造模因素对TNBS致大鼠溃疡性结肠炎模型的影响

中药药理与临床２００７；２３（６）８１

我们要求药理实验者首先起码应当是一名合格的技术操作人员，我们提倡他们成为所从事专业试验的解牛庖丁，我们更希望他们掌握更多的医药学研究的科学艺术。

参考文献

１邓文龙．路漫漫其修远兮，吾将上下而求索——纪念《中药药理与临床》创刊二十周年．中药药理与临床，２００５；２１（５）：１～３

造模因素对ＴＮＢＳ致大鼠溃疡性结肠炎模型的影响

李茹柳１，迟莉１，郭文峰１，王桂香１，王静１，陈蔚文Ｌ２

（１广州中医药大学脾胃研究所，广州５１０４０５，２上海市高校中医内科学Ｅ一研究院，上海２０１２０３）

摘要目的：探讨造模因素对三硝基苯磺酸（ＴＮＢＳ）致大鼠溃疡性结肠炎的影响。方法：①ｓＤ大鼠以４种造模方案观察动物体重和ＴＮＢＳ剂量对大鼠死亡率和结肠病变的影响，即大鼠１８０—２００９，ＴＮＢＳ１００ｍｇ／ｋｇ；大鼠２１０—２５０９，ＴＮＢＳ９０ｍｇ／ｋｇ；大鼠２４０～２８０９，ＴＮＢＳ８５ｍｇ／ｋｇ；大鼠２００—２２０９，ＴＮＢＳ５０ｍｇ／ｋｇ。实验周期均为１５ｄ。（室）Ｗｉｓｔａｒ大鼠观察实验周期对结肠病变的影响：大鼠２１０—２６０９，ＴＮＢＳ９０ｍｇ／ｋｇ，实验周期为１０、２０、３０ｄ。结果：ＳＤ大鼠４个方案的死亡率、结肠肉眼观察平均分值分别为９０．Ｏ％，５．９；７０．０％，５．１；１８．２％，４．３；２５．Ｏ％，４．０。（墓）Ｗｉｓｔａｒ大鼠实验周期１０ｄ：死亡率１８．８％，结肠肉眼观察平均分值５．２，组织病理学平均分值７．８；实验周期２０ｄ分别为１２．５％、４．３、６．５；实验周期３０ｄ分别为１８．８％、３．５、５．６。结论：动物的种属、体重、ＴＮＢＳ剂量、实验周期等都是模型的影响因素。推荐造模方案ＳＤ大鼠体重２２０—２４０９，ＴＮＢＳ剂量５０—６０ｍｇ／ｋｇ；Ｗｉｓｔａｒ大鼠体重２２０—２４０９，ＴＮＢＳ剂量８０一９０ｍｇ／ｋｇ；死Ｊ亡率控制在２０％以内比较合适。

关键词溃疡性结肠炎；动物模型；影响因素

２，４，６一三硝基苯磺酸（２，４，６一ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｓｕｔｆｏｎｉｃａｃｉｄ，ＴＮＢＳ）致大鼠溃疡性结肠炎（ＵｌｃｅｒａｔｉｖｅＣｏｌｉｔｉｓ，ＵＣ）是常用的ＵＣ动物模型，其病理特点是结肠组织呈一种慢性炎症变化，病程较长，与人类溃疡性结肠炎相似，比较适用于溃疡性结肠炎防治药物的筛选和研究，但目前关于造模因素对该模型影响的研究报道较少。本文以动物一般状态、体重变化、死亡率、结肠病变肉眼和病理组织学检查等为指标，观察大鼠种属、体重、ＴＮＢＳ剂量、实验周期等因素对溃疡性结肠炎模型的影响，为建立适合中药药理学研究的实验方案提供参考。

１材料与方法

１．１动物ＳＤ大鼠，ＳＰＦ级，雌雄兼有；Ｗｉｓｔａｒ大鼠，ＳＰＦ级，雌雄各半；均购自广州中医药大学实验动物中心。

１．２试剂ＴＮＢＳ：美国Ｓｉｇｍａ公司出品，批号０１４Ｋ５００７，分子量２９３．２，试剂浓度５０昏／Ｌ。

１．３造模及检查参照文献…方法，ＴＮＢＳ与无水乙醇以１：１比例混匀，按大鼠禁食后体重计算需注入的混合药液体积，具体剂量依据不同造模方案而定。正常组大鼠不造模正常饲养；造模组大鼠禁食不禁水２４ｈ，乙醚麻醉，以灌胃针头从大鼠肛门轻柔插入结肠约７ｃｍ后注入造模药液，大鼠提尾倒置３０ｓ让药液充分停留结肠内。造模后大鼠正常饲养，每日观察大鼠一般状态、死亡情况、称体重并记录。实验结束时处死存活大鼠，取出结肠洗净，甲醛固定，石蜡包埋，切片作ＢＥ染色，光学显微镜下进行病理学检查。

１．３．１结肠病变肉眼评分标准０分：结肠无损伤；１分：结肠轻度充血水肿；２分：结肠明显水肿，肠粘膜粗糙呈颗粒状；３分：结肠粘膜溃疡形成，溃疡最长径≤ｌｃｍ；４分：结肠粘膜溃疡形成，溃疡最长径介于１—２ｃｍ之间；５分：结肠粘膜溃疡形成，溃疡最长径＞，２ｃｍ；６分：结肠全段的肠壁坏死或动物死亡ｐ。。１．３．２结肠组织病理学评分标准①上皮细胞：０分：正常形态；１分：有杯状细胞丢失；２分：杯状细胞大面积丢失；３分：隐窝细胞丢失；４分：隐窝细胞大面积丢失。②炎细胞浸润：０分：没有浸润；１分：浸润在隐窝基底层；２分：浸润到达粘膜肌层；３分：浸润深人到粘膜肌层，伴随粘膜增厚和明显水肿；４分：浸润到达粘膜下层。每只大鼠总评分为”上皮细胞”评分＋”炎细胞浸润”评分¨Ｊ。

２结果

２．１动物体重、ＴＮＢＳ剂量对模型的影响以ｓＤ大鼠为实验动物，设立４个造模方案，主要以死亡率和结肠病变肉眼评分为观察指标。造模当天为实验１ｄ，实验周期均为１５ｄ。

造模方案一１０只大鼠体重１８０～２００９，以ＴＮＢＳ剂量１００ｍｇ／ｋｇ造模。结果在实验周期内死亡９只大鼠，解剖见结肠广泛坏死呈黑褐色，有的出现肠穿孔。实验结束时处死的１只大鼠有明显的溃疡病灶。肉眼评分：５分１只，６分９只，平均分值５．９。本组大鼠造模后死亡率高达９０％，病变程度过重，考虑是由于大鼠体重较轻和造模剂量偏高。

造模方案二１０只大鼠体重２１０—２５０９，以ＴＮＢＳ剂量９０ｍｇ／ｋｇ造模。结果在实验周期内死亡７只大鼠，实验结束时处死的３只大鼠其中１只可见明显的溃疡病灶，另外２只结肠见明显水肿，粘膜粗糙呈颗粒状。肉眼评分：２分２只，５分１只，６分７只，平均分值５．１。本组大鼠与”造模方案一”比较，虽然死亡率（７０％）有所降低，但仍然过高。

造模方案三１１只大鼠体重２４０—２８０９，以ＴＮＢＳ剂量８５ｍｇ／ｋｇ造模。结果在实验周期内死亡２只大鼠，实验结束时处死的９只大鼠有８只出现溃疡病灶，１只以肠粘膜水肿为主。肉眼评分：２分１只，３分２只，４分３只，５分３只，６分２只，平均分值４．３。本组动物死亡率降至１８．２％，并使大多数动物产生溃疡病灶。但本组大鼠实验时体重较重，实验前饲养周期较

造模因素对TNBS致大鼠溃疡性结肠炎模型的影响

作者：李茹柳， 迟莉， 郭文峰， 王桂香， 王静， 陈蔚文

作者单位：李茹柳,迟莉,郭文峰,王桂香,王静(广州中医药大学脾胃研究所,广州,510405)， 陈蔚文(广州中医药大学脾胃研究所,广州,510405;上海市高校中医内科学E-研究院,上海,201203)

刊名：

中药药理与临床

英文刊名：PHARMACOLOGY AND CLINICS OF CHINESE MATERIA MEDICA

年，卷(期)：2007,23(6)

被引用次数：5次

1.沃格尔HG;沃格尔WH药理学实验指南--新药发现和药理学评价 2001

2.李茹柳,迟莉,郭文峰,徐颂芬,潘怀耿,陈蔚文鸟氨酸脱羧酶表达水平与溃疡性结肠炎病变时相的关系[期刊论文] -广州中医药大学学报 2007(3)

3.Obermeier F;Dunger N;Strauch UG Contrasting activity of cytosine-guanosin dinucleotide oligonucleotides in mice with experimental colitis 2003

4.王皓,欧阳钦,胡仁伟三硝基苯磺酸结肠炎动物模型的建立[期刊论文]-胃肠病学 2001(1)

5.Christine C;Catherine M;Gerard L The prebiotic characteristics of fructooligosaccharides are necessary for reduction of TNBS-induced colitis in rats 2003

6.Ishiguro Y;Sakuraba H;Yamagata K The presentation of haptenated proteins and activation of T cells in the mesenteric lymph nodes by dendritic cells in the TNBS colitis rat 2004

7.郑礼,高振强大鼠溃疡性结肠炎模型的实验研究[期刊论文]-中国药理学通报 1998(4)

1.朱萱萱.沈洪.施荣山.邱召娟肠安胶囊治疗大鼠免疫性溃疡性结肠炎的实验研究[期刊论文]-中国中医药科技2002,9(1)

2.刘莉.王志鹏.梅其炳.李晨2、4、6-三硝基苯磺酸诱导的大鼠结肠炎CD4+T细胞增加[期刊论文]-中国病理生理杂志2004,20(3)

3.武继彪.隋在云.许复郁慢性血瘀证动物模型的建立及其血液流变学的变化[期刊论文]-中药药理与临床

2001,17(5)

4.杨建宏.王荣.王伟明.吴秉纯解脲支原体感染非淋菌性尿道炎大鼠模型建立及评价[期刊论文]-中药药理与临床2008,24(5)

5.郭雁冰.王新月.林燕IL-8与溃疡性结肠炎复发的关系及中药抗复发的研究[期刊论文]-新中医2008,40(2)

6.向志勇溃疡性结肠炎的中医实验研究近况[期刊论文]-湖南中医药导报2003,9(3)

7.周燕红.于皆平.Yan-Hong Zhou.Jie-Ping Yu银杏天宝对大鼠实验性结肠炎抗氧化作用的影响[期刊论文]-世界华人消化杂志2007,15(15)

8.郭雁冰.王新月.林燕.GUO Yan-bing.WANG Xin-yue.LIN Yan中药抗溃疡性结肠炎复发的临床观察[期刊论文]-中华中医药学刊2008,26(2)

9.张永斌.邹移海.连至诚.陈苇菁溃疡性结肠炎大鼠模型及其结肠电异常[期刊论文]-实验动物科学与管理2002,19(2)

10.金艳.刘莉.王庆伟.王志鹏.李宇华.冯娟.梅其炳.JIN Yan.LIU Li.WANG Qing-wei.WANG Zhi-peng.LI Yu-hua. FENG Juan.MEI Qing-bing己烯雌酚对2、4、6-三硝基苯磺酸/乙醇诱导的大鼠结肠炎的影响[期刊论文]-中国临床药理学与治疗学2006,11(2)