氟比洛芬巴布剂透皮含量测定

氟比洛芬巴布剂透皮吸收实验
1. 仪器与试药
1.1 试药
材料名称批号来源
NP-700 20131227 广州拜澳生物科技有限公司羧甲基纤维素钠G1219039 阿拉丁试剂公司
滑石粉20130411 成都市科龙化工试剂厂
二氧化钛20130428 成都市科龙化工试剂厂
氢氧化铝20120901 成都市科龙化工试剂厂
酒石酸20100628 成都市金山化学试剂有限公司PVP K90 P1305040021-1 博爱新开源制药
吐温-80 20130723 成都市科龙化工试剂厂
薄荷醇20130502 成都市科龙化工试剂厂
薄荷油Z34021098 黄山市天目药业有限公司
氮酮20090124 成都市科龙化工试剂厂
硫化钠HG-905-1976 成都金山化学试剂有限公司氯化钠20131029 广东光华科技有限公司
1.2 仪器
仪器名称型号来源
万分之一天平BS1245 北京赛多利斯仪器有限公司
恒温水浴锅HH-2 国华电器有限公司
烘箱101 北京中兴伟业仪器有限公司
纯水机PCJ-10 成都品成科技有限公司
透皮扩散试验仪TK-12D 上海锴凯科技贸易有限公司
高效液相色谱仪
2. 实验动物
昆明种小鼠四川大学动物实验中心提供
实验过程
1.溶液的配置
1.1 缓冲溶液的配制
PBS（pH=7.4）：取KH2PO4 6.80g，加0.1mol/L NaOH 395mL，加超纯水溶解并定容至1000mL，于4℃保存，备用。

1.2 药物溶液的配制
氟比洛芬贮备液：精密称取10.00mg的氟比洛芬溶于PBS（pH=7.4）配制成100.0μg/mL 的贮备液。

硫化钠溶液：精密称取30g硫化钠溶于水配制成6%的Na2S溶液。

生理盐水：精密称取9g氯化钠溶于水配制成0.9%的NaCl溶液。

2.氟比洛芬含量测定方法的建立：
2.1高效液相色谱法
2.1.1色谱条件
色谱柱：Dikma C18(250mm×4.6mm,5µm)；流动相：甲醇: 水: 磷酸= 80: 20: 0.017；进样量：20μl；流速：1.000mL/min；柱温：35℃；检测波长：247nm。

2.1.2系统适用性和专属性实验
比较流动相和氟比洛芬供试液的色谱行为，判断氟比洛芬在相应的峰位是否有杂质干扰。

2.1.3 标准曲线的绘制
精密量取一定量氟比洛芬贮备液，以流动相配制一系列浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL的氟比洛芬标准溶液，经0.2μm微孔滤膜滤过后，按“2.1.1项下色谱条件进行分析，记录峰面积，以样品浓度对峰面积进行线性回归，计算标准曲线方程，观察线性。

2.1.4 精密度试验
精密量取一定量的氟比洛芬贮备液，以流动相稀释定容后配制低、中、高（0.1、1.0、10.0 μg/mL）3个浓度的氟比洛芬供试液，各浓度分别配制3份溶液（n=3），经0.2μm微孔滤膜滤过后，按照 2.1.1中所述色谱条件，测定各溶液中的氟比洛芬含量，计算其相对标准偏差
（RSD%），考察日内精密度。

同样操作连续进行3天，考察日间精密度。

2.1.5 方法回收率试验
精密称取取一定量的氟比洛芬，相当于处方量中氟比洛芬的80%、100%、120%，制备氟比洛芬巴布剂各三份。

将制得的巴布剂以流动相溶解、37±0.5℃恒温震荡24h后定容至100mL，将各供试液以流动相稀释100倍后按2.1.1条件进样，测定含量，计算氟比洛芬的回收率。

3.氟比洛芬巴布剂的制备：
按照如下处方制备4种氟比洛芬巴布剂（含氟比洛芬40mg）：
No. 氟比
洛芬
/mg
NP-700 CMC-Na
PVP
K90
甘油Al(OH)3
TiO2+滑
石粉
薄荷
醇
吐温
-80
氮酮
薄荷
油
水
1 40 0.7 0.044 0.298 7 0.0525 1.75 0.1785 0.298 0.14918
2 40 0.7 0.044 0.298 7 0.0525 1.75 0.1785 0.595 0.14918
3 40 0.7 0.088 0.595 7 0.0525 1.75 0.1785 0.5950.149 10.9
4 40 0.7 0.088 0.59
5 7 0.0525 1.75 0.1785 0.89250.149 10.9 其他单位：(g)
制备方法：
1．分别配制5%CMC-Na、5%PVP K90的溶液，于40℃充分溶胀过夜。

2．称处方量的甘油于研钵中，加入处方量的氟比洛芬，研匀后按序加入NP-700、薄荷醇、吐温-80或氮酮、薄荷油、TiO2、滑石粉、Al(OH)3，5%的CMC-Na和5%的PVP K90每组分加入后须充分搅拌研匀，最后加入处方量的水搅拌均匀，即得巴布剂膏体。

将得到的膏体涂布于10×14cm无纺布，在40℃烘箱中放置4h烘干，即得氟比洛芬巴布剂。

4.氟比洛芬巴布剂的透皮吸收试验
4.1鼠皮的制备
小鼠断颈处死，立刻用6%硫化钠处理20分钟后脱毛，用生理盐水清洗干净后，剪取完整腹部皮肤，去除皮下脂肪组织和结缔组织，露出真皮层，生理盐水洗净，置于磷酸盐缓冲液（PBS 溶液）中浸泡30min后，取出用pH7.4的磷酸盐缓冲液漂洗至洗液澄明，用滤纸吸干，备用。

4.2透皮吸收实验
巴布剂的体外经皮渗透试验采用改良Franz扩散池，扩散面积3.14cm2（d=2cm），含药量
0.2941mg/cm2，将小鼠皮肤固定在扩散池上，真皮面向接受室，角质层面向供给室。

将巴布剂贴于皮肤上，开启恒温（37±0.5℃）水浴循环和磁力搅拌器（300r/min），在不同时间点(1h、2h、4h、8h、12h、24h)取样，每次0.5mL，并立即补充等体积的37℃的PBS溶液，高效液相色谱法测定氟比洛芬浓度。

以单位面积累积透过量Q对时间t得线性回归方程。