实验二__中和试验

同时设阳性血清对照，待检血清毒性对照，病毒 对照和正常细胞对照，其中： 1 阳性血清对照：将阳性血清做 8 个 2 倍比稀释度，
每孔各加50µ l病毒液和50µ l各稀释度血清。
2 待检血清毒性对照:将待检血清做8个2倍比稀释
度，每孔各加50µ lD-Hanks和50µ l各稀释度血清.
3 病毒对照:做4个10倍比稀释度(200个TCID50、20
=（66.7-50）/（66.7-16.7）
= 0.33
PD50=-1.299的反对数=0.05=1/20 即 1:20 稀释的待检血清可保护 50% 的组织培
养细胞免于出现CPE
三、血清中和试验的分类
1、终点法 固定病毒—稀释血清法 固定血清—稀释病毒法 2、蚀斑减数法 3、交叉保护试验
四、用途
1、疾病诊断
2、病毒分离株的鉴定
3、不同病毒株的抗原关系研究
4、疫苗免疫原性的评价
5、免疫血清的质量评价
6、测定实验动物血清中是否存在抗体
六、固定病毒—稀释血清法的操作步骤
待检血 清毒性 对照
病毒 对照
细胞 对照
血清稀 释度 1:2（10-0.3） 1:4（10-0.6）
CPE 孔数 0 0
无CPE 孔数 8 8
累计 CPE孔数 0 0 无CPE孔数 30 22
保护率%
100(30/30) 100(22/22)
1:8（10-0.9）
1:16（10-1.2） 1:32（10-1.5） 1:64（10-1.8）
每孔 100µl ，继续置 37 ℃ 5%CO 2 培养箱培养
1.5h ，洗液（ D-Hanks ）洗一遍，换维持液，
放温箱中培养，逐日观察并记录结果。 结果计算，按 Reed-Muench 两氏法或 Karber 法进行。
阳性血清对照
实验孔 血清 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256
2
2 6 8
6
6 2 0 0
2
4 10 18 26
14
8 2 0 0
87.5(14/16)
66.7(8/12) 16.7(2/12) 0(0/18) 0(0/26)
1:128（10-2.1） 8
lgPD50=高于50%的保护率血清稀释度的对数+距离 比例×稀释度对数的差 =-1.2+0.33×(-0.3) =-1.299 距离比例=（高于50%的保护率-50% ）/ （高于50%的保护率—低于50%的保护率）
实验三
血清中和试验
（固定病毒—稀释血清法）
一、实验目的
了解中和试验的基本原理和几种不同
的测定方法，掌握固定病毒 — 稀释血清法 的操作步骤和计算方法及含义。
二、原理
病毒感染敏感靶细胞后，引起细胞
形态学变化，出现细胞病变效应
（ CPE ）。特异性中和抗体与病毒结合
后，可使病毒颗粒失去感染性，抑制细
胞病变百度文库出现。
测定病毒液的TCID50( 10-4.5/0.1ml )
将测好 TCID 50的病毒液稀释成 200个 TCID 50的病毒
悬液。
将血清作连续倍比稀释（具体方法是在 8 个 EP 管
中各加入 500 µlD-Hanks ，第一管再加 500 µl 待检
血清，混匀后，吸 500 µl 至下一管，如此下去。 一直到 1:256 ，共 8 个稀释度），再将 8 个 EP 管内 各加等量(500µl)病毒液，混匀。
个TCID50、2个TCID50、0.2个TCID50 ),每孔各
加50µ lD-Hanks和50µ l各稀释度病毒液。 4 正常细胞对照：每孔各加100µ lD-Hanks.
将血清病毒混合液（包括阳性血清对照组）
放入37℃ 5%CO2培养箱中作用45min-60min.
感作完成后每个稀释度分加至 96孔细胞板中，