培养基的配制
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培养基的配制
培养基是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分
配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺,服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散
淀粉溶解:少量的冷水进粘贴
琼脂融化温度为95-97℃,加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值
用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤
滤纸或棉。
(有时可以省略)
5. 分装
一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶
静态培养时,100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml
否则,在灭菌过程中,培养基的煮沸极易污染棉塞,造成细菌污染;
如果进行瓶培养,15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装
液体培养基通常填充4-5ml,约为试管高度的1 / 4;
一般固体斜培养基为3-4ml,约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎
包装完毕后,塞好棉塞,用牛皮纸包好棉塞,防止灭菌时湿气进入,弄湿棉塞。
7. 灭菌
高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高,营养成分就会被破坏
培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜
灭菌后,需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置,使其固化成一个斜坡,约占试管长度的1 / 2。
9. 存储
中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好,置于2-8℃冰箱中保存。