细胞培养基的选择
动物细胞培养的注意事项
动物细胞培养的注意事项动物细胞培养是生物学研究和医学实验中重要的工具之一。
在进行动物细胞培养时，需要注意以下几个方面的问题，以确保实验的顺利进行和结果的准确性。
1. 培养基的选择选择适当的培养基是动物细胞培养的基础。
不同种类的动物细胞对培养基的要求不同，因此在培养细胞前需要了解所使用细胞的特点，选择合适的培养基。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640等，可以根据实验需求添加适当的补充物。
2. 细胞的来源细胞的来源对实验结果有重要影响。
通常，细胞可以从动物组织中分离得到，也可以通过购买商业化的细胞株获得。
在选择细胞来源时，需要考虑细胞的纯度、稳定性和应用范围等因素。
3. 细胞的处理和传代在进行细胞培养时，需要注意细胞的处理和传代方法。
细胞的处理包括细胞的分离、传代和冻存等步骤。
分离细胞时应注意使用适当的酶或缓冲液，避免对细胞造成损伤。
传代时要控制细胞的密度和培养时间，避免细胞过度增长或老化。
4. 培养环境的控制细胞的培养环境对细胞的生长和功能表达有重要影响。
在培养细胞时，需要控制培养箱的温度、湿度和二氧化碳浓度等因素。
通常细胞培养温度为37摄氏度，CO2浓度为5%。
同时，还需要注意培养器具和培养基的无菌操作，避免细胞受到外源性微生物的污染。
5. 细胞的检测和鉴定在进行动物细胞培养时，需要对细胞进行检测和鉴定，以确保细胞的纯度和功能。
常用的细胞检测方法包括形态学观察、细胞计数、细胞周期分析和免疫细胞化学等。
此外，还可以使用PCR和酶切等分子生物学方法对细胞进行鉴定。
6. 细胞的存储和传输细胞的存储和传输是细胞培养的常用操作。
存储细胞时，可以使用液氮冻存或干冰冻存等方法，注意选择适当的冻存液和冻存温度。
传输细胞时要注意包装和运输条件，避免细胞受到振动和温度变化等因素的影响。
7. 实验的伦理和安全在进行动物细胞培养实验时，需要遵守伦理规范和安全操作。
尊重动物权益，遵循实验动物使用的伦理原则。
同时，要注意实验室的安全措施，如佩戴实验手套、口罩和实验服，避免对自身和他人造成伤害。
衣原体的细胞培养方法
衣原体的细胞培养方法引言：衣原体是一类常见的细菌性病原体，它可以感染人体的上皮细胞，引发多种疾病。
为了研究衣原体的生物学特性、发病机制以及寻找有效的治疗方法，科学家们进行了大量的细胞培养实验。
本文将介绍衣原体的细胞培养方法，包括培养基的选择、细胞的处理和培养条件的调控等方面。
一、培养基的选择衣原体的细胞培养需要特定的培养基，常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640和MEM等。
这些培养基中含有丰富的营养物质，如氨基酸、葡萄糖、维生素等，可以提供衣原体生长所需的营养物质。
同时，培养基中还需要添加适当的抗生素，如青霉素、链霉素等，以防止细菌和真菌的污染。
二、细胞的处理在进行衣原体的细胞培养前，需要对细胞进行处理。
一般情况下，我们可以选择人类上皮细胞作为培养细胞。
首先，将细胞接种在含有培养基的培养皿中，并进行预培养，使细胞附着在培养皿上。
接着，使用抗生素处理细胞，以杀死潜在的细菌和真菌。
最后，用PBS缓冲液清洗细胞，以去除培养基中的抗生素和细胞碎片。
三、衣原体的感染在细胞处理完成后，可以将衣原体接种到培养皿中，使其感染细胞。
首先，将衣原体悬液加入培养基中，将其与细胞充分接触。
接着，将培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度，使衣原体能够在细胞内生长和复制。
通常情况下，衣原体的感染需要一定的时间，具体的感染时间可以根据实验的需要进行调整。
四、培养条件的调控为了使衣原体能够正常生长和复制，需要对培养条件进行调控。
首先，保持适宜的温度和湿度，一般情况下，37摄氏度和5%二氧化碳是较为常用的条件。
其次，定期更换培养基，以提供充足的营养物质。
此外，还可以添加一些辅助因子，如胎牛血清和胰蛋白酶等，促进衣原体的生长和复制。
五、细胞的观察和检测在进行衣原体的细胞培养过程中，我们可以通过显微镜观察细胞的形态和数量变化，以判断衣原体的感染情况。
此外，还可以使用PCR、免疫荧光染色等方法，检测衣原体的存在和复制程度。
如何选择合适的培养基和培养条件
如何选择合适的培养基和培养条件在生物科学研究中，细胞培养是非常重要的实验手段之一。
通过培养细胞，我们可以对其生长、分化和生物活性等进行深入的研究。
而要成功地培养细胞，选择合适的培养基和培养条件是至关重要的。
首先，我们需要了解细胞的类型和特性。
不同种类的细胞在生理和生化特性上存在差异，因此需要针对不同的细胞类型选择相应的培养基。
通常情况下，培养基可以分为无血清培养基和含血清培养基两类。
无血清培养基是指不含动物血清成分的培养基，主要适用于原代细胞的培养以及特殊要求的细胞系。
而含血清培养基则包含动物血清中的多种因子和营养物质，适用于细胞系的连续传代和大规模培养。
其次，在选择培养基时，需要考虑到细胞的营养需求和生长要求。
细胞需要获得充足的营养物质来维持其生长和增殖。
常见的培养基成分有运输生理盐水、糖类、氨基酸、维生素、抗生素等。
此外，还需要注意培养基的pH值和渗透压等因素，以保持培养环境的稳定性。
在细胞培养的过程中，我们还需要为细胞提供适当的温度、湿度和气体环境。
一般来说，细胞的适宜生长温度为37摄氏度，而湿度应保持在90%左右。
另外，细胞还需要充足的氧气和二氧化碳供应，以维持其正常代谢活动。
此外，细胞培养中还需要注意细胞的纯度和无菌性。
为了确保细胞的纯度，可以通过细胞的形态特征、生长速度和表面标记物等进行鉴定。
而为了保持培养环境的无菌性，我们需要严格遵守无菌操作的要求，并使用高质量的培养器具和培养基。
在选择培养基和培养条件时，还需要考虑到实验的目的和需求。
有些实验可能要求细胞的生长周期加快，可以选择富含生长因子和促进细胞增殖的培养基。
而有些实验则需要细胞的分化或特定功能的表达，需要通过添加不同的因子和调节培养条件来实现。
综上所述，选择合适的培养基和培养条件是成功进行细胞培养的关键。
针对不同的细胞类型和实验需求，我们需要根据细胞的特性和要求来选择合适的培养基，并提供适当的培养条件。
只有在确保细胞获得足够的营养和生长环境的情况下，我们才能获得可靠的实验结果，并推动细胞生物学研究的进一步发展。
细胞培养基简介
依据实验目的选择培养基
增殖实验
选择能够支持细胞快速增殖的培养基，以便在短时间 内获得大量细胞。
诱导分化实验
选择能够诱导细胞分化的培养基，以便观察细胞分化 过程和分化后的表型特征。
基因转染实验
选择能够支持基因转染的培养基，以便将外源基因导 入细胞并观察其对细胞表型的影响。
优化培养基配方
调整营养成分
较高。
无血清培养基
总结词
无血清培养基是指在培养基中不添加任何动物来源的血清，完全由化学成分合成的培养基。
详细描述
无血清培养基不含动物来源的血清，而是通过添加多种化学成分来模拟血清的功能，如添加蛋白质、生长因子等 。无血清培养基适用于生产疫苗、单克隆抗体等生物制品，因为其成分明确、质量控制方便，且能够避免血清批 次差异对细胞培养的影响。
再生医学
细胞培养基在再生医学领域也有广泛应用，如组织工程、器官再生等 。
发展趋势
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新型细胞培养基的开发
随着生物技术的不断发展，对新型细胞培养基的 需求越来越高，如无血清培养基、个性化培养基 等。
细胞培养基的个性化定制
根据不同细胞类型和实验需求，细胞培养基需要 进行个性化定制，以满足特定实验条件和生产需 求。
细胞培养基市场的主要参与者包括生 物技术公司、科研机构和制药企业等 。
细胞培养基市场主要集中在美国、欧 洲和亚太地区，其中亚太地区增长最 快。
应用领域
生物制药
细胞培养基是生物制药生产过程中必不可少的原料之一，用于大规 模培养细胞，生产重组蛋白、单克隆抗体等生物药物。
科学研究
细胞培养基广泛应用于生命科学、医学、药学和农业等领域的基础 研究和应用研究，如肿瘤研究、免疫学研究、干细胞研究等。
选择培养基
选择培养基引言：在生物科学研究和实验室工作中，选择正确的培养基是非常重要的。
培养基是供养细胞、微生物或其他生物体进行生长和繁殖的培养环境。
不同的生物体需要不同的培养基来提供所需的营养物质和环境条件。
本文将探讨选择培养基的重要性以及如何根据特定需求选择合适的培养基。
选择培养基的重要性：选择适当的培养基对于生物体的健康生长和研究结果的准确性至关重要。
不合适的培养基可能会导致细胞死亡、微生物感染、菌落不清晰等问题。
培养基的选择取决于多个因素，包括生物体的类型、目标实验的目的和特定的研究要求。
如何选择培养基：1.了解生物体类型：首先要了解要培养的生物体类型，例如细胞、微生物还是其他生物体，这将有助于确定选择培养基的范围。
不同类型的生物体具有不同的生长需求和生态环境。
2.了解生物体的特性：了解生物体的特性对于选择培养基至关重要。
例如，细胞培养通常需要富含营养物质的培养基，而微生物培养可能需要更适合其生理特性的培养基。
3.考虑营养物质和环境条件：根据所需的营养物质和环境条件来选择培养基。
一般来说，培养基中包含的主要成分包括碳源、氮源、维生素和矿物质等。
不同的生物体对这些成分的需求不同，因此需要根据特定需求来选择合适的培养基。
4.考虑生长因子和添加物：一些生物体在生长过程中需要特殊的生长因子或添加物来促进其生长和繁殖。
这些因子可以是激素、生长因子、抗生素等。
根据所研究的生物体类型和特性，选择含有适当生长因子和添加物的培养基。
5.考虑杂质和污染的风险：一些培养基可能带有杂质或受到污染，这可能会影响实验结果的准确性。
因此，选择质量良好、纯度高的培养基非常重要。
避免使用已过期的培养基，以及对培养基进行适当的质量控制和消毒处理，以减少污染的风险。
常用的培养基类型：根据生物体的类型和特性，人们开发了许多常用的培养基。
下面列举了几种常见的培养基类型：1.液体培养基：液体培养基是一种水溶性培养基，适用于细胞培养和微生物培养。
hmc3细胞培养技巧
hmc3细胞培养技巧
HMC3细胞是一种人类脑胶质瘤细胞系，广泛应用于神经科学研究。
在进行HMC3细胞的培养过程中，需要注意以下几个
技巧。
1. 培养基的选择：HMC3细胞适合在DMEM/F12培养基中进
行培养，其中含有10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素/链霉素。
同时，可以添加一些生长因子，如EGF和FGF。
2. 细胞的传代：当HMC3细胞达到80%的密度时，可以进行
传代。
首先用PBS缓冲液洗涤细胞，然后加入0.25%的胰蛋
白酶进行消化。
消化时间一般为3-5分钟，视情况而定。
消化后加入培养基停止消化，离心收集细胞。
将细胞按照比例分配到新的培养皿中，加入新的培养基进行培养。
3. 细胞的冻存：在进行HMC3细胞的冻存前，需要保证细胞
处于最佳状态。
可以用PBS缓冲液洗涤细胞，然后加入0.25%的胰蛋白酶进行消化。
消化后加入培养基停止消化，离心收集细胞。
将细胞用冷冻液冷冻保存。
4. 细胞的恢复：在进行HMC3细胞的恢复前，需要将冷冻液
快速解冻至37℃。
然后将细胞转移到新的培养皿中，加入DMEM/F12培养基进行培养。
5. 细胞的检测：在进行HMC3细胞的检测时，可以采用荧光显微镜观察细胞的形态变化。
同时，也可以采用PCR或Western Blot等技术检测细胞中特定基因或蛋白的表达情况。
总之，在进行HMC3细胞的培养过程中，需要注意以上几个技巧。
只有保证每个步骤都正确无误，才能获得高质量的实验结果。
干细胞培养过程中的培养基选择与调整技巧
干细胞培养过程中的培养基选择与调整技巧干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，具有重要的研究和应用前景。
在干细胞培养过程中，培养基的选择和调整是非常关键的，可以直接影响到干细胞的生长、增殖和分化能力。
本文将介绍干细胞培养过程中培养基的选择和调整技巧。
一、培养基的选择干细胞的培养基通常包括基础培养基和补充物。
基础培养基提供了细胞生长所需的基本营养物质，而补充物可以调整培养基的成分，满足干细胞的特定需求。
常用的基础培养基主要包括无血清培养基和血清培养基。
无血清培养基通常采用动物血清替代物（如胎牛血清替代物，FBS），优点是能够降低培养基中的细菌和病毒污染风险，减少样品间的批次差异。
但无血清培养基的复杂配方和高成本是制约其广泛应用的主要因素。
相比之下，血清培养基更容易获取和使用，但存在许多负面因素，如潜在的污染风险和困扰实验结果的变异性。
当选择基础培养基时，需要考虑以下几个因素：1. 细胞类型：不同类型的干细胞对培养基成分的需求是不同的，如胚胎干细胞和间充质干细胞等对细胞因子和生长因子的需求有所差异。
2. 应用需求：如果是进行分化研究，需要选择适合特定分化类型的培养基；如果是进行维持和增殖，需要选择适合细胞增殖的培养基。
3. 实验目的：如果是进行基础研究，可以选择商业化的基础培养基；如果是进行应用研究或临床转化，可以选择自定义培养基。
在选择补充物时，需要根据细胞类型和实验需求来确定。
常用的补充物包括细胞因子、生长因子、维持因子和激素等。
补充物的种类和浓度应根据实验的需要进行调整。
二、培养基的调整技巧1. pH值的调整：维持适宜的pH值对于培养基的稳定性和细胞的生长非常重要。
在常温下，培养基的pH值通常保持在7.2-7.4之间。
可以通过添加缓冲液来调整培养基的pH值。
2. 渗透压的调整：细胞在维持稳态的过程中对渗透压非常敏感。
如果渗透压过高或过低，都会影响细胞的正常生理功能。
调整培养基的渗透压可以通过添加渗透剂（如蔗糖或甘露醇）来实现。
hacat细胞培养注意事项
hacat细胞培养注意事项
Hacat细胞是一种人类皮肤角质细胞系，广泛应用于皮肤生理和病理相关研究中。
下面是Hacat细胞培养注意事项：
1. 培养基的选择：选择适合Hacat细胞生长的培养基，常用的培养基包括DMEM/F12、DMEM等，其中添加10%的胎牛血清能够提高细胞生长速率和细胞存活率。
2. 培养条件的控制：Hacat细胞在37℃、5% CO2的环境下生长，要保证无菌操作，避免细胞污染。
3. 细胞的传代：Hacat细胞传代次数过多容易引起细胞凋亡和变异，建议在80%~90%的细胞密度下进行传代。
传代时需用胰酶等消化酶将细胞从培养瓶中剥离，建议每次传代不超过三次。
4. 细胞的冻存：Hacat细胞可在低温下冻存保存，但要注意细胞密度不宜过低，最好在80%~90%的密度下进行冻存，并使用10% DMSO等保护剂冻存，避免细胞死亡或变异。
5. 细胞的检测：为保证Hacat细胞的纯度和鉴定，建议进行细胞形态观察、细胞生长曲线分析、细胞标记物检测等方法进行检测。
同时，也要保存好细胞的相
关信息和记录，便于日后查阅和使用。
以上是Hacat细胞培养注意事项的一些基本要求，实验室研究人员需要严格按照操作规范进行操作，以保证实验结果的准确性和可重复性。
b细胞培养方法
b细胞培养方法引言：b细胞是一类免疫细胞，具有产生抗体的能力，对于研究免疫相关疾病以及生物药物的开发具有重要意义。
b细胞的培养方法是研究b细胞生物学的基础，本文将介绍常用的b细胞培养方法。
一、细胞培养基的选择b细胞培养需要选择适合其生长的培养基。
常用的培养基包括RPMI 1640、DMEM等，其中RPMI 1640是最常用的培养基之一，含有适宜的营养物质和生长因子，能够提供b细胞生长所需的条件。
二、细胞的传代b细胞在培养过程中会不断增殖，因此需要定期进行细胞的传代。
传代的目的是保持细胞的生长状态和功能，并防止细胞的老化和突变。
传代前需要将细胞从培养瓶中取出，进行细胞计数，然后将细胞按照一定比例转移到新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基。
三、细胞的分离和纯化b细胞培养过程中常常需要对细胞进行分离和纯化，以获取纯度较高的b细胞。
最常用的分离方法是通过抗体标记细胞表面的B细胞特异性标志物，如CD19、CD20等，然后使用磁珠或流式细胞术对标记细胞进行分离。
此外，还可以利用密度梯度离心法或细胞排序仪等方法进行细胞的分离和纯化。
四、细胞激活和扩增在一些研究中，需要对b细胞进行激活和扩增，以增加其数量和活性。
常用的激活方法包括使用抗CD40抗体、细胞因子如IL-4、IL-21等刺激b细胞。
激活后的b细胞可以通过细胞培养和传代的方法进行扩增，以获得足够数量的细胞用于后续实验。
五、细胞的保存和冻存为了长期保存b细胞，可以使用液氮冷冻保存方法。
首先将细胞转移到含有冷冻保护剂的冻存液中，然后缓慢降温至-80℃或液氮温度，最后存放在液氮罐中。
在需要使用时，可以将细胞快速解冻并进行培养。
六、细胞培养条件的优化为了提高b细胞培养的效果，可以对培养条件进行优化。
例如，可以调整培养基中的营养物质和生长因子的浓度，优化细胞传代的时间和比例，以及控制培养环境的温度、湿度和CO2浓度等。
此外，还可以添加一些辅助因子，如细胞因子、抗生素等，以提高细胞的存活率和增殖速度。
各种细胞培养基的区别及应用
各种细胞培养基的区别及应用细胞培养基是用于体外培养细胞的一种重要介质，它可以为细胞提供生长所需的营养物质、生长因子、激素等。
根据不同的需求和应用领域，细胞培养基有很多种类和特点。
本文将对细胞培养基的区别及应用进行详细介绍，以帮助大家更好地了解和选择合适的细胞培养基。
一、细胞培养基的概述细胞培养基的发展历程可以追溯到上世纪50年代，随着生物科学研究的不断深入，细胞培养技术得到了广泛应用。
细胞培养基的研究和应用不仅为生物学基础研究提供了有力支持，还为医学、农业、工业等领域创造了巨大价值。
二、细胞培养基的区别1.基础培养基与专用培养基基础培养基：含有细胞生长所需的基本营养物质，如糖、氨基酸、维生素等，适用于大多数细胞的培养。
常见的基础培养基有DMEM、RPMI-1640、MEM等。
专用培养基：针对特定类型的细胞设计，具有较高的特定成分和较窄的营养成分范围，可以满足某些细胞对特定营养物质的需求。
如HEK293细胞培养基、MCF-7细胞培养基等。
2.天然培养基与合成培养基天然培养基：来源于动物血清、血浆等天然物质，含有丰富多样的生长因子、激素等，具有较高的生物活性。
常见的天然培养基有FBS（胎牛血清）、ABC（人血清）等。
合成培养基：通过化学合成或重组技术制备，成分明确、可定制。
可以根据细胞需求添加不同的生长因子、激素等，具有较高的可控性。
如MED64培养基、Synthemax培养基等。
3.液体培养基与固体培养基液体培养基：含水量较高，细胞在其中可以自由悬浮和生长。
常见的液体培养基有DMEM/F12、RPMI-1640等。
固体培养基：在液体培养基中添加固体成分，如琼脂、纤维素等，使细胞可以在固体表面附着生长。
常见的固体培养基有agarose、matrigel等。
4.不同种类的细胞对培养基的需求不同种类的细胞对培养基的需求不同，例如：- 淋巴细胞培养：需要较高浓度的氨基酸、维生素和血清；- 神经细胞培养：需要添加神经营养因子、生长因子等；- 肿瘤细胞培养：需要较高浓度的糖和血清。
rko细胞培养事项
rko细胞培养事项RKO细胞培养事项细胞培养是生物学研究中重要的实验手段之一，可以用于细胞生物学、生物医学研究等领域。
RKO细胞是一种常用的人类肠癌细胞系，在研究肠癌的发生机制、细胞信号传导等方面具有重要意义。
为了保证RKO细胞的正常生长和研究的可靠性，以下是RKO细胞培养的一些事项。
1. 培养基选择：RKO细胞通常使用DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基，其中添加10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素（如青霉素和链霉素）。
培养基中的成分和浓度要根据实验需求进行调整，以保证细胞的正常生长和功能。
2. 细胞传代：细胞在培养过程中会不断增殖，当细胞密度达到一定程度时，需要进行传代。
传代的目的是避免细胞过度生长导致细胞死亡和功能异常。
传代时，需要用1×PBS洗涤细胞，加入胰蛋白酶（Trypsin）消化细胞，然后用培养基停止消化，离心沉淀细胞，重新分装到新的培养皿中。
3. 培养条件：RKO细胞的培养条件要求在37℃恒温培养箱中，保持5% CO2含量的湿度控制环境中。
细胞培养箱要定期检查温度和湿度的稳定性，以确保细胞的正常生长。
此外，细胞培养箱中的培养皿要定期检查是否有污染或异物，及时更换。
4. 细胞检测：为了保证RKO细胞的纯度和功能，需要定期对细胞进行检测。
常用的方法包括细胞形态观察、细胞活力检测、染色体核型分析等。
检测结果应与RKO细胞参考文献数据进行对比，确保细胞的一致性和可靠性。
5. 培养皿处理：培养皿的选择和处理对细胞的生长和培养质量影响很大。
常用的培养皿有塑料培养皿、玻璃培养皿等。
在使用培养皿之前，要先用70%乙醇消毒，然后用无菌技术将培养基加入培养皿中，避免细菌和真菌的污染。
6. 培养液更换：培养基中的营养物质和生长因子会随着细胞生长消耗，同时还会产生代谢产物和废物。
为了保证细胞的正常生长和功能，需要定期更换培养基。
通常情况下，每2-3天更换一次培养基。
细胞培养软基质和硬基质的标准
细胞培养软基质和硬基质的标准细胞培养是一项重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物筛选和组织工程等领域。
在细胞培养中，选择合适的培养基质对于细胞的生长、增殖和分化起着至关重要的作用。
软基质和硬基质是两种常见的细胞培养基质，它们具有不同的特点和应用场景。
软基质是一种具有弹性和柔软性的基质，常见的软基质包括明胶、海藻酸盐和聚乙二醇等。
软基质具有良好的生物相容性和生物降解性，能够提供细胞黏附和生长所需的支持。
软基质的弹性和柔软性使得细胞能够在其上形成三维结构，模拟体内组织的微环境，有利于细胞的分化和组织工程的构建。
此外，软基质还能够调控细胞的形态和功能，促进细胞的增殖和分化。
因此，软基质在组织工程和再生医学中得到了广泛的应用。
然而，软基质也存在一些局限性。
由于其柔软的特性，软基质在细胞培养过程中容易发生变形和收缩，影响细胞的生长和分化。
此外，软基质的机械性能较差，无法提供足够的支持力，限制了细胞的扩张和组织工程的构建。
因此，在某些需要较高机械强度和稳定性的应用中，软基质可能不适用。
相比之下，硬基质是一种具有较高机械强度和稳定性的基质，常见的硬基质包括玻璃、塑料和金属等。
硬基质能够提供稳定的支持力，防止细胞的变形和收缩，有利于细胞的生长和分化。
此外，硬基质的机械性能较好，能够模拟体内组织的硬度，对于一些需要模拟体内组织刚度的研究具有重要意义。
因此，硬基质在细胞力学研究和生物材料领域得到了广泛的应用。
然而，硬基质也存在一些问题。
由于其较高的硬度，硬基质对细胞的黏附和生长能力有一定的限制。
此外，硬基质的生物相容性和生物降解性较差，可能引起细胞的免疫反应和异物反应。
因此，在一些需要模拟体内组织柔软性和生物相容性的应用中，硬基质可能不适用。
综上所述，软基质和硬基质在细胞培养中具有各自的特点和应用场景。
在选择细胞培养基质时，需要根据具体的研究目的和应用需求来确定。
对于需要模拟体内组织的柔软性和生物相容性的研究，可以选择软基质；对于需要模拟体内组织的硬度和机械强度的研究，可以选择硬基质。
细胞培养知识
11.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？
二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
12.制备 lipid-DNA的方法会影响转染效率吗？
10.Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差别?
Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清执行的所有的标准检验程序，而且除了这些标准检测，Certified胎牛血清还有如下一些附加的检测：End-Point Determination of Endotoxin Content噬菌体检验生物化学检测 激素的检测血红蛋白检测Sf9 细胞生长促进及方法学检测
15.我可以使用固体形式的Murashige Skog 培养基吗？
如果使用固体形式的培养基，需要加入琼脂。琼脂加入前要先灭菌。应该避免MS培养基的直接灭菌，应该高压灭菌琼脂溶液，然后把融化的琼脂溶液加入到MS培养基中。
16. 20℃下配制的缓冲液，在较高或较低的温度下PH值会改变吗？
6.如何用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
7.如何消除组织培养的污染？
当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
raw细胞培养方法
raw细胞培养方法细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，它允许研究人员在控制条件下观察和研究细胞的生长、增殖、分化以及与环境之间的相互作用。
在细胞培养中，raw细胞是常用的细胞系之一。
本文将介绍raw细胞培养的方法，包括准备培养基和培养器具、细胞的分离和传代，以及培养条件的控制等。
一、准备培养基和培养器具1.1 选择适合raw细胞培养的细胞培养基。
在raw细胞培养中，常用的培养基包括DMEM（Dulbecco最小培养基）、RPMI 1640（Roswell Park细胞文化基）、FBS（胎牛血清）等。
根据实验需求，可以添加适量的抗生素如青霉素和链霉素等来防止细菌污染。
1.2 准备培养器具。
培养器具包括培养皿、培养瓶、离心管、培养箱等。
这些器具必须经过高温高压灭菌处理，以确保无菌状态。
二、细胞的分离和传代2.1 准备细胞原料。
选择合适的动物（如小鼠）进行实验，将其牺牲并收集组织样本（如脾脏、肾脏等）。
将组织样本放入含有消化酶（如胰蛋白酶）和酶解缓冲液（如PBS）的离心管中，进行组织分离。
2.2 细胞的分离。
将组织分离液通过过滤网筛除多余的细胞块和组织残渣。
再利用无菌注射器将细胞分离液吸入离心管中，在低速离心下将细胞沉淀。
2.3 细胞的传代。
通过显微镜观察细胞密度和活力，根据需求调整培养基中细胞的密度。
将细胞悬液分装到新的培养器具中，添加新鲜的培养基，进而使细胞继续增殖生长。
三、培养条件的控制3.1 培养温度和湿度的控制。
对于raw细胞的培养，通常在37摄氏度和5%二氧化碳气氛下进行。
可以通过培养箱、CO2孵化器等仪器设备来控制培养温度和湿度。
3.2 培养基的更换和补充。
细胞在培养基中不断耗用营养物质，同时释放代谢产物。
为了保证细胞的生长和增殖，必须定期更换培养基，并添加适量的胎牛血清、细胞因子等营养物质。
3.3 细胞的监测和形态观察。
在培养过程中，需要对细胞的形态和状态进行监测。
利用显微镜观察细胞的形状、大小、颜色等变化，及时评估细胞的健康状况。
干细胞的培养与传代方法
干细胞的培养与传代方法干细胞是一类能够自我更新并具有潜能分化成多种细胞类型的特殊细胞。
它们具有许多潜在的应用价值，例如再生医学、疾病治疗和药物筛选等。
干细胞的培养和传代方法是研究者在实验室中进行干细胞研究所必需的技术。
本文将介绍干细胞的培养和传代方法，以帮助读者更好地理解和掌握这一领域的关键技术。
一、干细胞培养条件的优化干细胞培养的基本条件包括培养基、培养器具和培养环境等。
为了获得稳定和高质量的干细胞培养，研究者需要优化这些条件。
1.培养基的选择：干细胞培养基的选择是干细胞培养的基础。
目前常用的培养基包括无血清培养基和有血清培养基。
无血清培养基可以避免血清来源的不稳定性和免疫原的潜在风险，但其成本较高，且需要较复杂的配方和条件。
有血清培养基通常使用胎牛血清，成本较低且易于获取，但由于血清来源的不稳定性，存在一定的批次差异和细胞应激的风险。
对于特定类型的干细胞，研究者可以选择不同的培养基，以满足其特定的培养需求。
2.培养器具的选择：培养器具也是干细胞培养的重要因素。
常用的培养器具包括细胞培养瓶、培养皿和多孔膜培养器。
对于干细胞的培养，培养器具的表面要求较为特殊，以提供良好的附着和增殖环境。
通常，干细胞培养中常使用带有特殊表面修饰的培养器具，如胶原被修饰的培养瓶。
此外，可使用特制的细胞培养器具，如培养皿的凹槽和凹槽，以便更好地控制干细胞的分裂和传代。
3.培养环境的优化：干细胞对培养环境的要求较高，包括适当的温度、湿度和气氛等。
通常，干细胞培养需要在37摄氏度的恒温培养箱中进行，保持水分通常通过加入适当量的培养基或者使用水合舱实现。
对于某些特定类型的干细胞，如神经干细胞，还需要提供一定的气氛，如增加二氧化碳和氧气浓度等。
二、干细胞传代的方法干细胞在进行长期培养时需要进行传代，以维持其生长状态和增殖能力。
干细胞传代是一种将干细胞从初始培养器中移至新的培养器中的过程。
1.胶原酶消化法：胶原酶消化法是一种常用的干细胞传代方法。
动物细胞培养的原理
动物细胞培养的原理动物细胞培养是利用无菌条件下，提供适当的培养基、温度、湿度和气体组成等因素，通过对细胞培养的控制和调节，实现细胞的生长、增殖和分化的一种实验室技术。
其原理主要涉及细胞培养基、细胞分裂与生长、传代和分化等方面。
1.细胞培养基的选择细胞培养基是提供细胞正常生长和繁殖所必需的营养物质和蛋白质的培养液。
细胞培养基通常由无机盐、有机物、氨基酸、维生素、激素和生长因子等组成。
细胞需求的每个组分的含量和质量比例将直接影响细胞的生长和分化。
2.细胞分裂与生长细胞通过分裂增殖，这是细胞培养的基础。
细胞分裂包括有丝分裂和无丝分裂两种类型。
一般情况下，细胞会分别经历细胞周期的G1、S、G2和M期，然后进入有丝分裂和细胞分裂。
细胞培养时，重要的因素包括培养基中的营养物质浓度、pH、温度和气体环境等，这些因素的调节会直接影响细胞的分裂和生长。
3.传代传代是指将培养物中已生长到一定程度的细胞分离出来，移植到新的培养皿或上清液中的操作。
传代的目的是维持细胞培养的持续性。
传代的方法有机械传代和酶消化传代两种。
在传代过程中，需要注意细胞的状态、营养物质的浓度和质量比例，以及培养的条件和时间等因素。
4.细胞分化细胞分化是指细胞从未分化状态向具有特定功能和结构的细胞类型转变的过程。
细胞分化可以通过改变培养基的成分、添加适当的化学物质或生长因子来实现。
在体外细胞培养中，当细胞分化成功时，细胞可以表现出与原来体内细胞相似的形态、功能和遗传特征。
总的来说，动物细胞培养原理是通过提供适当的培养基和提供细胞正常生长和繁殖所必需的营养物质和蛋白质的培养液等条件，调节细胞的分裂、生长、传代和分化等过程，从而实现对动物细胞的长期培养和研究。
通过细胞培养技术，我们可以更好地了解细胞的生理和代谢过程，探索疾病发生机制和药物的研发等。
细胞合适的培养基
细胞合适的培养基培养细胞的重要环节有很多，其中很重要的一步就是为细胞选择适合的生长环境，为其选择成分适合又营养丰富的细胞培养基。
细胞培养基是供给细胞营养、维持细胞生长和增殖的多种营养物质的混合物，种类一般包括经典/基础培养基、无血清培养基以及化学成分确定的培养基等。
这其中又以经典/基础培养基最为常用。
经典/基础培养基属于合成培养基，是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基，其主要成分有氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其他辅助成分，比如DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12，这些都是应用非常广泛的经典/基础细胞培养基。
接下来为你详细介绍一下这些培养基以及适用的细胞类型：1.RPMI-1640 Medium：RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2.Minimum Essential Medium（MEM）：也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3.DMEM-高糖（标准型）：是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4.DMEM-低糖（标准型）：是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
thp-1细胞培养要点
thp-1细胞培养要点THP-1细胞培养要点引言：THP-1细胞是一种人类单核细胞系，常用于体外炎症和免疫研究中。
为了保证实验结果的准确性和可重复性，正确的培养方法是至关重要的。
本文将介绍THP-1细胞的培养要点，以帮助研究人员获得高质量的实验结果。
一、培养基选择：THP-1细胞可以在含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基中维持生长。
此外，可以添加适量的抗生素（如青霉素和链霉素）来防止细菌污染。
二、细胞传代：当THP-1细胞达到80%~90%的密度时，需要进行细胞传代。
首先，将细胞培养液离心，以去除细胞沉淀。
然后，用无菌PBS洗涤细胞，以去除残留的培养基。
接下来，加入适量的消化酶（如胰蛋白酶）来解离细胞。
将细胞转移到新的培养瓶中，并加入新的培养基。
每3-4天进行一次传代，以保持细胞的健康生长。
三、细胞密度控制：THP-1细胞的密度对于实验结果的可靠性至关重要。
细胞过于稀疏会导致实验结果不准确，而细胞过于密集则会影响细胞生长和功能。
通常，将细胞密度控制在1×10^5~1×10^6个细胞/ml之间，以保证实验的稳定性和可重复性。
四、细胞分化：THP-1细胞可以通过添加诱导剂（如12-酰化平衡子）来诱导其分化成巨噬细胞。
分化后的THP-1细胞具有更接近体内巨噬细胞的特性，适用于更多类型的研究。
通常，在培养基中添加适量的诱导剂，并将细胞培养至48-72小时，即可实现细胞的分化。
五、细胞处理：在进行实验前，需要将THP-1细胞从培养瓶中转移到实验板或培养皿中。
在转移过程中，需要注意保持细胞的活力和完整性。
使用无菌的工具和培养基，并避免过度处理和长时间的离心，以减少细胞损伤和死亡。
六、细胞检测：为了确保培养的THP-1细胞的纯度和活性，需要进行细胞检测。
可以使用染色法（如朗格罗斯染色）来检测细胞的形态和数量。
此外，还可以使用流式细胞术或免疫荧光染色来检测细胞表面标记物的表达和细胞功能。
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D-Hanks’ 平衡盐溶液(D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS)
KCl KH2PO4 NaCl NaCO3 Na2HPO4 D-Glucose Phenol Red 0.40g 0.06g 8.00g 0.35g 0.048g 1.00g 0.01g
（三）、消化液——分散组织、细胞 ——
EDTA·4Na 溶液：
一种化学螯合剂，对细胞有一定的离散作用， 而且毒性小，价格低廉，使用方便 常用工作液浓度为0.02%。
注意：使用EDTA 处理细胞后，要用平衡盐液冲洗干 净，因残留的EDTA 会影响细胞生长（E-cadherin)
EDTA 溶液配制：用D-Hanks’ 平衡盐溶液溶解 后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，4℃冰箱保存
使用终浓度为1-4mmol/L 一般配制为100倍浓缩液，即浓度为200mmol/L （29.22g/L），配制方法为 ： 谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成 200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后（应加温 30℃），过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存， 使用时可向100ml培养液中加入0.5-2ml谷氨酰 胺浓缩液，终浓度为1-4mmol/L
第一部分： 动物细胞用液的制备
细胞培养基本技术
细胞培养用液及培养基
☆ 培养用液——水
平衡盐溶液 消化液 ☆ 培养基——天然培养基 合成培养基
配液前准备：
①滤器、滤膜、磁力搅拌器、天平、烧 杯、量筒、注射器。 贮液瓶（生理盐水瓶）、瓶塞、15磅， 121℃，20分钟蒸气灭菌 ②NaHCO3、NaOH、HCl、胎牛（小牛） 血清、青霉素、链霉素、三蒸水、培养 基粉剂
作用： （1）在进行原代培养过程中需分散组织、细胞。 （2）在传代中要使细胞脱离附着的底物时均需使用消化液。 类型： 组织细胞培养中常用的消化液为胰蛋白酶、二乙烯四乙酸二钠 （EDTA）及胶原酶溶液，可以分别单独使用或混合使用。
胰蛋白酶液(Trypsin)
● 使细胞间的蛋白质水解、细胞分散培养细胞传代。 分离组织、细胞团消化所需时间和浓度与细胞特性相关
抗生素溶液
通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗溶 液”。 青霉素主要是对革兰阳性菌有效，链霉素主要 对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝 大多数细菌污染。 培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升 100单位。 庆大霉素：每毫升100单位
抗菌素液（青、链霉素： ）：
青、链霉素：最终浓度为青霉素 100U/ml，链霉素100U/ml。 一般市售市售链霉素为100万U/瓶，将 其溶解在10ml Hanks液或三蒸水中，取 8ml链霉素液溶解80万U/瓶青霉素，即 成为青霉素、链霉素各1.0×105U/ml的 母液.使用时每100ml培养液中加 0.1ml，即成最终浓度为100U/ml。
NaHCO3 溶液
常用浓度为7.5%。配制时用三蒸水溶解 后，过滤除菌或高压灭菌，分装，4℃保 存
（五）、HEPES溶液：
一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，对细胞无 毒性 主要作用:防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件 下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅 速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持 pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES 使用终浓度一般为10-50mmol/L（分子量238.31）溶液 50 常配成1M 储存液：用20ml 双蒸水溶解4.76克HEPES， 过滤除菌或高压灭菌，分装小瓶，4℃保存。使用时可 保存。 向100ml培养液中加入2ml HEPES浓缩液，终浓度为 HEPES 20mmol/L
胶原酶液 ：
消化细胞间质，分离上皮细胞与胶原成分。 根据细胞类型选用不同型号胶原酶（Ⅰ-Ⅳ）。 新鲜配制、 37-38oC作用、时间控制。 EDTA不可与胶原酶联用，因胶原酶的消化作用依赖 于钙。 附：细胞外基质成分有胶原、纤粘蛋白（FN）、层粘连蛋 白（LN）、弹性蛋白等）
（四）、pH 调整液：
细胞培养基本技术2
第一部分：细胞培养用液及培养基
☆ 培养用液——水
平衡盐溶液 消化液 ☆ 培养基——天然培养基 合成培养基
第二部分内容：
原代细胞分离、培养（酶消化法和组织块培养法）。 细胞生长状况的观察。 培养细胞一代生长过程。 传代。 冻存与复苏。 细胞培养注意事项（如细胞污染）。 细胞培养的一些专业术语介绍（如细胞株、系， 上皮细胞型、成纤维细胞型）
特点： 1、胰蛋白酶的活力用解离酪蛋白的能力来表示，常用的有1： 125和1：250两种。 2、许多学者认为钙、镁离子和血清的存在都会降低胰蛋白酶的 活力。消化细胞时，加入一些血清（10%）或含血清的培养液，能终止消
化作用。
胰蛋白酶溶液配制： 称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，用少许DHanks 平衡盐（或PBS）溶液调成糊状，再 补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀，置 室温4 小时或冰箱过夜，不断搅拌振荡 次日，过滤除菌，分装入瓶中， -20℃保 存备用（以免分解失效），常用浓度为 0.25% （0.1%-0.5%）。 如果短期内要使用，就放置4℃冰箱。
市场上可提供干粉培养基和液体培 养基
干粉培养基需使用者自己配制并灭菌，其优 点是价格便宜。缺点是配制过程繁琐，质量 不易控制 液体培养基是由专业厂家按标准规模化生 产，不仅质量得到保证，而且使用十分方便
ห้องสมุดไป่ตู้
● 种类 根据细胞特性选择（文献） 199——成分复杂，不常用；改良为109效果较199好 Eagle系列——MEM（Eagle最低必需培养液） BMEM（氨基酸改良） DMEM（增加成分）：高糖、低糖 RPMI1640——常用、悬浮细胞、多种细胞 Ham——F12：加微量元素等，可少用血清 单细胞、克隆化培养，无血清培养
联合使用： 胰蛋白酶和EDTA联合使用可提高消化效 率(细胞与细胞之间的粘附分子需要Ca2+: cadherin, selectin, integrin). 但需注意EDTA不能被血清中和，消化后 要彻底清洗，否则细胞易脱壁。
联合使用： 常用的配制方法（0.25%trypsin0.04%EDTA溶液）： 胰蛋白酶0.25 g，EDTA0.04 g，PBS(-) 液100 mL，烧杯内磁力搅拌充分溶解， 0.22μm滤膜正压过滤，-20℃冰箱保 存。
三、培养基
培养基——维持体外细胞生存和生长的溶液 ● 天然培养基 取自动物 营养成分丰富；来源受限 • 血清： 小牛、胎牛、马、人（市售） 须灭活补体（56oC、30min）、- 20oC保存 质量差异大（无细菌、支原体、病毒） • 血浆 鸡血浆；现少单独使用
•合成培养基：
合成培养基：
合成培养基 一般需加血清等 成分 氨基酸、维生素、糖类、无机离 子、辅助成分
干粉培养基的配制
认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分， 常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES 等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨 酰胺，有些根据实验需要决定。 配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质 都要等培养基完全溶解之后才能添加。 配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 所用器皿应严格消毒。 配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
细胞培养基应用选择：
选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： (1 ）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞 首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时 咨询。 (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可 以适合多种细胞。 (3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如 小鼠细胞株多选 RPMI1640 。
RPMI1640种类
RPMI—1640（A） （不含谷氨酰胺、可高压灭菌） RPMI—1640（A）无酚红 （不含谷氨酰胺、高压灭菌） RPMI—1640 （含谷氨酰胺、除菌过滤灭菌）
DMEM细胞培养基
是在MEM培养基的基础上研制的 与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型 （低于4500g/L）和低糖型(低于1000g/L)。 高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较 快、附着较困难肿瘤细胞等。 DMEM（A）【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】 DMEM（H）【含谷氨酰胺、高糖型、除菌过滤灭 菌】 DMEM（L）【含谷氨酰胺、低糖型、除菌过滤灭 菌】。
超纯净水：
采用进口的RO膜、离子交换膜、离子交换树 脂、抛光核子级树脂、静音高压泵、电磁阀 等，产品性能得到最大化的保证； 分子生物学、生命科学、基因研究、组织培 养、试管婴儿、生物工程、动物细胞培养、培 养基制备、DNA测序、氨基酸分析、疾控中 心、水质检测中心、药检所、质检所、高校科 研等标准实验室及各种高端精密仪器用水。
配液过滤无菌操作要求：
操作前无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬 面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟 操作时，小心取用无菌之实验物品，避免造 成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口。 在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周 围进行
一、细胞培养用液及培养液——水
PBS（Phosphate-Buffered Sallines）
KCl KH2PO4 NaCl Na2HPO4·7H2O 0.20g 0.20g 8.00g 2.16g
DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Sallines）标准型
CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) KCl KH2PO4 MgCl2·6H2O NaCl Na2HPO4·7H2O 0.10g 0.20g 0.20g 0.10g 8.00g 2.16g
（六）、谷氨酰胺补充液：
谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成 培养基中都要添加，由于谷氨酰胺在溶液中很 不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约 50%，所以都是在使用前添加. 配制好的培养液（含谷氨酰胺）在4℃放置2周 以上时，要重新加入原来量的谷氨酰胺，故需 单独配制谷氨酰胺，以便临时加入培养液内