细胞培养基的选择
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特点： 1、胰蛋白酶的活力用解离酪蛋白的能力来表示，常用的有1： 125和1：250两种。 2、许多学者认为钙、镁离子和血清的存在都会降低胰蛋白酶的 活力。消化细胞时，加入一些血清（10%）或含血清的培养液，能终止消
化作用。
胰蛋白酶溶液配制： 称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，用少许DHanks 平衡盐（或PBS）溶液调成糊状，再 补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀，置 室温4 小时或冰箱过夜，不断搅拌振荡 次日，过滤除菌，分装入瓶中， -20℃保 存备用（以免分解失效），常用浓度为 0.25% （0.1%-0.5%）。 如果短期内要使用，就放置4℃冰箱。
超纯净水：
采用进口的RO膜、离子交换膜、离子交换树 脂、抛光核子级树脂、静音高压泵、电磁阀 等，产品性能得到最大化的保证； 分子生物学、生命科学、基因研究、组织培 养、试管婴儿、生物工程、动物细胞培养、培 养基制备、DNA测序、氨基酸分析、疾控中 心、水质检测中心、药检所、质检所、高校科 研等标准实验室及各种高端精密仪器用水。
RPMI1640种类
RPMI—1640（A） （不含谷氨酰胺、可高压灭菌） RPMI—1640（A）无酚红 （不含谷氨酰胺、高压灭菌） RPMI—1640 （含谷氨酰胺、除菌过滤灭菌）
DMEM细胞培养基
是在MEM培养基的基础上研制的 与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型 （低于4500g/L）和低糖型(低于1000g/L)。 高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较 快、附着较困难肿瘤细胞等。 DMEM（A）【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】 DMEM（H）【含谷氨酰胺、高糖型、除菌过滤灭 菌】 DMEM（L）【含谷氨酰胺、低糖型、除菌过滤灭 菌】。
细胞培养基应用选择：
选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： (1 ）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞 首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时 咨询。 (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可 以适合多种细胞。 (3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如 小鼠细胞株多选 RPMI1640 。
胶原酶液 ：
消化细胞间质，分离上皮细胞与胶原成分。 根据细胞类型选用不同型号胶原酶（Ⅰ-Ⅳ）。 新鲜配制、 37-38oC作用、时间控制。 EDTA不可与胶原酶联用，因胶原酶的消化作用依赖 于钙。 附：细胞外基质成分有胶原、纤粘蛋白（FN）、层粘连蛋 白（LN）、弹性蛋白等）
（四）、pH 调整液：
合成培养基的配制 ：
①滤器、滤膜、磁力搅拌器、天平、烧 杯、量筒（容量瓶）、贮液瓶（生理盐 水瓶）、瓶塞、注射器。 ②NaHCO3、NaOH、HCl、胎牛（小牛） 血清、青霉素、链霉素、三蒸水、培养 粉
Biblioteka Baidu
EDTA·4Na 溶液：
一种化学螯合剂，对细胞有一定的离散作用， 而且毒性小，价格低廉，使用方便 常用工作液浓度为0.02%。
注意：使用EDTA 处理细胞后，要用平衡盐液冲洗干 净，因残留的EDTA 会影响细胞生长（E-cadherin)
EDTA 溶液配制：用D-Hanks’ 平衡盐溶液溶解 后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，4℃冰箱保存
细胞培养基本技术2
第一部分：细胞培养用液及培养基
☆ 培养用液——水
平衡盐溶液 消化液 ☆ 培养基——天然培养基 合成培养基
第二部分内容：
原代细胞分离、培养（酶消化法和组织块培养法）。 细胞生长状况的观察。 培养细胞一代生长过程。 传代。 冻存与复苏。 细胞培养注意事项（如细胞污染）。 细胞培养的一些专业术语介绍（如细胞株、系， 上皮细胞型、成纤维细胞型）
三、培养基
培养基——维持体外细胞生存和生长的溶液 ● 天然培养基 取自动物 营养成分丰富；来源受限 • 血清： 小牛、胎牛、马、人（市售） 须灭活补体（56oC、30min）、- 20oC保存 质量差异大（无细菌、支原体、病毒） • 血浆 鸡血浆；现少单独使用
•合成培养基：
合成培养基：
合成培养基 一般需加血清等 成分 氨基酸、维生素、糖类、无机离 子、辅助成分
（七）、酚红：
大多数培养液中使用酚红作为pH 指示
红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色 表示碱性pH
七、酚红：
在一些特殊培养液中不含酚红
因为已有一些研究表明：酚红能模拟类固 醇激素（尤其是雌激素）样作用.
（八）、抗生素溶液：
抗生素使用种类与浓度：
工作浓度 储存温度 杀灭细菌 penicillin 100 u/ml -20℃ G(+) streptomycin 100 ug/ml -20℃ G(+) 、G(-) gentamicin 50 ug/ml -20℃ G(+) 、G(-)、支原体 amphotericin B 2.5 ug/ml -20℃ 真菌(二性霉素B） nystatin 50 ug/ml -20℃ 真菌（制霉菌素）
干粉培养基的配制
认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分， 常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES 等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨 酰胺，有些根据实验需要决定。 配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质 都要等培养基完全溶解之后才能添加。 配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 所用器皿应严格消毒。 配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
第一部分： 动物细胞用液的制备
细胞培养基本技术
细胞培养用液及培养基
☆ 培养用液——水
平衡盐溶液 消化液 ☆ 培养基——天然培养基 合成培养基
配液前准备：
①滤器、滤膜、磁力搅拌器、天平、烧 杯、量筒、注射器。 贮液瓶（生理盐水瓶）、瓶塞、15磅， 121℃，20分钟蒸气灭菌 ②NaHCO3、NaOH、HCl、胎牛（小牛） 血清、青霉素、链霉素、三蒸水、培养 基粉剂
（六）、谷氨酰胺补充液：
谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成 培养基中都要添加，由于谷氨酰胺在溶液中很 不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约 50%，所以都是在使用前添加. 配制好的培养液（含谷氨酰胺）在4℃放置2周 以上时，要重新加入原来量的谷氨酰胺，故需 单独配制谷氨酰胺，以便临时加入培养液内
使用终浓度为1-4mmol/L 一般配制为100倍浓缩液，即浓度为200mmol/L （29.22g/L），配制方法为 ： 谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成 200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后（应加温 30℃），过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存， 使用时可向100ml培养液中加入0.5-2ml谷氨酰 胺浓缩液，终浓度为1-4mmol/L
联合使用： 胰蛋白酶和EDTA联合使用可提高消化效 率(细胞与细胞之间的粘附分子需要Ca2+: cadherin, selectin, integrin). 但需注意EDTA不能被血清中和，消化后 要彻底清洗，否则细胞易脱壁。
联合使用： 常用的配制方法（0.25%trypsin0.04%EDTA溶液）： 胰蛋白酶0.25 g，EDTA0.04 g，PBS(-) 液100 mL，烧杯内磁力搅拌充分溶解， 0.22μm滤膜正压过滤，-20℃冰箱保 存。
抗生素溶液
通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗溶 液”。 青霉素主要是对革兰阳性菌有效，链霉素主要 对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝 大多数细菌污染。 培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升 100单位。 庆大霉素：每毫升100单位
抗菌素液（青、链霉素： ）：
青、链霉素：最终浓度为青霉素 100U/ml，链霉素100U/ml。 一般市售市售链霉素为100万U/瓶，将 其溶解在10ml Hanks液或三蒸水中，取 8ml链霉素液溶解80万U/瓶青霉素，即 成为青霉素、链霉素各1.0×105U/ml的 母液.使用时每100ml培养液中加 0.1ml，即成最终浓度为100U/ml。
●（一）水——营养物、代谢物溶于水中 调节渗透压、平衡pH值 普通自来水含大量杂质，不利于细胞生长 高度纯化水—— 离子交换水： 蒸馏水： 超纯净水： 三蒸、新鲜
离子交换水：
离子交换水中仍有一些非离子物质及有 机物，一般在细胞培养中较少使用。
双蒸水、三蒸水：
细胞培养用水必须非常纯净，不含有离 子和其他的杂质。 需要用新鲜的双蒸水、三蒸水
（二）、平衡盐液体（Balanced salt solution, BSS） ：
组织细胞培养中常用的基本液体，可以维持渗透 压、调节pH值、供给细胞生存所需的能量和无机 离子成分 如： PBS、 Hanks 用途：用于洗涤组织、细胞或配制消化液时等
平衡盐液体：
组成 无机盐、葡萄糖 种类： 氯化钠浓度、离子浓度、缓冲系统不同 Earle——NaHCO3含量高、缓冲能力高， 5%CO2平衡 Hanks——NaHCO3含量低、缓冲能力低，空 气平衡 D-Hanks——不含钙、镁离子 Dulbecco——含少量钙、镁离子 PBS ——磷酸缓冲系统
PBS（Phosphate-Buffered Sallines）
KCl KH2PO4 NaCl Na2HPO4·7H2O 0.20g 0.20g 8.00g 2.16g
DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Sallines）标准型
CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) KCl KH2PO4 MgCl2·6H2O NaCl Na2HPO4·7H2O 0.10g 0.20g 0.20g 0.10g 8.00g 2.16g
配液过滤无菌操作要求：
操作前无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬 面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟 操作时，小心取用无菌之实验物品，避免造 成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口。 在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周 围进行
一、细胞培养用液及培养液——水
NaHCO3 溶液
常用浓度为7.5%。配制时用三蒸水溶解 后，过滤除菌或高压灭菌，分装，4℃保 存
（五）、HEPES溶液：
一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，对细胞无 毒性 主要作用:防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件 下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅 速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持 pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES 使用终浓度一般为10-50mmol/L（分子量238.31）溶液 50 常配成1M 储存液：用20ml 双蒸水溶解4.76克HEPES， 过滤除菌或高压灭菌，分装小瓶，4℃保存。使用时可 保存。 向100ml培养液中加入2ml HEPES浓缩液，终浓度为 HEPES 20mmol/L
市场上可提供干粉培养基和液体培 养基
干粉培养基需使用者自己配制并灭菌，其优 点是价格便宜。缺点是配制过程繁琐，质量 不易控制 液体培养基是由专业厂家按标准规模化生 产，不仅质量得到保证，而且使用十分方便
● 种类 根据细胞特性选择（文献） 199——成分复杂，不常用；改良为109效果较199好 Eagle系列——MEM（Eagle最低必需培养液） BMEM（氨基酸改良） DMEM（增加成分）：高糖、低糖 RPMI1640——常用、悬浮细胞、多种细胞 Ham——F12：加微量元素等，可少用血清 单细胞、克隆化培养，无血清培养
作用： （1）在进行原代培养过程中需分散组织、细胞。 （2）在传代中要使细胞脱离附着的底物时均需使用消化液。 类型： 组织细胞培养中常用的消化液为胰蛋白酶、二乙烯四乙酸二钠 （EDTA）及胶原酶溶液，可以分别单独使用或混合使用。
胰蛋白酶液(Trypsin)
● 使细胞间的蛋白质水解、细胞分散培养细胞传代。 分离组织、细胞团消化所需时间和浓度与细胞特性相关
D-Hanks’ 平衡盐溶液(D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS)
KCl KH2PO4 NaCl NaCO3 Na2HPO4 D-Glucose Phenol Red 0.40g 0.06g 8.00g 0.35g 0.048g 1.00g 0.01g
（三）、消化液——分散组织、细胞 ——
化作用。
胰蛋白酶溶液配制： 称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，用少许DHanks 平衡盐（或PBS）溶液调成糊状，再 补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀，置 室温4 小时或冰箱过夜，不断搅拌振荡 次日，过滤除菌，分装入瓶中， -20℃保 存备用（以免分解失效），常用浓度为 0.25% （0.1%-0.5%）。 如果短期内要使用，就放置4℃冰箱。
超纯净水：
采用进口的RO膜、离子交换膜、离子交换树 脂、抛光核子级树脂、静音高压泵、电磁阀 等，产品性能得到最大化的保证； 分子生物学、生命科学、基因研究、组织培 养、试管婴儿、生物工程、动物细胞培养、培 养基制备、DNA测序、氨基酸分析、疾控中 心、水质检测中心、药检所、质检所、高校科 研等标准实验室及各种高端精密仪器用水。
RPMI1640种类
RPMI—1640（A） （不含谷氨酰胺、可高压灭菌） RPMI—1640（A）无酚红 （不含谷氨酰胺、高压灭菌） RPMI—1640 （含谷氨酰胺、除菌过滤灭菌）
DMEM细胞培养基
是在MEM培养基的基础上研制的 与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型 （低于4500g/L）和低糖型(低于1000g/L)。 高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较 快、附着较困难肿瘤细胞等。 DMEM（A）【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】 DMEM（H）【含谷氨酰胺、高糖型、除菌过滤灭 菌】 DMEM（L）【含谷氨酰胺、低糖型、除菌过滤灭 菌】。
细胞培养基应用选择：
选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： (1 ）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞 首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时 咨询。 (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可 以适合多种细胞。 (3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如 小鼠细胞株多选 RPMI1640 。
胶原酶液 ：
消化细胞间质，分离上皮细胞与胶原成分。 根据细胞类型选用不同型号胶原酶（Ⅰ-Ⅳ）。 新鲜配制、 37-38oC作用、时间控制。 EDTA不可与胶原酶联用，因胶原酶的消化作用依赖 于钙。 附：细胞外基质成分有胶原、纤粘蛋白（FN）、层粘连蛋 白（LN）、弹性蛋白等）
（四）、pH 调整液：
合成培养基的配制 ：
①滤器、滤膜、磁力搅拌器、天平、烧 杯、量筒（容量瓶）、贮液瓶（生理盐 水瓶）、瓶塞、注射器。 ②NaHCO3、NaOH、HCl、胎牛（小牛） 血清、青霉素、链霉素、三蒸水、培养 粉
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EDTA·4Na 溶液：
一种化学螯合剂，对细胞有一定的离散作用， 而且毒性小，价格低廉，使用方便 常用工作液浓度为0.02%。
注意：使用EDTA 处理细胞后，要用平衡盐液冲洗干 净，因残留的EDTA 会影响细胞生长（E-cadherin)
EDTA 溶液配制：用D-Hanks’ 平衡盐溶液溶解 后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，4℃冰箱保存
细胞培养基本技术2
第一部分：细胞培养用液及培养基
☆ 培养用液——水
平衡盐溶液 消化液 ☆ 培养基——天然培养基 合成培养基
第二部分内容：
原代细胞分离、培养（酶消化法和组织块培养法）。 细胞生长状况的观察。 培养细胞一代生长过程。 传代。 冻存与复苏。 细胞培养注意事项（如细胞污染）。 细胞培养的一些专业术语介绍（如细胞株、系， 上皮细胞型、成纤维细胞型）
三、培养基
培养基——维持体外细胞生存和生长的溶液 ● 天然培养基 取自动物 营养成分丰富；来源受限 • 血清： 小牛、胎牛、马、人（市售） 须灭活补体（56oC、30min）、- 20oC保存 质量差异大（无细菌、支原体、病毒） • 血浆 鸡血浆；现少单独使用
•合成培养基：
合成培养基：
合成培养基 一般需加血清等 成分 氨基酸、维生素、糖类、无机离 子、辅助成分
（七）、酚红：
大多数培养液中使用酚红作为pH 指示
红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色 表示碱性pH
七、酚红：
在一些特殊培养液中不含酚红
因为已有一些研究表明：酚红能模拟类固 醇激素（尤其是雌激素）样作用.
（八）、抗生素溶液：
抗生素使用种类与浓度：
工作浓度 储存温度 杀灭细菌 penicillin 100 u/ml -20℃ G(+) streptomycin 100 ug/ml -20℃ G(+) 、G(-) gentamicin 50 ug/ml -20℃ G(+) 、G(-)、支原体 amphotericin B 2.5 ug/ml -20℃ 真菌(二性霉素B） nystatin 50 ug/ml -20℃ 真菌（制霉菌素）
干粉培养基的配制
认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分， 常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES 等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨 酰胺，有些根据实验需要决定。 配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质 都要等培养基完全溶解之后才能添加。 配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 所用器皿应严格消毒。 配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
第一部分： 动物细胞用液的制备
细胞培养基本技术
细胞培养用液及培养基
☆ 培养用液——水
平衡盐溶液 消化液 ☆ 培养基——天然培养基 合成培养基
配液前准备：
①滤器、滤膜、磁力搅拌器、天平、烧 杯、量筒、注射器。 贮液瓶（生理盐水瓶）、瓶塞、15磅， 121℃，20分钟蒸气灭菌 ②NaHCO3、NaOH、HCl、胎牛（小牛） 血清、青霉素、链霉素、三蒸水、培养 基粉剂
（六）、谷氨酰胺补充液：
谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成 培养基中都要添加，由于谷氨酰胺在溶液中很 不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约 50%，所以都是在使用前添加. 配制好的培养液（含谷氨酰胺）在4℃放置2周 以上时，要重新加入原来量的谷氨酰胺，故需 单独配制谷氨酰胺，以便临时加入培养液内
使用终浓度为1-4mmol/L 一般配制为100倍浓缩液，即浓度为200mmol/L （29.22g/L），配制方法为 ： 谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成 200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后（应加温 30℃），过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存， 使用时可向100ml培养液中加入0.5-2ml谷氨酰 胺浓缩液，终浓度为1-4mmol/L
联合使用： 胰蛋白酶和EDTA联合使用可提高消化效 率(细胞与细胞之间的粘附分子需要Ca2+: cadherin, selectin, integrin). 但需注意EDTA不能被血清中和，消化后 要彻底清洗，否则细胞易脱壁。
联合使用： 常用的配制方法（0.25%trypsin0.04%EDTA溶液）： 胰蛋白酶0.25 g，EDTA0.04 g，PBS(-) 液100 mL，烧杯内磁力搅拌充分溶解， 0.22μm滤膜正压过滤，-20℃冰箱保 存。
抗生素溶液
通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗溶 液”。 青霉素主要是对革兰阳性菌有效，链霉素主要 对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝 大多数细菌污染。 培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升 100单位。 庆大霉素：每毫升100单位
抗菌素液（青、链霉素： ）：
青、链霉素：最终浓度为青霉素 100U/ml，链霉素100U/ml。 一般市售市售链霉素为100万U/瓶，将 其溶解在10ml Hanks液或三蒸水中，取 8ml链霉素液溶解80万U/瓶青霉素，即 成为青霉素、链霉素各1.0×105U/ml的 母液.使用时每100ml培养液中加 0.1ml，即成最终浓度为100U/ml。
●（一）水——营养物、代谢物溶于水中 调节渗透压、平衡pH值 普通自来水含大量杂质，不利于细胞生长 高度纯化水—— 离子交换水： 蒸馏水： 超纯净水： 三蒸、新鲜
离子交换水：
离子交换水中仍有一些非离子物质及有 机物，一般在细胞培养中较少使用。
双蒸水、三蒸水：
细胞培养用水必须非常纯净，不含有离 子和其他的杂质。 需要用新鲜的双蒸水、三蒸水
（二）、平衡盐液体（Balanced salt solution, BSS） ：
组织细胞培养中常用的基本液体，可以维持渗透 压、调节pH值、供给细胞生存所需的能量和无机 离子成分 如： PBS、 Hanks 用途：用于洗涤组织、细胞或配制消化液时等
平衡盐液体：
组成 无机盐、葡萄糖 种类： 氯化钠浓度、离子浓度、缓冲系统不同 Earle——NaHCO3含量高、缓冲能力高， 5%CO2平衡 Hanks——NaHCO3含量低、缓冲能力低，空 气平衡 D-Hanks——不含钙、镁离子 Dulbecco——含少量钙、镁离子 PBS ——磷酸缓冲系统
PBS（Phosphate-Buffered Sallines）
KCl KH2PO4 NaCl Na2HPO4·7H2O 0.20g 0.20g 8.00g 2.16g
DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Sallines）标准型
CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) KCl KH2PO4 MgCl2·6H2O NaCl Na2HPO4·7H2O 0.10g 0.20g 0.20g 0.10g 8.00g 2.16g
配液过滤无菌操作要求：
操作前无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬 面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟 操作时，小心取用无菌之实验物品，避免造 成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口。 在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周 围进行
一、细胞培养用液及培养液——水
NaHCO3 溶液
常用浓度为7.5%。配制时用三蒸水溶解 后，过滤除菌或高压灭菌，分装，4℃保 存
（五）、HEPES溶液：
一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，对细胞无 毒性 主要作用:防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件 下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅 速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持 pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES 使用终浓度一般为10-50mmol/L（分子量238.31）溶液 50 常配成1M 储存液：用20ml 双蒸水溶解4.76克HEPES， 过滤除菌或高压灭菌，分装小瓶，4℃保存。使用时可 保存。 向100ml培养液中加入2ml HEPES浓缩液，终浓度为 HEPES 20mmol/L
市场上可提供干粉培养基和液体培 养基
干粉培养基需使用者自己配制并灭菌，其优 点是价格便宜。缺点是配制过程繁琐，质量 不易控制 液体培养基是由专业厂家按标准规模化生 产，不仅质量得到保证，而且使用十分方便
● 种类 根据细胞特性选择（文献） 199——成分复杂，不常用；改良为109效果较199好 Eagle系列——MEM（Eagle最低必需培养液） BMEM（氨基酸改良） DMEM（增加成分）：高糖、低糖 RPMI1640——常用、悬浮细胞、多种细胞 Ham——F12：加微量元素等，可少用血清 单细胞、克隆化培养，无血清培养
作用： （1）在进行原代培养过程中需分散组织、细胞。 （2）在传代中要使细胞脱离附着的底物时均需使用消化液。 类型： 组织细胞培养中常用的消化液为胰蛋白酶、二乙烯四乙酸二钠 （EDTA）及胶原酶溶液，可以分别单独使用或混合使用。
胰蛋白酶液(Trypsin)
● 使细胞间的蛋白质水解、细胞分散培养细胞传代。 分离组织、细胞团消化所需时间和浓度与细胞特性相关
D-Hanks’ 平衡盐溶液(D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS)
KCl KH2PO4 NaCl NaCO3 Na2HPO4 D-Glucose Phenol Red 0.40g 0.06g 8.00g 0.35g 0.048g 1.00g 0.01g
（三）、消化液——分散组织、细胞 ——