二乙酰一肟-异丙醇-安替比林法测定游泳水中尿素
二乙酰一肟在游泳池水尿素测定中的应用_杨沐成
总之，采用二乙酰一肟—安替比林方法加热的 时间较短，精密度较高，并且线性范围很宽，具有良 好的回收率。且其测定结果和国标法相比无明显差 异，并且在 实 际 运 用 中 很 准 确，操 作 起 来 也 比 较 方 便。
参考文献：
［1］ 蒋 雪 凤，金 淋 奇． 游 泳 池 水 中 尿 素 测 定 方 法 的 改 进 ［J］． 中国卫生检验杂志，2010，2（ 01） ： 56 － 57．
第六，加 强 化 验 分 析 相 关 知 识 和 技 能 的 学 习。 加强针对性精密仪器的性能构造、维护保养的相关 培训，加强相关色谱理论方面知识和国家标准行业 标准的培训学习。加强理论运用到实际工作中，实 际问题总结归纳，并做成相关课题、案例，组织大家 学习，实现知识的回归，提高全员的学习能力和实践 经验。
2 结果
2． 1 最大波长和标准系列 采用 25 μg 的管，把它设置在 450 ～ 470 nm 的
范围内开始扫描，当位于 459 nm 时达到高峰，显示 出最大的波长为 459 nm，在采用这种方法测定时， 选用波长为 460 nm。其中 0 ～ 50 μg 尿素的吸光度 位于 0． 035 ～ 1． 047 之间，在这种范围内各个浓度和 吸光度之间的关系符合 Beer 定律，经过反复多次实 验，相关系数达到 0． 999 9。 2． 2 稳定性实验
二乙酰一肟法测定游泳池水中尿素的改进
二乙酰一肟法测定游泳池水中尿素的改进Journat.fEnvironmentandHea[th,July2000,V ot.17,No.4环境与健康杂志2000年7月第l7卷第4期'233.(/\—一/文童编号:100159l4(2o00)04-0233—01【技术与方法】二乙酰一肟法测定游泳池水中尿素的改进,/,,,郜婕丁洪强(新疆鸟鲁木齐铁路局中心防疫站,8300]1)I</2_一—一摘要国标《辨城水中尿素卫生检验标准方法》采用二乙酰一肟法,该法反应产物不稳定,溶液显色后遇光楗色,必须使用棕色比色管,操作过程较繁琐.车法采用二乙酰一肟硫氨尿溶液,经与国标法对比,差异不显着0=1.075<t..P>O.05),且线性范围宽,反应时间短,灵敏度,精密度较好.,.美攮词:三圣壁=璺塑丛;c承l,水坚I1,中圈分类号R126.4文献标识码:BI ImprovementofDeterminatonofUreainSwimmingWaterWithDiaceytylMonoximeZHE NGJie.DINGHong—qiang-CentralSanitationandAnti—epidemicStationofUrumuchiRailv~yBureatt,Urumchi830011Abstract:DiacetylmonoximewasappliedinNationalSanitaryStandardMethodfordetectin gureainswimmingwater,whichpresentedsomeshortagesasfollows,unstablereactingproducts,easilyfadedco loredsolutionbylight. essentialapplicationofcolorimetrlccylinderandcomplicatedoperatingprocedure.Inthisas say.themixtureexceptdi—acetylmonoxJmethiosemtcarhazidecompoundwereadded,theresultsrevealednosignifica ntdifferencescomparedwiththosedataobtainedaccordingtoNationalStandardMethod(:1-075~t005,P>008)T hisassaypresentedsoineadvantagesasfollows,widelinearrange,shorterreactiontifne,bettersensitivenessand precision.Keywords:Diacetylmonoxime{Thosemicarbazide{Urea二乙酰一肟法测定游泳池水中尿素是国标规定的游泳池用水水质检验方法],由于该法煮沸时问长,反应产物不稳定,还需用棕色比色管,且二乙酰一肟及安替比林保存时间短,影响测定.笔者改配成二乙酰一肟硫氨脲溶液,在短时加热强酸条件下,尿素与二乙酰一肟缩台成红色联吖嗪],用硫氨脲来提高和稳定产物颜色1试剂二乙酰一肟硫氨脲溶液:称取=乙酰一肟600mg,硫氨脲30mg,加水溶解后,至100mL.此溶液在室温稳定;混合酸:浓磷酸35mI,浓硫酸80ml,慢慢加于300mI水中,冷却后加水至500mL;其余试剂同原法.2方法吸取5mL水样于25mL比色管中.另取25ml具塞比色管7只,分别加入0.01mg/L尿素标准应用液0,0.5O,1.00,1.5O,2.00,2.50,3.00mL,用纯水定作者简介郑捷(1969一),女,乌鲁木齐铁路局中心防瘴站植验师,占L事农质分析.∈jz,.容至5mL,相当于尿素浓度为00,1.0,20,3.0,4.0,50,6.0mg/L,向水样和标准系列中加入二乙酰一肟硫氨脲液1mg/I,混台酸5mg/I.混匀后置沸水浴中煮沸l5min,置流水中冷却2min,于520Dm波长下,用lcm比色杯,空白调零,测定样品和标准系列溶液的吸光度.3结果与讨论经改进的方法线性范围大,可达0～6.0mg/I,而原法只为0～1.5mg/I.且本法反应时间短,仅15min,灵敏度和精密度较好,不需要复杂设备,适用于各级实验室.3.1标准曲线本法经实验测定,在0～6.0mg/I范围内线性良好,线性方程为Y=0.044.v+0,018,招关系数r=0.9998.波长选择在500～550nm,经测试,在520nm处有最大吸收值.3.2方法精密度取水样5mI,平行测定6份,平均值为0.688mg/L,变异系数为2.1(下转第241页)雪{2{毒葭瑕,Jourmi[ofEllvirorlrnentnndHealth,July2000,V o1.17tNo.4环境与健康杂当?241中囤分类号:R123乌江涪陵段水质10年动态分析型型(四川省重庆市涪陵区卫生防疫站,..o0]文献标识码:C为了解乌江永质在汇^长江永前的卫生状况,作者从1989年起,连续10年对其水质进行了卫生指标监测并分析其动态按黑境一设计方案,在乌江^口处至上游2km以内,离岸10rn处各设2～5个采样点,分别进行丰,枯永期卫生指标监测,监测项目分舄lI为感官指标,一般化学指标,毒理学指标及细菌学指标.按照GB5750—1988《生话饮用水标准检验法》进行采样检验,同时依据CJ3020—1993~生活故用水水豫水质标准'及GB3838—1988《地面永环境质量标准》对照分析连续1O年监测发现:细菌总数,总大脑菌群,色度,浑浊度及铁5项指标分别为:最高为(1696土2.77)十/mL,(1905土7.87)十/L,(9.20士8.82)度,(38.81土27.02)度,(0.20土0.10)mg/L,最低为(656土2.61)个/mL,(171士2.96)十/L,(3.0O土1.48)度,(2.g5土0.87)度和(0.06土0.03)mg/L.各年都有一定起伏变化t但没有逐年增加或减少的趋势.其余5项指标在10年中.1997年有一个永样橙出锰,为0.02mg/L;1994年有4个永样检出锅,分别在0.02～O.35mg/L之间,锌,挥发酚,阴离子台成洗1窘}剂均未检出.以上监测结果说明,乌江上游无大的污染源,水质在10年内未发生大的改变.5项一般化学指标监测结果中,pH值最低为6.53,最高为8.70,均值在7.46～8.05之间,总硬度最低为98mg/L,最高为382mg/Lt均值在146.85～187.2mg/L之间,氯化物等3项指标的古量均较低,并且各项指标均在《生活饮用水术源永质标准'允许范围之内,同样也投有莲年增加或减少的趋势.由此可见,乌江水质多年来,一般化学指标比较稳定,且pH值适中,总硬度在正常范匿内波动,是生活饮用水较好的水掉.乌江承质每年以氟化物,硝酸盐和六六六指标检出为主,范围分男II在0.12～O.38mg/L,9.60～1.5Omg/L和0.15～1.67g/L之问.l0年中,1994年有一个水样检出砷为0.02mg/Lt1994,l995年有8十水样检出错,分别为0.01mg/L.R,2'/0.02mg/L和0.12mg/L~1992年有3个水样检出铅,分别为0.06rng/L,0.012mg./L和0.015mg/L;1997年有2个水样检出镉,分别为0.003mg/L及0.005mg/L.上述项目检出值,同样符台《生话戗用水水豫水质标准》的要求.其它毒理学指标各年度均未检出.丰,枯水期永质变化情况见表1.可见,丰,枯水期8项卫生指标监测中,除细菌数,总大肠菌群及浑浊度3项指标丰水期明显高于枯水期外<0.O1),其余指标在不同水期无大的变化(尸>o.05).表1不同水期8项卫生指标监测结果项目丰期t,-_54)枯木期(=51)范围;±范围;±40~16㈣761~6.0316㈣830_+705色礁2～15594±3790～14570士3.161军i生度8～8028.70±21.670～50892~儿49pH瞳9.3～83772-4-0..165～82799±0261:7~3551704-_79.261∞～20o~69~1805(mg/L)0.O7～9.70441d:2761t0~11385.18~2.88c.1431.,20.Lo.05ul】38LⅥ108从总体监测结果来看,乌江水质虽属I类地面水标准,但从局部采样点某项目分析,仍夸人担忧.如总太肠菌群超过l0000十/L的就占监测总水样的918,已超过Ⅲ类地面水标准最高限值.特剐是三峡大坝建成正常蓄水后,长江永流将变得平稳,且有大量江永倒灌人乌江河道,致使乌江流速减慢,白净能力降低随着两岸城市建设和工业企业不断发展,如果太量的生活污水和工业污水不加处理直接捧^江中,就会使水质恶化而引起不良后果,应引起有关部门的关注.(收稿日期:I999.08I7)(车文编辑:于文霞)t上接第233页)3.3回收率取同～水样6份,分别加入尿素标准,每毫升相当于1mg,测定6次,回收率为98～l02.3.4对比实验分别取5个样品,用两种方法测定,其结果,=11.075<￡.尸>0.05两种方法无显着差异.参考文献:[1]中毕^咒共和国卫生部.游泳用水水质檀验方法.1985:10.1l :2]采忠勇主编实用医学检验学.^民军医出版杜.1992261—262. [3:李林主编.临束医学检验手册吉林科学技术出版社.1986; 42U一21.'收稿日期:1999—05.05)(本文编辑:于文霞)",'●。
二乙酰一肟氨基硫脲法检测游泳池水中尿素
二乙酰一肟氨基硫脲法检测游泳池水中尿素饶国强武义县疾病预防控制中心321200尿素含量是游泳池水质检验中一项重要的卫生指标，国标方法GB/T18204.29-2000中用的二乙酰一肟安替比林法存在显色后遇光褪色，线性范围窄的缺点。
本人借鉴临床生化检验中的尿素氮测定方法，设计了二乙酰一肟氨基硫脲比色法，结果令人满意。
1．原理尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸环境中加热，生成红色的二嗪衍生物。
显色强度在一定范围内与尿素含量成正比。
2．材料与方法2．1 仪器721-分光光度计2．2 试剂2．2．1 酸性试剂浓硫酸200ml与磷酸300ml混匀，冷至室温。
加氨基硫脲50mg，硫酸镉2.0g溶解，棕色瓶冷藏至少可保存一年。
2．2．2 二乙酰一肟溶液称取4.0g二乙酰一肟，溶解后加纯水至200ml，棕色瓶冷藏可保存半年。
2．2．3 尿素标准贮存液准确称取0.1000g尿素，加少量纯水溶解后，移至1000ml容量瓶中，加5滴三氯甲烷作防腐剂，用纯水定容至刻度。
4℃保存，此溶液尿素浓度为0.1mg/ml。
2．2．4 尿素标准使用液临用时将尿素标准贮存液稀释10倍。
此溶液尿素浓度10ug/ml。
2．3 操作步骤2．3．1取水样10ml于具塞标准比色管中。
另取比色管8只，分别加入10ug/ml的尿素标准使用液0、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00ml，各加水至约10ml。
2．3．2 每管各加酸性试剂5.0ml，2%的二乙酰一肟溶液2.0ml，加纯水至25ml。
沸水浴12分钟，取出后用冷水冷却至室温。
2．3．3 以空白管调零，在540nm处，用1cm比色皿测定各管吸光值。
以浓度对照吸光值，制备标准曲线。
以水样的吸光值在标准曲线上查出尿素含量。
2．3．4 计算C＝M×1000 V试中：C―水样中尿素浓度，mg/L；M－从回归方程算得水样中尿素质量，ug ；V－水样体积，ml。
二乙酰一肟-硫代氨基脲法测定游泳池水中尿素
《 游泳场所卫生标准》 Ｇ ９ ６ （ Ｂ ６７—１９ ） ９６ 将其确定为评 价游泳池水水质受人体污染 的一个重要指标 。 尿素易溶于水 ， 具有刺激性 。若游泳池水 中尿素
将 上述 试管 在沸 水浴 中加 热 １ 钟 ， ０分 置流 动 自来 水 中 冷却 ２分钟 ， 以纯 水作 参 比 ， ５０ ｍ 处 ， １ｍ 比色 在 ２ｎ 用 ｃ
范 围窄 、 反应 时 间 长 、 应 产 物 不 稳 定 和 易 褪 色 等 缺 反 点 。针对 这种 情况 ， 们 以二 乙 酰 一肟 一硫 代 氨基 脲 我 溶液 替代 二 乙酰一 肟 和安替 比林 溶液 来 提高 和稳 定产
含量过高， 会使游泳者出现皮肤瘙痒 、 潮红、 红斑 、 脱屑 等症状。我 国在《 游泳场所卫生标准》 中规定游泳 池
水 中的尿 素含 量 不 得 超 过 ２ ５ ｇＬ 目前 ， 于测 定 ．ｍ ／ 。 用 游泳 池水 中尿 素 的方 法 有邻 苯 二 甲醛 法 、 酚 一次氯 苯 酸盐 分光 光度 法 、 Ｐ Ｏ Ａ法 、 尿酶 一Ｂ ｎ ｌｔ 、 乙酰一 ｅｈｏ 法 二 肟法 等 … 。二 乙酰 一 肟 一安 替 比林 法 是 国 家 标 准 方
ｉ
二 乙酰 一肟 一硫 代 氨 基 脲 法测 定 游 泳 池水 中尿 素
郑 瑾 边 文耀
（ 呼和 浩特 铁路 疾 病预 防控 制 所 ， 内蒙古 呼和浩 特 ０ｏ ５ ） ｌ０ Ｏ
尿素是人体 内蛋 白质 的代谢产物 ， 主要经 肾脏随
硫氨脲二乙酰一肟联合显色测定游泳池水中尿素
本法操作 简单 ， 色稳定 。 性范 围大 ， 显 线 试剂 易保存 ， 能满 足实 际工 作需 要 ， 对游泳 池 水 中尿素 含量 的测 定 具有 较高 的
应用价值 。
［ 参考 文献 ］
［ ］Ｇ ／ １２ ４ ２ １ Ｂ Ｔ ８０ 、 ９—２０ ．公共场所卫生标准检验法 ［ ］ ００ Ｓ． ２ ８ 方法 对 比试 验 ． ［ ］叶应妩 ， ２ 王毓三 ．全 国临床检验操作规程 ［ ．第 ２版 ．南京 ： Ｍ］ 东
（ 转 第 ９ ８页 ） 下 ８
维普资讯
９８ ８
中国 卫 生 检 验 杂 志 ２０ ０ ５年 ８月 第 １ ５卷 第 ８期
Ｃ ｉｅｅＪｕｎ ｌ ｆ ａｔ ａｏａｏｙＴ ｃｎｌｇ ， ｕ ０ ５ Ｖ ｌ ５ Ｎ ｈｎ ｓ ｏｒａ ｏ ｌ Ｌｂ ｒ ｒ ｅｈ ｏ ｙ Ａ ｇ２０ ； ｏ １ ｏ８ Ｈｅ ｈ ｔ ｏ
用本法和二 乙酰一 肟 安替 比林 法测 定 ／ ， 乙酰一 肟 安 ． ９± ． ６ｍｇ Ｌ 二
南 大学 出版社 ， ９７ １９ ・
（ 收稿 日 ： ０ － ５ ） 期 ２ ５０一 ０
（ ６）：０ —２３ ２ ．
未见任何毒性和致突变作用 ， 基本 上符 合使用 安全 ， 建议 企业 可考 虑将 它们联合应用 于食 品中 ， 同发挥其保健 功效。 共 ［ 参考 文献 ］
［ ］白树民 ， １ 谢力勒 ， 刘成林 ， ．在 食品 中添 加－十八烷 醇对 尾吊大 等
［ ］杜引娣 ， ２ 刘培贤 ． 牛磺酸的研究现 状与前景 ［ ］ Ｊ ．临床 医药实践
１ ４ 标 准 曲 线 的 制 备 ．
图 １ 吸 收 光 谱 曲线 （ 以水 调 零 】
２ ５ 标 准 曲 线 及 线 性 方 程 ．
二乙酰一肟检测尿素
2 试剂
2．1 0．2％二乙酰一肟溶液：称取0．2g二乙酰一肟 ［CH3COC：（NOH）CH3］溶于10％乙酸中，并稀释至100ml， 保存于棕色瓶备用。 2．2 0．2％安替比林溶液：称取0．2g安替经林（1，5 －二甲基－2－苯－3－吡唑酮C6H5NN（CH3）C（CH3）：CHC： O），溶于1＋1硫酸中并用混酸稀释至100ml，棕色瓶中保 存。（注：硫酸浓度大于1＋1时，显色缓慢且操作不便。） 2．3 尿素标准溶液：准确称取0．1000g尿素于小烧杯中， 加少量纯水溶解后转入1000ml容量瓶中，加0．1ml氯仿并 用纯水定容，此液每ml含0．1mg尿素。冷藏保存。 2．4 尿素标准使用溶液，准确吸取尿素标准储备溶液 10．00ml于100ml容量瓶中，用纯水定容，此液每ml含 0．01mg尿素。
3 方法
3．1 定性测定：取使用液 2 mL 加入试管中，加 0.1 mL
牛奶，在电炉上快速加热至煮沸，保持沸腾 1 min，观察
颜色，用不含尿素样品做比较。正常奶颜色为淡红色， 添加尿素的牛奶反应颜色为玫红色。 3．2 定量测定：取5mL使用液加入0.1mL牛奶，于20 mL
的螺口试管中，加盖拧紧，于 95 ℃水浴中反应 20 min，过
( 011 ~ 11 5 m g /L), 吸光度偏低,反应产物不稳定, 溶液
显色后遇光褪色等多种问题, 对检测结果影响较大, 为此 本法参阅有关文献[ 2, 3] , 通过摸索, 将国标法中的标准 曲线扩大, 定容体积由25 m l改为10 ml, 使线性范围变宽, 吸光度的值增大, 标准系列的稳定时间长, 结果满意, 其准 确度、精密度较好, 能满足基层实验室的需要。
1．原理
尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸环境中
测定游泳池水中尿素方法的改进
解决的疑难病例和重大技术问题测定游泳池水中尿素方法的改进游泳池水中的尿素只要来自人体分泌物、排泄物，特别是汗液和尿液的污染因而测定水中尿素是了解认为污染的重要指标。
常用的方法是二乙酰一肟安替比林法，为国家规定的标准检测方法GB/T18204.29-2000，此方法要求使用棕色具塞比色管，因为不易买到给工作带来困难，本人通过实验证明使用透明的比色管采取沸水浴锅加热，取得满意的效果1.原理尿素与二乙酰一肟及安替比林反应呈现黄色,在波长460nm处有最大吸收峰,与标准系列比较定量。
2.试剂2.1 二乙酰一肟溶液(20g/L):取2g二乙酰一肟[CH3COC(NOH)CH3]溶于10%乙酸中,并稀释至100ml,保存于棕色瓶中。
2.2安替比林溶液(2g/L):取0.2g安替比林[C6H5NN(CH3)C(CH3)CHCO]溶于1+1硫酸中并稀释至100ml,保存于棕色瓶中。
2.3尿素标准储备溶液(100μg/ml)和尿素标准使用溶液(10μg/ml)。
3.仪器和器材紫外/可见分光光度计、沸水浴锅、25ml具塞比色管.4.分析步骤取游泳池水样2.00ml于10ml比色管中。
另取尿素标准使用溶液(10μg/ml)0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.7、0.9、1.1、1.2、1.3、1.5ml(尿素含量为0、1、3、5、7、9、11、13、15μg),各管加纯水稀释至2ml,于上述各管各加入1.0ML二乙酰一肟，混匀。
再加入安替比林2.0ML，盖上比色管赛后置于沸水浴锅中煮沸50min，取出并在流动的自来水中冷却2min，立即与纯水为对照在460nm处，用1CM比色皿。
在避免阳光直射的条件下尽快测定各管吸光度值。
绘制标准曲线并求得样品尿素的浓度。
5.结果5.1标准曲线线性范围本标准曲线在0～15μg范围内线性关系良好Y=17.8X-0.214 r>01999。
卫生标准要求尿素≤3.5mg/L,若取2ml水样测定,则可测定浓度范围为0～7.5mg/L5.2精密度和回收率实验分别对尿素浓度为0.80、2.00、4.50水样重复测定6次进行方法的精密度和回收率实验结果见表1.表1 方法的精密度和回收率实验结果编号浓度(mg/L) 测定值(mg/L) X (mg/L) S RSD (%) 回收率(%)1 0.80 0.694~0.827 0.775 0.0518 6.68 96.62 2.00 1.984~2.073 2.027 0.0362 1.78 101.43 4.50 4.413~4.476 4.438 0.0208 0.47 98.65.3.干扰实验因游泳池水中以氯制剂消毒，且游离余氯应在0.3~0.5mg/L，经干扰实验证明水中余氯在15mg/L时对显色无影响。
游泳水中尿素测定方法
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• 二乙酰一肟硫氨脲法 • 邻苯二甲醛法 • OPA法 • 酶-Berthlot法
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• 游泳池水尿素含量≤3.5mg/L
《公共场所卫生标准》
• GB/T-18204.29-2000 游泳池水中尿素测定 方法
• 国标法的改进
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GB/T-18204.29-2000 游泳池水中尿素测定方法
实验原理 • 尿素与二乙酸一肟CH3COC (NOH) CH3及
安替比林反应呈现黄色，在波长460 nm处 有最大吸收峰，比色定量。
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于25mL棕色比
取样10mL
色管
纯水稀释至刻度 0.2g 100mL
0.2%二乙酰一肟溶液
1.0mL0.2%安替比林溶液20mL2020/8/26
混匀
水浴锅
分光
光度计 1cm比色皿
沸水浴50min,自来水冷却2min
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• 2、黄丽君等，游泳池水中尿素二乙酰一肟 检测方法的改进，中国卫生检验杂志， 2008（18）：1431-1432
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• 3、杨佩丽等，二乙酰一肟－ 安替比林分光 光度法测定游泳池水中尿素的方法改进与 探讨，河南预防医学杂志，2010（21）：
改良二乙酰一肟-安替比林法测定游泳水中尿素
改良二乙酰一肟-安替比林法测定游泳水中尿素改良二乙酰一肟-安替比林法测定游泳水中尿素中国卫生检验杂志2008年7月第18卷第7期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Ju12008;Vol18N.71319 改良二乙酰一肟一安替比林法测定游泳水中尿素施伟红(浙江省宁海县疾病预防控制中心,浙江宁海315600)【化学测定方法】[摘要]目的:建立实用,快捷的游泳水中尿素的测定方法.方法:在国标法的基础上提高酸用量,增大显色剂浓度.结果:本方法在0.20,10mg/L范围呈线性关系,精密度,加标回收率均符合要求,加热时间缩短一半,样品反应后2h内基本不褪色.结论:此方法测定结果与国标法比较无显着差异,在实际应用中更准确,操作更方便.[关键词]改良;二乙酰一肟,安替比林法;尿素[中图分类号]0657.32[文献标识码]A[文章编号]1004—8685(2008)07—1319—02Simultaneousdeterminationofureainswimmingwaterbydiacetylmonoxime——antipyrineShiWei—hong(NinghaiCenterforDiseaseControlandPrevention,Ninghai315600,China) [Abstract]0bjective:Toestablishautilityandshortcutmethodfordeterminningu reainswimmingwater.Methods:BasedontheGBimprovetheamountofacidandexpandthechromaofcolorreagent.Results: Withthemethodalinearrelationisexhibitedwithin0.20,10mg/L:tlleprecisionandtherecoveryrateareallaccordedwiththedemand;Th etimeofcalefactionisreducedtoonlyahalf;andthesampleswontfadedwithin2hafterreaction.Conclusion:Bet weentheresultswiththissimultaneousdetermi—nationandthoseoftheGBmethodnoobviousdifierenceappear.andwiththismeth odtheresultismoreaccurateinpracticeand theprocessismoreconvenient. 『KeywordslSimultaneous;Diacetylmonoxime—antipyrine;Urea 我国《公共场所卫生标准检验方法》规定GB/T18204.29 —2000游泳水中尿素测定方法(简称标准方法)采用二乙酰一肟一安替比林分光光度法J.虽然线性,重现性,灵敏度都好,回收率也高,但存在加热时间长,显色不稳定,检测范围 (0.10,1.5mg/L)小等缺憾.为此,经过反复试验,提高酸用量,增大显色剂浓度,使加热时间缩短至15min,加入稳定剂后使溶液颜色在相当长时间内保持不褪,同时还扩大了检测范围.结果满意,现将方法报告如下.1材料和方法1.1仪器TU一1901双光束紫外可见分光光度计;电热水浴锅; 25m】无色具塞比色管.1.2试剂1.2.1安替比林一酸溶液称取2.0g安替比林,0.25g三氯化铁,溶于100ml纯水中,缓缓加入100ml磷酸,再一边搅拌一边缓缓加入200ml硫酸,放冷倒入棕色瓶保存. 1.2.2二乙酰一肟一异丙醇称取1.0g二乙酰一肟溶于 50ml(1+9)乙酸中,再加入5Om1异丙醇,混匀倒入棕色瓶保存.1.2.3尿素标准使用溶液10.0ml.[作者简介]施伟红(1968一),女,学士,高级工程师,主要从事理化检验工作.1.3测定步骤1.3.1吸取水样5.00ml置于25m1具塞比色管内,另取7 只同样比色管分别加入尿素使用液0,0.10,0.25,0.50,1.O0,2.50,5.O0ml,分别加入纯水补足至5.0ml;加标水样:吸取适量尿素标准液置于100ml容量瓶内,加水样至刻度,混匀后吸取5.O0rnl加标水样测定.1.3.2各管加入4.0ml安替比林一酸溶液,2.0ml二乙酰一肟一异丙醇溶液,充分混匀后放沸水浴内,待水面沸腾时开始计时.加热15min后立即取出比色管,流水冷却后加纯水至刻度.1.3.3以纯水为参比,于460nm波长下,用1cm比色皿,测定各管吸光度.曲线自动回归,浓度直读并打印.2结果2.1最大波长用25g管,设置在450,470nm范围内进行扫描,在 458460nm处出现高峰,显示最大波长为459nm.本法测定时,波长选用460nm.2.2标准系列0,50.0Ixg尿素的吸光度在0.034—1.046之间.在此范围内各浓度与吸光度的关系符合Beer定律,经多次实验,其相关系数达0.9999,y=0.10134X+0.03856. 2.3稳定性试验经反复实验,酸的用量增加时显色时间提前,10m】溶液1320中国卫生检验杂志2008年7月第l8卷第7期ChineseJoum~0fHeMthLaboratoryTechnolo~,Jd2008;Vol18?7 中加2.0ml硫酸已趋于平台,但加入纯水至25mJ时,如果没有足够的酸度保证,显色不稳定,所以预先加入1.0ml磷酸, 能起到稳定作用.加入1.0ml丙三醇后在2h内各管的吸光度均无明显变化,而且在加热前加入丙三醇会使线性更好. 同时实验证明加入三氯化铁对稳定颜色和降低空白吸光度有明显效果,当二乙酰一肟的浓度提高时空白吸光度也提高,加入三氯化铁后,空白吸光度能得到有效控制.2.4精密度尿素质量为5.0,10,25,30的溶液各测6次,结果见表1. 表1样品测定的精密度(ttg)2.5回收率3个不同浓度的样本内加入低,中,高的标准物质,各测6 次,结果见表2.表2加标回收率(me,/L)2.6显色剂的浓度经实验证明安替比林和二乙酰一肟的浓度与吸光度的大小有关,1.0ml2.0%安替比林达到显色平台,二乙酰一肟浓度提高时,吸光度一再增高,为了控制吸光度在最佳范围,二乙酰一肟的浓度选用1.0%取1.0ml较为合适. 2.7加热时间试验用3种不同浓度的样品以不同的加热时间进行吸光度测定,结果如表3,可见加热至15min后吸光度基本趋于稳定. 表3加热时间与吸光度值的变化2.8与标准方法对比用标准方法和改进后的方法同时检测3批样品,每批8 次,结果全部无显着性差异(t=1.28,0.901,0.243;全部P> 0.05),但改进方法的吸光度较标准方法有明显的增大,含尿素1.50mg/L的游泳水样标准法测得吸光度0.076,改进法测得的吸光度提高到0.173.2.9干扰物质对检测结果的影响配制含下述物质的合成水样:(mg/L)氨氮2,碳酸钙 450,亚硝酸盐氮0.2,硝酸盐氮20,氯化物400,游离有效氯5,经试验以上浓度的干扰物质不影响检测结果. 3讨论标准方法显色缓慢是因为酸的浓度太低,显色剂含量过低J,经反复实验证明:酸,二乙酰一肟,安替比林的浓度与显色速度,吸光度成正相关.10IIll反应液中含2ml硫酸,1ml 磷酸能使反应加速;1.0ml安替比林(2.0%)使显色趋于平台,增加二乙酰一肟浓度,吸光度值也可提高,同时空白吸光度也提高,加入1.0ml二乙酰一肟(1.0%)能使吸光度提高一倍多,已可满足实验要求.按本方法操作加热15min就能达到较好的效果.虽然继续加热还能提高吸光度,但会使线性变差.操作时样品和标准管是在相同条件下加热,所以对结果影响不大.应该注意水浴要高于比色管内反应液液面,防止受热不均匀. 标准方法的检测范围是0.10,1.5mg/L,改进法的检测范围是0.20,10.0mg/L,目前执行的《游泳场所卫生标准》 (GB9667—1996)尿素43.5mg/L,在同时加入标准物质后,改进法的标准系列线性范围包容了上述浓度,在测定过程中增加平行样品和加标试验,可同时取得相对偏差,回收率作为评价,使结果更可信.硫酸能加快反应速度,但不稳定,退色也快,磷酸反应慢, 但稳定性好,混合酸溶液中加入三氯化铁,能使安替比林显色稳定,与磷酸结合成无色络合物,降低空白吸光度.据报道的文献提示多种有机溶剂能起到稳定显色剂的作用.因异丙醇灵敏度高,水溶性好,且为常用试剂,无毒害,易购得],经试验加入1.0ml异丙醇具有相当好的效果,在加热前加入比加热后加入有更好的线性.起稳定作用的因素是酸浓度,加上高铁离子和异丙醇,三者起到协同作用.标准方法规定使用棕色比色管是因为溶液遇光退色,当加入稳定剂后,溶液颜色相当稳定,室内2h观察无明显变化,可以用无色比色管来操作.改进后的方法加热时间短,线性范围宽,精密度高,回收率好.测定结果与标准方法比较,无显着差异,可以更方便更准确地应用于实际工作中,值得广大实验人员借鉴和应用. [参考文献][1]GB/T18204.29—2000.游泳池水中尿素测定方法[S]. [2]孙兰,胡毅志,胡国嫒.游泳池水中尿素的测定,二乙酰一肟硫氨脲分光光度法[J].环境与健康杂志,1995,12(4):176—178. [3]黄卫东.二乙酰一肟一异丙醇一安替比林法测定游泳池水中尿素 [J].中华预防医学杂志,2001,35(3):190—192.[4]相开幕,孙剑,才玉亮.硫氨脲二乙酰一肟联合显色剂测定游泳池水中尿素[J].中国卫生检验杂志,2005,15(8):945. [5]徐向阳.测定游泳池水中尿素方法的改进[J].中国卫生检验杂志,2006,16(2):235—236.(收稿日期:2008—03一l1)。
二乙酰一肟检测尿素指南
3 操作步骤
3．1取水样10ml于具塞标准比色管中。另取比色管8只，分别
加入10ug/ml的尿素标准使用液0、0.10、0.25、0.50、
1.00、2.00、3.00、5.00ml，各加水至约10ml。 3．2 每管各加酸性试剂5.0ml，2%的二乙酰一肟溶液2.0ml， 加纯水至25ml。沸水浴12分钟，取出后用冷水冷却至室温。 3．3 以空白管调零，在540nm处，用1cm比色皿测定各管吸光
值。以浓度对照吸光值，制备标准曲线。以水样的吸光值
在标准曲线上查出尿素含量。
4 结果
本法操作简便，溶液显色稳定，线性范围宽，试剂 稳定时间长，适合平时工作中使用。
二乙酰一肟-异丙醇-安替比林法
化学式
（CH3）2CHOH OH
异丙醇
结构式
H3C
CH
I
CH3
作用
作显色稳定剂。
1 原理
在原发的基础上，选择异丙醇作显色稳定剂对游泳池 水中尿素进行测定，使标准曲线的线性范围有了很大的提 高，缩短了煮沸时间，方法的精密度、准确度优于原法， 且符合卫生检验要求。
3 分析步骤
3 ．1取游泳池水样 10 ml于25 ml比色管中。另取尿素标准使用 溶液( 10μ g/ml) 0、0．25、0．50、1．00、2．00、3．00、 4．00、5．00、6．00 ml (尿素含量为0、2．5、5、10、20、 30、40、50、60μ g) ,各管加纯水至10 ml,做标准系列。 3 ．2样品及标准系列管各加入 110 ml二乙酰一肟溶液,摇匀,再 加入210 ml安替比林溶液,混匀后置沸水浴锅中煮沸20 min (建 议同时放入同时取出 ,或按次序放入、取出, 以保证加热时间的 一致。在样品多时这点尤为重要) ,在沸水浴时轻轻盖上比色管 塞,以防溶液蒸发。 3 ．3停止加热后在冷水浴 (10℃～15℃,冷水浴水位高于比色管 中溶液为佳 ) 中冷却2 min, 再次混匀后以纯水为对照 , 在460 nm处,用1 cm 比色皿,在避免阳光直射的条件下测定吸光度。绘 制标准曲线并求得样品中尿素的浓度。
对国标GBT18204.2-201413 尿素测定的解读(1)
对国标[GB/T`18204.2-2014公共场所卫生检验方法第二部分化学污染物]- 13 尿素游泳池水中尿素测定的方法解读
一：安替比林溶液配制
①硫酸1+1：纯水60mL + 40mL硫酸（3:2）解释：1+1硫酸如
果配制时出现失误，导致浓度高于1+1时会使显色变慢。
②用混酸定容至100mL。
（混酸配制：浓硫酸：浓磷酸=1:2）
③称取0.2g安替比林，加入80mL硫酸1+1，在沸水浴中溶解安替比
林，然后加入20mL混酸至100mL。
④配制曲线时：加入标准液后，然后加入1mL二乙酰一肟溶液，2mL
安替比林溶液，最后定容至25mL.(国标中加入标准液后直接定容至25mL再加显色剂会导致①标准液浓度改变由25mL变为28mL(有些国标都会这样，实际上相差不大，但是不够严谨，新国标都是先加显色剂最后定容)。
②反应要求酸的浓度必须达到适当强度，国标先定容后加酸会导致酸的浓度降低，是比较关键的影响因素。
)
⑤尿素开封后，长期不用的，应放置在鼓风干燥箱中，105℃烘干1-2
小时后再用。
⑥棕色比色管对实验严格来讲有影响，但是影响不大，可不必使用，
有条件可购买棕色比色管，有条件可购买棕色比色管。
⑦全程注意避光，虽然影响不大。
游泳池水中尿素测定方法的改进
游泳池水中尿素测定方法的改进马娟【摘要】目的：建立一种实用、灵敏、准确、快捷的游泳池水中尿素的测定方法。
方法：将二乙酰一肟分光光度法国标法中样品及标准系列定容体积由25 mL改为10 mL；将煮沸时间由原来的50 min缩短至20 min。
结果：改进后扩大了标准曲线线性范围且线性好，标准曲线在0～100μg范围内，相关系数r＝0．9999，精密度、准确度高，符合卫生检验的要求。
结论：改进方法具有显色稳定、线性范围宽、精密度和准确度高、测定时快捷、方便等优点，值得推广。
【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】2页(P148-149)【关键词】游泳池水;尿素检测;方法改进【作者】马娟【作者单位】南宁市疾病预防控制中心，广西南宁530023【正文语种】中文游泳池水卫生质量的优劣直接影响游泳者的身体健康，尿素是评价指标之一，是判断游泳池水受到人体污染程度的一项重要指标。
游泳池水中尿素含量测定方法采用国标二乙酰一肟分光光度法(以下简称原法)［1］。
该法精密度和灵敏度高，但在应用中存在线性范围窄(最高浓度只能测到1.5 mg/L，而游泳池水尿素评价标准为≤3.5 mg/L［2］)、反应时间长、标准曲线相关系数难以达到0.999以上等缺点［3］;对于尿素浓度高的水样需反复检测，既费时、又浪费试剂。
本法在原法的基础上进行改进，将国标法中样品及标准系列定容体积由25 mL改为10 mL，最高浓度可以测到10.0 mg/L;将煮沸时间由原来的50 min缩短至20 min，改进后扩大了标准曲线线性范围且线性好，标准曲线在0～100 μg范围内，相关系数r=0.999 9，精密度、准确度高，符合卫生检验的要求。
1 材料与方法1.1 试剂二乙酰一肟溶液(2 g/L)，按 GB/T18204.29－2000方法配制。
安替比林溶液(2 g/L)，按GB/T18204.29－2000方法配制。
二乙酰一肟-异丙醇-安替比林法测定游泳水中尿素
游泳池水中尿素的测定随着人民生活水平的提高，游泳已成为人们消暑、娱乐、锻炼的一种方式，但游泳池水极易被污染，引起多种疾病的发生，因此，必须加强对游泳池水的卫生指标的监测。
尿素是其中的一项卫生理化指标，游泳池水中尿素主要来自人体分泌物、排泄物，特别是汗液和尿液的污染，因而测定水中尿素是了解人为污染的重要指标。
二乙酰一肟-安替比林分光光度法（GB/T 18204.29-2000）是游泳场所尿素测定的国家标准检验方法。
该法虽具有标准系列线性好，灵敏度、重现性、回收率高等优点，但同时又有遇光退色，需特备棕色比色管操作，线性范围未包括卫生标准允许浓度，沸水浴时间较长等缺憾。
本文选择异丙醇作显色稳定剂对游泳池水中尿素进行测定，并与标准方法作了对照试验，获得了满意的结果。
1 材料与方法1.1 仪器 723A型分光光度计、水浴锅、25ml无色具塞比色管。
1.2 试剂1.2.1 二乙酰一肟-异丙醇溶液称取1.0g二乙酰一肟溶于1+9乙酸溶液中，并使其总量为100ml，于此溶液中加入异丙醇50ml，混匀，棕色瓶中保存。
1.2.2 安替比林溶液称取0.2g安替比林溶于1+1硫酸中，并使其总量为100ml，棕色瓶中保存。
1.2.3 尿素标准贮备液称取0.1000g尿素，溶于少量水后移入1000ml 容量瓶中，加0.1ml氯仿并用水定容，冷藏保存，此液1.00ml含0.100mg尿素。
1.2.4 尿素标准使用液吸取尿素标准贮备液10.00ml于100ml容量瓶中，以水定容，此液1.00ml含10. 0ug尿素。
1.2.5 实验用水均为去离子水。
1.3 测定步骤1.3.1 吸取水样10.0ml于25ml无色具塞比色管中，另取同型比色管分别加入尿素标准使用液0、0.20、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，以水定容至25ml。
1.3.2 于上述各管中加入二乙酰一肟-异丙醇溶液1.50ml，混匀。
再加入安替比林溶液2.00ml，混匀。
游泳水中尿素测定方法
游泳水中尿素测定方法二乙酰一肟分光光度法1、原理尿素与二乙酰一肟及安替比林反应呈黄色，在波长460nm处有最大吸收峰。
2、仪器2.1 25ml棕色具塞比色管2.2水浴2.3分光光度计3、试剂3.1 0.2%二乙酰一肟溶液：称取0.2g二乙酰一肟[CH3COC：（NOH）CH3]溶于10%乙酸中，并稀释至100ml，保存于棕色瓶备用。
3.2 0.2%安替比林溶液：称取0.2g安替比林（1，5-二甲基-2-苯-3-吡唑酮C6H5NN（CH3）C（CH3）：CHC：O），溶于1+1硫酸中并用混酸稀释至100ml，棕色瓶中保存。
（注：硫酸浓度大于1+1时，显色缓慢且操作不便。
）3.3尿素标准溶液：准确称取0.1000g尿素于小烧杯中，加少量纯水溶解后转入1000ml容量瓶中，加0.1ml氯仿并用纯水定容，此液每ml含0.1mg尿素。
冷藏保存。
3.4尿素标准使用溶液，准确吸取尿素标准储备溶液10.00ml于100ml容量瓶中，用纯水定容，此液每ml含0.01mg尿素。
4、分析步骤4.1吸取水样10ml（尿素含量在0.001～0.015mg范围内）于25ml棕色具塞度管中，另取棕色具塞度管加入尿素标准使用液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5ml，并用纯水稀释至25ml。
（注：显色后溶液遇光退色，帮需用标色法）。
4.2于上述各管加入1.0ml二乙酰一肟溶液，混均。
再加安替比林溶液2.0ml，混匀。
4.3将上述试管在沸水浴中加热50min。
取出并在流动的自来水中冷却2min。
立即以纯水为对照，在460nm处，用1cm比色皿，测定各管吸光值（加热45～55min，呈最深色，若再延长时间吸光值下降）。
4.4以浓度对照吸光值，制备标准曲线。
以水样吸光值从曲线上查出尿素含量。
5、计算C=M/V1000C――水样中尿素浓度mg/L；M――从曲线上查得的尿素含量，g；V――水样体积，ml。
作者：管理员[][返回上一页][打印]。
游泳池水中尿素的测定──二乙酰一肟－硫氨脲分光光度法
游泳池水中尿素的测定──二乙酰一肟－硫氨脲分光光度法
孙兰;胡毅志;胡国嫒
【期刊名称】《环境与健康杂志》
【年(卷),期】1995(12)4
【摘要】游泳池水中尿素的测定──二乙酰一肟－硫氨脲分光光度法孙兰，胡毅志，胡国嫒测定游泳池水中尿素，采用二乙酰一肟－安替比林法（以下简称安替比林法）［１］，需在沸水浴中加热５０分钟显色。
由于煮沸时间长，溶液蒸发损失量多，其定容为１３ｍｌ，即使加水补充，测定的...
【总页数】3页(P176-178)
【关键词】游泳池;水;尿素;测定;安替比林法
【作者】孙兰;胡毅志;胡国嫒
【作者单位】广州市卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R126.4
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4.硫氨脲二乙酰一肟联合显色测定游泳池水中尿素 [J], 相开幕;孙剑;才玉亮
5.二乙酰一肟硫氨脲法测定游泳池水尿素 [J], 刘汉方;冯占娟
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游泳池水中尿素的测定
随着人民生活水平的提高，游泳已成为人们消暑、娱乐、锻炼的一种方式，但游泳池水极易被污染，引起多种疾病的发生，因此，必须加强对游泳池水的卫生指标的监测。
尿素是其中的一项卫生理化指标，游泳池水中尿素主要来自人体分泌物、排泄物，特别是汗液和尿液的污染，因而测定水中尿素是了解人为污染的重要指标。
二乙酰一肟-安替比林分光光度法（GB/T 18204.29-2000）是游泳场所尿素测定的国家标准检验方法。
该法虽具有标准系列线性好，灵敏度、重现性、回收率高等优点，但同时又有遇光退色，需特备棕色比色管操作，线性范围未包括卫生标准允许浓度，沸水浴时间较长等缺憾。
本文选择异丙醇作显色稳定剂对游泳池水中尿素进行测定，并与标准方法作了对照试验，获得了满意的结果。
1 材料与方法
1.1仪器723A型分光光度计、水浴锅、25ml无色具塞比色管。
1.2试剂
1.2.1二乙酰一肟-异丙醇溶液称取1.0g二乙酰一肟溶于1+9乙酸溶液中，并使其总量为100ml，于此溶液中加入异丙醇50ml，混匀，棕色瓶中保存。
1.2.2安替比林溶液称取0.2g安替比林溶于1+1硫酸中，并使其总量为100ml，棕色瓶中保存。
1.2.3尿素标准贮备液称取0.1000g尿素，溶于少量水后移入1000ml容量瓶中，加0.1ml氯仿并用水定容，冷藏保存，此液1.00ml含0.100mg尿素。
1.2.4尿素标准使用液吸取尿素标准贮备液10.00ml于100ml容量瓶中，以水定容，此液1.00ml含10. 0ug尿素。
1.2.5实验用水均为去离子水。
1.3测定步骤
1.3.1吸取水样10.0ml于25ml无色具塞比色管中，另取同型比色管分别加入尿素标准使用液0、0.20、0.50、1.00、
2.00、
3.00、
4.00、
5.00ml，以水定容至25ml。
1.3.2于上述各管中加入二乙酰一肟-异丙醇溶液1.50ml，混匀。
再加入安替比林溶液2.00ml，混匀。
1.3.3各管加塞后同时置沸水浴中加热20min，取出，在流动的自来水中冷却2min。
以水为对照，于460nm处，用1cm比色皿测定各管吸光度。
1.3.4计算标准系列直线回归方程，以水样吸光度代入方程，求出水样尿素含量。
2 结果
2.1最大吸收波长以30.0ug管作最大吸收波长测定，结果见表1。
其λmax在460nm左右，与标准方法基本一致。
2.2标准系列本法标准系列测定结果见表2。
尿素在0~50ug范围内与吸光度的关系符合比尔定律。
直线回归方程Y＝0.013567X＋0.008，相关系数γ＝0.99969。
2.3重现性和回收率取人工游泳池水样6份，各作6次平行测定，计算重现性评价指标，并作加标回收测定，结果见表3。
从表3可看出，其RSD值均＜5%，加标量在0.5~
3.0时，回收率在95.7%~10
4.1%之间。
其重现性和回收率均较好。
2.4对照试验将上述水样同时以标准方法测定，取其均值与本法作对照试验，结果见表4。
经作配对资料的统计学处理，结果表明：t＝1.040＜t0.05（t(5)0.05＝2.571），P＞0.05，两法测定结果差别无显著性意义。
2.5干扰试验向标准系列中加入下列浓度的干扰物（mg/L）：NH3-N 2、NO2-N 1、NO3-N 40、Cl- 400、ABS 2、Ca2+ 400、Cu2+ 2、Fe2+ 1、Mn2+ 1、Zn2+ 3、Ni2+ 3、有效氯15，对测定无干扰。
大于上述浓度的NO2-有负干扰，大于上述浓度的有效氯有正干扰。
3 讨论
3.1尝试以异丙醇、异丁醇、正戊醇、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、甲醛、正辛醇、异戊醇等十余种有机溶剂作显色稳定剂试验，结果显示：甲醛使显色无法进行；正辛醇、异戊醇水溶性差，溶液出现混浊；其余试剂均有显色稳定作
用，但以异丙醇显色后最稳定，灵敏度较高，水溶性好，且为常用试剂，无毒，易购得，故选之。
异丙醇的使用，弥补了标准方法
3.2经实验，异丙醇用量在0.4~0.6ml/管时，空白值较低，灵敏度较高，稳定性好，故选其中间值（0.5ml/管），按此比例将其与二乙酰一肟试剂混合后加入，操作方便，且不影响二乙酰一肟试剂的稳定性。
3.3当二乙酰一肟溶液用量为1ml/管，其浓度为10g/L与20g/L时，灵敏度较高，且两者基本相同，而当其浓度为2g/L时，灵敏度大大降低，故选其浓度为10g/L。
因其与异丙醇混合后一次加入，为达二物质最佳显色量，故该混合试剂加入量为1.5ml。
3.4当安替比林溶液用量为2ml/管，浓度为2g/L与10g/L时，对测定基本无影响，故保持标准方法中该试剂2g/L的浓度。
3.5实验表明，沸水浴时间从15~40min，随加热时间的延长，吸光度增加，标准斜率加大，继续延长加热时间，则线性变差。
加热25min时，50ug管吸光度近0.8，仪器测定误差加大，故本法选用沸水浴加热20min，比标准方法的沸水浴50min时间大大缩短。
因沸水浴时间不同，吸光度差别较大，故水样应与标准系列同批测定。
同时，沸水浴容量应较大，避免过挤致受热不匀，使反应不均匀、完全。
3.6作标准系列及水样显色定容后立即至26h稳定性试验，实验结果显示：在显色定容后2h内呈色稳定，测定偏差小，比色测定最好在此期间完成。
延长至20h间，吸光度值逐渐增大，但在此期间只要标准系列与水样为同批测定，对低、中浓度样品结果基本无影响，高浓度样品偏差稍大，但尚可接受（相对偏差＜5%）。
若再延长时间则不可取。
3.7《游泳场所卫生标准》（GB9667-1996）中规定尿素应≤3.5mg/L。
本法线性范围包容了上述浓度，对一般水样可直接一次测定完成，避免了标准方法测定尿素浓度在1.5~5mg/L水样时，因超出线性范围需将样品稀释后重新测定的麻烦及引入的误差。
本法从十余种有机溶剂中筛选出异丙醇作显色稳定剂，并经反复实验研究，对游泳池水中尿素测定的标准方法作了改进。
与标准方法比较，有遇光不退色，可用普通无色比色管操作；线性范围扩大，一般游泳池水样可不经稀释一次完成测定；沸水浴时间大大缩短，节约时间等优点。
应用于游泳池水中尿素的测定，其重现性、回收率、与标准方法的对照试验，均获得满意结果。