烟草基因瞬时表达体系的建立与优化研究

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植物瞬时表达系统的研究进展

植物瞬时表达系统的研究进展植物瞬时表达系统（PES）是一种用于在植物中快速、高效地表达外源蛋白的技术。

它是基因工程领域中非常重要的工具，被广泛应用于植物基因功能研究、植物生物工程以及植物疫苗和药物生产等方面。

在过去的几十年里，关于植物瞬时表达系统的研究取得了许多重要的进展，这些进展在优化表达系统、提高表达效率、缩短表达时间和拓展应用领域等方面具有重要意义。

本文将介绍植物瞬时表达系统的基本原理、研究进展以及未来的发展方向。

一、植物瞬时表达系统的原理植物瞬时表达系统是利用几种不同类型的病毒或细菌，如农杆菌（Agrobacterium），烟草花叶病毒（TMV）和土壤细菌等，将外源基因导入植物细胞中，并在短时间内表达出目的蛋白。

基本的操作流程包括：将外源基因插入载体中，然后将载体转化到病毒或细菌中，最后通过侵染或注射等方式将这些病毒或细菌导入植物细胞内，从而实现外源基因的表达。

相比于转基因植物技术，植物瞬时表达系统具有表达时间短、转化效率高、不易产生突变和遗传稳定等优点。

它在植物基因功能研究和植物疫苗、药物等生产方面有着广阔的应用前景。

二、研究进展1. 优化表达系统随着对病毒和细菌基因工程技术的深入研究，人们不断优化植物瞬时表达系统，以提高表达效率和稳定性。

研究人员对载体和表达引物进行了优化，选择了更加适合植物转化的载体和引物，使得外源基因在植物中的表达更加高效和稳定。

病毒和细菌基因工程技术的进步也为植物瞬时表达系统的优化提供了更多可能性，不断地推动着这一技术的发展。

2. 提高表达效率为了提高表达效率，研究人员采用了各种策略，如优化表达条件、改进载体构建和转化方法、筛选适合的宿主植物等。

利用基因组学、蛋白组学等高通量技术，对植物瞬时表达系统进行了深入研究，揭示了植物基因表达调控的机制，为提高表达效率提供了理论基础。

3. 缩短表达时间在研究过程中，人们发现植物瞬时表达系统与传统的转基因技术相比，具有表达时间短的优势。

烟草瞬时表达实验原理

烟草瞬时表达实验原理利用农杆菌将外源基因导入到烟草叶片中进行表达，可以借此进行蛋白的亚细胞定位、蛋白互作（BiFC）和蛋白的纯化等实验操作。

在荧光蛋白(YFP、GFP、Luciferase 等)的两个β 片层之间的环结构上有许多特异性位点可以插入外源蛋白而不影响荧光蛋白的荧光活性。

BiFC 技术正是利用荧光蛋白家族的这一特性，将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白融合表达。

如果两个目标蛋白因物理相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成有活性的荧光基团而发出荧光。

试剂：500 mM MES (pH5.6)、100 mM MgCl2、100 mM 乙酰丁香酮(acetosyringone, AS)、LB 培养基、50 mg/mL Kana (母液)、25 mg/mL Rif (母液)、100 mg/mL Amp (母液)。

仪器：一次性注射器、恒温摇床、分光光度计、普通离心机、激光共聚焦显微镜。

配方：500 mM MES (pH 5.6)：称取9.75 g无水MES，用去离子水溶解，经NaOH调pH至5.6，定容至100 mL，0.22 μm过滤器过滤除菌后，于4 °C保存。

100 mM 乙酰丁香酮：称取0.196 g乙酰丁香酮，用5 mL DMSO (二甲基亚砜) 溶解，再用去离子水定容至 10 mL，0.22 μm过滤器过滤除菌后，分装1 mL至1.5 mL的EP管中，于-20 °C 保存。

50 mg/mL Kana (母液)：称取1 g的Kana粉末，用去离子水溶解并定容至20 mL，0.22 μm过滤器过滤除菌后，分装1 mL至1.5 mL的EP管中，于-20 °C 保存。

100 mg/mL Amp (母液)：称取2 g的Amp粉末，用去离子水溶解并定容至20 mL，0.22 μm过滤器过滤除菌后，分装1 mL至1.5 mL的EP管中，于-20 °C 保存。

利用烟草和豌豆瞬时表达抗aFGF单链抗体

利用烟草和豌豆瞬时表达抗aFGF单链抗体单链抗体(single chain variable fragment,sc Fv)是利用DNA重组技术和蛋白质工程技术合成的一种小分子基因工程抗体,最近在肿瘤的诊断和治疗上得到广泛应用。

本研究利用改造的植物病毒载体在烟草(Nicotiana benthamiana)和豌豆(Pisum sativum L.)中瞬时表达抗人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,a FGF)的单链抗体,旨在建立一种安全、高效,易于规模化生产的单链抗体瞬时表达体系。

本研究首先利用基于烟草花叶病毒(TMV)的p35S-30B表达载体,建立烟草瞬时表达体系并表达抗a FGF单链抗体,验证sc Fv在植物中表达的可行性;接着利用基于豌豆早褐病毒(PEBV)的p CAPE1和p CAPE2-GFP载体建立豌豆瞬时表达体系,通过叶片注射法在豌豆中瞬时表达sc Fv,寻找更适于sc Fv表达的受体植物;最后建立一种基于豌豆芽苗菜无土栽培的规模化植物瞬时表达系统,并对该系统表达的sc Fv进行纯化及生物学活性分析。

本研究的主要结论:(1)利用p35S-30B-GFP载体建立了基于叶片注射法的烟草瞬时表达体系,绿色荧光蛋白(GFP)在病毒侵染后8-10天达到峰值;利用含p35S-30B-sc Fv重组质粒的农杆菌EHA105侵染烟草,瞬时表达的sc Fv具有较强的抗原结合能力。

(2)利用p CAPE1和p CAPE2-GFP载体通过叶片注射法建立了豌豆瞬时表达体系,病毒侵染后的10-12天GFP达到最大量累积;成功构建了p CAPE2-sc Fv 和p CAPE2-GFP-sc Fv瞬时表达载体,利用叶片注射法侵染豌豆后,分别在RNA 和蛋白水平上检测到sc Fv基因的表达,ELISA检测证明sc Fv和GFP-sc Fv与抗原具有较好的结合能力。

植物瞬时表达系统的研究进展

植物瞬时表达系统的研究进展植物瞬时表达系统是一种基因表达调控技术，旨在实现在植物细胞内迅速高效地表达外源基因。

近年来，该技术在农业、生物医学和生物工程领域取得了显著的研究进展。

本文将从瞬时表达系统的工作原理、应用领域及未来发展方向等方面，对该技术的研究进展进行综述。

植物瞬时表达系统利用病毒载体将外源基因导入植物细胞，通过瞬时表达来实现外源基因的快速高效表达。

病毒载体主要包括植物病毒（如烟草花叶病毒、植病毒等）和昆虫病毒（如斑驳花叶病毒、昆虫斑驳花叶病毒等）。

当病毒载体感染植物细胞后，外源基因可以在数小时内迅速表达，并在数天内积累到高水平。

植物瞬时表达系统可应用于多个领域。

在农业领域，瞬时表达可以用于快速生产植物抗性蛋白，如抗病毒蛋白、抗昆虫蛋白等，以提高作物的抗病虫害能力。

瞬时表达还可用于合成药物、生物农药和酶等生物制剂的生产。

在生物医学领域，瞬时表达可用于生产抗体和疫苗等生物制品，用于疾病的预防和治疗。

在生物工程领域，瞬时表达系统可以用于高通量筛选基因表达调控关键因子，以及用于分析外源基因在植物细胞中的功能和调控机制。

研究人员们在植物瞬时表达系统的研究中取得了许多进展。

病毒载体的可选择性得到了明显提高。

病毒载体可以根据不同的表达需求进行选择，使得瞬时表达系统更加灵活和高效。

研究人员利用基因编辑技术，在植物瞬时表达系统中实现了外源基因的定点插入和稳定遗传转化，从而在表达效率和基因稳定性方面取得了重大突破。

研究人员还发展了许多新的转染方法，如离体病毒感染、冷冻转染等，以进一步提高瞬时表达系统的表达效率和稳定性。

植物瞬时表达系统仍然存在一些挑战和亟待解决的问题。

病毒载体的选择性仍然有限，只能应用于某些特定的植物物种。

瞬时表达系统在大规模生产上还存在一定的局限性，需要进一步优化和提高生产效率。

目前关于瞬时表达系统的调控机制研究较少，需要进一步探索其在植物细胞中的具体调控机制，以提高表达效率和稳定性。

烟草基因瞬时表达体系的建立与优化研究

Botanical Research 植物学研究, 2015, 4, 25-31Published Online March 2015 in Hans. /journal/br/10.12677/br.2015.42004Establishment and Optimization ofAgrobacterium-Mediated TransientGene Expression System in TabaccoLiwei Wen, Hongliang Zhu*Department of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, BeijingEmail: 210824@, *hlzhu@Received: Apr. 15th, 2015; accepted: May 1st, 2015; published: May 6th, 2015Copyright © 2015 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/AbstractTo establish and optimize a transient expression system in Nicotiana benthamiana, the method was developed with the β-glucuronidase (GUS) and Ripening Inhibitor (RIN) as marker genes. Us-ing the agrobacterium-mediated transformation method, GV3101 was used for the effects of dif-ferent bacteria concentration on the efficiency of protein transient expression in Nicotiana ben-thamiana. Observed by the results, a higher transient expression level of GUS & RIN gene could be obtained as OD600 value of A. tumefaciens for intiltration 1.0. The entire process only took 25 days from sowing seed to protein analysis. Therefore, this method is simple and rapid. It has a potential application in dissecting gene expression and function in Brassica napus.KeywordsTobacco, Leaf, Transient Expression System烟草基因瞬时表达体系的建立与优化研究文莉薇，朱鸿亮*中国农业大学，食品科学与营养工程系，北京Email: 210824@, *hlzhu@*通讯作者。

烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花[发明专利]

专利名称：烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花
专利类型：发明专利
发明人：高玉龙,谢贺,肖炳光,李永平
申请号：CN201210462131.2
申请日：20121116
公开号：CN103045609A
公开日：
20130417
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种烟草NtFT1基因的cDNA序列及其瞬时表达诱导烟草早花，具体涉及烟草FT(Flowering locus T)基因NtFT1及其在诱导烟草早花中的应用，属于分子生物学中的基因领域。

本发明公开了源自烟草的控制植物开花时间的NtFT1基因全长编码序列及其编码的蛋白序列。

NtFT1基因是通过同源序列搜索，从中国烟草基因组测序计划数据中经Blastn比对及剪切位点分析得到的。

以此序列涉及出一对NtFT1基因特异引物用半定量PCR(RT-PCR)方法，克隆了该基因。

本发明还构建了NtFT1基因的PVX病毒表达载体，构建的病毒表达载体经农杆菌渗滤侵染烤烟品种红花大金元、云烟87和K326，能诱导这些品种早花，证明该基因具有诱导烤烟早花的功能。

将NtFT1基因的PVX 病毒瞬时表达系统用于烟草育种，可缩短烟草生育期、加快育成烟草新品种的年限。

申请人：云南省烟草农业科学研究院
地址：653100 云南省玉溪市红塔区南祥路14号
国籍：CN
代理机构：昆明今威专利商标代理有限公司
代理人：赛晓刚
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植物瞬时表达系统的研究进展

植物瞬时表达系统的研究进展植物瞬时表达系统是一种用于合成和表达外源蛋白的方法，其具有高效、快速和经济的特点。

近年来，随着生物技术的发展，该领域取得了许多重要的研究进展。

本文将介绍植物瞬时表达系统的原理、优势和应用，并总结近年来的研究进展，展望其在农业生产、医药生物技术和工业生产等领域的应用前景。

一、植物瞬时表达系统的原理和优势植物瞬时表达系统是一种利用植物叶片或其他组织快速表达外源蛋白的技术。

其原理是通过植物病毒或农杆菌介导的转染，将外源基因导入植物细胞中，利用植物细胞的生物合成系统合成外源蛋白。

相比传统的植物转基因技术，植物瞬时表达系统具有以下优势：1. 高效快速：植物瞬时表达系统能够在较短的时间内表达大量外源蛋白，通常只需数天至数周的时间，远远快于传统的植物转基因技术。

2. 经济低成本：植物瞬时表达系统无需大量耗费时间和金钱的农业生产，通过简单的组织培养和转染技术即可实现外源蛋白的大规模表达，具有较低的生产成本。

3. 安全环保：相比于转基因作物，植物瞬时表达系统不会对环境和生态系统产生长期影响，安全性较高。

4. 可定制性：植物瞬时表达系统能够实现外源蛋白的快速定制和大规模生产，适用于不同的应用场景。

二、植物瞬时表达系统在农业生产中的应用1. 植物病毒疫苗：利用植物瞬时表达系统，可以快速合成和生产植物病毒疫苗，用于防治各种植物病毒病害，提高农作物产量和质量。

2. 抗虫、抗病基因的快速筛选：利用植物瞬时表达系统，可以快速表达和筛选出对虫害和病害具有抗性的基因，用于育种改良。

3. 其他农业生产相关的功能性蛋白的生产：例如抗氧化蛋白、生长调节蛋白等，可以提高作物抗逆性和增强产量。

除了农业生产领域，植物瞬时表达系统还在医药生物技术领域具有重要的应用价值：1. 疫苗和抗体的生产：利用植物瞬时表达系统，可以快速合成和生产各种疫苗和抗体，如乙肝疫苗、流感疫苗等，具有较低的生产成本和较高的生物安全性。

2. 药物的生产和筛选：通过植物瞬时表达系统，可以快速合成和筛选各种药物，如抗癌药物、免疫调节药物等，为医药研发提供新的途径。

烟草瞬时转化

创作编号：GB8878185555334563BT9125XW创作者：凤呜大王*本氏烟草（N. benthamian）瞬时表达及相关实验方法：一、农杆菌介导的烟草瞬时转化：A、实验步骤：1、根据实验需要，将所要表达的基因克隆到含有不同标签的双元载体中，并转化农杆菌。

2、将新活化的农杆菌单克隆接种到含有相应抗生素的YEP中，28℃，200rpm过夜。

*估算时间，防止农杆菌液浓度超过1OD，否则会影响转化效率。

3、当菌液OD值介于0.6~1.0之间时，1000g，5min离心收集农杆菌。

4、用2ml Induction medium（without AS）轻柔重悬农杆菌，然后再次离心收集菌液。

5、重复步骤4。

6、所得沉淀用1ml Induction medium 重悬。

7、室温放置1~4小时8、测OD值，根据实验需要，配置侵染液（组合详见下文）。

9、用不加针头的注射器将侵染液注射进6~8周大的本氏烟草叶片中。

*使用注射器时注意安全，防止针头扎到手，使用完的注射器要把针头套套上再扔，或者将针头放到注射器里面，避免伤害他人；注射时应戴乳胶手套并在每次注射完成后清洗手套，防止交叉污染。

B、试剂：Induction medium：MES-KOH PH 5.7 10nMMgCl210mMAS 200uM推荐提前配制母液1M MES-KOH PH5.7 过滤灭菌，4℃保存，用时稀释100倍。

1M MgCl2 过滤灭菌，4℃保存，用时稀释100倍。

0.2M AS 溶于DMSO 有机溶剂专用滤膜过滤灭菌，分装（避免反复冻融），-20℃。

用高压灭菌的超纯水稀释。

C、关于表达时间：烟草瞬时表达系统中蛋白的表达可以维持比较长的时间，一般注射24小时之后到一周之内都会有表达。

严格来讲需要摸索每个蛋白的最佳表达时段，但一般注射后48小时至72小时不同蛋白表达量都比较可观，不要错过。

D、关于侵染液浓度：推荐每个菌株的浓度在0.1~0.2之间。

植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究

植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究欧阳乐军;黄真池;沙月娥;曾富华【摘要】According to the sequences of pathogen-inducible plant promoters PPP3 at GenBank,PPP3 promot-ers was cloned from tobacco genome .It was used to replace cauliflower mosaic virus 35 S promoter of pCAM-BIA1301 .The recombinant plasmid was used to transform Agrobacterium tumefaciens GV3101 .The inducibility of the PPP3 promoters in tobacco leaf was evaluated by Agrobacterium tumefaciens-transient genetic transformation as-sye .Real-time quantitative PCR was used to screen the PPP 3 promoters with high inducible expression .The results showed that the gus transcript level under the control of PPP 3 promoters increased respectively 27 .94 fold and 17.69 fold after inoculation with Ralstonia solanacearum and SA.The PPP3 promoter had the advantages such as low basal activity and high expression activity .%根据GenBank中植物病原物诱导型启动子碱基序列设计引物，以烟草基因组DNA为模板，扩增PPP3启动子。

农杆菌介导的烟草瞬时表达影响因素研究_孙蔓莉 (1)

西北农业学报２０１５，２４（１）：ａｅＢｏｒｅａｌｉ－ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓＳｉｎｉｃａ
ｄｏｉ：１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－１３８９．２０１５．０１．０２８
网络出版日期：２０１５－０１－２０网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１２２０．Ｓ．２０１５０１２０．０９２０．００３．ｈｔｍｌ
植物通过２种防御机制响应病原菌的侵染，一种是识别并响应病原菌特征分子或微生物特征分子，另一种是直接或间接地响应病原菌效应因子。［１２］前人在研究亚麻对亚麻锈菌抗病性的基础上，提出基因对基因模型［１３］，即当有一对抗病基因和无毒基因存在的情况下，就可以引发过敏性坏死反应（ＨｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅＲｅｓｐｏｎｓｅ，ＨＲ），马铃薯晚疫病抗病基因ＲＢ和致病疫霉菌效应基因Ａｖｒｂｌｂ１互作可引发ＨＲ［１４］。本研究利用ＲＢ和Ａｖｒｂｌｂ１为报告基因，ＧＵＳ基因为空白对照，以本氏烟和６个普通烟草品种为材料，采用农杆菌介导的注射渗透法，分析烟草的基因瞬时表达的最佳条件。
本研究分析菌悬液od600值遗传背景烟草品种及其生长时期并对根癌农杆菌介导的烟草基因瞬时表达影响因素进行分析确认od60006和08时agl1gv3101和c58c1农杆菌菌系在本氏烟上介导的瞬时表达rb和avrblb1的效率较高且一致表现在烟草叶片均出现明显的坏死斑对照gus基因未出现坏死现象注射不含菌液成分溶液即注射重悬液mes后不表现任何反应

利用烟草花叶病毒瞬时表达目的基因

利用烟草花叶病毒瞬时表达目的基因一、实验目的蛋白瞬时表达方法已被用于烟草当中，例如来定位绿色荧光蛋白等标记物标记的目的蛋白的亚细胞位置，或者在不利用转基因植物的条件下生产和诱导大量蛋白。

可利用基因工程改造后的根癌农杆菌来引导目的基因进入烟草叶中进行表达。

二、实验原理烟草花叶病毒(TMV)表达载体30B是一个目前广泛应用的植物病毒表达载体，但用其生产外源蛋白时，必须先将它体外转录成RNA，才能被用来接种宿主植物。

但RNA体外转录费用昂贵、操作复杂。

用农杆菌接种法(a-groinnoculation)接种该病毒载体，即将30B cDNA 置于花椰菜花叶病毒(CaMV)的35启动子和终止子之间，再将整个表达框架插人到农杆菌T-DNA的左边界和右边界之内，构建成质粒p35S-30B，将转人该质粒的农杆菌注射到植物的叶片中，30B cDNA随T-DNA进人植物细胞后，被转录成可自我复制的RNA形式，进而发生系统侵染。

为了检测此接种方式的可行性，绿色荧光蛋白(GFP)报告基因被克隆到p35S-30B中，构建成p35S-30B:GFP，用含有该质粒的农杆菌进行注射操作。

三、实验试剂和仪器1. 带有病毒表达载体的农杆菌菌株(通常由花椰菜花叶病毒35S启动子驱动)2. 健康的烟草(Nicotiana benthamiana)植物(3-4周龄)3. MES / KOH(pH=5.6)4. 氯化镁5. 乙酰丁香酮6. 相应抗性的LB培养基四、实验步骤1、准备激活缓冲液配制母液MgCl2 1 M; MES (pH 5.6) 100 mM; 乙酰丁香酮(Ace)100 mM。

使用时，每1 ml 溶液中加入888 μl无菌水，10 μl MgCl2 1 M，100 μl MES (pH 5.6) 100 mM，2 μl乙酰丁香酮(Ace) 100 mM。

2、挑克隆挑取重组农杆菌单斑接种于含有Kan (50 mg/l) 和Rif (50 mg/l) 抗性的LB 培养基中28℃过夜振荡培养；然后1:100转接到相同抗性的LB培养基中，生长至对数生长期(OD600值约为0.6-0.8)，经6000 rpm离心5 min收集菌体3、制备菌液用含终浓度为10 mM MgCl2，10 mM MES (pH=5.6)，200 μM乙酰丁香酮(Ace)的无菌水重悬浮，调整菌液浓度至OD600=0.5或者根据需要调整；在室温下放置3 h以上。

烟草瞬时转化实验步骤

烟草叶片瞬时转化实验试验方法一、实验材料及药品pCAMBIA 1381Z-Luc载体、Gv3101农杆菌菌株及其感受态、MES、MgCl2、乙酰丁香通、5-6周本氏烟草等二、载体构建及农杆菌转化烟草瞬时转化实验选用融合Luc信号的pCAMBIA 1381Z-Luc载体，载体构建过程是将拟南芥及菊花的FT启动子分别采用双切双连的常规载体构建方式将启动子构建到pCAMBIA 1381Z-Luc载体上，同时将目的基因构建到pMDC43或pMDC32或pORE载体上作为超表达载体进行后续的瞬时转化实验。

通过农杆菌转化的方式，将上述构建好的质粒转化到农杆菌菌株GV3101的感受态细胞中。

三、材料的准备1、烟草植株5-6周幼嫩未开花植株2、携带质粒的农杆菌（GV3101或An105均可）3、YEB培养液（一瓶+K+R、一瓶只+R——pCAMBIA 1381Z-Luc载体为卡纳氯霉素抗性、Gv3101只有r抗性）4、处理液：10mL配方如下母液配方（10ml配方）：0.5M MES 200ul 0.976g1M MgCl2100ul 2.03g100mM乙酰丁香酮10ul 0.196g（使用DMSO溶解）灭菌水加至10ml （若长时间保存，需避光！）四、操作步骤1、农杆菌转化2、转化正确的农杆菌进行过夜培养，同时培养P19菌株（最好先进行划线）3、确定不同农杆菌所加菌液的量：计算公式：V=n×Vfinal×0.5/OD600 VP19= n×Vfinal×0.3/OD600OD600最好在1以上n=注射叶片数Vfinal=悬浮后的终体积多为2ml或3ml 注：在进行转录激活或抑制实验时，一般加入四种农杆菌（包括P19）而对照组往往只加入两种或三种菌液，此时，应使用Gv3101对体系进行补充，计算方法为公式一，具体加入量视对照组缺失的量确定，分别加入一倍或两倍Gv3101进行补充。

烟草瞬时表达人表皮细胞生长因子(hEGF)

烟草瞬时表达人表皮细胞生长因子(hEGF)薛萍;柳月英;付宏岐;于欣;董健伟;刘秀明;官丽莉【摘要】构建人表皮细胞生长因子(hEGF)病毒表达载体,为实现hEGF在烟草中瞬时表达提供理论和实验依据.PCR扩增获得hEGF基因,将其连接到马铃薯病毒表达载体pGR107上,利用农杆菌介导法感染烟草叶片,对其进行转录水平和翻译水平检测.根据GFP的表达确定收获hEGF时间为病毒侵染叶片后第7天;RT-PCR检测的结果表明hEGF基因在转录水平有表达;Western blotting、ELISA和MTT结果表明感染烟草叶片中有hEGF蛋白表达,表达量为总可溶蛋白的0.0103%,且具有生物活性.【期刊名称】《陕西农业科学》【年(卷),期】2016(062)002【总页数】5页(P20-24)【关键词】烟草;瞬时表达;人表皮生长因子(hEGF)【作者】薛萍;柳月英;付宏岐;于欣;董健伟;刘秀明;官丽莉【作者单位】渭南职业技术学院食品检测中心,陕西渭南 714000;吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,吉林长春 130118;吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,吉林长春 130118;渭南职业技术学院食品检测中心,陕西渭南 714000;东北师范大学附属中学,吉林长春 130028;渭南职业技术学院食品检测中心,陕西渭南 714000;吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,吉林长春 130118;吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,吉林长春 130118【正文语种】中文表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)于1962年首次在小鼠的颌下腺中发现的一种小分子多肽[1]，在人体内广泛存在，由53个氨基酸残基组成，相对分子量为6.045Da，它具有促进多种上皮细胞的分裂增殖和血管生成的生物活性，临床上用于创伤、溃疡、神经损伤、新生儿呼吸窘迫综合症[2]等治疗。

烟草瞬时表达原理

烟草瞬时表达原理烟草瞬时表达原理是指烟草植株在生长发育过程中，通过信号传导途径，调控基因表达和代谢途径，从而快速响应外界环境变化，实现瞬时适应和生存优势的一种生理机制。

烟草植株在面对环境胁迫、病虫害和营养物质供应等外界压力时，能够快速调整生长发育和代谢途径，以适应环境变化，保证植株的生存和繁衍。

烟草瞬时表达原理的核心是信号传导途径。

烟草植株通过感知外界环境信号，如光照、温度、湿度、营养物质浓度等，启动内部信号传导途径，进而调控基因表达和代谢途径。

这一过程涉及多种信号分子和信号通路的参与，包括激素信号、离子信号、氧化还原信号等。

这些信号分子在植物体内形成复杂的信号网络，通过相互作用和调控，最终影响基因表达和代谢途径的调控。

烟草瞬时表达原理的实现依赖于基因表达和代谢途径的调控。

烟草植株在面对外界环境变化时，会启动特定的基因表达途径，调控相关基因的表达水平，以实现对环境的快速适应。

同时，烟草植株还会调整代谢途径，重新分配营养物质和能量，以满足生长发育和抵御外界压力的需要。

这些调控过程涉及到多种基因和代谢产物的参与，形成复杂的调控网络。

烟草瞬时表达原理的研究对于揭示植物生理机制、改良烟草品种、提高烟草产量和质量具有重要意义。

通过深入研究烟草瞬时表达原理，可以发掘植物在面对环境胁迫时的生理适应机制，为培育抗逆烟草品种提供理论依据和实践指导。

同时，还可以通过调控烟草瞬时表达原理，提高烟草产量和品质，促进烟草产业的可持续发展。

总之，烟草瞬时表达原理是烟草植株在面对外界环境变化时的一种生理适应机制，涉及信号传导途径、基因表达和代谢途径的调控。

通过深入研究和理解烟草瞬时表达原理，可以为烟草品种改良和产业发展提供重要的理论和实践支持。

不同调控序列作用下GUS基因在烟草中瞬时表达活性

大。泛素（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ。Ｕｂ）是一种由７６个氨基酸构成的多肽，是泛素蛋白酶体途径的重要组成部分，植物生长发育的很多方面受泛素蛋白酶体介导的蛋白降解途径的调控（宋素胜和谢道昕，２００６）。利用泛素启动子在细胞体内
列的１．５倍：Ｕｂｉ．Ｕ４．ＣａＭＶ３５Ｓ复合启动子附￣ｎＫｏｚａｋ序列驱动ＧＵＳ基因表达水平最高，其表达效率是双ＣａＭＶ３５Ｓ启动子附
￣Ｋｏｚａｋ序列调控下ＧＵＳ表达效率的３倍，为ＣａＭＶ３５Ｓ独立作用时的１０倍。
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植物学通报ＣｈｉｎｅｓｅＢｕｌｌｅｔｉｎｏｆＢｏｔａｎｙ２００７，２４（４）：４５２－４５８，ｗｗｗ・ｃｈｉｎｂｕｌｌｂｏｔａｎｙ・ｃｏｍ
通过叶盘转化法转化烟草叶片，检测瞬时表达活性，研究不同调控序列对外源基因表达的调控作用。结果表明：ＣａＭＶ３５Ｓ启动子附￣ｎＫｏｚａｋ序列后使ＧＵＳ活性比独立使用ＣａＭＶ３５Ｓ提高了近２倍：￣ＣａＭＶ３５Ｓ启动子附￣ｎＫｏｚａｋ序列驱动ＧＵＳ基因的表达活性与单ＣａＭＶ３５Ｓ附￣ｎＫｏｚａｋ序列相当：烟草泛素启动子附￣ＨＫｏｚａｋ序列的表达活性为ＣａＭＶ３５Ｓ启动子附￣ｎＫｏｚａｋ序

植物瞬时表达系统的研究进展

植物瞬时表达系统的研究进展随着生物技术的迅猛发展，植物生物学领域也取得了重大突破。

植物瞬时表达系统的研究进展成为研究的热点之一。

植物瞬时表达系统是通过转基因技术将外源基因瞬时表达于植物体内，为研究基因功能、蛋白质表达及生物技术应用提供了有力工具。

本文将对植物瞬时表达系统的研究进展进行综述，以期为相关研究提供参考和借鉴。

1. 植物瞬时表达系统的原理植物瞬时表达系统是一种快速、高效的转基因技术，利用病毒、农杆菌或其他载体将外源基因导入植物细胞内，使其在短时间内表达特定蛋白质。

这种系统利用了植物细胞内天然的生物合成机制，使外源基因快速表达并产生所需的蛋白质。

相比于传统的稳定转化技术，植物瞬时表达系统具有更快的转化速度和更高的表达水平，成为了研究和应用的重要工具。

2. 植物瞬时表达系统的研究进展近年来，植物瞬时表达系统的研究取得了显著的进展。

在转化载体方面，病毒载体和农杆菌介导的转化系统成为了主要研究方向。

病毒载体如烟草花叶病毒（TMV）、西瓜嵌索单病毒（CWMV）等，能够在植物细胞内快速表达外源基因，并且具有较高的转化效率。

农杆菌介导的转化系统则通过构建适当的植物表达载体，将外源基因导入植物细胞内，实现快速表达。

在转化技术方面，克服了瞬时表达系统的一些局限性，如低表达水平、不稳定性等问题。

通过优化载体结构、调控表达条件等手段，提高了外源基因的稳定性和表达水平，增强了转化效率和表达时间。

研究人员还利用基因组学、生物信息学等技术手段，对植物瞬时表达系统进行了深入研究，探索其在基因功能研究、蛋白质组学等领域的应用前景。

3. 植物瞬时表达系统在基因功能研究中的应用植物瞬时表达系统在基因功能研究中发挥了重要作用。

通过引入外源基因，研究人员能够对目标基因的功能进行快速、方便的分析。

利用该系统可以研究植物抗性基因、光合作用相关基因、花色素合成相关基因等的功能及调控机制，为解析植物分子生物学和遗传学提供了便利的工具。

在烟草中瞬时表达迷迭香酸的研究

在烟草中瞬时表达迷迭香酸的研究梁童瑶;邢丙聪;张治海;麻鹏达;梁宗锁;韩蕊莲【期刊名称】《西北林学院学报》【年(卷),期】2017(032)001【摘要】遗传转化一直以来都是研究药用植物次生代谢物调控的重要手段,虽然具有重现性好的优势,但获得稳定转化的毛状根体系或转基因植株往往费时费力,该方法无法满足大批量药用植物次生代谢调控相关基因的研究需求.农杆菌介导的瞬时转化以其易操作、低成本、短周期的优势,已被广泛应用于植物功能基因的研究中.然而目前药用植物的功能基因研究还常使用稳定遗传转化,或一些高成本、高难度的瞬时转化方法(如基因枪、原生质体转化等).因此,本研究利用pEAQ载体在本氏烟草叶片中高效表达了一个或多个外源基因,这将为外源基因在烟草中快速有效的表达提供新途径,也为进一步探究其功能提供了一条思路.多个外源基因的高效共表达也为在本氏烟草中异源构建次生代谢途径提供了可能.【总页数】5页(P179-183)【作者】梁童瑶;邢丙聪;张治海;麻鹏达;梁宗锁;韩蕊莲【作者单位】西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨陵712100;中国科学院水利部水土保持研究所,陕西杨陵712100;陕西省安塞县果业发展局,陕西安塞717499;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨陵712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨陵712100;中国科学院水利部水土保持研究所,陕西杨陵712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨陵712100;中国科学院水利部水土保持研究所,陕西杨陵712100【正文语种】中文【中图分类】S572【相关文献】1.植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究 [J], 欧阳乐军;黄真池;沙月娥;曾富华2.去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达 [J], 常英英;梁立雄;高亚南;王颜波;丁昌俊;苏晓华;张冰玉3.RP-HPLC法同时测定夏桑菊颗粒中绿原酸、异迷迭香酸苷、迷迭香酸和蒙花苷[J], 林丽美;夏伯候;刘菊妍;李春;何迎春;姚江雄;许招懂;梁航;廖端芳4.杜氏盐藻番茄红素ε-环化酶基因DsLYCE表达载体构建及其在烟草中瞬时表达分析 [J], 王计平; 安茜; 段露露; 赵熙宁; 岳敏; 崔红利; 李润植5.高效液相色谱-串联质谱法同时测定水溶性迷迭香提取物中迷迭香酸、阿魏酸和咖啡酸的含量 [J], 许高燕;刘莹雯;银董红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。