流式细胞仪分选课件

TETRAMER 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的 MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。 MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗 原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分 析仪器对标本中这群细胞进行分析
Th1Th2检测Tips 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
一定要确定T细胞是否已经活化，细胞转运阻滞是否成功，胞 膜打孔是否有效
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一定要用胞浆内同型对照（特别是FITC标记时） ，以便分别部分弱表达的细胞因子。
当前DC检测的方法： 1）Lin-,CD11c,CD123,同时可能表达
CD80,CD86,CD83,DR等 2）利用BDCA1,2,3,4对外周血或其它组织DC进行分
析 3）CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123
T细胞分析 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
免疫状态评价： 移植、放化疗等.
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DNA含量及细胞周期分析
细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S， G2 ，M)的各个时期，DNA的含量随各时相 呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记 DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到 细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%， S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞 的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白 （CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCNA） 等，对细胞周期进行精确的分期：G0、G1、 S、G2、M.
对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意 义，一般认为CUTOFF值为200/ul.
绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起 测定，流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算 出浓度
对任何细胞群体都可以进行绝对计数
Th1Th2细胞因子分泌细胞测定 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
根据产生的细胞因子的类
型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ
细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2
Ｔｈ1细胞产生ＩＬ 2、ＩＬ 12 、ＩＦＮ γ、ＴＮＦ β等细胞因 子,主要参与细胞介导的免疫反 应、迟发性过敏反应,并在清除
病毒等细胞内致病因子方面起 着重要作用
Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ 4、ＩＬ 5 、ＩＬ 6、ＩＬ 10、ＩＬ 13等 细胞因子,主要促进体液免疫反 应,中和胞外病原体
1. 肿瘤的早期诊断。 2. 肿瘤的良恶性判断。 3. 观察细胞的增殖状态及周期分布。 4. 疗效监测
细胞功能分析 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
1.吞噬功能试验 2.氧爆发试验 3.根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同将CD4+或 CD8+分为介导细胞免疫的I型细胞和介导体液 免疫的II型细胞. 4.药物泵的功能检测 5.NK细胞的肿瘤杀伤活性检测 6.血小板的粘附,聚集功能检测
四聚体技术的优势是：可以对特异性免疫细胞进行定量；用流式细胞仪检测 可以快速测定大量细胞，可以同时进行其它表面染色，可以直接用外周血测 定而不需要培养；四聚体染色不会杀伤细胞，因此染色后的细胞可以进行分 选或其它功能分析；四聚体对所有的特异性T细胞都能够结合，而不仅仅是
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Normal Cell Cycle
M G2
G0
G1
s
C o u n t
DNA Analysis
G0G1
s G2M
0
200
400
600
800
1000
2N
4N
DNA content
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相应地，CD8+T细胞也可以分 为Tc1和Tc2
Th1细胞：介导细胞免疫、细 胞毒性T细胞的生长和活化 、巨噬细胞的活化、介导 迟发型过敏反应。其功能 亢进将导致炎症慢性迁延 ，器官特异性自身免疫病 ，急性排异反应和接触性 皮炎等的发病和免疫病理 损伤。
Th2细胞 ：介导体液免疫，促 进B细胞的生长、活化和分 化，是IgG1和IgE类抗体的 转换因子，其功能亢进将 导致特异性过敏反应，参 与高IgE综合症和嗜酸性粒 细胞增多症。
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1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态 2.白血病/淋巴瘤免疫分型 3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系 4.干祖细胞的定量及成分分析. 5.其它:粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及
抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋 白的分析等等。
树突状细胞分析（Dendritic Cells,DC) 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
DC是主要的抗原递呈细胞，同时又是重要的先天 免疫细胞，还是具有免疫调控功能的一个细胞群 ，没有发现特异性的抗原标记
DC研究的主要内容包括直接分析计数、体外诱导 检测,一般分为两群－PDC,MDC
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临床应用
疾病诊断:为疾病诊断提供直接的或支持诊断的依据
免疫调节：细胞因子/受体的相互作用 共刺激分子受体/配体的相互作用
发病机理：肿瘤的发病与机体的免疫力低下、以及信号传递 障碍有关
药物/疫苗效果的评价：肿瘤生物治疗的时机选择、以及效果 的监测
相对计数－淋巴细胞亚群数量检查项目和意义
疾病
CD3 CD4 CD8 CD4/CD8
自身免疫病
降低 增高 降低
AIDS SARS
降低 降低
严重 降低
降低
增高 降低 降低 降低
慢Байду номын сангаас活动性肝炎、 肝硬化
肿瘤
降低
降低 降低
正常 降低 或 增高
增高 降低
NK 降低
降低 降低
降低
CD4细胞绝对计数 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。