微柱凝胶法血型鉴定操作规程精编版

微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程

微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程一、目的为规范ABO和RhD血型鉴定（微柱凝胶卡式法）的技术操作，保证鉴定结果准确即临床输血安全有效。

二、适用范围适用于微柱凝胶卡式法进行ABO和RhD血型鉴定。

三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。

四、步骤和方法1，取微柱凝胶ABO血型鉴定检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。

2，用微量移液器在A、B、D、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液，在Ac、Bc微孔中各加入受检者血清（血浆）50微升，再分别加入1%A、B型试剂红细胞悬液50微升。

3，将准备就绪的检测卡静止3分钟使其充分反应后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后，取出判断结果。

结果判读：如Ctrl微孔为阴性：A、B、D各微孔阳性表明受检红细胞表达相应抗原，Ac、Bc微孔阳性表明受检者血清（血浆）存在抗-A或者抗-B；若各微孔阴性，则结果相反；结合反应格局判读血型结果。

若Ctrl微孔为阳性，结果不可信，重新试验。

5，Rh血型分型：5.1取Rh血型分型微柱凝胶卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。

5.2使用微量移液器在C、c、D、E、e、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液。

5.3将检测卡静止3分钟使其充分反应后放入专用离心机按上述条件离心后观察结果。

5.4判断规则见上表：结果判定：如Ctrl微孔为阴性，C、c、D、E、e微孔中阳性结果表示受检者红细胞表达相应的血型抗原，反之则不表达相应的血型抗原。

微柱凝胶法血型鉴定操作规程

微柱凝胶法
1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml
2原理：
2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）；
2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶；
2.3凝胶间隙具有分子筛作用。

凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。

未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部；
2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。

3操作：
3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。

3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul
3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟
3.4离心结束后在白色背景前观察结果
4结果判断：
A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
A孔阴性B孔阴性为O型;A孔阳性B孔阳性为AB型。

5.注意事项
5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。

5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。

5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。

5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。

5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。

5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。

6.方法评价
卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。

ABO血型鉴定操作规程

1 目的指导工作人员进行ABO血型实验。

2 适用范围血型检验岗位工作人员3 职责负责送检标本ABO血型的检测工作。

4 【原理】ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。

同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。

【标本】1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。

【器材】载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。

【试剂】1.1 抗-A、抗-B试剂1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液1.3 受检者血清1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管【操作步骤】2.1 试管法2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。

2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。

用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。

2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。

2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。

主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页2.1.5 凝集强度判断标准4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明；3+=红细胞凝集成几大块,血清尚清晰；2+=红细胞成中等大凝块,游离红细胞<1/2；1+=红细胞成小凝集块，游离红细胞>1/2；±=红细胞成微小凝集块，周围有很多游离红细胞。

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。

(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。

2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。

(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。

(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。

交叉配血试验标准操作规程(微柱凝胶)

交叉配血试验标准操作规程（微柱凝胶抗人球蛋白法）1. 目的为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。

2. 适用范围适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。

3. 职责医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。

4. 原理红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。

5. 所需设备和试剂普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡6. 检测环境条件室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。

7. 操作步骤7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。

7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者 0.5% 红细胞LIM 悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。

7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min,2500r/min离心1min。

7.4取出，判定结果，结果判定标准按下表：（可参照结果判定示图）检验结果的解释：阳性结果，表示受（供）血者血浆或血清中含供（受）血者红细胞血型抗原相应的抗体（不完全抗体IgG或完全抗体IgM），供受血者血液不相容。

阴性结果，表示供受血者血液相容。

8. 质量控制8.1微柱凝胶试剂卡在有效期内使用，每批试剂卡在使用前用已知阴、阳性对照确认其有效性。

8.1试剂质量控制方法8.1.1即作阴、阳性对照试验：撕开检测卡的封膜，于2个反应腔中分别加入已致敏IgG抗D的1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl、健康者1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl。

ABO、RhD血型检测卡(微柱凝胶)标准操作程序(正定)

ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶）标准操作程序（正定）发布日期：2012-03-20 查看次数：1197一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。

（二）检测标本的准备：红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1.0－1.2毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。

二、操作步骤1．将准备好的微柱凝胶试剂卡做好标记。

2．将配制好的被检者红细胞悬液分别加入第1至第3管或第4至第6管中，每管50微升。

3．即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼判定结果。

血型判定见表：血型抗A抗B抗DD 阳性A +—+B —++ O——+ AB+++D 阴性A +——B—+—O———AB++—三、注意事项1、检测标本必须为抗凝血。

2、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。

尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。

如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。

3、如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。

4、若结果为±或1＋需进一步分析，可能为亚型或弱化抗原。

5、每日实验前，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温，以防冷凝集。

6、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。

血型鉴定、交叉配血操作规程

ABO、Rh-D血型鉴定操作规程1.目的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采血2ml抗凝血,避免溶血试剂3. 试剂：长春博讯生物技术有限责任公司4.方法原理【原理】:标准血清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特异性的凝集反应。

根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。

5. 操作:一、玻片法(一般只能做正定型)【正定型】:1、取一张玻片,用蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每一等份左上角标明A、B、D,2、对应加入抗A和抗B抗D标准血清一滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2大小;5、轻轻地连续倾斜转动玻片2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型血;B端凝集为B型血;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,无凝集则为RH阴性。

备注:玻片法可作为ABO血型初筛或复检;不适用于抗体鉴定和交叉配血;不适合检测ABO亚型。

二、试管法(盐水介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者血清(血浆)中相应的抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的凝集反应,从而可推断出受检者的血型。

【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可自行新鲜配制);2、受试者血清或血清;3、洁净康氏试管。

【正定型】:1、取二支洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加入抗A和抗B血清1滴;3、分别加入病人红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B型血。

【反定型】:1、取二支试管分别记上AC和BC;2、分别加入病人血清;3、对应加入A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果;【解释】:首先检查上清液有无溶血,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型血;A、B管均不凝集则为AB型血;A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。

ABO、RhD血型鉴定

ABO、RhD血型鉴定操作规程一、目的指导规范本科工作人员进行血液ABO、RhD血型鉴定工作。

二、适用范围输血岗位工作人员。

三、职责负责对申请输血的标本进行ABO、RhD血型鉴定。

四、标本2mlEDTA-K2抗凝全血。

五、实验器材载玻片、0.5~10ul加样枪、20~200ul加样枪、100~1000ul加样枪、一次性吸头、台式离心机、小试管、微柱凝胶离心机、记号笔等。

六、实验试剂抗-A、抗-B血型定型试剂（单克隆抗体），RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）；0.5%~1%A、B标准红细胞盐水悬液；ABO、RhD血型定型检测卡；0.9%生理盐水。

七、检测原理血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合，能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性抗-A、抗-B和RhD标准血清来检测红细胞上有无相应的特异性抗原；而反定型，是同时用标准A 红细胞和B红细胞来检测被检血浆（清）中有无相应的天然IgM类抗-A 或抗-B。

微胶凝柱卡是采用排阻层析原理，在微胶凝柱介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。

八、操作流程1、玻片法1.1查抗原：取洁净载玻片一张，用记号笔标注好A、B、Rh，分别向所标注位置加5ul待检全血，再向相应位置滴加抗-A、抗-B、RhD标准血清一滴，混匀。

1.2查抗体：台式离心机3000r/min离心待检标本2min，上清备用。

取洁净载玻片一张，记号笔标注Ac、Bc，相应加入A型、B型标准红细胞一滴，再分别加入待检血浆（清）20ul，混匀。

1.3将玻片不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续15min，肉眼观察有无凝集反应。

如肉眼观察无凝集，则用显微镜观察有无凝集或溶血。

2、微胶凝柱法2.1标本准备：待检全血3000r/min离心2min，上清液为待检血浆；取压积红细胞10ul加入1000ul生理盐水中制成待检红细胞悬液，在试管上做好标记。

交叉配血试验标准操作规程(微柱凝集法)

南昌大学第一附属医院输血科第 1 页共 5 页交叉配血试验标准操作规程（微柱凝集法）一、目的为保证临床输血的相容性，确保临床输血安全，对全血、红细胞悬液、洗涤红细胞、浓缩红细胞、少白细胞红细胞、冰冻红细胞、机采浓缩白细胞悬液等血液成分进行交叉配血试验。

二、方法采用微柱凝集法；三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。

微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。

凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。

四、适用范围适用于输血前需进行交叉配血试验的血液及血液成分。

五、仪器设备普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器；六、试剂1、试剂名称：抗人球蛋白交叉配血卡（微柱凝集法）SOPREG012.01 第1 页共5南昌大学第一附属医院输血科第 2 页共 5 页2、试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：聚丙烯卡12卡×3检测人份/盒；5、贮藏条件；18-25℃避光保存。

6、有效期：自检定合格之日起12个月；七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。

2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。

3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。

4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。

八、操作步骤1、将受血者与献血者的红细胞血清分离；2、分别配制受血者与献血者0.5%-0.8%红细胞悬液3、将受血者血清50ul与献血者红细胞悬液50ul加入主侧管中；4、将受血者红细胞悬液50ul与献血者血清50ul加入次侧管中；5、将加样后的试剂卡置37℃免疫微柱孵育器中孵育15分钟；6、使用血型血清学多用离心机900rpm离心2分钟，1500rpm离心3分钟，取出肉眼观察结果。

血型鉴定微柱凝胶法

血型鉴定微柱凝胶法1.目的：采用正反定型对受检者进行血型鉴定2.职责：严格按照血型鉴定试剂说明书操作3.适用范围：血库工作人员4.原理：凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。

5.试剂、仪器及所需材料5.1 ABO/RhD血型定型检测试剂卡：江阴立博医药生物技术有限公司，产品注册号：国械注准20163400855，包装：6孔/卡，12卡每盒。

储存要求：18-25℃保存，主要成分：IgM性质抗-A单克隆试剂：细胞株HA4、ADD、HA5、HA3，来源于河北医科大学生物医学工程中心；IgM性质抗-B单克隆试剂：细胞株BAD、BDF、HB4，来源于河北医科大学生物医学工程中心；IgM性质抗-D单克隆试剂：细胞株RUM-1，来源于英国Millipore公司。

5.2 0.8%-1%的A型和B型红细胞5.3 0.9%的生理盐水：安徽双鹤药业有限责任公司5.4 LB-3000医用低速离心机一次性吸管一次性塑料试管6.标准种类及收集要求样本应符合《临床输血技术规范》要求，应无严重溶血、无脂血及无纤维蛋白存在，EDTA抗凝的血液标本。

7.检测环境条件：18-25℃，湿度30%-70%8.操作程序8.1 血型卡有六个凝集管。

其中第一管为抗A凝胶，第二管为抗B 凝胶，第三管为抗D凝胶，第四至六管为中性胶。

8.2 用生理盐水将待检者的压积红细胞配置成0.8%-1%浓度，分别加入第一至第三管和第六管微管中，每管50ul。

8.3 将A型、B型红细胞分别加入到第四和第五管中，每管50ul。

8.4将待检者血浆分别加入到第四至第六管中。

每管25ul。

8.5 混匀后置专用离心机离心5分钟。

输血科微柱凝胶法交叉配血试验标准操作规程

输血科微柱凝胶法交叉配血试验标准操作规程1目的建立微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验标准操作规程,确保微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验操作的准确性和规范性。

2原理微柱凝胶卡采用分子排阻层析原理在微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，而未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3适用范围适用于建立微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验4操作程序4.1试剂：4.1.10.9%生理盐水；4.1.2微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血试验检测卡4.2器材：4.2.1LDZ4-1.2台式普通离心机4.2.2微柱凝胶法专用孵育箱：FYQ型免疫微柱孵育器4.2.3微柱凝胶法专用离心分离机：TD-3A型血型血清学离心机4.2.4IOU1、50Ul的微量移液器。

4.2.5玻璃或塑料试管（IOXI2mm或12X15mm）4.2.6一次性枪头4.3样本要求：抗凝全血3ml,本实验室为EDTA-K2抗凝。

4.4方法4.4.1选择微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血试验检测卡，观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，然后将卡平行至室温（15°C-28℃）,平衡后用TD-3A型血型血清学离心机离心2-3min o做好标记：填写病人姓名、血型和配血日期，去除卡中微柱凝胶管上的密封铝膜。

4.4.2制备红细胞悬液：分别将受血者及供血者的抗凝血标本使用LDZ4-1.2台式普通离心机IoOOXg60SeC（3479转/分离心60SeC）,将红细胞吸出后，用0.9%生理盐水稀释成1%的溶液【10UI红细胞沉淀溶于InIIO.9%生理盐水中工取50Ul1%受血者或供血者红细胞悬液加于相应的微管。

4.4.3将已达室温的待检的全血标本使用LDZ4-1.2台式普通离心机离心IOOOXg2-3min（3479转/分离心2-3min）,确保加入反应体系中的血浆不含有任何颗粒性成分，取50UI受血者及供血者血浆加于相应的微管。

ABO Rh(D)血型鉴定(微住凝胶法)

寿阳县人民医院输血科指导作业书主题内容ABO Rh(D)血型鉴定操作规程版本：A/O生效日期：2018-08-01页码：第1页，共4页ABO Rh(D)血型鉴定（微住凝胶法）【产品名称】通用名称：ABO、RhD血型检测卡（微注柱胶）包装規格】12卡／盒（货号：BX1002【预期用途】本品用于人ABO、RhD血型抗原的检测，只用于临床检測，不用于血源筛查血型检测主要应用于输血。

当人身体内循环血量不足或大失血时，輸血是挽教患者生命的重要医疗措施。

输血的前提是必须选择血型相同的供血者，进行交又配血相合时才能输血对于RhD阴性结果应按有关规定做进一步的确认试验，必要时送血型参比实验室进行确认实【检验原理）本品应用了微柱凝胶免疫技术，采用排阻层析原理，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中：如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间沉于微柱腔底部【主要组成成分】本品系在聚丙烯塑料透明卡片上的六支微柱型管中充填凝敗，从左向右顺序第一支至第三支和第四支至第六支微管凝胶中均分别充以抗A（24和15B或A日和AB，鼠单克隆抗体，或上海血液生物医药与法国D1GAST公司混合液）、抗B（133和3C或BA，和BC，鼠单克抗体，或上海血液生物医药与法国 DIGAST公司混合液）、抗D（BS226，鼠单克隆抗体）IgM试剂。

【储存条件及有效期】2－25℃避光保存，有效期12个月。

寿阳县人民医院输血科指导作业书主题内容ABO Rh(D)血型鉴定操作规程版本：A/O生效日期：2018-08-01页码：第2页，共4页【适用仪器】长春博研科学仪器有限责任公司生产的离心机，型号：TD－3A型、TDA型；瑞士 Hami lton Bonaduz AG生产的185015型全自动血型分析仪。

【样本要求】标本采集：采集被检对象静脉血，加入含抗凝剂的试管中红细胞标本的制备：将采集的标本配制成0．5％～0．8％红细胞生理盐水悬液【检验方法】1．手工法（1）将微柱凝胶试剂卡标号。

S007红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程讲解

赣州市人民医院输血科第 1 页共9 页赣州市人民医院输血科第 2 页共9 页红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。

二、方法采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正反定型）与RhD 血型。

三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。

微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，卡片上从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM 试剂，检测人红细胞ABO、RhD抗原。

第四支至第六支微管中只有凝胶，第四支微管作阴性对照管，第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。

微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。

凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。

四、适用范围SOPREG007.01 第2 页共9赣州市人民医院输血科第 3 页共9 页适用于输血前患者红细胞ABO血型（正反定型）确认与RhD血型复查。

五、仪器设备普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器；六、试剂1、试剂名称：ABO、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）；试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：聚丙烯卡12检测人份/盒；贮藏条件；18-25℃避光保存；有效期：自检定合格之日起12个月；试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；抗D效价≥32；特异性试验合格。

2、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：A1、B、O试剂各1支，10ml /支；贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻；有效期：自检定合格之日起2个月；试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。

ABO血型正反定型实验操作比赛细则（微柱凝胶法）-吉安市中心血站

参赛人员：a 穿工作服、口罩、、帽子、手套；b 佩戴竞赛号牌；c 不佩戴手饰等；d 穿工作鞋或者带鞋套聚凝胺试剂盒（含低离子强度液、聚凝胺溶液、重悬(中和)液、阳性对照
(IgG 抗-D）液，专用离心机、显微镜、记号笔、吸管、吸嘴（盒子）、
试管、试管架、玻片、5-50 微升移液器、50-250 微升移液器、200-1000 微升移液器、生理盐水、擦镜纸、吸水纸、记录表单、消毒桶、氯制剂、有效氯浓度测试纸、抹布、医用垃圾袋。口述含有效氯消毒液 500mg/L 和 1000mg/L 浓度的用途与配制方法，用 500mg/L 氯制剂清洁工作台面及地面。（有擦拭动作即可））
2. 立即离心，离心条件为 900～1000g,离心时间 15 秒。 3. 先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果或是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来。
4. 观察有无凝集及凝集强度，并立即记录结果。血清（浆）标本制备：取受检者标本，1000g 离心 5 分钟，取上清，该上清无絮状物或沉淀。（可与正定型同步操作） 1. 取洁净小试管（10mm60mm）3 支，分别标明 A1、B、O，分别加入被检者血浆各 1 滴（50 微升）于试管底部。再分别加入 A1、B、O 试剂红细胞 1 滴（50 微升）。混匀。
2. 立即离心，离心条件为 1000g,时间 15 秒。
3. 先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果或是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来。
4. 观察有无凝集及凝集强度，并立即记录结果。
根据正反定型结果得出实验结果。
实验后
记录医疗废物处理：
及时记录试验试剂、被检者信息、实验结果、书写工整清楚。回收医疗物品在含有效氯量的消毒液中充分混合；一次性医疗废物放入医用垃圾袋中；整理工作台面，归还物品；

微柱凝胶法血型鉴定操作规程

微柱凝胶法
1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml
2原理：
2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）；
2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶；
2.3凝胶间隙具有分子筛作用。

凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。

未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部；
2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。

3操作：
3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。

3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul
3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟
3.4离心结束后在白色背景前观察结果
4结果判断：
A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
A孔阴性B孔阴性为O型;A孔阳性B孔阳性为AB型。

5.注意事项
5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。

5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。

5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。

5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。

5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。

5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。

6.方法评价
卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。

微柱凝胶技术操作规程

微柱凝胶技术操作规程 SXYJ-GZ-02281目的规范微柱凝胶技术检测操作。

2适用范围采用微柱凝胶技术进行抗人球蛋白试验。

3职责检测者负责按此程序进行微柱凝胶技术操作。

4材料与设备Biovue工作站系统（包括孵育器、离心机）、微柱凝胶卡（Anti-IgG,-C3d;polyspecific）、低离子增强液（BLISS液）、微量加量枪、吸头等、KUBOTA KA-2200型离心机、0.9%无菌生理盐水；根据检测需要准备相应的抗血清及试剂红细胞。

5操作方法5.1待检标本的准备及要求5.1.1患者血清准备不抗凝血样3-5ml，退缩充分，离心3000rpm/5min分离出血清备用。

5.1.2红细胞悬液的准备 EDTA抗凝血样3400rpm/2min（KA-2200型离心机Ⅲ档离心2次）压积红细胞。

取另一小试管作好标记加入190ul生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成4%红细胞悬液；或加入1ml生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成0.8%红细胞悬液。

5.2直接抗人球蛋白试验5.2.1取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；5.2.2加入4%待检红细胞悬液10 ul；5.2.3离心5min，观察结果。

5.3间接抗人球蛋白试验（添加法）5.3.1打开孵育器将温度设定为37℃；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；5.3.2每孔加BLISS液50ul；5.3.3加入10ul4%红细胞悬液、或者20ul抗体筛选试剂红细胞（sanquin公司）、或者25ul反定型试剂O细胞（北京金豪公司）；5.3.4加入患者血清或试剂抗血清40ul；5.3.537℃孵育15min，离心5min，观察结果。

5.4间接抗人球蛋白试验（重悬法）5.4.14%红细胞1ml加入3ml生理盐水，900g离心5min，弃上清加入4mlBLISS液，配制成浓度为1%的红细胞悬液；5.4.2打开孵育器将温度设定为37℃；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；5.4.3加入1%的红细胞悬液40ul，加入患者血清或试剂抗血清40ul；5.4.437℃孵育15min，离心5min，观察结果。

微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程

微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程1、目的为规范输血科ABO和RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科ABO正反血型和RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶免疫测试法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。

当抗原抗体反应，则红细胞发生凝集形成红细胞免疫复合物。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

4.2.1ABO血型基础4.2.2Rh血型Rh血型系统包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r与抗-D阳性反应的红细胞为Rh阳性。

5、样本采集和处理：受血者血样为EDTA-K2抗凝血。

抽取受血者静脉血1～2ml 于专用管（紫色头管）内，离心分离出血浆。

将细胞配成0.8%的悬液备用。

6、试剂：6.10.9%的生理盐水；6.2长春博迅公司的血型定型试剂卡；6.3长春博迅公司的0.8%的A、B型试剂红细胞悬液；7、仪器：7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；7.2长春博迅公司的FYQ型免疫微柱孵育器；7.3长春博迅公司的TD-3A型血型血清学专用离心机；8、操作程序：8.1工作准备：8.1.1将0.8%A、B型试剂红细胞悬液室温平衡。

准备样本，标记卡。

8.1.2 0.8%样本红细胞制备：将8μl压积红细胞加到1ml生理盐水中充分混匀。

8.1.3 将50μlA1、B标准反定细胞加入血型卡的第5-6管中，将待检者血浆或血清50μl加到血型卡的第5-6管中。

将0.8%样本红细胞分别加入到血型卡的第1-4管中，各50μl。