牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；掌握划线分离纯化微生物的原理与方法熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等实验原理：培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等实验内容：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。
（3）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。
加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内（附图1-1）。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
几种培养基的配方
几种培养基的配方培养基是用于培养和繁殖微生物的营养物质的混合物。
根据微生物的特性和应用需求，可以设计出不同成分和配方的培养基。
以下是几种常见的培养基配方：1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）的配方：-牛肉膏：5g-蛋白胨：5g-水解酵母膏：1.5g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将牛肉膏、蛋白胨和水解酵母膏溶解在蒸馏水中，添加纯化琼脂，混合并加热直至溶解，然后倒入培养皿中。
2. EMB（Eosin Methylene Blue）培养基的配方：-蛋白胨：17g-明胶胨：3g-乳糖：10g-酵母提取物：3g-果糖：1g- Eosin Y：0.4g-亚甲蓝：0.065g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将蛋白胨、明胶胨、乳糖、酵母提取物和果糖溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加Eosin Y和亚甲蓝，最后加入纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
3. 铡锰培养基（Sabouraud Agar）的配方：-葡萄糖：40g-酵母膏粉：5g-水解麦粉：15g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将葡萄糖、酵母膏粉和水解麦粉溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
4.胰蛋白酶-大豆酪蛋白肉汤培养基（TRYPTICASE™SOYBROTH）的配方：-胰蛋白酶胨：15g-大豆酪蛋白胨：5g-食盐：5g-葡萄糖：20g-蒸馏水：1000mL将胰蛋白酶胨、大豆酪蛋白胨、食盐和葡萄糖溶解在蒸馏水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温。
5. M9盐碱培养基（M9 minimal medium）的配方：-磷酸一氢二钾：3g-硫酸镁：0.5g-氯化钠：0.5g- 氨氯化铁：7.5mg-葡萄糖：4g-去离子水：1000mL将磷酸一氢二钾、硫酸镁、氯化钠和氨氯化铁溶解在去离子水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温后添加葡萄糖。
这只是几种常见的培养基配方，实际上还有很多不同成分和配方的培养基。
牛肉膏蛋白胨培养基
1、实验原理
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学研究最常用的天然培养基。
在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基。
加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离、培养和测数等。
2、培养基配方
牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g、NaC1 5.0g、琼脂20.0g、自来水1000 mL、pH7.0。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，1000mL蒸馏水，pH 7.0。
牛肉膏蛋白胨固体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5g NaCl，20g琼脂, 1000mL蒸馏水，pH 7.0。
3、操作步骤
⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g，加50 mL自来水，置电炉搅拌加热至牛肉膏、蛋白胨完全溶解。
⑵向小铝锅中加入500 mL自来水，将溶解的牛肉膏、蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次。
加入5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌。
⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL。
⑷用玻棒沾少许液体，用pH试纸测定pH值。
用NaOH或HC1调至pH7.0。
⑸分装漏斗分装于10mm×180mm试管中，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好。
★是否可以搁置几天后进行灭菌？
⑹高压蒸汽灭菌，121℃灭菌30min。
⑺灭菌后摆放斜面。
各种培养基配方
1．营养肉汤成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。
2．营养琼脂培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。
3．MRS培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g，（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。
4．脱脂乳培养基成分：牛奶，蒸馏水。
制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。
除去上层乳脂即得脱脂乳。
将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。
5．培养基A成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。
6．PTYG培养基成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。
盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。
7H2O 0.48g，NaCO3 10g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。
牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌
将已融化的培养基瓶身擦干净，转移入工作台； 待培养基冷却至50°C左右（不烫手为原则，但是 不可冷却过度），倒平板。
第四十当前一4页1页，，共共5五5页十，五星期页日。。
平板要求：平板平整，无凸起；平板无“挂壁”；培养基布 满整个平皿 倒平板操作视频
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第五十二页，当前共52页五，共十55五页，页星期。日。
斜面培养基接种法
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内， 从斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管。 再伸进待接种的培养基管，进行斜面培养 基接种，从斜面底部轻轻向顶端弯曲划线， 不要触破培养基表面。
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第二十八当页前2，8页共，共五55十页，五星页期日。。
7.微量移液器的使用
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今天的工作：
1.固体物品的灭菌 2.配制培养基并进行灭菌 3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查
第三十页，当前共30页五，共十55五页，页星期日。。
无菌
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消毒灭菌方法：
（一）干热灭菌法 （二）湿热灭菌法 （三）过滤除菌 （四）紫外线杀菌 （五）药物杀菌
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▪ （一）干热灭菌法
▪ 1.火焰灭菌法
▪ 2.热空气灭菌法
▪ 140~160℃2~3h
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1
微生物吃什么？
2 微生物长的什么样？
各种培养基配方
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rose100mLbengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
牛肉膏蛋白胨培养基 接种等
实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。
（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。
二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。
牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。
三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
(二)其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。
四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后，补足所需水分。
（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。
（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。
（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。
1．液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。
2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。
分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。
3．半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方成分克/升牛肉膏10.0胨5.0酵母粉5.0盐5.0葡萄糖1.0琼脂15.0酚红0.025培养基PH值调整至7.0±0.2，于121℃高压灭菌20分钟即可。
下面解释每个成分的作用和影响：1.牛肉膏：提供氮源、维生素和矿物质，为微生物提供生长所需的营养物质。
3.酵母粉：富含维生素B群和其他营养物质，能够促进微生物的生长。
4.盐：提供微量元素，维持细胞内渗透平衡。
5.葡萄糖：提供微生物的碳源和能量，促进微生物的繁殖。
6.琼脂：用于凝固培养基，使其固化，提供坚固的基质，方便微生物生长。
7.酚红：作为指示剂，用于检测培养基的酸碱度，在碱性条件下呈现红色。
配方中的每个成分都起到了重要的作用，为微生物的生长提供了必要的营养物质。
同时，配方还可以根据需要进行适当的改动和调整，以满足特定微生物的生长需求。
在制备培养基时，需要注意的事项有：1.每个成分的浓度：每个成分的浓度都对微生物的生长产生影响，需要严格按照配方中的比例加入。
2.PH值调整：PH值对微生物的生长也有影响，需要根据具体的需求和微生物的要求进行调整。
3.培养基的制备和高压灭菌：制备培养基时，要注意加热和溶解的过程，确保所有成分充分溶解。
高压灭菌可以杀灭培养基中的细菌和其他微生物，保证培养基的无菌状态。
总结起来，牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的培养基，通过提供丰富的营养物质，可以有效地支持微生物的生长和繁殖。
配方中的每个成分都具有重要的功能和作用，制备时需要注意每个成分的浓度和PH值的调整。
此外，高压灭菌可以保证培养基的无菌状态。
通过合理的制备和使用，牛肉膏蛋白胨培养基可以为微生物学实验和研究提供坚实的基础。
细菌真菌放线菌培养基配方
一．细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
肉膏蛋白胨培养基1.～7.6 2.、6管，10%3.（1速。
（2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
（3）调pH：检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用lmol/LHCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
（4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
（5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以（6（7（8（9（10）无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。
二.放线菌培养基:高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基,培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源，KNO3作为氮源，K2HP04、MgSO4和FeS04作为无机盐等高氏合成一号培养基1.药品比例：可溶性淀粉20gNaCI 0．5gKNO31gK2HPO4MgSO4FeSO4琼脂水pH2.3.成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4．7H2O可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。
待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌讲义
实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、目的要求1．明确培养基的配制原理。
2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
4．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15—20g 水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方
配方：
1.牛肉膏粉：10克
2.蛋白胨：10克
3.氯化钠：5克
4.水：1000毫升
制备过程：
1.将牛肉膏粉、蛋白胨和氯化钠加入烧杯中。
2.加入适量的水，充分搅拌，直到完全溶解。
3.将溶液转移到一个大容量瓶中。
4.加入适量的水，使总体积达到1000毫升。
5.用盖子或气密塞封闭瓶口，避免细菌的污染。
6.将培养基在121摄氏度的高压灭菌器中高压灭菌20分钟。
7.灭菌后，将培养基冷却至室温，并存储在4摄氏度的冰箱中。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含营养物质的培养基，适用于广泛的细菌种类。
牛肉膏提供了蛋白质、胆碱和其他有机物质，支持细菌的生长。
蛋白胨是由动物和植物的蛋白质消化得到的营养物质，富含氨基酸，可提供能量和生长因子。
氯化钠提供细菌所需的离子平衡。
制备好的牛肉膏蛋白胨培养基可用于分离和培养广谱细菌。
在培养细菌时，可以向培养基中添加其他适当的抗生素或指示剂来选择特定的细菌
菌种。
此外，还可以向培养基中添加其他营养物质，如血清、糖类、氨基酸等，以增强培养基的适用性，满足特定细菌的生长需求。
总结：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，它以富含营养的牛肉膏和蛋白胨为基础，提供了细菌所需的能量、氨基酸和生长因子。
配方简单，制备过程相对简单，适用于广泛的细菌菌种的培养。
根据具体的实验需求，可以对配方进行适当的修改和补充，以提高培养基的适用性和选择性。
msr培养基配方
msr培养基配方
MSR培养基的配方可能因不同的实验需求而有所差异，但我可以提供一个基础的配方作为参考。
以下是一个常见的MSR培养基的配方：
•蛋白胨：10.0g
•牛肉膏：5.0g
•酵母膏：5.0g
•葡萄糖：20.0g
•吐温80：1.0mL
•磷酸氢二钾：2.0g
•醋酸钠：5.0g
•柠檬酸铵：2.0g
•硫酸镁：0.2g
•硫酸锰：0.05g
•蒸馏水：1000mL
•pH：7.0-7.2
请注意，上述配方仅作为参考，并不适用于所有情况。
对于特定的实验需求，MSR 培养基的配方可能需要进行调整。
建议查阅相关的科学文献或咨询专业的微生物学家以获取适用于您实验的MSR培养基的确切配方。
此外，配制培养基时，应遵循无菌操作技术，并在适当的温度和时间下进行灭菌，以确保无菌条件和培养基的质量。
在使用之前，还应检查培养基的pH值，并根据需要进行调整，以确保微生物的生长和繁殖。
最后需要强调的是，由于培养基的配方可能因实验需求而有所不同，因此在使用任何培养基之前，都应仔细阅读相关的使用说明，并按照说明进行操作。
牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌
目录
• 牛肉膏蛋白胨培养基的简介 • 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 • 牛肉膏蛋白胨培养基的灭菌 • 牛肉膏蛋白胨培养基的应用 • 总结与展望
01
牛肉膏蛋白胨培养基的简介
定义与用途
定义
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用 的基础培养基，以牛肉膏和蛋白 胨为主要成分。
用途
常用于培养细菌，如大肠杆菌、 沙门氏菌等。
组成成分
牛肉膏
提供细菌生长所需的碳源、氮源、维生素和矿物质。
蛋白胨
提供细菌生长所需的氮源和维生素。
氯化钠
维持培养基渗透压，调节细菌生长环境。
琼脂
凝固培养基，形成固体培养基。
培养基的理化性质
pH值
适宜细菌生长的pH值为7.2-7.4。
渗透压
适当的渗透压有利于细菌的生长和繁殖。
营养成分
牛肉膏和蛋白胨提供了丰富的营养成分，满足细 菌生长所需。
加入琼脂粉
将溶解好的琼脂粉加入上 述溶液中，继续加热并搅
拌至完全溶解。
01
02
03
04
05
称量试剂
按照配方比例称取适量的节pH值
使用酸或碱调节培养基的 pH值至7.2-7.4。
灭菌处理
将配制好的培养基分装到 灭菌的培养皿或试管中，
进行高压蒸汽灭菌。
注意事项
避免交叉污染
在配制过程中，要避免培养基与 其他物品接触，以免交叉污染。
储存与使用
配制好的培养基应储存于干燥、 阴凉处，避免阳光直射；在使用 前应检查培养基是否有杂菌污染 。
01
严格控制pH值
pH值对细菌的生长有重要影响 ，应确保培养基的pH值在合适 的范围内。
金黄色葡萄球菌 (牛肉膏蛋白胨培养基)
金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。
本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
2．金黄色葡萄球菌肠毒素检测金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。
3．金黄色葡萄球菌的控制主要包括：1）防止金黄色葡萄球菌污染食品防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。
防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、细菌繁殖。
奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。
对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
2）防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。
牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基制作
牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基2克琼脂0.5克氯化钠（盐）1克牛肉蛋白胨在烧杯中称0.5克牛肉膏，将氯化钠，和牛肉蛋白胨置于烧杯中，加不超过100毫升的水搅匀，放在酒精灯上，使材料熔化，加入2克琼脂，加热至溶化，将溶液加至100毫升，测试并调节溶液的酸碱度（PH值）至7.5左右，，加氢氧化钠溶液（1毫升每升）（碱性）（增加PH），或氯化氢溶液（1毫升每升）（酸性）（减少ph），没有的话用醋代替，搅拌，检测PH值，给试管制作大小合适的棉塞（直径15毫米15厘米长），做成长圆柱形，让棉塞长度的3分之2再试管里，将培养基趁热分装在试管内，分装时，不能让培养基粘在试管口，试管上端培养基液体的高度约为试管的五分之一，分装完毕，塞好棉塞，将每十只试管用线绳捆成一捆（10个以下不用捆），用牛皮纸包住管口一端的外面，用绳子扎好，标明制作日期，制作人，培养及类型。
放入蒸蛋器，蒸10到20分
当试管温度约为50度时，将试管斜放，斜放后的液面长度不能超过试管的一半，静置试管，等待琼脂凝固，凝固后保存。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和Na Cl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌（荤食），因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15—20g、水 1000ml、pH 7．4—7．6（7.0—8.0）三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌（荤食），因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、琼脂 15—20g、水 1000ml、pH 7．4—7．6（—）三、器材牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法1.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.4～7.6。
2.高氏1号培养基(用于放线菌培养)可溶性淀粉20g，KNO₃ 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4•3H2O 0.5g，MgSO4•7H2O0.5g，FeSO4•7H2O0.01g•水1000mL•pH7.4～7.6。
配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌）K2HPO 41g，MgSO4•7H2O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，1/3000孟加拉红水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃湿热灭菌30min。
待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。
4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯(去皮) 200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下：将马铃署去皮，切成约2cm²的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖，再补足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。
5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养)蔗糖 30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4•7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4•7H2O 0.1g，水1000mL，pH7.0～7.2。
6.Hayflik培养基(用于支原体培养)牛心消化液(或浸出液) 1000mL，蛋白胨 10g，NaCl 5g，琼脂15g，pH7.8～8.0，分装每瓶 70mL，121℃湿热灭菌15min，待冷却至80℃左右，每70mL中加入马血清20mL，25%鲜酵母浸出液10mL，15醋酸铊水溶液2.5mL，青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上) 0.5mL，以上混合后倾注平板。
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实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与
纯化
实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；
掌握划线分离纯化微生物的原理与方法熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCI、琼脂等
实验原理：
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效
果。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等
实验内容：
1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备
（1）计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。
（3）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。
加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10% NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2, 因为高压蒸汽
灭菌后， pH 常降低。
(5)分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内
(附图 1-1)。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如
液体培养基，应装试管高度的 1/4 左右；固体培养基装试管高度的 1/5
左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
(6)包扎试管扎成捆。
试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸和牛皮纸包扎，纸上表
明培养基的名称、配制日期等。
(7)灭菌培养基用O.IMpa( 15lb/in2)高压蒸汽灭菌15~20min,
2.培养基的高压蒸汽灭菌
灭菌原理：水的沸点可随压力的增加而提高，当高压蒸汽灭菌锅中水煮沸时，因锅是密闭的，蒸汽不能溢出，而使压力增加，水的沸点和温度也随之增加。
因此，高压蒸汽灭菌是利用高压蒸汽产生的高温，以及热蒸汽的穿透能力来达到灭菌的目的。
一般在 O.IMpa (15lb/in2)的压力时，温度可达 121C只要维持 15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种抱子。
灭菌方法：
(1)加水于灭菌器内到规定的水平面。
(2)需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基) ，棉塞、
硅胶泡沫塞等用防潮纸包好 (防止锅内水汽把棉塞淋湿) ，放入灭菌锅内
的套筒中。
摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。
(3)将灭菌锅盖的排气管插人套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，
切勿漏气。
(4)打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约 5~
l0min，
关闭放气阀。
(5)关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压
力和温度都上升，直至压力表指针达到所需压力时，开始计时，通过调节
热源，维持此压力到所需时间。
(6)灭菌完毕，待压力自然降至 0 时，打开放气阀，注意不能打开过早，
否
则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
(7)打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。
(8)火菌锅用完后，将锅内剩余的水倒掉，以免日久腐蚀。
3.微生物的分离与纯化
借助于划线将混杂的细菌材料逐步稀释，最后在琼脂平板上分散开来，使之
出现单一菌落而达到分离纯化的目的。
4.注意事项
1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
4.划线法分离纯化微生物注意各区勿相互交叉。
5.示教内容：
微生物的分离纯化
高三下册生物书我记得有。
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和 NaCI。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而 NaCI提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96 C时溶化，一般实际应
用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40 C时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或
微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：
牛肉膏3g
蛋白胨10g
NaCI 5g
琼脂15—20g
水 1000ml
pH 7. 4— 7. 6
三、器材
牛肉膏，蛋白胨，NaCI，琼脂；
1mol/L NaOH , 1mol/L HCI ;
试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸(pH 5 . 5—9. 0)，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤
1 .称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCI放入烧杯中。
牛肉
膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2.溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
3.调 pH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其 pH值，直至pH达7. 6。
反之，则用1mol/L HCl进行调节。
注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行(使用方法，可参考有关说明书)。
4.过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。
一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去(本实验无需过滤)。
5.分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
分装装置见图V -1。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面，如图V -2。
分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
6.加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。
7.包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8.灭菌
将上述培养基以1. 05kg/cm2 （15磅/英寸2）, 121 . 3 C, 20分钟高压蒸汽灭菌。
如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
9•搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50 C左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10.无菌检查
将灭菌的培养基放入37 C的温室中培养24 — 48小时，以检查灭菌是否彻底。