实验二十三 土壤硝化作用强度的测定

实验二十三

硝化作用强度的测定

硝化作用强度的测定

◆目的要求

◆实验材料

◆试验程序

◆土壤硝化作用强度

◆思考题

目的要求

掌握硝化作用强度的测定方法，从而使学生进一步了解土壤中氮素如何有效利用及对环境污染的影响。

◆样品：新鲜土壤。

◆培养基：硝化作用第二阶段用培养基，

药品用分析纯。配方如下：

NaNO2 1g

MgSO4·7H2O 0.03g

MnSO4·4H2O 0.01g K2HPO40.75g NaCO3(无水）1g NaH2PO40.25g CaCO3 3.0g 蒸馏水1000mL

◆格利斯试剂：

1. 溶液Ⅰ 称取对氨基苯磺酸0.5g,溶于150ml30%醋酸溶液中，保存于棕色瓶中。

2.溶液Ⅱ 称取α－萘胺0.5g,加入50mL

蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30％的醋酸溶液150mL,保存于棕色瓶中。

◆亚硝酸银标准液称取1.5000g分析纯亚硝酸钠于烧杯中，加蒸馏水溶解后洗入1000mL容量瓶中，再加蒸馏水至刻度，摇匀。用时以此液稀释成标准液（每mL含0.01mg的NO2-)

其它：

容量瓶（50mL、100mL、1000mL）、移液管（1mL、5mL）、三角瓶、漏斗、滤纸、玻棒、洗瓶等及分光光度计。

实验程序

◆培养基的配制及1/10土壤悬液的制备

◆接种培养

◆用比色法测定虑液中的亚硝酸银含量

实验程序1 (培养基的配制及1/10土壤悬液的制备)

◆在150mL三角瓶中装30mL硝酸细

菌培养基(要准确称量),灭菌,每组2

只.

◆在150mL三角瓶中装45mL蒸馏水,

并放入少许玻璃珠灭菌,每组1只.

◆1/10土壤悬液的制备称5g土壤

放入装有45mL带玻璃珠的三角瓶

中,振摇5min。

（接种培养）

◆吸取1/10土壤悬液1mL接种到硝酸细菌培养基中，每组接2只三角瓶过滤立即用以测定原始培养液中亚硝酸根含量，另一支三角瓶置于280C 温室中培养15d.

◆培养结束，取出三角瓶，培养液进行过滤。

(用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量）

◆取滤液1mL于50mL容量瓶中，稀释至约40mL，加入1mL格利斯试剂Ⅰ，放置

10min。再加入1mL格利斯试剂Ⅱ和

1mL2%醋酸钠溶液，显色后稀释至刻度，放置10min后，用分光光度计（波长

520nm)比色测定。

◆亚硝酸银标准曲线的绘制吸取压硝酸银标准液0、1、2、3、4、5mL，分别放

入50mL容量瓶中，定容。与待测样品同样条件进行比色，以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准曲线。

实验程序3 (用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量）

结果计算

NO2-(mg/30mL)=X(m g/mL) ×比色体积×稀

释倍数×10－3

式中X(m g/mL）——由标准曲线查知

10－3——换算为mg

土壤硝化作用强度 计算公式：

硝化作用强度＝原始培养基中NO 2-量－培养基中NO 2-量原始培养基中NO 2-量

×100％

思考题

◆什么叫硝化作用？硝化作用由哪两类细菌参与？

◆根据硝酸细菌培养基的组成成分，硝酸细菌属何种营养类型？

◆本实验的原理是什么？

◆实验中要注意什么？

实验二十三结束