实验二十三 土壤硝化作用强度的测定
矿化、硝化与反硝化实验方法
土壤矿化、硝化与反硝化1.矿化培养矿化培养试验采用风干土淹水密闭培养法，预培2 周来消除干土效应。
称取过20 目筛风干土5g，每层土样称取3份，分别置于10×180 mm 的试管中。
将试管平放于桌面上小心滚动，使管中土面倾斜，用移液管缓缓加入5 ml去离子水。
加水后检查各试管中的土壤是否完全润湿，并尽量驱出土中的空气，然后用橡皮塞密封管口，置于25o C 的培养箱中恒温培养，约每周换气一次，并驱除土中气体（在培养后期换气的时间间隔可长一些）；分别于淹水后第0 周、1，3 周、5 周、7 周、10 周、14周时进行取样测定土壤中的铵态氮的含量，每层土样测定3 管，作为3 个重复。
测定时用20ml 2.5 mol/L KCl 将管中土壤全部洗入100ml 三角瓶中，振荡1 小时后静置半小时过滤，将滤液储存在塑料瓶中备测。
(1)每个培养管吸取培养溶液：5ml去离子水(2) 培养周期：预培2 周，分别于淹水后第0 周、2 周、4 周、6 周、8 周、10 周和12 周时进行取样测定土壤中的铵态氮的含量，每层土样测定3 管，作为3 个重复。
(3) 培养结束处理：测定时用20ml 2.5 mol/L KCl 将管中土壤全部洗入100ml三角瓶中，振荡1 小时后静置半小时过滤，将滤液储存在塑料瓶中备测。
2.土壤硝化试验方法如下：称取5g 过20 目筛的每层供试土样各2份，分别放入10×180 mm 的试管中，其中0天培养则不加铵，另外第7天、14 天、21 天和28 天分别取样的分别加入1.125 mgN (NH4)2SO4溶液，然后加水至田间持水量的80％，瓶口用塑料薄膜封口以减少水分损失，称重后置于25o C 的培养箱中恒温培养。
预培3 天后，对不加铵的分别加22.7ml 2.2mol/L KCL 溶液，振荡1 小时后，过滤到干净的塑料瓶中，测定铵态氮和硝态氮的含量作为初始量；而对加铵培养瓶称重，通气30 分钟并补充水分至原重，然后继续恒温培养，并开始计算时间，每隔3 天对加铵培养瓶通气一次并称重补充水分至原重，在正式培养后的第7天、14 天、21 天和28 天分别取样，每层土样各取3 瓶作为3 个重复，分别加25ml 2 mol/L KCL溶液，振荡1 小时后，过滤到干净的塑料瓶中，测定铵态氮和硝态氮的含量。
实验二十三 土壤硝化作用强度的测定
实验二十三硝化作用强度的测定硝化作用强度的测定◆目的要求◆实验材料◆试验程序◆土壤硝化作用强度◆思考题目的要求掌握硝化作用强度的测定方法，从而使学生进一步了解土壤中氮素如何有效利用及对环境污染的影响。
◆样品：新鲜土壤。
◆培养基：硝化作用第二阶段用培养基，药品用分析纯。
配方如下：NaNO2 1gMgSO4·7H2O 0.03gMnSO4·4H2O 0.01g K2HPO40.75g NaCO3(无水）1g NaH2PO40.25g CaCO3 3.0g 蒸馏水1000mL◆格利斯试剂：1. 溶液Ⅰ 称取对氨基苯磺酸0.5g,溶于150ml30%醋酸溶液中，保存于棕色瓶中。
2.溶液Ⅱ 称取α－萘胺0.5g,加入50mL蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30％的醋酸溶液150mL,保存于棕色瓶中。
◆亚硝酸银标准液称取1.5000g分析纯亚硝酸钠于烧杯中，加蒸馏水溶解后洗入1000mL容量瓶中，再加蒸馏水至刻度，摇匀。
用时以此液稀释成标准液（每mL含0.01mg的NO2-)其它：容量瓶（50mL、100mL、1000mL）、移液管（1mL、5mL）、三角瓶、漏斗、滤纸、玻棒、洗瓶等及分光光度计。
实验程序◆培养基的配制及1/10土壤悬液的制备◆接种培养◆用比色法测定虑液中的亚硝酸银含量实验程序1 (培养基的配制及1/10土壤悬液的制备)◆在150mL三角瓶中装30mL硝酸细菌培养基(要准确称量),灭菌,每组2只.◆在150mL三角瓶中装45mL蒸馏水,并放入少许玻璃珠灭菌,每组1只.◆1/10土壤悬液的制备称5g土壤放入装有45mL带玻璃珠的三角瓶中,振摇5min。
（接种培养）◆吸取1/10土壤悬液1mL接种到硝酸细菌培养基中，每组接2只三角瓶过滤立即用以测定原始培养液中亚硝酸根含量，另一支三角瓶置于280C 温室中培养15d.◆培养结束，取出三角瓶，培养液进行过滤。
(用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量）◆取滤液1mL于50mL容量瓶中，稀释至约40mL，加入1mL格利斯试剂Ⅰ，放置10min。
土壤硝化作用强度测定
土壤硝化作用强度测定
一、原理
将定量的土壤接种到硝化细菌培养基中，由于土壤中硝化细菌的作用，是亚硝酸氧化成硝酸，用培养基中亚硝酸的消失量占原始培养基中亚硝酸含量的百分比作为硝化作用强度的指标。
亚硝酸能与格利斯试剂反应产生一种紫红色的化合物，该显色反应不易受硝态氮的干扰。
二、药品器材
1.硝化细菌培养基：NaNO2 1g MgSO4·7H2O 0.03g MnSO4·4H2O 0.01g K2HPO40.75g
Na2CO3(无水)1g NaH2PO40.25g超纯水1000ML
2.格利斯试剂：溶液一，称取磺胺酸0.5g，溶于150ml醋酸溶液（30%）中，保存于棕色
瓶中。
溶液二，称取α-萘胺0.5g，加入50ml蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30%的醋酸溶液150ml，保存于棕色瓶中。
3.亚硝酸根标准溶液：称取 1.500g分析纯亚硝酸那于烧杯中，加蒸馏水溶解后定容至
1000ml，此溶液亚硝酸根离子浓度为1mg/ml。
用时以此液配成亚硝酸根标准溶液（亚硝酸根离子浓度为0.01mg/ml）。
三、步骤
1.在150ml三角瓶中装30ml硝化细菌培养基，灭菌。
2.冷却后的培养基中接种1/10土壤悬液1ml，于28℃恒温培养15d，取出三角瓶过滤。
3.用比色法测定滤液中的亚硝酸含量。
四、硝化作用强度
硝化作用强度=（原始培养基中亚硝酸根含量-培养后培养基中亚硝酸根含量）/原始培养基中亚硝酸根含量*100%。
稳定性肥料中硝化抑制剂作用效果的检测方法
稳定性肥料中硝化抑制剂作用效果的检测方法发布时间：2021-04-26T10:40:08.337Z 来源：《基层建设》2020年第33期作者：李保荣[导读] 摘要：通过特定的过程，在肥料造粒过程中，添加尿素酶抑制剂和（或）硝化抑制剂以形成稳定的肥料，延迟施用于土壤的尿素的水解，进一步抑制铵态氮向硝酸态氮的转化，和氮可以减少。
哈密市质量与计量检测所新疆哈密 839000摘要：通过特定的过程，在肥料造粒过程中，添加尿素酶抑制剂和（或）硝化抑制剂以形成稳定的肥料，延迟施用于土壤的尿素的水解，进一步抑制铵态氮向硝酸态氮的转化，和氮可以减少。
一种含氮肥料，可延长挥发性肥料的保质期。
这种肥料可以减缓尿素的水解，抑制NO-3的形成，使土壤中的氮素保持更长的时间，并提高尿素的有效性。
它的关键作用是稳定化肥抑制剂。
硝化抑制剂通过抑制土壤中硝化细菌和硝化细菌的活性来减缓NH+4-N向NO-3-N的转化。
因此，检查硝化抑制剂在稳定的复合肥料中的抑制作用非常重要。
本文就此展开了探究。
关键词：稳定性肥料；硝化抑制剂；农业生产引言化肥是农业可持续发展的物质保证，是农业生产的基础。
氮素是作物在生长发育过程中需求量最多的矿质元素，是影响作物产量的首要因素。
目前，我国氮肥利用率不高，其中有很大一部分氮素会从农田系统进入到外部环境中，这不仅造成了肥料浪费，还带来了农田氮污染[1]。
有研究表明，在农业生产上，除合理施用氮肥、深施氮肥和分次施氮等方法能提高氮肥的利用率外，添加肥料增效剂[如通过施用硝化抑制剂（NP），可调控氮素的转化，减缓硝化过程，也是实现氮肥高效管理与利用的有效手段。
而硝化抑制剂的施用效果，除受自身性状和土壤微生物的影响外，还受土壤质地、有机质含量、水分、温度和土壤pH等因素的限制。
1材料与方法1．1材料供试土壤中国科学院沈阳生态基地的棕壤，吉林省农业科学研究所的黑土，吉林省白城市的浅黑土，江西南昌的红土。
除去杂质后，风干并通过2毫米筛子粉碎以使用。
(新)土壤硝化作用强度的测定
实验程序3
(用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量）
结果计算
NO2-(mg/30mL)=X(mg/mL) ×比色体积×稀 释倍数 ×10－3
式中X(mg/mL）——由标准曲线查知 10－3——换算为mg
土壤硝化作用强度
计算公式：
原始培养基中NO2- 量－培养基中NO2- 量 硝化作用强度＝ ×100％ 原始培养基中NO2- 量
思考题
什么叫硝化作用？硝化作用由哪
两类细菌参与？ 根据硝酸细菌培养基的组成成分， 硝酸细菌属何种营养类型？ 本实验的原理是什么？ 实验中要注意什么？
实验二十三
结
束
菌培养基中，每组接2只三角瓶过 滤立即用以测定原始培养液中亚硝 酸根含量，另一支三角瓶置于280C 温室中培养15d. 培养结束，取出三角瓶，培养液进 行过滤。
实验程序3
(用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量） 取滤液1mL于50mL容量瓶中，稀释至约 40mL，加入1mL格利斯试剂Ⅰ，放置 10min。再加入1mL格利斯试剂Ⅱ和 1mL2%醋酸钠溶液，显色后稀释至刻度， 放置10min后，用分光光度计（波长 520nm)比色测定。 亚硝酸银标准曲线的绘制 吸取压硝酸银 标准液0、1、2、3、4、5mL，分别放 入50mL容量瓶中，定容。与待测样品同 样条件进行比色，以浓度为横坐标，以光 密度为纵坐标绘制标准曲线。
实验材料2
格利斯试剂： 1. 溶液Ⅰ 称取对氨基苯磺酸0.5g,溶于 150ml30%醋酸溶液中，保存于棕色瓶中。 2.溶液Ⅱ 称取α－萘胺0.5g,加入50mL 蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30％的醋酸 溶液150mL,保存于棕色瓶中。 亚硝酸银标准液 称取1.5000g分析纯亚 硝酸钠于烧杯中，加蒸馏水溶解后洗入 1000mL容量瓶中 ，再加蒸馏水至刻度， 摇匀。用时以此液稀释成标准液（每mL含 0.01mg的NO2-)
硝化作用强度的测定
6.亚硝酸根标准曲线的绘制，吸取亚硝酸根标准液0、1、2、3、4、5ml分别放入50ml容量瓶中，定容，与待测样品同样条件进行比色，以浓度为横坐标，以OD值为纵坐标绘制标准曲线。
三、实验步骤
培养基的配置及1/10土壤悬液的制备-----接种培养-----用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量。
1.在150ml三角瓶中装30ml硝酸细菌培养基，灭菌每组2瓶。
2.在150ml三角瓶中装45ml蒸馏水，并放入少许玻璃珠，灭菌每组1瓶。
3.称5g土于45ml三角瓶中，震荡5分钟。
4.取1ml于硝酸细菌培养基中，每组接2瓶，其中一瓶立即过滤用以测定原始培养基中亚硝酸根含量，另一瓶置于28温箱培养15天，培养结束，取出三角瓶，培养液进行过滤。
硝化作用强度的测定
一、目的要求
掌握硝化强度的测定方法，了解土壤中氮素如何有效利பைடு நூலகம்及对环境污染的影响。
二、实验材料
样品：新鲜土样
培养基：硝化作用第二阶段培养基
亚硝酸钠1克；硫酸镁0.03克；硫酸锰0.01克
磷酸氢二钾0.75克；碳酸钙3.0克；水1000毫升
格里斯试剂：
1.溶液Ⅰ：称取对氨基苯磺酸0.5g(0.05g)溶于150ml(15ml) 30%醋酸溶液中，保存于棕色瓶中。
四、结果计算
NO2–(mg/30ml)=X(ug/ml)*比色体积*稀释倍数*10-3
X（由标准曲线查知）10-3（换算为ml）
土壤消化强度=原始培养基中NO2–量—培养基中NO2–量
运用气压过程分离法测定旱地苹果园土壤硝化—反硝化作用
运 用 气 压 过 程 分 离 法 测 定 旱 地 苹 果 园 土 壤 硝 化 一 反 硝 化 作 用
葛顺峰 ，姜远茂 ，彭福 田，房祥 吉，陈 汝
（． 山东农业大学作物生物学国家重点实验室，山东 泰安 １ ２ １１ ；２ ７ ０８ ．山东农业 大学园艺科学与工程学院 ，山东 泰安 ２１１） ７０ ８
（ ． Ｓａ ｅ ａｏａｏｙｏ ｒ ｉ ｏ ｙ ｈ ｎ ｏ ｇ Ａ ｒ ｕｔｒｌ ｎ ｅ ｉ ，Ｔ ｉ ７ ０ ８ Ｓ ａ ｄ ｎ ， ｈｎ ； １ ｔｔ Ｋ ｙ Ｌ ｂ ｒｔ ｆ ｏ Ｂ ｏ ｇ ，Ｓ ａ ｄ ｎ ｇ ｃ ｌ ａ Ｕ ｉ ｒ ｔ ａ￣ ２ １ １ ， ｈ ｎ ｏ ｇ Ｃ ｉａ ｅ ｒ Ｃ ｐ ｌ ｉ ｕ ｖ ｓｙ ｍ
料 和 根 际效 应 也 避 免 土柱 发 生 紧 实 作用 ；土 柱 取样 量 以 每 个 处 理 ３个 环 刀 ，重 复 ３次 较 好 ；苹 果 园 土壤 总 硝
化速率和反硝化速率年周期变化动态呈先升高后降低的趋势 。 关键词 ：气压过程分离法 ；硝化一反硝化作用 ；环 刀土样 ；旱地苹果 园 中图分类号 ：Ｓ６ １ ６ ．１ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１０ ２２ （００ ３— ３ ０— ４ ００— ３ ４ ２ １ ）０ ０ ３ ０
２ Ｃｌ ｇ ｆ ｏ ｉ ｌ ｒ ｃｅｃ ｎ ｎｉ ｅｉ ， ｈｎ ｏｇＡ ｒｕｔｒｌ ｎｖｒｔ， ａａ ７０ ８， ｈｎ ｏｇ ｈｎ ） ． ｏｌ ｅｏ ｒｃ ｔ ｅＳｉ ｅａｄｅｇｎ ｒ ｇ Ｓ ａｄｎ ｇｉ ｌ ａ Ｕ ｉ ｓ ｙ Ｔ ｉｎ２ １１ Ｓ ａｄｎ ，Ｃ ｉａ ｅ Ｈ ｔｕｕ ｎ ｅ ｎ ｃ ｕ ｅｉ
Ａｂｓｒ ｃ ： Ｎｉｒｆ ａｉｎ ａ ｄ ｄ ｎ ｔｉ ｃ ｔ ｎ ｗｅ ｅ ｄ ｔ ｒ ｎ ｄ ｕ ｉｇ ｔ ｅ Ｂａ ｏ ｔｉ ｏ ｅ ｓＳ ｐ ｒｔｏ ｅ ｈ ｉ ｕ ｉ ｔａ ｔ ｔ ｉ ｔｏ ｎ ｅ ｉ ｆ ａｉ ｒ ｅｅ ｍｉ ｅ ｓｎ ｈ ｒ ｍｅ ｒｃＰｒｃ ｓ ｅ ａ ａｉｎ ｔｃ ｎ ｑ ｅ ｎ ｉ ｃ ｒｉ ｏ ｕ ｌｎ ｐ ｌ ｒ ｈ ｒ ｐ ａ ｄ ａ ｐｅ ｏ ｃ ａ ｄ，ａ ｄ ｉ ｔｏ ｕ ｅ ｈ ａ ｉ ｒｎ ｉ ｌ ｓ ａ ｄ ｄ ｔｒ ｉａｉ ｎ ｍｅ ｈ ｄ ｏ ｈ ｅ ｍｅｈ ｄ，ａ ｄ ｎ ｎ ｒ ｄ ｃ ｓ ｔ ｅ ｂ ｓｃ ｐ ｃｐ ｅ ｎ ｅｅ ｎ ｔ ｔ ｏ ｆ ｔｅ ｎ ｗ ｔ ｏ ｉ ｍ ｏ ｎ ｄ ｓ ｕ ｓ ｓ ｓ ｍｅ ａ ｐ ｃｓ ｉ ｐ ｌ ａｉｎ ｏ ｓ ｍｅｈ ｄ ｎ ｕｐａ ｄ ａ ｐ ｅ ｏ ｃ ａ ｄ． ｉｃ ｓ ｅ ｏ ｓ ｅ ｔ ｎ ａ ｐ ｉ ｔｏ ｆｔ ｔｏ ｏ ｌ ｎ ｐ ｌ ｒｈ ｒ ｃ ｈｉ Ｔｈ ｅ ｕｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｅｒｓ ｌ ｓｏ ｄｔａ ： Ｔ ｅ ｓ ｈ
土壤硝态氮铵态氮的测定(精)
（二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4-酚二磺酸6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。
（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。
4）操作步骤（1）浸提：称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4•2H2O 0.5g（注2）[凝聚剂的作用，使滤液不混浊而澄清]和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。
包气带土层的反硝化强度测定方法研究
264
地 球
与
环
境
2011 年
构、 土层厚度等与反硝化作用量的变化关系。 ( 2) 较 难区分采集气体中的 N O 量 , 哪些产自硝化作用 ,
2
对不同深度土层微生物固持无机氮量的测定。将这 些补充测试量加入到反硝化作用过程的氮均衡计算 中即可。
哪些产自反硝化作用? 将使依据 N2 O 量变化进行 的反硝化强度测定, 产生较大偏差。( 3) 也较难区分 不同厚度土层和最大稳定埋深水 分运移零通量 面 上、 下土层以及地下含水层间的反硝化作用量差别。 不能真实评估地下水位之上土层的相关防护能力。 ( 4) 施入的 N 肥料与土壤原有的氮素间存在生物 交换作用及土壤气体的逸出不通畅等, 将使反硝化 强度值的测定偏低。 ( 5) 反硝化过程的分馏作用, 使 N2O、 N 2 气体 偏向贫 N, 而 底物硝 态氮 偏向富 集
施用氮肥是农业增产的重要手段, 广施氮肥易 引起包气带土层和地下水中的氮素污染。土壤反硝 化作用是农田氮素损失、 消散的重要途径, 也是包气 带土层中的氮污染净化和地下水污染防护的根本力 量所在。田间土层的反硝化强度测定, 即是利用一 定的分析技术和测试方法对田间土层的转化、 消散 氮素能力进行实测认知的一项活动。田间土层反硝 化强度的测定将在认识掌握农田氮素损失、 土壤氮 的污染治理、 地下水的污染防护、 农田施肥与种植结 构调整、 包气带土层的氮污染容量评价等方面 , 发挥 重要而无可替代的作用。 对于田间包气带土层防护地下水污染的反硝化 强度测定 , 目前还没 有较好的方法 满足应用需求。 现行的相关测定方法大多适用性狭窄, 它们在面对 这一领域的应用时, 还存在许多问题与不足 [ 1] 。当 下亟需有适宜的测试方法来满足应用。为此 , 本文 重点针对田间包气带土层防护地下水污染的反硝化 强度测定进行了探讨研究。
土壤中硝氮、氨氮测定方法
（七）沉积物磷形态测定方法-SMT方法概述：SMT (The Standards,Measurements and Testing Programme) 是欧洲标准测试委员会框架下发展的淡水沉积物磷形态分离方法，是一种标准测试程序。
对于在湖泊修复中水质的监测和水资源领域的管理，尤其是在至关重要的实验室分析过程的质量保证和数据可比性中是一种很有价值的工具。
研究表明，对沉积物中磷形态与其沉积物的理化性质(有机质、主要氧化物组成)之间的关系可用来推断沉积物中磷的特性。
前人利用SMT方法发现消落带土壤中活性磷组分与河流沉积物中活性磷组分与相比较高，在适宜的环境条件下会成为水体的二次污染源。
目前，已应用SMT法分析沉积物中磷分布特征、各形态磷之间的关系以及与沉积物的某些理化性质之间的相关关系等。
1、方法原理利用土壤、沉积物中各种形态的无机磷酸盐具有不同浸提能力的化学浸提浸提剂，将无机磷酸盐加以逐级分离。
图1淡水沉积物磷形态分离SMT法摘自：金相灿,庞燕,王圣瑞,周小宁. 长江中下游浅水湖沉积物磷形态及其分布特征研究[J].农业环境科学学报2008,27(1):279-285.2、需要的设备与实验条件紫外分光光度计、高压灭菌锅3、所需试剂及操作步骤（一）所需要的试剂（1）5N H2SO4：70mL浓硫酸-500mL水中，置于常温下保存；（2）酒石酸锑钾溶液：准确称取1.3715g酒石酸锑钾于500mL容量瓶中，溶解定容，充分摇匀后将该溶液贮存在棕色或其他试剂瓶（玻璃瓶）中，将其置于4℃下保存。
（3）钼酸铵溶液：准确称取40g钼酸铵于1000mL容量瓶中，加适量水待其完全溶解后加水稀释至刻度线，充分摇匀后将该溶液贮存在棕色或其他试剂瓶（玻璃瓶）中，将其置于冰箱中于4℃下保存。
（4）抗坏血酸溶液：准确称取17.6g抗坏血酸1000mL容量瓶中，加适量水待其完全溶解后加水稀释至刻度线，充分摇匀后将该溶液贮存在棕色或其他试剂瓶（玻璃瓶）中，将其置于冰箱中于4℃下保存。
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法
土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法六、氮含量（硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵态氮等）的测定：（2g）样品提取液的提取: 称取新鲜植物组织2g，加入15ml无离子水研磨成匀浆，置于45℃振荡机中摇动浸提（或超声波）lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。
备注（lg的经验）：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。
1硝态氮的测定：标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。
5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。
2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，加入重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。
操作方法标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次加入标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，则成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶加入无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别加入5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。
冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。
0.1ml滤液＋0.4ml 5％水杨酸一硫酸溶液，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液9.5ml，混匀。
土壤中细菌、真菌呼吸作用强度的测定
土壤中细菌、真菌呼吸作用强度的测定参考文献：胡开辉主编微生物学试验中国林业出版社//2004年8月。
1.原理：在一定容器中用一定浓度的碱液吸收因土壤呼吸作用所释放的二氧化碳，然后用标准酸回滴甚于的碱，求出用于吸收二氧化碳消耗的碱量。
由此计算出二氧化碳的释放量。
根据抗生素抑制某些类群微生物生长的特点，使用抗生素处理土壤能够把土壤呼吸中属于细菌和属于真菌的作用部分区分开来，分别进行测定。
2.器材：2.1待检土样：鲜土2.2器材：0.1mol/L NaOH溶液，0.1mol/LHCl溶液，10mol/L酚酞乙醇溶液，链霉素硫酸盐，放线菌酮，500mL广口瓶、纱布、线绳、酸碱滴定仪、电子称。
3操作步骤3.1样品处理：取500mL广口瓶4个，每瓶盛20ml0.1 mol/L NaOH溶液.然后称取20g鲜土3份（内各加0.1g葡萄糖）。
其中1份加链霉素硫酸盐2万单位，另1份加放线菌酮4万单位，混匀。
3份土样均用双层纱布包好，悬于500ml广口瓶中，塞紧瓶塞，做好标记。
不加土壤样品的广口瓶作为空白对照。
然后置广口瓶于28℃温度下培养24h。
3.2酸滴定：小心取出广口瓶中土壤样品，于每瓶碱液中滴数滴酚酞指示剂，观察瓶中NaOH 溶液色变化并纪录，。
然后用0.1mol/LHCl溶液滴定NaOH溶液，至酚酞指示剂颜色消失，并纪录所用HCl数量。
3.3土壤含水量测定：水分%=水分/干土重×100干土%（水分系数）=1/1-水分%3.4计算：按滴定空白对照与个处理所消耗的盐酸数量之差，以及各处理中有等量的NaOH用于吸收土壤呼吸作用所释放的二氧化碳。
按每消耗1ml0.1mol/LnaOH相当于2.2mg二氧化碳量，计算出各处理土壤呼吸作用的二氧化碳释放量。
计算公式：总呼吸强度：（CO 2mg/g干土）=B-A/20×干土%细菌呼吸强度：（CO 2mg/g干土）=B-C/20×干土%真菌呼吸强度：（CO 2mg/g干土）=B-D/20×干土%试验报告：土壤中细菌、真菌强度的测定结果。
《土壤质量硝化潜势和硝化抑制的测定氨氧化快速检测》
《土壤质量硝化潜势和硝化抑制的测定氨氧化快速检测》Soil quality – Determination of potential nitrification and inhibition of nitrification – Rapid test byammonium oxidation(ISO 15685：2012)国家标准（征求意见稿）编制说明国家标准《土壤质量-硝化潜势和硝化抑制的测定-氨氧化快速检测》标准起草组二〇一九年一月项目名称：土壤质量-硝化潜势和硝化抑制的测定-氨氧化快速检测计划编号：20184361-T-326项目负责单位：江苏省农业科学院项目负责人：杨林章技术委员会：全国土壤质量标准化技术委员会（SAC/TC 404）目录1、编制的目的和意义 (1)2、任选来源 (1)3、编制过程 (1)3.1预研阶段 (1)3.2立项阶段 (2)3.3起草阶段 (2)4、标准编制原则和主要内容 (2)4.1基本原则 (2)4.2技术路线 (3)4.3技术内容 (3)5、与现行法律、法规、标准的协调性 (3)6、国内外有关标准现状 (3)7、对标准贯彻的建议 (4)1、编制的目的和意义硝化作用在氮转化过程中扮演着重要的作用，可作为污染物对土壤影响的评价指标。
硝化过程的进行常常通过“硝化势”的大小来衡量。
通常将NH4+作为基质加入土壤中，通过培养试验测定土壤硝氮或亚硝氮浓度来估算硝化势，培育期在几个小时到50天不等。
目前，我国尚没有土壤硝化潜势及硝化抑制相关的国家标准和行业标准。
因此，制定《土壤质量-硝化作用潜势的测定和硝化作用的抑制-氧化铵快速试验》具有重要的意义。
本标准规定了土壤硝化潜势和硝化抑制的快速测定方法，该方法适合各种土壤类型的测定，可应用于土壤和废弃物质量的快速鉴定，以及耕作方式、生物固体和土壤污染物等影响效果的评定。
2、任选来源2018年12月中国标准化管理委员会下达了《关于下达2018年第四批推荐性国家标准制计划的通知》（国标委发函[2018] 83号）其中《土壤质量硝化作用潜势的测定和硝化作用的抑制氧化铵快速试验》获得批准成为2018年第四批国家标准制订计划项目，计划编号20184361-T-326，主管部门为农业部，技术归口单位为全国土壤质量标准化技术委员会，由江苏省农业科学院承担起草工作。
土壤硝化作用强度测定
土壤硝化作用强度测定
土壤硝化作用强度测定
一、原理
将定量的土壤接种到硝化细菌培养基中，由于土壤中硝化细菌的作用，是亚硝酸氧化成硝酸，用培养基中亚硝酸的消失量占原始培养基中亚硝酸含量的百分比作为硝化作用强度的指标。
亚硝酸能与格利斯试剂反应产生一种紫红色的化合物，该显色反应不易受硝态氮的干扰。
二、药品器材
1.硝化细菌培养基：NaNO2 1g MgSO4·7H2O0.03g MnSO4·4H2O 0.01g K2HPO40.75g
Na2CO3(无水)1g NaH2PO40.25g超纯水1000ML
2.格利斯试剂：溶液一，称取磺胺酸0.5g，溶于150ml醋酸溶液（30%）中，保存于棕色
瓶中。
溶液二，称取α-萘胺0.5g，加入50ml蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30%的醋酸溶液150ml，保存于棕色瓶中。
3.亚硝酸根标准溶液：称取1.500g分析纯亚硝酸那于烧杯中，加蒸馏水溶解后定容至
1000ml，此溶液亚硝酸根离子浓度为1mg/ml。
用时以此液配成亚硝酸根标准溶液（亚硝酸根离子浓度为0.01mg/ml）。
三、步骤
1.在150ml三角瓶中装30ml硝化细菌培养基，灭菌。
2.冷却后的培养基中接种1/10土壤悬液1ml，于28℃恒温培养15d，取出三角瓶过滤。
3.用比色法测定滤液中的亚硝酸含量。
四、硝化作用强度
硝化作用强度=（原始培养基中亚硝酸根含量-培养后培养基中亚硝酸根含量）/原始培养基中亚硝酸根含量*100%。
亚硝化球菌属(Nitrososphaera)可能是酸性土壤硝化作用的重要驱动者
土 壤 (Soils), 2021, 53(1): 13–20①基金项目：国家重点研发计划项目(2018YFC0407604，2016YFD0200302)和国家自然科学基金项目(51779077，91747104)资助。
* 通讯作者作者简介：李文兴 (1993—)，女，山西大同人，硕士研究生，主要从事土壤氮循环微生物研究。
DOI: 10.13758/ki.tr.2021.01.003李文兴, 郑曼曼, 王超, 等. 亚硝化球菌属(Nitrososphaera )可能是酸性土壤硝化作用的重要驱动者. 土壤, 2021, 53(1): 13–20.亚硝化球菌属(Nitrososphaera )可能是酸性土壤硝化作用的重要驱动者①李文兴1,2，郑曼曼1,2，王 超1*，沈仁芳1,2(1 土壤与农业可持续发展国家重点实验室(中国科学院南京土壤研究所)，南京 210008；2 中国科学院大学，北京 100049)摘 要：选择初始pH 相近的两个酸性土壤 (JX-3和JX-7) 样品进行培养试验，探讨了氨氧化古菌(ammonia-oxidizing archaea, AOA)和氨氧化细菌(ammonia-oxidizing bacteria, AOB)在酸性土壤硝化过程中所发挥的作用。
结果显示，经过50 d 的培养，JX-7样品硝化速率显著高于JX-3，且明显降低土壤pH 。
培养后，两个土壤样品AOB 丰度均增加，但样品间没有显著差异；JX-7土壤AOA 丰度显著增加，而JX-3无显著变化。
两个土壤样品AOA 群落组成本身存在分异，但对于同一样品培养前后均无显著分异；AOB 群落组成在两土壤间没有分异，但培养前后分别有分异。
培养后，JX-7样品中AOA 优势属Nitrososphaera 和某些未知微生物的个别OTUs 绝对丰度显著增加，而两样品AOB 中Nitrosospira 属的一些OTUs 的绝对丰度均显著增加。
资料21硝化速度的测定方法中文.doc.docx
2010年11月硝化速度的测定方法JICA短期专家竹岛正【意义】所谓硝化反应是指污水中的氨氮在氨氧化细菌以及亚硝酸氧化细菌的作用下转化为硝酸盐氮的氧化反应，可以用下式表示2NH； +3（92-^2NO； +2H2O+2H2O+4H+（氨氧化细菌）2NO'0L N03（亚硝酸氧化细菌）在以脱氮为目的的高度处理设施，为了达到脱氮的目的，首先必须在好氧槽（硝化槽）要进行上述的硝化反应。
硝化反应主要受SRT, ASRT,水温，溶解氧浓度，碱度等影响。
好氧槽内混合液的硝化速度可以用单位时间内（时间）单位体积（L）的混合液所硝化的氮量（mg/L-小时），或者用单位时间内（时间）单位重量（g）的活性污泥所硝化的氣量（mg/g・小时）来表示。
【测定方法】序批式实验装置：序批式实验时，采用容积约为试样量的10倍左右的反应器进行曝气，为了促进搅拌和氧的溶解而设置搅拌机。
所要器具:•反应容器（烧杯：3升）•磁力搅拌器1台•空气泵及曝气头（气泡石）1套•溶解氧测定仪1台•P H计1台•水温计1支•活性污泥混合液试样的过滤用具1套-氨氮，亚硝酸盐氮，硝酸盐氮的分析系统•活性污泥混合液的MLSS, MLVSS的分析系统试验操作：从处理设施的好氧槽内采取活性污泥混合液，按所需量添加到实验装置。
在对污泥混合液进行搅拌的同时进行曝气，当溶解氧的浓度达到2mg/L以上，开始釆取活性污泥混合液。
所釆取的试样应在硝化速度达到不变的部分内按一定间隔采取数点，采取后立即过滤。
对滤液中的氨氮，亚硝酸盐氮，硝酸盐氮进行分析，然后根据亚硝酸盐氮和硝酸盐氮的总量的时间变化求出单位时间内的硝化速度。
硝化速度的计算应在亚硝酸盐氮和硝酸盐氮的总量的时间变化呈线性的范围内进行。
实验应在活性污泥混合液中的氨氮消耗之后，硝化速度出现下降时结束。
活性污泥混合液单位体积的硝化速度（mg/L・小时）=亚硝酸盐氮浓度的增加量（mg/L） +硝酸盐氮浓度的增加量（mg/L）经过时间（小时）另外，需要计算单位重量活性污泥的硝化速度时，在实验开始和结束时分别测定MLSS, MLVSS，根据平均值计算出活性污泥的单位MLSS或单位MLVSS （g）的硝化速度。
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实验二十三
硝化作用强度的测定
硝化作用强度的测定
◆目的要求
◆实验材料
◆试验程序
◆土壤硝化作用强度
◆思考题
目的要求
掌握硝化作用强度的测定方法，从而使学生进一步了解土壤中氮素如何有效利用及对环境污染的影响。
◆样品：新鲜土壤。
◆培养基：硝化作用第二阶段用培养基，
药品用分析纯。
配方如下：
NaNO2 1g
MgSO4·7H2O 0.03g
MnSO4·4H2O 0.01g K2HPO40.75g NaCO3(无水）1g NaH2PO40.25g CaCO3 3.0g 蒸馏水1000mL
◆格利斯试剂：
1. 溶液Ⅰ 称取对氨基苯磺酸0.5g,溶于150ml30%醋酸溶液中，保存于棕色瓶中。
2.溶液Ⅱ 称取α－萘胺0.5g,加入50mL
蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30％的醋酸溶液150mL,保存于棕色瓶中。
◆亚硝酸银标准液称取1.5000g分析纯亚硝酸钠于烧杯中，加蒸馏水溶解后洗入1000mL容量瓶中，再加蒸馏水至刻度，摇匀。
用时以此液稀释成标准液（每mL含0.01mg的NO2-)
其它：
容量瓶（50mL、100mL、1000mL）、移液管（1mL、5mL）、三角瓶、漏斗、滤纸、玻棒、洗瓶等及分光光度计。
实验程序
◆培养基的配制及1/10土壤悬液的制备
◆接种培养
◆用比色法测定虑液中的亚硝酸银含量
实验程序1 (培养基的配制及1/10土壤悬液的制备)
◆在150mL三角瓶中装30mL硝酸细
菌培养基(要准确称量),灭菌,每组2
只.
◆在150mL三角瓶中装45mL蒸馏水,
并放入少许玻璃珠灭菌,每组1只.
◆1/10土壤悬液的制备称5g土壤
放入装有45mL带玻璃珠的三角瓶
中,振摇5min。
（接种培养）
◆吸取1/10土壤悬液1mL接种到硝酸细菌培养基中，每组接2只三角瓶过滤立即用以测定原始培养液中亚硝酸根含量，另一支三角瓶置于280C 温室中培养15d.
◆培养结束，取出三角瓶，培养液进行过滤。
(用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量）
◆取滤液1mL于50mL容量瓶中，稀释至约40mL，加入1mL格利斯试剂Ⅰ，放置
10min。
再加入1mL格利斯试剂Ⅱ和
1mL2%醋酸钠溶液，显色后稀释至刻度，放置10min后，用分光光度计（波长
520nm)比色测定。
◆亚硝酸银标准曲线的绘制吸取压硝酸银标准液0、1、2、3、4、5mL，分别放
入50mL容量瓶中，定容。
与待测样品同样条件进行比色，以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准曲线。
实验程序3 (用比色法测定滤液中的亚硝酸根含量）
结果计算
NO2-(mg/30mL)=X(m g/mL) ×比色体积×稀
释倍数×10－3
式中X(m g/mL）——由标准曲线查知
10－3——换算为mg
土壤硝化作用强度 计算公式：
硝化作用强度＝原始培养基中NO 2-量－培养基中NO 2-量原始培养基中NO 2-量
×100％
思考题
◆什么叫硝化作用？硝化作用由哪两类细菌参与？
◆根据硝酸细菌培养基的组成成分，硝酸细菌属何种营养类型？
◆本实验的原理是什么？
◆实验中要注意什么？
实验二十三结束。