葛根和粉葛高效液相色谱指纹图谱及化学模式识别_李生茂

DOIʒ10．13192/j．issn．1000-1719．2016．05．048葛根和粉葛高效液相色谱指纹图谱及化学模式识别李生茂1，刘琳2，谭睿3，甄汉深4（1.川北医学院药学院，四川南充637000；2.川北医学院附属医院内分泌科，四川南充637000；3.西南交通大学医学院，四川成都610031；4.广西中医药大学，广西南宁530001）摘要：目的：建立并比较葛根和粉葛的高效液相色谱（HPLC ）指纹图谱，为其质量控制提供依据。

方法：采用HPLC 法，色谱柱为Kromasil C 18（4.6mm ˑ200mm ），流动相为乙腈－0.03mol /L 醋酸铵溶液（梯度洗脱），流速为0.9mL /min ，柱温为40ħ，检测波长为250nm ，进样量为20μL 。

收集16批次的葛根和粉葛样品进行测定，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A 版》软件进行相似度评价，采用聚类分析和主成分分析对指纹图谱进行化学模式识别研究。

结果：16批葛根和粉葛药材的指纹图谱有6个共有峰，经对照指认出葛根素、大豆苷、大豆苷元和染料木素的色谱峰。

相似度分析结果显示葛根和粉葛的相似度较高，均在0.910以上；聚类分析将葛根和粉葛样品分别归为两类；主成分分析提取得到8个主成分，累计方差贡献率达到93.548%，前3个主成分得分投影结果与聚类分析基本一致。

结论：葛根和粉葛所含化学成分既有一定的相似性，也存在一定差异，该方法可作为葛根和粉葛的质量控制及临床应用的依据。

关键词：葛根；粉葛；HPLC 指纹图谱；聚类分析；主成分分析中图分类号：Ｒ284文献标志码：A 文章编号：1000-1719（2016）05-1034-04HPLC Fingerprint and Chemical Pattern Ｒecognition of Pueraria lobata and Pueraria thomsoniiLI Shengmao 1，LIU Lin 2，TAN Ｒui 3，ZHEN Hanshen 4（1．School of Pharmacy ，North Sichuan Medical College ，Nanchong 637000，Sichuan ，China ；2．Department of Endocrinology ，Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College ，Nanchong 637000，Sichuan ，China ；3．Southwest Jiao Tong University ，College of Medicine ，Chengdu 610031，Sichuan ，China ；4．Guangxi University of Chinese Medicine ，Nanning 530001，Guangxi ，China ）Abstract ：Objective ：To establish and compare HPLC fingerprints of Pueraria lobata and Pueraria thomsonii ．Methods ：HPLC was used to analyze16batches of samples．The determination was performed on Kromasil C 18column with mobile phase consisted of acetonitrile －0．03mol /L ammonium acetate with gradient elution at the flow rate of 0．9mL /min．The detection wavelength was 250nm and column temperature was set at 40ħ．The sample size was 20μL．TCM fingerprint evaluation software （2004edi-tion ）was used to evaluate the similarity of 16batches of samples．Hierarchical cluster analysis （HCA ）and principal component analysis （PCA ）were applied to chemical pattern recognition．Ｒesults ：There were 6common peaks of fingerprints of Pueraria lo-bata and Pueraria thomsonii ．Four components were identified as Puerarin ，Daidzin ，Daidzein and Genistein．The similarities of 16batches of samples were proved to be higher than 0．910．Sixteen batches of Pueraria lobata sample and Pueraria thomsonii ware classified into two groups （Pueraria lobata sample and Pueraria thomsonii sample ）based on HCA．Eight principal components （PC ）were observed via PCA and the values of 8principal components accounted for 93．548%of the total variance．The classifi-cation result according to PCA was consistent with the HCA．Conclusion ：The components of Pueraria lobata and Pueraria thomso-nii are different．The method can be used for identification and quality evaluation of Pueraria lobata and Pueraria thomsonii ．Keywords ：Pueraria lobata ；Pueraria thomsonii ；HPLC fingerprint ；HCA ；PCA收稿日期：2015－12－09基金项目：2012年四川省教育厅科研项目（12ZB216）作者简介：李生茂（1981－），男，四川成都人，讲师，博士，研究方向：中药药效物质基础及质量标准化研究。

通讯作者：谭睿，教授，博士，研究方向：中药、民族药及复方药效物质基础及质量标准化研究，E －mail ：93230430@qq．com 。

葛根和粉葛分别来源于豆科葛属植物野葛［Puer-aria lobata （Willd.）ohwi ］和甘葛藤（Pueraria thomso-nii Benth.）的干燥根［1］，长期以来两者均作为葛根药材使用［2－4］，具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒之功效［1］。

现代研究显示，葛根和粉葛均含有葛根素、大豆苷和大豆苷元等异黄酮类活性成分，但由于基源的不同，两者所含化学成分及药理作用存在一定差异［5－8］，《中华人民共和国药典》从2005年版开始也将葛根和粉葛分别单列。

目前，有关葛根和粉葛化学成分比较的研究大多采用紫外光谱法［9－11］、红外光谱法［12］、薄层色谱法［13－14］、高效液相色谱法［5－6，10－11，15－19］等对二者的总黄酮等大类成分或部分活性成分的定性或定量的对比，未能更深入对葛根和粉葛药材化学成分异同进行系统比较分析。

因于此，本实验采用高效液相色谱法建立葛根和粉葛的指纹图谱，并结合聚类分析和主成分分析对指纹图谱进行模式识别，以期为进一步系统比较这二者化学成分的异同，并为更为合理使用葛根药材提供一定的依据。

1仪器与试药1.1仪器岛津LC－10A高效液相色谱仪包括两个LC－10A泵、DGμ－12A在线脱气机、SPD－10A检测器、SIL－10A自动进样器、CTO－10A柱温箱（日本岛津）；Sartoius BS110电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药实验所用葛根药材经西南交通大学生命科学与技术学院宋良科副教授鉴定为豆科植物野葛［Pueraria lobata（Willd．）Ohwi］或甘葛藤（Pueraria thomsonii Benth.）的干燥根，药材来源详见表1。

葛根素、大豆苷对照品（中国药品生物制品检定所）、大豆苷元对照品（SHENZHZN TAVTO BIOTECH CO.，LTD，CHINA）以及染料木素对照品（成都曼斯特生物技术有限公司），纯度均大于98%。

乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水（自制）。

表1药材来源样品品种来源样品品种来源s1Pueraria lobata（Willd.）Ohwi云南昆明s9Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川平武s2Pueraria lobata（Willd.）Ohwi广西南宁s10Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川北川s3Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川广元s11Pueraria thomsonii Benth.广西南宁s4Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川凉山s12Pueraria thomsonii Benth.广西贺州s5Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川简阳s13Pueraria thomsonii Benth.云南昆明s6Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川彭州s14Pueraria thomsonii Benth.云南大理s7Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川彭州s15Pueraria thomsonii Benth.四川成都s8Pueraria lobata（Willd.）Ohwi四川成都s16Pueraria thomsonii Benth.四川成都2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Kromasil C18（4.6mmˑ200mm）；流动相：A为乙腈，B为0.03mol/L醋酸铵溶液，梯度洗脱（0 25min，10%A；25 60min，10%→25%A；60 80 min，25%→40%A；80 90min，40→58%A）；流速：0.9mL/min；柱温：40ħ；检测波长：250nm；进样量：20μL。