 1888年，宫廷专用铁路落成。
2．特点 (1)近代中国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和 航空都获得了一定程度的发展。 (2)近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。 (3)地域之间的发展不平衡。 3．影响 (1)积极影响：促进了经济发展，改变了人们的出行方式， 一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的 联系，丰富了人们的生活。 (2)消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠夺。
发 二、增加对检出菌的检定要求 三、每种接种后的培养基分别置两种温度（适合细
菌生长和适合真菌生长）下培养
一、无菌检查用培养基的不断改进
1、与国际先进药典无菌检查法所用培养基一 致
理由（1） 随着对药品安全的保证和药品无
菌检查要求的不断提高，无菌检查用培 养基应不断改进。
理由（2） USP<71>中大豆酪蛋白胨培养基灵敏度
表1、表2和表3部分
表1
将表1第3列的表题原 “每种培养基最少检验数量” 修订为：“接种每种培养基所需的最少检验数量” ——更明确指出接种到 培养基中去的检验量。
修订了表1下的 注: 对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确 规定最少检验数量应加倍。
表2
• 将 的最表少2原检名验称数：量“”上市抽验样品（液体制剂）
版无菌检查法
增、修订涉及范围
前言部分
培养基部分 灵敏度检查 稀释液、冲洗液 方法验证 薄膜过滤法 培养及观察 结果判断 表1、表2和表3
前言部分
1、新增规定：“ 防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。” 2、新增规定：“ 日常检验还需要对环境进行监控。” 3、新增规定：“ 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技 术的培训。
培养基部分
1、删除：1. 硫乙醇酸盐流体培养基 后括号（用于培养好氧菌、厌 氧菌）的说明
2、删除：2. 改良马丁培养基 后括号（用于培养真菌）的说明
培养基部分
3、删除：3. 选择性培养基 项下加入适量中和剂或表面活性剂后面的 “ 如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试 品）或β -内酰胺酶（用于β -内酰胺类供试品）”等说明。
供试品的的无菌检查部分
薄膜过滤法：
1、新增规定：抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜 2、新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不得过1000ml 3、新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同验证试验
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·4、增、修订无菌气（喷）雾剂供试品的
检验方法： ——规定冰室的温度应至少为-20℃， 新增了开启容器后 “将供试品转移至无菌容 器中”的操作步骤。
● 2、验证试验中样品用量的规定：
删除了原：“ 将规定量供试品按… ”
修订为： 薄膜过滤法验证试验样品量： “ 取每种培养基规定接种的供试品总量按 薄膜过滤法过滤。” 直接接种法验证试验样品量： “…其中1管接入每支培养基规定量的供试 品量，“ —— 明确了验证试验所需样品量是供试 品的检验量而不是供试品的检验数量。
培养基灵敏度检查部分
2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限：
“ 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃， 可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验证过的贮存期内 使用。”
稀释液、冲洗液及其制备方法部分
在 原有 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
存在的菌都培养出来。
理由（2） 与培养基灵敏度试验用菌相比较，药
品中的污染微生物更广泛、活性更低。
可能存在某些苛养菌——是否需要添 加更丰富的营养成分，如动物的血液、动 物组织提取液等。
理由（3）
据报道：巯乙醇酸盐流体培养基中指示 剂刃天青对微生物有一定抑制作用；加 0.1%刃天青1ml~0.5ml对灵敏度无显著差 异。
[合作探究·提认知] 电视剧《闯关东》讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家， 从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山 一家从山东辗转逃亡到东北途中可能用到的四种交通工具。
依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。 提示：特点：新旧交通工具并存(或：传统的帆船、独轮车， 近代的小火轮、火车同时使用)。 原因：近代西方列强的侵略加剧了中国的贫困，阻碍社会发 展；西方工业文明的冲击与示范；中国民族工业的兴起与发展； 政府及各阶层人士的提倡与推动。
可选用的中和剂或灭活方法
亚硫酸氢纳 稀释法 稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐 卵磷脂、聚山梨酯
亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐 卵磷脂 聚山梨酯 硫代硫酸盐 镁或钙离子 对氨基苯甲酸 ß-内酰胺酶
培养基部分
4、将原第 6. 0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无 菌检查） 修订排列为第 4.
修订为：
在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用 量同验证试验。
(中和剂、灭活剂见微生物限度检查法中表1）
表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法
干扰物
戊二醛 酚类、乙醇、吸附物 醛类 季铵类化合物（QACs）、 对羟基苯甲酸酯 汞类制剂 双胍类化合物 碘酒、洗必泰类 卤化物 乙二胺四乙酸（EDTA） 磺胺类 ß-内酰胺类抗生素
的基础上新增加： “可根据供试品的特性，选用其他经验证的适宜的溶液作为稀释液、冲洗 液。”
方法验证试验部分
1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌种的基础上，删除了 铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌。