酪蛋白的提取与测定(参考资料)
酪蛋白的制备_实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解酪蛋白的基本性质和来源。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 学会等电点沉淀法提取蛋白质。
4. 了解酪蛋白的纯化过程。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，占牛奶蛋白质总量的80%左右。
酪蛋白是一种含磷蛋白质，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至4.7，使酪蛋白沉淀出来。
然后通过离心、洗涤、干燥等步骤，可以得到纯酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶、95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。
2. 试剂：A液（0.2mol/L醋酸钠溶液）、B液（0.2mol/L醋酸溶液）、乙醇-乙醚混合液。
四、实验步骤1. 准备0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液：取A液1770ml，B液1230ml混合即得。
2. 取100mL新鲜牛奶，加热至40℃，在搅拌下慢慢加入预热至40℃的醋酸-醋酸钠缓冲液100mL。
3. 用精密pH试纸或pH计调节pH值至4.7。
4. 将上述悬浮液冷却至室温，离心15分钟，弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
5. 用水洗涤沉淀3次，每次加入50mL水，离心10分钟，弃去上清液。
6. 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌，悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
7. 用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次，每次加入50mL混合液，离心10分钟，弃去上清液。
8. 最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
9. 将沉淀风干，得到纯酪蛋白。
五、实验结果与分析通过上述实验步骤，我们成功从牛奶中提取了纯酪蛋白。
实验过程中，我们发现以下几点：1. 在调节pH值至4.7时，酪蛋白开始沉淀，此时溶液变得浑浊。
2. 离心过程中，酪蛋白沉淀逐渐沉淀到离心管底部。
3. 在洗涤过程中，沉淀物逐渐变得纯净，颜色由白色变为淡黄色。
4. 通过乙醇、乙醚洗涤，沉淀物进一步纯化，颜色变为淡黄色。
六、实验总结本次实验我们成功从牛奶中提取了纯酪蛋白，掌握了等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
酪蛋白的提取与测定（参考资料）
酪蛋⽩的提取与测定（参考资料）⽜乳中酪蛋⽩的制备与浓度测定⼀、实验⽬的1、学习从⽜乳中分离酪蛋⽩的原理和⽅法2、掌握等电点沉淀法提取蛋⽩质的⽅法3、了解紫外吸收法测定蛋⽩质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使⽤4、学会⽤考马斯亮蓝结合法测定蛋⽩质浓度⼆、实验原理1、准备酪蛋⽩原理：⽜乳中主要含有酪蛋⽩和乳清蛋⽩两种蛋⽩质，其中酪蛋⽩占了⽜乳蛋⽩质的80%。
⽜乳在PH4.7时酪蛋⽩等电聚沉后剩余的蛋⽩质统称为乳清蛋⽩。
酪蛋⽩是⽩⾊、⽆味的物质，不溶于⽔、⼄醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋⽩不同于酪蛋⽩，其粒⼦的⽔和能⼒很强，分散性⾼，在乳中呈⾼分⼦状态。
本法利⽤等电点时溶解度最低的原理，将⽜乳的PH调⾄4.7时，酪蛋⽩就沉淀出来。
⽤⼄醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋⽩。
2、紫外吸收法测定蛋⽩质浓度的原理：⼤多数蛋⽩质由于有酷氨酸和⾊氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收⾼峰，可以进⾏蛋⽩质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，⼲扰测定，不过核酸的最⼤吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm 时A的⽐值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋⽩质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋⽩质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋⽩质的疏⽔微区相结合，这种结合具有⾼敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红⾊，最⼤吸收峰在465nm。
当它与蛋⽩质结合形成复合物时呈蓝⾊，其最⼤吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋⽩质复合物的⾼消光效应导致了蛋⽩质定量测定的⾼敏感度。
在⼀定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋⽩质复合物呈⾊后，在595nm下，吸光度与蛋⽩质含量呈线性关系，故可以⽤于蛋⽩质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋⽩：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离⼼机、布⽒漏⽃、表⾯⽫、恒温⽔浴锅⽜奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%⼄醇、⽆⽔⼄醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、⽯英⽐⾊⽫0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L⼄酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃⽐⾊⽫⽜⾎清⽩蛋⽩（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋⽩1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热⾄40℃2、将20mL⽜奶加热⾄40℃，在搅拌下缓慢地加⼊20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、⽤精密pH试纸调pH⾄4.7，可见溶液变为乳⽩⾊悬浮液4、待悬浮液冷却⾄室温，4000rpm离⼼5min，弃上清，得酪蛋⽩粗制品5、⽤蒸馏⽔洗沉淀3次，3000rpm离⼼5min，弃上清6、在沉淀中加⼊20mL95％⼄醇，搅拌⽚刻，将全部悬浊液转移⾄布⽒漏⽃中抽滤7、⽤⼄醇-⼄醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后⽤⼄醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽⼲8、将沉淀摊开在表⾯⽫上，风⼲，得酪蛋⽩纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的⽯英⽐⾊⽫中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，⽤⽣理盐⽔为⽐⾊空⽩对照。
酪蛋白提取实验报告
酪蛋白提取实验报告酪蛋白提取实验报告引言：酪蛋白是一种重要的蛋白质成分，存在于牛奶等乳制品中。
本实验旨在通过提取酪蛋白，探索其在食品工业和医药领域的应用潜力。
通过实验过程的详细描述和结果的分析，我们将深入了解酪蛋白提取的方法和效果。
实验材料与方法：1. 材料：牛奶、氯化钙、硫酸、酒精、磷酸盐缓冲液等。
2. 方法：a. 酪蛋白的沉淀：将牛奶加热至80°C，加入少量氯化钙搅拌，冷却后加入硫酸沉淀酪蛋白。
b. 酪蛋白的溶解：将酪蛋白沉淀加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解。
c. 酪蛋白的纯化：将溶解的酪蛋白加入酒精，离心沉淀，去除杂质。
实验过程：1. 酪蛋白的沉淀：将适量牛奶加热至80°C，加入少量氯化钙搅拌，冷却后加入硫酸，酪蛋白逐渐沉淀。
2. 酪蛋白的溶解：将沉淀后的酪蛋白加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解，形成均匀的溶液。
3. 酪蛋白的纯化：将溶解的酪蛋白加入酒精，离心沉淀，去除杂质，得到纯净的酪蛋白。
实验结果与讨论：通过实验，我们成功地提取到了酪蛋白，并进行了初步的纯化。
在实验过程中，我们观察到牛奶在加热后出现了沉淀，这是因为加热使酪蛋白发生凝聚而形成的。
随后，我们通过加入磷酸盐缓冲液将酪蛋白溶解，得到了均匀的溶液。
最后，通过加入酒精并进行离心，我们成功地去除了酪蛋白溶液中的杂质，得到了纯净的酪蛋白。
酪蛋白作为一种重要的蛋白质成分，具有广泛的应用潜力。
在食品工业中，酪蛋白可用于制作奶酪、酸奶等乳制品，增加其营养价值和口感。
此外，酪蛋白还可以作为食品添加剂，提高食品的稳定性和质感。
在医药领域，酪蛋白具有抗菌、抗病毒等生物活性，可以应用于药物的载体材料和生物医学领域。
然而，本实验中的提取方法仅是初步的纯化过程，酪蛋白的纯度还有待进一步提高。
在实际应用中，需要根据具体需求选择更加精细的提取和纯化方法，以获得更高纯度的酪蛋白。
此外，酪蛋白的稳定性也需要进一步研究，以确保其在不同环境条件下的应用效果。
酪蛋白的提取与定性鉴定
酪蛋白的提取与定性鉴定酪蛋白的提取与定性鉴定摘要牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L，本实验以市面上出售的伊利纯牛奶为原料进行酪蛋白的提取。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至４.７时，酪蛋白就会沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后，便可得到较纯的酪蛋白。
利用显色反应对所提取的酪蛋白进行定性鉴定，结果发现它能与双缩脲反应生成紫红色化合物；与印三酮反应生成蓝紫色物质；与浓硝酸发生黄色反应，在碱性溶液中进一步形成深黄色的硝醌酸钠。
关键词酪蛋白提取定性鉴定双缩脲反应茚三酮反应黄色反应牛奶对人体有很多好处，可以促进心血管的健康，控制高血压，增强免疫机能，还能改善睡眠状况，对人类有很大的益处。
而牛奶的主要成分是酪蛋白，所以我们去提纯分析牛奶中酪蛋白的含量很有意义，可以此来初步判断市场销售牛奶的质量。
另外，通过对提取的酪蛋白进行定性鉴定，可以了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式，知道其与某些氨基酸的呈色反应原理，并学习常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
1材料和方法1.1材料伊利纯牛奶（从超市购得）离心机抽滤装置（布氏漏斗）精密pH试纸电炉电子称烧杯试管移液管玻璃棒滤纸温度计药匙锥形瓶1.2酪蛋白的提取取两个锥形瓶，分别放入50mL牛奶和50mL醋酸缓冲液，在水浴锅中加热至40℃。
在搅拌下慢慢将两者混合。
用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000r/min），弃去上清夜，得酪蛋白粗制品。
用蒸馏水洗沉淀3次，每次离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。
在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2 次，最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
将沉淀摊开在表面皿上，风干；得到酪蛋白纯品。
准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100mL 牛乳（g%）得率：测得含量/理论含量X100%1.3双缩脲反应取少量尿素结晶，放在干燥试管A中。
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
酪蛋白的提取[指南]
![酪蛋白的提取[指南]](https://img.taocdn.com/s3/m/2cd176836aec0975f46527d3240c844769eaa0fb.png)
一、实验目的1、掌握一种提取蛋白的方法。
2、掌握一种检测牛乳质量的方法。
二、实验原理酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。
它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。
它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。
三、仪器和试剂仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。
试剂：1. 95%乙醇、乙醚2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比）4. 市售牛乳四、实验步骤1.酪蛋白等电点沉淀将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。
将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。
2.除脂类杂质将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。
将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。
准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。
一、实验目的酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。
为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。
酪蛋白的提取实验资料搜集
酪蛋白的提取实验资料搜集：文章链接1：/Article/Class185/10919.shtml所谓蛋白质变性(denaturation)，就是天然蛋白质的严密结构（注1）在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间结构被破坏，从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失，如酶失去催化活力，激素丧失活性。
变性蛋白质和天然蛋白质最明显的区别是溶解度降低，同时蛋白质的粘度增加，结晶性破坏，生物学活性丧失，易被蛋白酶分解。
生活中最常见的例子，就是煮鸡蛋的时候，蛋清变成蛋白了。
引起蛋白质变性的原因可分为物理和化学因素两类。
物理因素可以是加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波的作用等；化学因素有强酸、强碱、尿素、重金属盐、十二烷基磺酸钠(SDS)等。
在临床医学上，变性因素常被应用于消毒及灭菌。
反之，注意防止蛋白质变性就能有效地保存蛋白质制剂。
变性并非是不可逆的变化，当变性程度较轻时，如去除变性因素，有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能，变性的可逆变化称为复性。
许多蛋白质变性时被破坏严重，不能恢复，称为不可逆性变性，比如说用金属盐、辐射使蛋白质变性。
我们有时常常会看到变性的蛋白质在溶液中沉淀，蛋白质的变性的确与沉淀有密不可分的关系，但并不是所有变性的蛋白质都会在溶液中沉淀。
具体地说，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀，变性蛋白质只在等电点附近才沉淀，沉淀的变性蛋白质也不一定凝固。
例如，蛋白质被强酸、强碱变性后由于蛋白质颗粒带着大量电荷，故仍溶于强酸或强减之中。
但若将强碱和强酸溶液的pH 调节到等电点，则变性蛋白质凝集成絮状沉淀物，若将此絮状物加热，则分子间相互盘缠而变成较为坚固的凝块。
下面是蛋白质沉淀的原理：蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。
若无外加条件，不致互相凝集。
然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH 至等电点和加入脱水剂)蛋白质便容易凝集析出。
酪蛋白检测实验报告
一、实验目的1. 掌握酪蛋白的提取方法。
2. 学习利用等电点沉淀法检测酪蛋白的含量。
3. 了解蛋白质的沉淀、溶解等性质。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，会以沉淀形式从牛奶中析出。
本实验通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使酪蛋白沉淀，然后通过离心、洗涤等步骤提取酪蛋白，并利用沉淀重量法检测酪蛋白的含量。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：- 95%乙醇- 无水乙醚- 0.2mol/L pH 4.7醋酸-醋酸钠缓冲液- 0.2mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 精密pH试纸或酸度计- 离心机- 烧杯- 温度计- 研钵- 天平四、实验步骤1. 酪蛋白提取- 取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边加入稀醋酸溶液约2mL，观察白色沉淀析出。
- 继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心15min。
- 离心完毕后，弃去上清液，得到酪蛋白沉淀。
2. 酪蛋白洗涤- 将酪蛋白沉淀用少量去离子水洗涤2次，弃去上清液。
- 用95%乙醇洗涤沉淀2次，弃去上清液。
- 用无水乙醚洗涤沉淀2次，弃去上清液。
3. 酪蛋白干燥- 将洗涤后的酪蛋白沉淀置于研钵中，用研棒轻轻研磨，使酪蛋白沉淀充分干燥。
- 将干燥后的酪蛋白沉淀转移到称量瓶中，于105℃烘干2小时，取出，置于干燥器中冷却至室温，称量。
4. 酪蛋白含量测定- 取一定量的酪蛋白沉淀，加入0.1mol/L盐酸溶液，使酪蛋白溶解。
- 将溶液转移至容量瓶中，定容至刻度线，摇匀。
- 取一定量的溶液，加入0.2mol/L氢氧化钠溶液，使溶液pH值调至4.7，观察酪蛋白沉淀析出。
- 将沉淀转移至离心杯中，于3000r/min离心15min。
- 弃去上清液，称量沉淀重量，计算酪蛋白含量。
牛奶中酪蛋白含量的测定
在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负 电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相 互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点 时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为左右（不同结构的酪蛋 白等电点有所不同），本实验中将牛乳的 pH 调值时，酪蛋白就沉淀出来。
称取的酪蛋白样品质量为，稀释倍数为 500 倍。 =
=%
五、误差分析与讨论
1、本次制备实验中得到的蛋白质量较多，但纯度较低，分析原因如下： 1）得到的蛋白质略呈黄色，且有些发粘，说明可能脱脂不彻底，蛋白质产品中 含有脂质。 2）考马斯亮蓝 G520 染液中有沉淀，最后影响考马斯亮蓝-蛋白质复合物溶液的 吸光度。 3）配制标准溶液时操作上可能有误差，如往试管中加入溶液时挂在管壁，且最 终也没有与下方溶液混合均匀，导致标准溶液的浓度可能不准，致使标准曲线不 准，数据处理时也发现数据线性并不好，尤其是浓度较大时，虽然可能是超出考 马斯蓝线性范围，但不能排除操作失误的可能。 2、注意事项
1）试管提前一周清洗干净并晾干，否则制作标准曲线时无法保证各管浓度。并 且不干净的试管在加溶液时容易挂管壁，不利于控制标准蛋白液浓度。 2）在配制不同浓度标准蛋白液时，各组分的体积要准确移取，特别是量较少的 标准蛋白液，只要稍微洒出一点就会导致较大的相对误差 3）蛋白质粗品的洗涤一定要按照规范做，每一次离心洗涤时要将搅匀，在布氏 漏斗上洗涤时要先微接抽气管，待洗出液缓慢流出后，再接紧橡皮管抽干。
酪蛋白提取及定量测定
实验酪蛋白提取及定量测定摘要本实验通过调节pH至酪蛋白等电点的方法，从蒙牛牛乳中提取酪蛋白并计算得率，然后分别用双缩脲和考马斯亮蓝G250染色法测定提取出的物质中酪蛋白的含量，实验的结果将在下文陈述出来。
因为提取出的酪蛋白不太纯，所以导致后面的定量测试中有一定的误差，这是要注意的。
材料与方法蒙牛牛乳酪蛋白的提取试剂的配制1 0.2 mol/L 乙酸钠缓冲液（4.6）：准确称量1.15ml的乙酸，用氢氧化钠调至pH为4.6，加水定容至1000ml。
2 95%乙醇3 乙醚4 乙醇-乙醚混合液：取乙醇，乙醚各30ml按1：1的比例混合。
5 1% 氢氧化钠：取0.1g氢氧化钠溶于10ml去离子水中方法取新鲜蒙牛牛乳100ml，放入250ml烧杯中，加热至40℃.加入100ml加热至同样温度的醋酸缓冲液，边加边摇动，并用pH计检测，调整混合液的pH4.6（用1%氢氧化钠溶液或10%醋酸溶液进行调整），冷却至室温，静置5min，然后用细沙布或滤纸过滤，收集沉淀物。
将沉淀物用少量蒸馏水洗几次，过滤。
将洗净的沉淀物悬浮在约30ml 95% 乙醇溶液中，用布氏漏斗抽滤。
所得沉淀物用无水乙醇和乙醚等量混合液洗涤两次，抽干。
最后用50ml乙醚洗一次并抽干。
取出抽干的粉状物，摊开在表面皿上，使乙醚完全挥发，干燥后得到的是酪蛋白纯品。
准确称重并计算其产量。
酪蛋白的得率=测得含量/理论含量*100% （理论含量为35g/L）结果提取出的酪蛋白净重为32.2g，为白色粉末状，中夹杂黄色块状物体。
酪蛋白得率为92%。
酪蛋白的测定双缩脲法试剂配制（1）酪蛋白溶液：5mg/mL，用0.1mol/LNaOH溶液配制；（2）双缩脲试剂:称取1.5gCuSO4和6.og酒石酸钾钠，溶于500mL水中，在搅拌下加入10%NaOH溶液300mL，用水稀释至1000mL，用棕色瓶避光保存。
方法将各管混匀后，在室温（15~25℃）下放置30min ，在波长540nn 处比色，已1号管调零点测定各管吸光度，一吸光度为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制标准曲线。
酪蛋白制作实验报告
一、实验目的1. 了解酪蛋白的来源和性质。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 熟悉等电点沉淀法提取蛋白质的实验操作。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质，含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，其等电点为4.7。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，容易从溶液中沉淀出来。
通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使酪蛋白沉淀，然后进行离心、洗涤、干燥等步骤，可以得到纯酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液3. 器具：离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计四、实验步骤1. 酪蛋白粗提（1）取100mL新鲜牛奶，加热至40℃。
（2）在搅拌下，缓慢加入预热至40℃的0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液100mL。
（3）用精密pH试纸或酸度计调节pH值至4.7。
（4）将混合液冷却至室温，离心15分钟。
（5）弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白纯化（1）用水洗涤沉淀3次，离心10分钟，弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mL 95%乙醇，搅拌。
（3）将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
（4）用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
（5）最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
五、实验结果与分析通过上述实验步骤，成功从牛奶中提取了酪蛋白。
实验过程中，观察到以下现象：1. 当pH值调节至4.7时，酪蛋白开始沉淀。
2. 经过离心、洗涤、干燥等步骤，得到纯酪蛋白。
六、实验结论1. 本实验成功从牛奶中提取了酪蛋白，证明了等电点沉淀法提取蛋白质的可行性。
2. 通过实验，掌握了酪蛋白的制备原理和实验操作方法。
3. 酪蛋白是一种重要的蛋白质资源，具有广泛的应用前景。
七、实验注意事项1. 在实验过程中，注意保持实验环境的清洁，避免污染。
2. 调节pH值时，应缓慢加入酸碱溶液，避免剧烈反应。
3. 离心速度不宜过快，以免损坏离心机。
酪蛋白的实验报告
一、实验目的1. 学习从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的操作技巧。
3. 了解酪蛋白的性质和特征。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，含量约为3.5%。
它是一种含磷蛋白质，具有等电点为4.7的特点。
在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，因此可以通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使其沉淀出来。
沉淀物经过离心、洗涤、干燥等步骤，可以得到纯净的酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶、离心机、烧杯、温度计、pH计、抽滤装置、布氏漏斗、玻璃棒等。
2. 试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 酪蛋白的提取（1）取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌边加入2mL稀醋酸溶液，观察白色沉淀的形成。
（2）继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心15min。
（3）离心完毕后，弃去清液，得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白的纯化（1）用水洗涤沉淀3次，每次离心10min，弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌，悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
（3）用乙醇和乙醚混合液清洗沉淀2次。
（4）最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。
（5）沉淀风干，得到纯净的酪蛋白。
3. 酪蛋白的性质研究（1）观察酪蛋白的外观，记录其颜色、形状等特征。
（2）取少量酪蛋白加入蒸馏水中，观察其在水中的溶解情况。
（3）用pH计测定酪蛋白的等电点。
（4）对酪蛋白进行缩二脲反应、蛋白黄色反应和茚三酮反应，观察其颜色变化。
五、实验结果与分析1. 酪蛋白的提取实验中观察到白色沉淀的形成，表明牛奶中的酪蛋白已经沉淀出来。
通过离心、洗涤、干燥等步骤，得到了纯净的酪蛋白。
2. 酪蛋白的纯化经过洗涤、抽滤、干燥等步骤，得到了纯净的酪蛋白。
酪蛋白呈白色粉末状，无异味。
3. 酪蛋白的性质研究（1）酪蛋白在水中溶解性较差，部分溶解。
酪蛋白(Casein)的提取
酪蛋白（Casein）的提取一、实验目的1、掌握一种提取蛋白的方法。
2、掌握一种检测牛乳质量的方法。
二、实验原理酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80～82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。
它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。
它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。
三、仪器和试剂仪器温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。
试剂1. 95%乙醇、乙醚2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1(体积比)4. 市售牛乳四、实验步骤1.酪蛋白等电点沉淀将100mL 牛乳放到500mL 烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH 达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。
将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。
2.除脂类杂质将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30mL95%的乙醇中。
将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。
准确称重后，计算出每100mL 牛乳所制备出的酪蛋白数量(g%)，并与理论产量(3.5g%)相比较，求出实际获得百分率。
牛奶中酪蛋白的提取与分析
实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶小组成员：实验时间：'~[？一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析二：报告撰写者三、小组成员实验仪器温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）、、、的移液管、试管、试管架、四、实验材料牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典）五、实验试剂特仑苏400ml、金典200ml、巴比妥（*）、巴比妥钠（*）、氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR （*）、100ml冰醋酸AR（*）、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、L的乙酸100ml （*）、L的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*）#所需试剂配制方法：乙醇乙醚混合液的配制：10ml95%的乙醇10ml95%的乙醚乙醇钠缓冲液的配制：L的乙酸51mlL的乙酸钠49ml巴比妥钠缓冲液的配制：】巴比妥巴比妥钠染色液的配制：氨基黑10B50ml甲醇AR10ml冰醋酸AR漂洗液的配制：45ml95%乙醇AR#5ml冰醋酸AR蒸馏水透明液的配制：25ml的冰醋酸AR75ml的无水乙醇ARL氢氧化钠溶液的配制：16g的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制：…配制巴比妥钠缓冲液（,./L）,将上述二者混合后定容于1000ml+40ml蒸馏水，混匀既得染色液配制乙醇乙醚1:1的混合液配制的乙酸钠缓冲液（l）混匀得染色液混匀得透明液5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制：15mg 五水硫酸铜60mg 酒石酸钾钠标准酪蛋白溶液A 的配制（10mg/ml ）： 用L 氢氧化钠溶液配制10ml从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液1、2的配制（2-9mg/ml ）： 用L 氢氧化钠溶液配制10ml标准酪蛋白溶液B 的配制（1500μg/ml ）： ！用L 氢氧化钠溶液配制从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液3、4的配制（50-1500μg /ml ）： 用L 氢氧化钠溶液配制七、实验目的1. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的方法2. 了解蛋白质分离纯化的基本办法3. 学习电泳的基本原理及掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离酪蛋白的具体操作4. 掌握双缩脲法和紫外吸收法测定蛋白质含量的原理及操作方法并比较两种方法5. 熟悉分光光度计的原理和操作6. 比较特仑苏与金典中的酪蛋白含量 、八、实验原理酪蛋白在其等电点时静电荷为零，同种电荷的相互排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调节到，酪蛋白就可以从牛乳中分离出来。
现代生化技术实验讲义(生物08)
实验一牛乳中酪蛋白的提取及其含量测定一、实验目的1、掌握等电点法提取蛋白的基本原理及基本操作；2、掌握双缩脲法测定蛋白含量的基本原理及基本操作。
二、实验原理酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。
它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。
它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。
在乳制品加工或成品中，酪蛋白含量是一个常需测定的指标。
常用于测定酪蛋白的方法是先将酪蛋白在等电点沉淀，再用凯氏定氮法测定。
本实验采用双缩脲法测定酪蛋白。
其原理为：蛋白质含肽键，肽键在碱性溶液中可与铜离子形成紫红色化合物，在540nm波长处有最大吸收，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸组成无关。
三、材料与试剂市售牛奶10mg/ml酪蛋白标准溶液（用0.1MNaOH配制）0.1M NaOH溶液、0.2M pH4.6的HAc－NaAc缓冲液双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O）1.5g，加水100ml，加热助溶；另称取酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2O）6.0g、碘化钾5g溶于500ml水中。
两液混匀后，在搅拌下加入10%NaOH 300ml，后用水稀释至1000ml，贮存于塑料瓶中。
此液可长期保存，若瓶底出现黑色沉淀则需重新配制。
四、操作步骤1、牛乳中酪蛋白的等电点沉淀用量筒量取25ml牛乳置50 ml 烧杯中，水浴加热至40℃，在搅拌下慢慢加入到已预热至40℃的等体积的0.2 M pH 4.6的HAc－NaAc缓冲液中，混匀，冷却静置30min沉淀酪蛋白后，3000r/min离心15 min，弃上清液，收集沉淀。
牛奶中酪蛋白的分离与鉴定学习资料
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六 结果处理
❖ 方法一 脂肪(％)＝(m6-m5) / m4 ×100
❖ 方法二 脂肪(％)＝(m3-m7) / m4 ×100
m6——接受瓶和脂肪的质量，g； m5——接受瓶的质量，g； m4——样品的质量(如为测定水分
后的 样品质量计)，g。
m3——未抽提滤纸包的质量，g； m7——抽提后滤纸包的质量，g； m4——样品的质量(如为测定水分
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五 注意事项
（1）如果测定要求很严格，可以在试剂加入后的520 min内测定光吸收，因为再这段时间内颜色最稳 定。
（2）测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比 色杯壁上，但此复合物的吸附量可以忽略。测定完 后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。
（3）一些阳离子如K+、Na+、Mg2+、乙醇等物质对 测定无影响，而大量的去污剂如SDS等会严重干扰 测定。
❖ 酪蛋白在其等电点时由于静电和为零，同种电荷间的 排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳 调到pH4.6，酪蛋白就可从牛乳中分离出来。酪蛋白 不溶于乙醇，这个性质被用来从酪蛋白粗制剂中将脂 类杂志除去。
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三 仪器、原料和试剂
❖ 仪器：温度计、布氏漏斗、pH试纸、抽滤瓶、水浴锅、 烧杯、 量筒、表面皿、天平、离心机等
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3 称重
❖ 取下接受瓶，回收乙醚，待接受瓶内乙醚剩 1 ～2 ml 时，在水浴上蒸干，再于100～ 105℃干燥 2小时，取出放干燥器内冷却30分 钟，称重，并重复操作至恒重（m6）。
❖ 取出滤纸包，于户外晾至无乙醚味，置入恒 温箱内，烘干，然后移入干燥缸内冷却后称 重，重复操作至恒重（m7）。
牛奶中酪蛋白的提取与分析Word版
牛奶中酪蛋白的提取与分析Word版酪蛋白是牛乳中含量最多的蛋白质，为牛乳中蛋白质总量的80%以上。
酪蛋白可分为α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白三种，其中α-酪蛋白和β-酪蛋白含量最高，约占酪蛋白总量的90%以上。
提取酪蛋白的方法有多种，常用的包括离心法、薄膜浓缩法和离子交换法等。
以下介绍一种离子交换法提取酪蛋白的方法。
材料和仪器设备：牛乳、0.02mol/L Na2HPO4（pH 8.2）、0.02mol/L NaH2PO4（pH 8.2）、0.5mol/L NaCl、硫酸钠、洗涤液、pH计、离心机、离子交换树脂（如DEAE-Sepharose CL-6B）、紫外分光光度计、SDS-PAGE凝胶电泳装置等。
步骤：1.将鲜牛乳离心去除脂肪，得到鲜乳液。
2.将鲜乳液加入同体积的0.5mol/L NaCl中，用搅拌器搅拌20min，离心分离得到上清液。
3.将上清液通过一根DEAE-Sepharose CL-6B离子交换树脂柱，收集流出液。
树脂柱洗涤至底座pH值稳定，得到初始洗涤液。
4.逐渐将洗涤液pH值升高至8.2，得到目标蛋白（酪蛋白）。
该步骤中DEAE-Sepharose CL-6B离子交换树脂中的团聚物质还可以部分与酪蛋白亲和，因此流出液中含有除酪蛋白外的其他物质，节约了纯化酪蛋白的成本。
5.将流出液进行浓缩处理。
常用的浓缩方法有薄膜浓缩法和淀粉微球浓缩法等。
淀粉微球浓缩法简便易行，且收率较高。
将淀粉往加入称量瓶中，加入适量的紫外吸收物质作为指示剂，加入约5倍的蒸馏水，搅拌至淀粉微球均匀分散，待微球沉淀后取上清液即可。
6.用紫外分光光度计对提取的酪蛋白进行检测，并进行酪蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳分析。
其中，SDS-PAGE凝胶电泳分析操作步骤较为繁琐，主要包括制备凝胶、电泳、染色、显色等过程。
制备凝胶时，常用的凝胶包括10%、12%和15%三种，根据待测蛋白大小进行选择。
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牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定
一、实验目的
1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法
3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用
4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度
二、实验原理
1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂
1、制备酪蛋白：
烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅
牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚
2、紫外光吸收法：
紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿
0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液
3、考马斯亮蓝法：
紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿
牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl
四、实验步骤
制备酪蛋白
1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃
2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液
3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液
4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品
5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清
6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤
7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干
8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品
9、准确称量，计算含量和得率
紫外光吸收法
1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
2．若A280nm/A260nm>1.5，用公式：蛋白质含量（mg/ml）=A280nm/6.3*10 若A280nm/A260nm<1.5，用公式：蛋白质含量（mg/ml）=1.45A280nm—0.74A260nm
考马斯亮蓝法
取9支干净试管，按表进行编号并加入试剂。
混匀，室温静置3min，以第1管为空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（μg/ml）作为横坐标作图得标准曲线。
五、实验数据
酪蛋白质量：0.5421g
酪蛋白含量：2.71g/100ml牛乳
紫外光吸收法：A280nm 0.769A A260nm 0.959A
A280nm/A260nm<1.5，蛋白质含量（mg/ml）=1.45A280nm—0.74A260nm =0.405 mg/ml
蛋白质浓度为。