鼠李糖脂的提取与纯化
鼠李糖脂合成途径
鼠李糖脂合成途径
【原创实用版】
目录
1.鼠李糖脂的概述
2.鼠李糖脂的合成途径
3.鼠李糖脂的应用前景
正文
【鼠李糖脂的概述】
鼠李糖脂是一种天然的生物表面活性剂,广泛存在于植物中,尤其在鼠李科植物中具有较高的含量。
鼠李糖脂具有优良的表面活性、乳化、分散、增稠等性能,广泛应用于化妆品、洗涤剂、食品添加剂等领域。
近年来,随着对鼠李糖脂的研究不断深入,其应用领域也在不断拓展。
【鼠李糖脂的合成途径】
鼠李糖脂的合成途径主要包括以下三个步骤:
第一步:糖的活化
在鼠李糖脂的合成过程中,首先需要将葡萄糖或其衍生物通过糖基转移酶活化为糖基。
第二步:糖基与脂肪酸的连接
活化的糖基与脂肪酸在糖脂合成酶的作用下,通过酯键结合形成鼠李糖脂前体。
第三步:鼠李糖脂前体的加工
鼠李糖脂前体在酶的催化下,经过一系列的加工反应,生成具有不同结构和功能的鼠李糖脂。
【鼠李糖脂的应用前景】
随着绿色、环保、可持续发展理念的深入人心,鼠李糖脂作为一种天然生物表面活性剂,其应用前景十分广阔。
目前,鼠李糖脂已广泛应用于化妆品、洗涤剂、食品添加剂等领域。
在未来,随着科学技术的不断进步,鼠李糖脂有望在生物医药、生物材料、环保等领域发挥更大的作用。
鼠李糖脂在生态农业中的应用
鼠李糖脂在生态农业中的应用一、鼠李糖脂简介1.1 鼠李糖脂的来源鼠李糖脂通常是由铜绿假单胞菌在一定培养条件下,通过生物发酵的方法产生的具有表面活性的糖脂类产物[1]。
1949年,Jarvis和Johnson最早对使用铜绿假单胞菌(Pseudomonas spp.)生产鼠李糖脂进行了报道[2]。
目前,人们通常采用假单胞菌(Pseudomonas spp.)发酵生产鼠李糖脂。
发酵法的关键是首先筛选出性能优良的高产菌株,然后再进行培养条件的优化来提高产量、降低成本。
培养基中的碳源是决定生物表面活性剂产量和结构的重要因素。
鼠李糖脂在菌株培养中生产的限制条件是发酵过程中累积的次级代谢产物,这些限制条件不包括碳源,而氮源和磷则会限制鼠李糖脂的生产[3]。
鼠李糖脂发酵的关键首先是能筛选或者构建出鼠李糖脂产量高的菌株,然后再对合适的生产菌株的发酵的各种条件进行优化,从而达到高产量低成本的目标。
条件优化主要从碳源、氮源、无机盐离子以及pH、温度等方面来进行[4] 。
目前主要通过代谢工程和基因工程方法来提高鼠李糖脂产量,这些策略的主要目的是:(a)不使用化学消泡剂获得高浓度的鼠李糖脂;(b)利用可再生资源生产鼠李糖脂,降低生产底物成本;(c)控制生产过程中的其他产物,获得单一的鼠李糖脂而不是混合物;(d)建立鼠李糖脂的非致病性生产菌株;(e)寻常基础材料生物催化鼠李糖脂的生产[5]。
实际工业生产中,鼠李糖脂生产条件的优化主要是通过添加脂肪酸、生产菌株随机突变、控制发酵pH值、控制底物摄取量和运用Tween-80及Triton X-100提高鼠李糖脂的产量。
之前有研究者将鼠李糖基转移酶复合物I(Rh1AB)在相对较安全的生产宿主恶臭假单胞菌KT2440中异源表达,但是产量提高的很少[6]。
可以通过构建工程菌株提高鼠李糖脂产量,之前有研究证明自转运酯酶参与了细胞膜的形成和运动,也参与了脂类的运输,当敲除自转运酯酶基因,鼠李糖脂产量明显降低,由此可知,自转运酯酶也参与了鼠李糖脂的形成,过量表达自转运酯酶EstA[7]和鼠李糖基转移酶复合物I(Rh1AB)提高鼠李糖脂产量[8]。
鼠李糖脂工业发酵生产工艺流程
鼠李糖脂工业发酵生产工艺流程鼠李糖脂是一种重要的生物活性物质,有着广泛的应用前景。
其工业化生产已经成为当前研究的热点。
本文将介绍鼠李糖脂工业发酵生产的工艺流程。
工艺流程:(一)种子培养首先,需要筛选合适的菌种,并进行种子培养。
在选用菌株时,应注意其生长速度快、产鼠李糖脂高等特点,如脂肪酸类的乳酸菌。
分离出的菌株宜在适宜的培养条件下生长,善于形成菌落,适宜于进行细胞増殖生产。
种子培养一般分为两个阶段:液体培养和板培养。
液体培养是用于大规模培养的一种方式,可以加速菌种的生长速度;板培养主要用于贮存种子,供以后使用。
(二)发酵鼠李糖脂发酵鼠李糖脂的工艺流程包括发酵培养、发酵条件、菌体收集和萃取纯化。
1、发酵培养将适当的培养液配制完毕后,用选定的菌种进行发酵培养。
发酵培养应在适宜的培养条件下进行,以确保菌体生长良好和鼠李糖脂产量高。
一般来说,在不同的发酵阶段应调整不同的培养条件,包括温度、pH值、营养物的添加等因素。
2、发酵条件发酵条件的选择直接影响到鼠李糖脂的产量和质量。
一般来说,合适的发酵条件应包括温度、pH值、气体等。
温度一般在30~37℃之间,pH值以6.5~7.5为最佳,KMnO4浓度则要根据不同的菌株进行调整。
3、菌体收集和萃取纯化在发酵后,需要将菌体收集起来,再经过简单的处理即可进行鼠李糖脂的萃取和纯化。
菌体的收集可以通过离心和过滤两种方式实现。
萃取和纯化主要有两种方法:有机溶剂法和溶剂萃取法。
有机溶剂法适合于适量生产鼠李糖脂的情况,溶剂萃取法适合于大规模生产鼠李糖脂的情况。
(三)产品质量检测鼠李糖脂生产后还需要进行检测,确保产品的质量和安全性。
常见的检测方法包括高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)等。
综上所述,鼠李糖脂工业发酵生产的主要工艺流程包括种子培养、发酵培养、发酵条件、菌体收集和萃取纯化、产品质量检测等环节。
在实际生产中,需注意机器设备的安全性、环境保护和质量管理等问题,以确保工艺流程的顺畅和产品的质量安全。
鼠李糖脂生物表面活性剂及其纯化方法研究进展
鼠李糖脂生物表面活性剂及其纯化方法研究进展田静;王靖;冀光;李明【摘要】鼠李糖脂生物表面活性剂是由微生物在一定的培养条件下分泌的次级代谢产物,具有良好的环境相容性,生产成本是制约其工业化应用的主要因素.综述了鼠李糖脂的常用纯化方法,并对其研究方向进行了展望.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2010(027)006【总页数】4页(P13-16)【关键词】鼠李糖脂;生物表面活性剂;纯化;展望【作者】田静;王靖;冀光;李明【作者单位】中国石油大学(北京)化学科学与工程学院,北京,102249;中国石油大学(北京)化学科学与工程学院,北京,102249;中国石油大学(北京)化学科学与工程学院,北京,102249;中国石油大学(北京)化学科学与工程学院,北京,102249【正文语种】中文【中图分类】TQ423生物表面活性剂是天然表面活性剂的一种,是微生物在特定条件培养时分泌的具有表面活性的一类代谢产物[1~3]。
其中研究较多的是鼠李糖脂生物表面活性剂。
与化学表面活性剂相比,鼠李糖脂生物表面活性剂除了具有类似的分子结构、一定的表/界面活性外,还表现出良好的环境和生物兼容性,即具有无毒、无害、易降解的特性。
因此,近年来广泛用于环境治理、石油开采、生物医药、造纸及化妆品等领域[4~8],并逐步拓展其它领域的研究应用。
由于化学表面活性剂合成步骤复杂、生产成本固定,而鼠李糖脂生物表面活性剂可以通过选择经济实用的分离方法、优化操作工序来降低成本。
因此,寻找经济、实用、高效的分离纯化生物表面活性剂的方法已经成为科研工作者急需解决的问题。
作者在此综述了鼠李糖脂常用的纯化方法,拟为相关研究提供理论及技术基础。
鼠李糖脂主要有4种结构[9,10],如图1所示。
鼠李糖脂公认的生物合成途径由Burger等[11]和Ochsner等[12]通过放射性同位素标记前体物质的方法研究并提出(图2)。
在此合成途径中,鼠李糖脂的合成是由一系列连续的糖基转移反应完成的,每个反应过程均由特定的鼠李糖脂转移酶进行催化,其中腺苷二磷酸鼠李糖(d TDP2L-鼠李糖)作为糖基的供体,L-鼠李糖苷-β-羟基癸酰-β-羟基癸酸和β-羟基癸酰-β-羟基癸酸分别作为糖基的受体。
鼠李糖脂农业应用介绍
鼠李糖脂在绿色农业中的应用一、鼠李糖脂简介1.1 来源及结构鼠李糖脂是由铜绿假单胞菌在一定培养条件下,通过生物合成的方法产生出的具有表面活性的糖脂类产物,它由鼠李糖元和脂肪酸组成,其分子结构通式为:R1: R1=α-L吡喃鼠李糖基R2: R1=HR2=β羟基癸酸R2=β羟基癸酸鼠李糖脂的分子结构中既有极性基团又有非极性基团,是一类中性两极分子。
亲水基团是非离子形式的单糖、二糖、多糖、羧基、氨基或肽链,疏水基团由带羟基的脂肪酸组成。
1.2鼠李糖脂粗提纯品组分构成鼠李糖脂生物表面活性剂是生物发酵制品,粗提纯的产品中还含有一些如糖脂、多糖、甘油、有机脂肪酸等代谢物,另外还包括少量的蛋白类物质,如菌体细胞蛋白、核酸蛋白、多糖类蛋白等。
1.3鼠李糖脂主要功能特点鼠李糖脂是目前生物表面活性剂中最重要、应用最广泛的一类,它属于水溶性阴离子生物表面活性剂,具有降低界面张力、增溶、乳化、渗透、润湿等多种功能,同时它又具有较好的热稳定性和化学稳定性,在90℃时仍具有很好的表面性能,并且能被微生物100%降解,是典型的环保型绿色产品。
1.4鼠李糖脂已获得的绿色认证(1)急性经口毒性试验LD50>5000mg/kg·Bw,属实际无毒。
(2)2004年,美国环保署即通过了鼠李糖脂作为生物农药的备案(PC Code 110029)。
(3)纽约州环境保护部固体和危险材料农药管理局,新的活性成分鼠李糖脂登记农药新产品的注册文件(EPA注册编号72431-1)。
(4)鼠李糖脂作为一种新的活性成分,申请登记生物杀菌剂的联帮登记公告。
2003年5月7日(68 FR 24456)。
(5)美国环保署(EPA),关于鼠李糖脂生物表面活性剂在食品中、农药化学品中的容许量申请及批复。
(68 FR 25026和68 FR 16796)1.5 鼠李糖脂农业应用方向(1)添加于肥料中提高肥料利用率,增强肥效;(2)直接作为生物农药或添加于农药产品中,增强药效;(3)用于土壤调节,增强土壤活力;(4)用于果蔬保鲜二、鼠李糖脂农业应用机理2.1肥料中提高肥料利用率,增强肥效2.1.1具有优良的表面活性,能促进有效营养成分的吸收利用鼠李糖脂本身具有优良的表面活性,能够有效降低接触面的表面张力,增大润湿面积,可以让目标物表面完整均匀的覆盖,增加液体携带营养物质与植物表面接触机会,同时改善植物细胞通透性,使不易于被植物直接吸收利用的元素可通过鼠李糖脂对植物细胞膜渗透的改善作用进入植物细胞内,被植物吸收,从而提高肥料利用率。
鼠李糖脂的提取与纯化
鼠李糖脂的提取与纯化:用1mol/LNaOH调培养48h发酵液(发酵时间待定)的pH值至8.0后8000r/min离心10min除菌体,上清液用36%HCl调pH值至2.0,然后以V(上清液):V(氯仿):V(甲醇)=3:2:1萃取15min,静置分层,收集下层液用旋转蒸发仪(50℃)浓缩至50ml,溶剂自然挥发干后即得纯鼠李糖脂。
将鼠李糖脂溶于0.05mol/LNaHCO3溶液中得鼠李糖脂溶液[1]。
之前的这种提取方法可以得到纯的鼠李糖脂。
关于发酵液中鼠李糖脂的含量检测。
有文献提到用电喷雾质谱ESI-MS来检测鼠李糖脂的含量。
还有一种主要用分光光度计和标准曲线的方法来做。
如下:一、材料、仪器及方法鼠李糖、苯酚、浓硫酸、尿素、Na2HPO4、KI~P04、Mgs04·7H20、CaC12·2H20均为国产分析纯。
紫外可见分光光度仪。
鼠李糖标准母液的配制:取鼠李糖于105℃烘干至衡重,精确称取25 mg 溶于250 mL容量瓶中,蒸馏水定容,摇匀即得0.10 g/L鼠李糖标准母液。
苯酚溶液的配制:苯酚用水浴加热后溶解,称取100 g,加铝片0.10 g,氢氧化钠0.05 g,蒸馏收集182 ℃的馏分。
取馏出液6.00 g,加水100 mL,置于棕色瓶中,备用。
样品的测定:种子培养基接种生物表面活性剂产生菌L Y4,发酵16 h,此时菌株处于对数生长中后期,以此时的发酵液作为种子液。
接种量5%,200 r/min~240 r/min,发酵周期为2 d。
将发酵液过滤除去过量的植物油(与他用的培养基有关,其中添加了植物油),准确移取滤液0.5 mL稀释至100.0 mL,取2.0 mL 稀释液(按鼠李糖标准曲线绘制中的方法显色)于482 nln处测其吸光度值,同时以蒸馏水作对照,由回归方程得鼠李糖的含量,鼠李糖的含量乘以相关系数3即为鼠李糖脂的产量。
二、鼠李糖标准曲线的绘制分别移取鼠李糖标准母液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL、10.0 mL、12.5 mL、15.0 mL、17.5 mL、20.0 mL于50 mL容量瓶中,蒸馏水稀释定容。
鼠李糖脂产能
鼠李糖脂产能鼠李糖脂(Euphorbia lathyris L.)是一种常见的植物,具有广泛的药用和工业价值。
它含有丰富的鼠李糖脂,是一种特殊的脂质类化合物,被广泛应用于医学、食品、化妆品和能源等领域。
本文将探讨鼠李糖脂的产能及其相关应用领域。
一、鼠李糖脂介绍及其化学成分鼠李糖脂是一种多年生草本植物,主要生长在亚洲和欧洲地区。
它的主要成分是鼠李酮等鼠李糖脂物质,具有重要的抗炎、抗癌、镇痛、抗菌等药理活性。
鼠李糖脂的化学结构复杂多样,包括酮烯型鼠李酮、酮烷型鼠李酮、酮基酯类等多种成分,其中酮烯型鼠李酮是最主要的鼠李糖脂成分。
二、鼠李糖脂的生产与提取鼠李糖脂主要通过鼠李糖脂苷的提取和分离来获得。
目前,常用的提取方法包括水提法、溶剂法、超临界流体提取法等。
其中,超临界流体提取法被认为是一种高效、环保的提取方法,已被广泛应用于鼠李糖脂的生产。
超临界流体提取法利用其独特的物理化学性质,可以在较低的温度和压力下实现鼠李糖脂的高效提取,同时可避免有机溶剂的使用,减少了对环境的污染。
三、鼠李糖脂的医学应用鼠李糖脂具有广泛的医学应用价值,被用作抗癌药物和抗炎药物。
研究表明,鼠李糖脂具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡的作用,对多种肿瘤具有明显的抗肿瘤活性。
此外,鼠李糖脂还具有良好的抗炎作用,可用于治疗风湿病、炎症性肠病等炎症性疾病。
四、鼠李糖脂的食品应用鼠李糖脂在食品工业中也有广泛的应用。
由于其具有良好的稳定性和抗氧化性,鼠李糖脂被用作食品添加剂,可用于保护食品的色泽、延长保质期和改善口感。
此外,鼠李糖脂还可用于制备膳食纤维产品,具有促进肠道健康、调节血糖和降低血脂的功效。
五、鼠李糖脂的化妆品应用鼠李糖脂在化妆品领域也有广泛的应用。
其丰富的多不饱和脂肪酸成分具有良好的保湿性和滋润性,可用于制备护肤品、唇膏、润肤油等化妆品产品。
同时,鼠李糖脂还具有控油、抗炎、抗氧化等功能,被广泛应用于护肤品中,可改善肌肤质地、修复受损肌肤、延缓皮肤衰老。
鼠李糖脂1.doc
(一)大庆萨北油层过渡带油层先导性试验[6]
1997 年 12 月-1998 年 12 月在大庆萨北油田北二区东部的小井距试验区葡 I4-7 油层进 行矿场试验,采用 3 注 4 采的四点法面积井网,平均注采井距 75 m,对 4 个段塞进行生物 表面活性剂三元复合驱注入,累计注入助剂 64613m3。
试验效果总结如下:
1)采出井含水大幅度下降,产油量上升
当鼠李糖脂表活剂三元复合体系注入 0.11PV 时,采油井含水开始下降,当段塞注入
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鼠李糖脂导读
0.45PV 时,含水降到最低值 61.0%,全区累计增油 7154t,提高采收率 16.64%,中心井累计 增油 2841t,提高采收率 23.24%,数值模拟见图 5。
鼠李糖脂导读
一、鼠李糖脂概述
生物表面活性剂(Biosurfactant)是细菌、真菌和酵母在合适的碳源、氮源、pH和温度 条件下,其生长代谢过程中分泌出的具有表面活性的代谢产物,它是具有亲水基团和疏水基 团的两亲化合物。其中,鼠李糖脂是生物表面活性剂中研究较为深入的一类,其属于糖脂类, 是一种非离子型生物表面活性剂,不仅具有降低油水表面/界面张力、乳化、增溶和改变分 子极性等功能,而且具有毒性小、易于生物降解等特性。
图1 鼠李糖脂的化学结构通式[1]
鼠李糖脂主要分成两类:单鼠李糖脂和双鼠李糖脂,前者含有一个鼠李糖环,化学式为
C26H48O9,后者含有两个鼠李糖环,化学式为C32H58O13,鼠李糖脂的同系物情况见表1。
表1 四种鼠李糖脂的同系物[1]
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鼠李糖脂合成途径
鼠李糖脂合成途径摘要:一、鼠李糖脂简介二、鼠李糖脂的合成途径1.发酵法2.化学合成法3.生物合成法三、鼠李糖脂的应用领域1.石油工业2.食品工业3.环境保护四、鼠李糖脂的产业化前景正文:鼠李糖脂(Rhamnolipid)是一种天然生物表面活性剂,由两部分组成:鼠李糖和脂质。
近年来,随着对其研究的深入,鼠李糖脂在各个领域的应用逐渐广泛。
本文将介绍鼠李糖脂的合成途径及其应用领域,并探讨产业化前景。
一、鼠李糖脂简介鼠李糖脂作为一种生物表面活性剂,具有优异的表面活性、降解性和生物相容性。
它主要由两种成分组成:鼠李糖和脂质。
鼠李糖是一种五碳糖,具有良好的溶解性和稳定性;脂质部分则包括多种脂肪酸,使鼠李糖脂具有良好的表面活性。
由于其生物降解性,鼠李糖脂在环保领域具有广泛的应用前景。
二、鼠李糖脂的合成途径1.发酵法:发酵法是制备鼠李糖脂的主要方法,通过微生物发酵生产。
发酵过程中,微生物产生鼠李糖脂,同时还可以调控发酵条件以优化产量和品质。
发酵法的优点是反应条件温和、原料成本低,但产量和纯度受发酵菌种、发酵条件和后处理工艺的影响。
2.化学合成法:化学合成法是通过化学反应制备鼠李糖脂。
该方法主要利用鼠李糖和脂肪酸进行酯化反应,生成鼠李糖脂。
化学合成法的优点是反应条件可控,产品纯度高,但缺点是原料成本较高,且可能产生环境污染物。
3.生物合成法:生物合成法是通过生物体内的代谢途径合成鼠李糖脂。
该方法主要利用生物体内的酶催化反应,将鼠李糖和脂肪酸合成鼠李糖脂。
生物合成法的优点是环保无污染,但目前产量较低,尚处于研究阶段。
三、鼠李糖脂的应用领域1.石油工业:鼠李糖脂在石油工业中的应用主要包括提高原油开采率、优化管道输送和改善储罐清洗。
鼠李糖脂与其他生物聚合物复配,可以建立新的生物驱油体系,显著提高采收率。
2.食品工业:鼠李糖脂作为一种天然生物表面活性剂,在食品工业中具有广泛的应用。
例如,它可以作为乳化剂、稳定剂、膨松剂等,提高食品的质量和稳定性。
一种鼠李糖脂的提取纯化方法[发明专利]
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010867293.9(22)申请日 2020.08.26(71)申请人 夏文杰地址 437600 湖北省咸宁市通山县通羊镇马槽桥社区马肚小区189号(72)发明人 夏文杰 (74)专利代理机构 连云港联创专利代理事务所(特殊普通合伙) 32330代理人 刘刚(51)Int.Cl.C07H 15/04(2006.01)C07H 1/06(2006.01)(54)发明名称一种鼠李糖脂的提取纯化方法(57)摘要本发明公开了一种鼠李糖脂的提取纯化方法,属于生物提取技术领域。
它包括以下步骤:(1)絮凝沉淀固液分离:调节鼠李糖脂发酵液的pH值,随后进行絮凝沉淀处理,最后过滤以进行固液分离,获取分离液;(2)脱色:在步骤(1)固液分离后的分离液中加入活性炭,获取脱色液,最后进行脱色处理,获取溶液A;(3)澄清:采用第一滤膜将步骤(2)脱色后的溶液A进行澄清处理,获取溶液B;(4)浓缩脱盐:采用第二滤膜将步骤(3)微滤澄清后的溶液B进行浓缩脱盐处理,获取溶液C;(5)蒸发浓缩:将步骤(4)浓缩脱盐后的溶液C进行蒸发浓缩。
与现有技术相比,可在较低成本下连续大规模高效地分离纯化鼠李糖脂,并获得高品质鼠李糖脂产品。
权利要求书2页 说明书8页CN 112279879 A 2021.01.29C N 112279879A1.一种鼠李糖脂的提取纯化的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)絮凝沉淀固液分离:鼠李糖脂发酵生产结束后,调节鼠李糖脂发酵液的pH值,并添加絮凝剂进行搅拌混合均匀,随后进行絮凝沉淀处理,最后过滤以进行固液分离,获取分离液;(2)脱色:在步骤(1)固液分离后的分离液中加入活性炭,获取脱色液,并控制脱色液的温度和pH值,最后进行脱色处理,获取溶液A;(3)澄清:采用第一滤膜将步骤(2)脱色后的溶液A进行澄清处理,获取溶液B;(4)浓缩脱盐:采用第二滤膜将步骤(3)微滤澄清后的溶液B进行浓缩脱盐处理,获取溶液C;(5)蒸发浓缩:将步骤(4)浓缩脱盐后的溶液C进行蒸发浓缩,即得成品。
一种鼠李糖脂的制备方法及其应用[发明专利]
专利名称:一种鼠李糖脂的制备方法及其应用专利类型:发明专利
发明人:孟琴,张国亮
申请号:CN201010136140.3
申请日:20100330
公开号:CN101845468A
公开日:
20100929
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明公开了一种鼠李糖脂的制备方法及其应用,本发明以废弃油脂为碳源,利用铜绿假单胞菌发酵生产鼠李糖脂,结合乙醇的消泡作用,产量可达35-50g/L,使成本比传统方法低25-40%左右。
含20-500mg/L鼠李糖脂溶液处理植物病害菌,对病害真菌菌丝体生长和孢子萌发的抑制率达40-90%,有效抑制植物真菌病害。
含20-500mg/L鼠李糖脂溶液对蟑螂和蚜虫的杀虫效果明显。
此外,将鼠李糖脂代替化学表面活性剂用作农药、肥料和饲料的助剂及含油污泥脱水剂,效果显著。
申请人:湖州紫金生物科技有限公司,孟琴
地址:310030 浙江省湖州市青铜路699号C座116
国籍:CN
代理机构:杭州求是专利事务所有限公司
代理人:周烽
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鼠李糖脂的提取与纯化:用1mol/LNaOH调培养48h发酵液(发酵时间待定)的pH值至8.0后8000r/min离心10min除菌体,上清液用36%HCl调pH值至2.0,然后以V(上清液):V(氯仿):V(甲醇)=3:2:1萃取15min,静置分层,收集下层液用旋转蒸发仪(50℃)浓缩至50ml,溶剂自然挥发干后即得纯鼠李糖脂。
将鼠李糖脂溶于0.05mol/LNaHCO3溶液中得鼠李糖脂溶液[1]。
之前的这种提取方法可以得到纯的鼠李糖脂。
关于发酵液中鼠李糖脂的含量检测。
有文献提到用电喷雾质谱ESI-MS来检测鼠李糖脂的含量。
还有一种主要用分光光度计和标准曲线的方法来做。
如下:一、材料、仪器及方法
鼠李糖、苯酚、浓硫酸、尿素、Na2HPO4、KI~P04、Mgs04·7H20、CaC12·2H20均为国产分析纯。
紫外可见分光光度仪。
鼠李糖标准母液的配制:取鼠李糖于105℃烘干至衡重,精确称取25 mg 溶于250 mL容量瓶中,蒸馏水定容,摇匀即得0.10 g/L鼠李糖标准母液。
苯酚溶液的配制:苯酚用水浴加热后溶解,称取100 g,加铝片0.10 g,氢氧化钠0.05 g,蒸馏收集182 ℃的馏分。
取馏出液6.00 g,加水100 mL,置于棕色瓶中,备用。
样品的测定:种子培养基接种生物表面活性剂产生菌L Y4,发酵16 h,此时菌株处于对数生长中后期,以此时的发酵液作为种子液。
接种量5%,200 r/min~240 r/min,发酵周期为2 d。
将发酵液过滤除去过量的植物油(与他用的培养基有关,其中添加了植物油),准确移取滤液0.5 mL稀释至100.0 mL,取2.0 mL 稀释液(按鼠李糖标准曲线绘制中的方法显色)于482 nln处测其吸光度值,同时以蒸馏水作对照,由回归方程得鼠李糖的含量,鼠李糖的含量乘以相关系数3即为鼠李糖脂的产量。
二、鼠李糖标准曲线的绘制
分别移取鼠李糖标准母液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL、10.0 mL、12.5 mL、15.0 mL、17.5 mL、20.0 mL于50 mL容量瓶中,蒸馏水稀释定容。
取2.0 mL标准溶液,以蒸馏水作对照,分别加入1.0 mL苯酚溶液,摇匀,迅速加入5.0 mL 浓硫酸,振摇5 min后于100℃水浴中加热15 min,而后置于冰水中迅速冷却10
min,于482 nnl处测其吸光度值,以吸光度值为纵坐标,鼠李糖质量浓度为横坐标,绘制标准曲线(图2),线性回归得鼠李糖的标准曲线方程Y=16.514x+0.004 2,相关系数=0.996 9。
在鼠李糖质量浓度0~0.04 g/L,该方法线性关系良好。
三、鼠李糖脂生物表面活性剂产生菌发酵液中总糖含量测定的较佳条件:
添加5.0 mL硫酸和1.0 rnL配好的苯酚溶液,100 ℃二水浴中显色15 min,迅速冷却后于482 nm进行测定。
吸收值与其质量浓度(在0~0.04 g/L)呈良好的线性关系,相关系数为0.996 9,加样回收率为100.5%(n=5) [2]。
[1]吴小红.鼠李糖脂在石油废水处理中的应用研究.硕士论文,2006
[2]唐仕荣等.生物表面活性剂产生菌发酵液中糖含量的测定[J].日用化学工
业.2005,35(6):96-398。