鼠李糖脂的提取与纯化

鼠李糖脂的提取与纯化：用1mol/LNaOH调培养48h发酵液(发酵时间待定)的pH值至8.0后8000r/min离心10min除菌体，上清液用36%HCl调pH值至2.0，然后以V(上清液):V(氯仿):V(甲醇)=3:2:1萃取15min，静置分层，收集下层液用旋转蒸发仪（50℃）浓缩至50ml，溶剂自然挥发干后即得纯鼠李糖脂。将鼠李糖脂溶于0.05mol/LNaHCO3溶液中得鼠李糖脂溶液[1]。

之前的这种提取方法可以得到纯的鼠李糖脂。

关于发酵液中鼠李糖脂的含量检测。有文献提到用电喷雾质谱ESI-MS来检测鼠李糖脂的含量。还有一种主要用分光光度计和标准曲线的方法来做。如下：一、材料、仪器及方法

鼠李糖、苯酚、浓硫酸、尿素、Na2HPO4、KI~P04、Mgs04·7H20、CaC12·2H20均为国产分析纯。紫外可见分光光度仪。

鼠李糖标准母液的配制：取鼠李糖于105℃烘干至衡重，精确称取25 mg 溶于250 mL容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀即得0.10 g/L鼠李糖标准母液。

苯酚溶液的配制：苯酚用水浴加热后溶解，称取100 g，加铝片0.10 g，氢氧化钠0.05 g，蒸馏收集182 ℃的馏分。取馏出液6.00 g，加水100 mL，置于棕色瓶中，备用。

样品的测定：种子培养基接种生物表面活性剂产生菌L Y4，发酵16 h，此时菌株处于对数生长中后期，以此时的发酵液作为种子液。接种量5％，200 r/min～240 r/min，发酵周期为2 d。将发酵液过滤除去过量的植物油（与他用的培养基有关，其中添加了植物油），准确移取滤液0.5 mL稀释至100.0 mL，取2.0 mL 稀释液(按鼠李糖标准曲线绘制中的方法显色)于482 nln处测其吸光度值，同时以蒸馏水作对照，由回归方程得鼠李糖的含量，鼠李糖的含量乘以相关系数3即为鼠李糖脂的产量。

二、鼠李糖标准曲线的绘制

分别移取鼠李糖标准母液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL、10.0 mL、12.5 mL、15.0 mL、17.5 mL、20.0 mL于50 mL容量瓶中，蒸馏水稀释定容。取2.0 mL标准溶液，以蒸馏水作对照，分别加入1.0 mL苯酚溶液，摇匀，迅速加入5.0 mL 浓硫酸，振摇5 min后于100℃水浴中加热15 min，而后置于冰水中迅速冷却10

min，于482 nnl处测其吸光度值，以吸光度值为纵坐标，鼠李糖质量浓度为横坐标，绘制标准曲线(图2)，线性回归得鼠李糖的标准曲线方程Y=16.514x+0.004 2，相关系数=0.996 9。在鼠李糖质量浓度0～0.04 g/L，该方法线性关系良好。

三、鼠李糖脂生物表面活性剂产生菌发酵液中总糖含量测定的较佳条件：

添加5.0 mL硫酸和1.0 rnL配好的苯酚溶液，100 ℃二水浴中显色15 min，迅速冷却后于482 nm进行测定。吸收值与其质量浓度(在0～0.04 g/L)呈良好的线性关系，相关系数为0.996 9，加样回收率为100.5％(n=5) [2]。

[1]吴小红.鼠李糖脂在石油废水处理中的应用研究.硕士论文,2006

[2]唐仕荣等.生物表面活性剂产生菌发酵液中糖含量的测定[J].日用化学工

业.2005,35(6):96-398